2024年1月13日发(作者：辜翠梅)
２００７Ｎ０９・２６・ｓｅｎａＩＮｏ．１７４ＣｈｉｎａＢｒｅｗｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＲｅｐｏｒｔ黑根霉固态发酵产木聚糖酶的研究吴萍，史钧，李正鹏（安徽科技学院生命科学学院，安徽凤阳２３３１００）摘要：利用黑根霉降解甘蔗渣固态发酵生产木聚糖酶，运用正交试验研究了甘蔗渣与麸皮的比例、氮源、ｐＨｆｇ、培养时间，水料比等对产木聚糖酶活力的影响。结果表明：甘蔗渣：麸皮为６：４，氯源为酵母青，ｐｎ削Ｊ５，培养时间为５ｄ，水料比为２．５：１，产酶量Ｊ２１４０６．１８Ｕ／ｇ。关键词：黑根霉；甘蔗渣；木聚糖酶；固态发酵中国分类号：０５３文献标识码：Ａ文章编号：２０５４＿旬５７１（２００７）０９－００２６－０３ＳｔｕｄｙｏｎｘｙｌａｎａｓｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙＲｈｉｚｏｐｕｓＷＵｐｉｎｇ，ＳＨＩ（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅｎ坦打ｃａｎｓｏｎｓｏｌｉｄ－ｓｔａｔｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎＪｕｎ，ＬＩＺｈｅｎｇ－ｐｅｎｇｓｃｉ％∞．ＡｎｈｎｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｆｅｎｇｙａｎ９２３３１００，Ｃｈｉｎａ）ＯｎＡｂｓｌｎｃｔ：ＴｈｅｘｙｌａｎａｓｅＷｆｉ８ｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙＲｈ／ｚｏｐ“ｓＭｇｒ／ｃａｎｓｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｔｈｅｓｏｌｉｄ－ｓｔａｔｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔＯｄｅｇｒａｄｅｂａｇａｓｓｅＴｈｅｆｉｖｅｆａｃｔｏｒｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｏｆｂａｇａｓｓｅａｎｄｗｈｅａｔｂｍｎ，ｎｉｎｏｇｅｎｓＯＢｒＣｅ，ｐＨｔｅｕｌＵｗｅｌｉｍｅａｎｄｗａｔｅｒ－ｄｒｉｅｒｒａｔｉｏ，ｗｈｉｃｈａｆｆｅｃｔｅｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｘｙｌａｎａｓｅ，ｗ∽ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃｌ，ａｅｄｔｈａｔｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｘｙｌａｎａ∞ｉｍｘｌｕｃｅｄｂｙＲ．ｎｉｇｒｌｃａａｓｒｅａｃｈｅｄ４０６１８Ｕ／ｇｗｈｅｎｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｗａｔｅｒ－ｃｈｉｅｆｒａｔｉｏａｔｐＨ５ｆｏｒ５ｄｕｓｉｎｇ），ｃａｓｔｅｘｈａｃｔ勰ｎｉｕｏｇｅｕｆｌｏＢｒｇｅ，ｔｈｅｂａｇ∞∞ａｎｄｗｈｅａｔｂｒａｎｗｅ佗ａ＆｛ｅｄｂｙ６：４’ａｎｄｔｈｅｗ∞２．５：１．Ｋｅｙｗｏｌ＇ｄｓ：Ｒｂ／ｚｏｐｕｓⅡ趣ｉｃ∞Ｉｓ；ｂａｇａｓｓｅ；ｘｙｌａｎａｓｅ；ｓｏｌｉｄ－ｓｔａｔｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ木聚糖是自然界中丰富的再生资源之一，是植物细胞壁的主要成分，属于非淀粉多糖，且是半纤维素的一内烘干，用万能粉碎机粉碎备用。１．１．３培养基斜面培养基：参照文献【２］制各。马铃薯蔗糖培养基（ＰＤＡ）：马铃薯２００９，蔗糖２０９，琼脂２０９，水１０００ｍＬ，ｐＨ值自然，在１２ｌ℃灭菌３０ｍｍ。液体种子培养基：甘蔗渣１．Ｏ％，酵母膏０．２％，ＮａＣＩｎ５％，ＫＨ２Ｐ０４ｎ０５％，ＫｚＩ－／ＰＯ，ｎ２％，ＮＨ，Ｎ０３ｎ５％，ＣａＣｌ２种，在植物的细胞壁中含量仅次于纤维素，约占细胞干中的３５％。许多谷物饲粮中存在的木聚糖是阻碍营养物质消化的抗营养因子，使饲料消化利用率大大降低。因此，能高教降解木聚糖的木聚糖酶的研究开发和应用受到世界各国的重视Ⅲ。本试验则试图探讨以甘蔗渣作为主要原料，添加其他辅料，利用黑根霉进行固态发酵生产饲用木聚糖酶的工艺条件。固态发酵生产木聚糖酶的工艺，可操作性强，易于在中、小型企业推广应用，因而，具有一定的实用价值。１材料与方法０．０１％，ＭｇＳＯ，・７Ｈ：ＯＲ０１％，ｐＨ直自然，在１２１℃灭菌３０ｒａｉｎ。固体发酵培养基：ＮＡＣｌ０５％，ＫＨ２Ｐ０４０．０５％，Ｋ２ＨＰ０４０．２％，ＮＨＮｑ０．５％，ＭｇＳＯ，，・７Ｈ２００，Ｏｌ％，ＣａＣｌ２０．０１％，碳源、氮源、水料比等见表ｌ，在１２１℃灭菌３０ｍｉｎ。１．１．４主要仪器及药品电热恒温培养箱：上海跃进医疗器械厂；恒温振荡器：上海福玛实验设备有限公司：７２２型光栅分光光度计：上海第三分析仪器厂：燕麦木聚糖：Ｓｉｇｍａ公司产品；其他均为分析纯试剂。１．２方法斜面种子培养：在无菌条件下，将黑根霉原种接种１．１材料１．１．１菌种黑根霉（Ｒｈｉｚｏｐｕ，ｓｎｉｇ，＇ｉｃａｍ）：由安徽科技学院生物技术中心提供。１．１．２甘蔗渣制备市场购入的新鲜甘蔗，去汁后，甘蔗渣置６０。Ｃ烘箱收稿日期：２００６－１２．２７作者简介：吴萍（１９５８－），女．安徽五河人．副教授，主要从事微生物学的教学与研究工作。万方数据
研究报告中国酿造２００７年第９期总第１７４期・２７・至新制的ＰＤＡ奈［面培养基上，于２８‘Ｃ恒温培养３ｄ。液体种子培养：在无菌条件下，用１０ｍＬ无菌水将活化的斜面菌种洗下接种到盛有５０ｍＬ液体种子培养基的２５０ｍＬ锥形瓶中．于２８℃、１６０ｒ／ｒａｉｎ振荡培养３ｄ。固体发酵培养：在无菌条件下，将种子液按２０％的接种量接种到已灭菌的盛有５９固体发酵培养基的ｌＯＯｍＬ锥形瓶中。置于２８％恒温箱中培养。含水量与干料比为２．５：１时，酶活力最高。表２优化产酶条件的Ｌ墨（５勺正交试验结果与分析Ｔａｂｌｅ２．ＲｅｓｕｌｔｓｏｆｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔｓｆｏｒｘｙｌａｎａｓｏｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎＢＣＤＥ试验号Ａ酶活力／（ｕ・９１）发酵粗酶液的制各：在固态发酵好的培养物中加入５０ｍＬＯ．２ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ４．８醋酸缓冲液，于３０℃浸泡４ｈ，过滤，滤液即为粗酶液。酶活力的测定佴．取ｎ１枷酶液加入０９ｍＩ．０２ｍｏＬ几、ｐＨ４．８醋酸缓冲液配制的１％木聚糖溶液，５０％水浴酶解３０ｍｉｎ，加３ｍＬＤＮＳ，沸水浴反应５ｍｉｎ，冷却后定容至１５ｍＬ混匀，于５２０ｒｉｍ处测其吸光度，以煮沸１５ｍｉｎ灭活酶液为对照．酶活力单位：每分钟水解木聚糖形成１肛ｇ还原糖（以木糖计）所需的酶量（Ｕ／ｎａｔ，），即：木聚糖酶活力单位＝ＮｘＧ／（０．Ｉｘ３０）式中：Ｎ为酶液稀释倍数；ｏ为酶解溶液中术糖的含量，／ａ．ｇ；０ｌ为加酶量，ｍＬ；３０为酶解时间，ｍｉｌｌ。２结果与分析２．１正交试验水平设计设计５因素５水平优化产酶条件的正交试验，因素水平见表１。表１优化产酶条件正交试验因素水平Ｔａｂｌｅ１．ＦａｃｔｏｒｓａｎｄｌｅｖｅｌｓｏｆｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔｆｏｒｘｙｌａｎａｓｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙＲｈｉｚｏｐｕｓｎｉｇｒｉｃａｎｓ水平甘蔗鑫：麸皮氮未１呦ｐ晶培养爵同／ｄ水嚣比而因素Ｂ即氮源对产酶影响最小，各种氮源的添加２．２正交试验结果按ｋ（５０做正交试验，结果见表２和附图。２．３发酵产酶结果分析比较极差Ｒ值可知，Ｅ＞Ａ＞Ｃ＞Ｄ＞Ｂ，说明因素Ｅ即水料比对产酶量影响最大。控制培养基中的含水量是固态发酵过程中的重要环节之一。含水量太低，菌株会形成对产酶无明显差异。张建新等【４１的试验结果也表明这一点，但氮源可以促进菌丝生长，这对预防前期杂菌污染有重要作用。因此添加一定量的酵母膏作为氮源可促进菌丝的生长。培养时间Ｄ为５ｄ时，产酶活力最高，但酶活力仍处于上升趋势，这说明为生产该酶，还可继续延长发酵时间。休眠孢子，单位面积菌体含量低，酶活力不高：而当培养基中含水量偏大时，由于供氧及散热条件恶化，菌体的生长缓慢，培养时间延长，产酶降低。从附图中可看出，当因素ＡＨＰ甘蔗渣与麸皮比为６：４时酶活力最高。酶活力基本随着培养基中麸皮的比例的增加而上升。这是因为麸皮是富含多糖、蛋白质、维生素和矿物质等万方数据
２００７Ｎｏ．９・２８・ＳｅｄａｌＮｏ．１７４ＣｈｉｎａＢｒｅｗｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＲｅｐｏａ常用的培养基成分。它既是碳源，又是氮源，还含有其发酵条件的目的。他对微生物生长和产酶起到促进作用的因子。但麸皮过表３验证试验结果多，培养基黏性增加．不利于透气，也影响产酶量。Ｔａｂｌｅ３．Ｖｅｄｆｉｃａｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ当因素ＣｆｌｏｐＨ值为５时，黑根霉产木聚糖酶的能力是最高的。但随着ｐＨ值的升高，酶活力逐渐下降。这是因为ｐＨ值不仅会影响到细胞膜所带的电荷，从而引起细胞对营养物质的吸收状况的变化，而且可以通过改变培养基中有机化合物的离子化作用程度，对细胞施加３结论间接影响．改变某些化合物分子进入细胞的状况，从而促进或抑制微生物的生长嘲。研究结果表明，以甘蔗渣为主要原料黑根霉产木聚糖酶的最佳固态发酵条件为Ａ４８４Ｃ２Ｄ』三２，即培养基中甘蔗渣与ｏ麸皮比例６｜４，氮源为酵母膏，ｐＨ５，最佳培养时间为５ｄ，水钿料比为２．５：１，所产木聚糖酶活力可达４０６．１８Ｕ／ｇ。●ｏ＜选用黑根霉在优化条件下固态发酵甘蔗渣生产木收聚糖酶具有生产成本低、经济效益高和生产工艺简单蜒避等特点。黑根霉是工业用安全菌种，利用黑根霉固态发酵甘蔗渣生产饲木聚糖酶更具安全性。ＩⅡⅢⅣＶＩＩＩＩＩＩｌＶＶＩｌｌＩｌｌＩＶＶＩＩＩⅢⅣＶＩＩＩⅢＩＷＡＢＣＤＥ参考文献：因素水平［１】禹慧明，徐有良，林勇．等．黑曲霉固态发酵生产木聚糖酶条附图各组酶活力变化件研究【Ｊ】．中国饲料，２００２（１５）；１７．１８．Ａｔｔａｃｈｅｄｆｉｇｕｒｅ．Ｖａｒｉａｔｉｏｎｏｆｅｎｚｙｍｅｅｃｔｉｖｉｔｙｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ［２】沈萍，范秀容，李广武微生物实验ＩＭ】．北京：高等教育出版社，１９９９．［３】吴凌伟，王水兴，严有明．利用甘蔗渣固态发酵生产木聚糖酶并且从表２和附图可知，适于黑根霉生产木聚糖酶叨食品与发酵工业，２００２．２９（８）：１００．１０２．的优势组合为Ａ｜Ｂ４Ｃ２ＤｓＥ：，为进一步验证正交试验结［４】张建新，李学梅．姜丽娜．黑曲霉固态发酵木聚糖酶中试条件果，按正交最佳组合和表观最佳组合的配方进行验证的研究田．微生物学杂志，２００３，２３（４）：２０．２２．试验，结果见表３。【５】曾莹，杨明发酵啤酒糟产饲用木聚糖酶的基质条件及其由表３可见，按正交分析所得最佳组合Ａ，ＢａＣ２１）；Ｅ。进。酶学性质研究叨．中国酿造，２００６，１６２（９）：１２—１５行产酶试验，产酶量达４０６７１８Ｕ／ｇ，试验起到了优化固态［６】周德庆．微生物学教程［ｈ们．北京：高等教育出版社，２００２．奄ｆ告奄冰珂牌全自动酿醋机为不锈钢设备，全自动电脑控制，无需稻糠、谷壳等作透气物。本机可使小麦、玉米、高梁、大米、苹果、葡萄、白酒等任何一种粮食或水果快速糖化发酵，２４ｈＨＰ可生产成品醋。所产醋气味清香，口感好，品质优。本机利用同态经糖化而成液态，液态回流醋酸苗发酵法，酿成成品醋，此酿醋机改变了原始的手工作坊式生产工艺，是酿醋行业的高科技、新工艺与新技术的高度综合。本场有多年高级酿造师亲自上门安装指导。可承接年产４００吨以上香醋生产线交钥匙工程。－如珂一牌今自一动＊酿。醋ｍ机联系电话：０３９４－２３８７３５８手机：１３８４９４３２９９２邮编：４６６６４１联系人：尹文忠邮局帐号：６０５０８３１０５２０００９７８１４办事处：广东省东莞市清溪镇渔粱围电话：０７６９—２３２４９１５５河南省西华县黄泛区农场三分厂冰珂酱醋厂万 方数据
黑根霉固态发酵产木聚糖酶的研究作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：吴萍， 史钧， 李正鹏， WU Ping， SHI Jun， LI Zheng-peng安徽科技学院,生命科学学院,安徽,凤阳,233100中国酿造CHINA BREWING2007(9)2次
参考文献(6条)
1.禹慧明;徐有良;林勇
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微生物学教程 2002
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2024年1月13日发(作者：辜翠梅)
２００７Ｎ０９・２６・ｓｅｎａＩＮｏ．１７４ＣｈｉｎａＢｒｅｗｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＲｅｐｏｒｔ黑根霉固态发酵产木聚糖酶的研究吴萍，史钧，李正鹏（安徽科技学院生命科学学院，安徽凤阳２３３１００）摘要：利用黑根霉降解甘蔗渣固态发酵生产木聚糖酶，运用正交试验研究了甘蔗渣与麸皮的比例、氮源、ｐＨｆｇ、培养时间，水料比等对产木聚糖酶活力的影响。结果表明：甘蔗渣：麸皮为６：４，氯源为酵母青，ｐｎ削Ｊ５，培养时间为５ｄ，水料比为２．５：１，产酶量Ｊ２１４０６．１８Ｕ／ｇ。关键词：黑根霉；甘蔗渣；木聚糖酶；固态发酵中国分类号：０５３文献标识码：Ａ文章编号：２０５４＿旬５７１（２００７）０９－００２６－０３ＳｔｕｄｙｏｎｘｙｌａｎａｓｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙＲｈｉｚｏｐｕｓＷＵｐｉｎｇ，ＳＨＩ（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅｎ坦打ｃａｎｓｏｎｓｏｌｉｄ－ｓｔａｔｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎＪｕｎ，ＬＩＺｈｅｎｇ－ｐｅｎｇｓｃｉ％∞．ＡｎｈｎｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｆｅｎｇｙａｎ９２３３１００，Ｃｈｉｎａ）ＯｎＡｂｓｌｎｃｔ：ＴｈｅｘｙｌａｎａｓｅＷｆｉ８ｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙＲｈ／ｚｏｐ“ｓＭｇｒ／ｃａｎｓｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｔｈｅｓｏｌｉｄ－ｓｔａｔｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔＯｄｅｇｒａｄｅｂａｇａｓｓｅＴｈｅｆｉｖｅｆａｃｔｏｒｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｏｆｂａｇａｓｓｅａｎｄｗｈｅａｔｂｍｎ，ｎｉｎｏｇｅｎｓＯＢｒＣｅ，ｐＨｔｅｕｌＵｗｅｌｉｍｅａｎｄｗａｔｅｒ－ｄｒｉｅｒｒａｔｉｏ，ｗｈｉｃｈａｆｆｅｃｔｅｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｘｙｌａｎａｓｅ，ｗ∽ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｂｙｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃｌ，ａｅｄｔｈａｔｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｘｙｌａｎａ∞ｉｍｘｌｕｃｅｄｂｙＲ．ｎｉｇｒｌｃａａｓｒｅａｃｈｅｄ４０６１８Ｕ／ｇｗｈｅｎｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｗａｔｅｒ－ｃｈｉｅｆｒａｔｉｏａｔｐＨ５ｆｏｒ５ｄｕｓｉｎｇ），ｃａｓｔｅｘｈａｃｔ勰ｎｉｕｏｇｅｕｆｌｏＢｒｇｅ，ｔｈｅｂａｇ∞∞ａｎｄｗｈｅａｔｂｒａｎｗｅ佗ａ＆｛ｅｄｂｙ６：４’ａｎｄｔｈｅｗ∞２．５：１．Ｋｅｙｗｏｌ＇ｄｓ：Ｒｂ／ｚｏｐｕｓⅡ趣ｉｃ∞Ｉｓ；ｂａｇａｓｓｅ；ｘｙｌａｎａｓｅ；ｓｏｌｉｄ－ｓｔａｔｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ木聚糖是自然界中丰富的再生资源之一，是植物细胞壁的主要成分，属于非淀粉多糖，且是半纤维素的一内烘干，用万能粉碎机粉碎备用。１．１．３培养基斜面培养基：参照文献【２］制各。马铃薯蔗糖培养基（ＰＤＡ）：马铃薯２００９，蔗糖２０９，琼脂２０９，水１０００ｍＬ，ｐＨ值自然，在１２ｌ℃灭菌３０ｍｍ。液体种子培养基：甘蔗渣１．Ｏ％，酵母膏０．２％，ＮａＣＩｎ５％，ＫＨ２Ｐ０４ｎ０５％，ＫｚＩ－／ＰＯ，ｎ２％，ＮＨ，Ｎ０３ｎ５％，ＣａＣｌ２种，在植物的细胞壁中含量仅次于纤维素，约占细胞干中的３５％。许多谷物饲粮中存在的木聚糖是阻碍营养物质消化的抗营养因子，使饲料消化利用率大大降低。因此，能高教降解木聚糖的木聚糖酶的研究开发和应用受到世界各国的重视Ⅲ。本试验则试图探讨以甘蔗渣作为主要原料，添加其他辅料，利用黑根霉进行固态发酵生产饲用木聚糖酶的工艺条件。固态发酵生产木聚糖酶的工艺，可操作性强，易于在中、小型企业推广应用，因而，具有一定的实用价值。１材料与方法０．０１％，ＭｇＳＯ，・７Ｈ：ＯＲ０１％，ｐＨ直自然，在１２１℃灭菌３０ｒａｉｎ。固体发酵培养基：ＮＡＣｌ０５％，ＫＨ２Ｐ０４０．０５％，Ｋ２ＨＰ０４０．２％，ＮＨＮｑ０．５％，ＭｇＳＯ，，・７Ｈ２００，Ｏｌ％，ＣａＣｌ２０．０１％，碳源、氮源、水料比等见表ｌ，在１２１℃灭菌３０ｍｉｎ。１．１．４主要仪器及药品电热恒温培养箱：上海跃进医疗器械厂；恒温振荡器：上海福玛实验设备有限公司：７２２型光栅分光光度计：上海第三分析仪器厂：燕麦木聚糖：Ｓｉｇｍａ公司产品；其他均为分析纯试剂。１．２方法斜面种子培养：在无菌条件下，将黑根霉原种接种１．１材料１．１．１菌种黑根霉（Ｒｈｉｚｏｐｕ，ｓｎｉｇ，＇ｉｃａｍ）：由安徽科技学院生物技术中心提供。１．１．２甘蔗渣制备市场购入的新鲜甘蔗，去汁后，甘蔗渣置６０。Ｃ烘箱收稿日期：２００６－１２．２７作者简介：吴萍（１９５８－），女．安徽五河人．副教授，主要从事微生物学的教学与研究工作。万方数据
研究报告中国酿造２００７年第９期总第１７４期・２７・至新制的ＰＤＡ奈［面培养基上，于２８‘Ｃ恒温培养３ｄ。液体种子培养：在无菌条件下，用１０ｍＬ无菌水将活化的斜面菌种洗下接种到盛有５０ｍＬ液体种子培养基的２５０ｍＬ锥形瓶中．于２８℃、１６０ｒ／ｒａｉｎ振荡培养３ｄ。固体发酵培养：在无菌条件下，将种子液按２０％的接种量接种到已灭菌的盛有５９固体发酵培养基的ｌＯＯｍＬ锥形瓶中。置于２８％恒温箱中培养。含水量与干料比为２．５：１时，酶活力最高。表２优化产酶条件的Ｌ墨（５勺正交试验结果与分析Ｔａｂｌｅ２．ＲｅｓｕｌｔｓｏｆｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔｓｆｏｒｘｙｌａｎａｓｏｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎＢＣＤＥ试验号Ａ酶活力／（ｕ・９１）发酵粗酶液的制各：在固态发酵好的培养物中加入５０ｍＬＯ．２ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ４．８醋酸缓冲液，于３０℃浸泡４ｈ，过滤，滤液即为粗酶液。酶活力的测定佴．取ｎ１枷酶液加入０９ｍＩ．０２ｍｏＬ几、ｐＨ４．８醋酸缓冲液配制的１％木聚糖溶液，５０％水浴酶解３０ｍｉｎ，加３ｍＬＤＮＳ，沸水浴反应５ｍｉｎ，冷却后定容至１５ｍＬ混匀，于５２０ｒｉｍ处测其吸光度，以煮沸１５ｍｉｎ灭活酶液为对照．酶活力单位：每分钟水解木聚糖形成１肛ｇ还原糖（以木糖计）所需的酶量（Ｕ／ｎａｔ，），即：木聚糖酶活力单位＝ＮｘＧ／（０．Ｉｘ３０）式中：Ｎ为酶液稀释倍数；ｏ为酶解溶液中术糖的含量，／ａ．ｇ；０ｌ为加酶量，ｍＬ；３０为酶解时间，ｍｉｌｌ。２结果与分析２．１正交试验水平设计设计５因素５水平优化产酶条件的正交试验，因素水平见表１。表１优化产酶条件正交试验因素水平Ｔａｂｌｅ１．ＦａｃｔｏｒｓａｎｄｌｅｖｅｌｓｏｆｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｔｅｓｔｆｏｒｘｙｌａｎａｓｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙＲｈｉｚｏｐｕｓｎｉｇｒｉｃａｎｓ水平甘蔗鑫：麸皮氮未１呦ｐ晶培养爵同／ｄ水嚣比而因素Ｂ即氮源对产酶影响最小，各种氮源的添加２．２正交试验结果按ｋ（５０做正交试验，结果见表２和附图。２．３发酵产酶结果分析比较极差Ｒ值可知，Ｅ＞Ａ＞Ｃ＞Ｄ＞Ｂ，说明因素Ｅ即水料比对产酶量影响最大。控制培养基中的含水量是固态发酵过程中的重要环节之一。含水量太低，菌株会形成对产酶无明显差异。张建新等【４１的试验结果也表明这一点，但氮源可以促进菌丝生长，这对预防前期杂菌污染有重要作用。因此添加一定量的酵母膏作为氮源可促进菌丝的生长。培养时间Ｄ为５ｄ时，产酶活力最高，但酶活力仍处于上升趋势，这说明为生产该酶，还可继续延长发酵时间。休眠孢子，单位面积菌体含量低，酶活力不高：而当培养基中含水量偏大时，由于供氧及散热条件恶化，菌体的生长缓慢，培养时间延长，产酶降低。从附图中可看出，当因素ＡＨＰ甘蔗渣与麸皮比为６：４时酶活力最高。酶活力基本随着培养基中麸皮的比例的增加而上升。这是因为麸皮是富含多糖、蛋白质、维生素和矿物质等万方数据
２００７Ｎｏ．９・２８・ＳｅｄａｌＮｏ．１７４ＣｈｉｎａＢｒｅｗｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＲｅｐｏａ常用的培养基成分。它既是碳源，又是氮源，还含有其发酵条件的目的。他对微生物生长和产酶起到促进作用的因子。但麸皮过表３验证试验结果多，培养基黏性增加．不利于透气，也影响产酶量。Ｔａｂｌｅ３．Ｖｅｄｆｉｃａｔｉｏｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ当因素ＣｆｌｏｐＨ值为５时，黑根霉产木聚糖酶的能力是最高的。但随着ｐＨ值的升高，酶活力逐渐下降。这是因为ｐＨ值不仅会影响到细胞膜所带的电荷，从而引起细胞对营养物质的吸收状况的变化，而且可以通过改变培养基中有机化合物的离子化作用程度，对细胞施加３结论间接影响．改变某些化合物分子进入细胞的状况，从而促进或抑制微生物的生长嘲。研究结果表明，以甘蔗渣为主要原料黑根霉产木聚糖酶的最佳固态发酵条件为Ａ４８４Ｃ２Ｄ』三２，即培养基中甘蔗渣与ｏ麸皮比例６｜４，氮源为酵母膏，ｐＨ５，最佳培养时间为５ｄ，水钿料比为２．５：１，所产木聚糖酶活力可达４０６．１８Ｕ／ｇ。●ｏ＜选用黑根霉在优化条件下固态发酵甘蔗渣生产木收聚糖酶具有生产成本低、经济效益高和生产工艺简单蜒避等特点。黑根霉是工业用安全菌种，利用黑根霉固态发酵甘蔗渣生产饲木聚糖酶更具安全性。ＩⅡⅢⅣＶＩＩＩＩＩＩｌＶＶＩｌｌＩｌｌＩＶＶＩＩＩⅢⅣＶＩＩＩⅢＩＷＡＢＣＤＥ参考文献：因素水平［１】禹慧明，徐有良，林勇．等．黑曲霉固态发酵生产木聚糖酶条附图各组酶活力变化件研究【Ｊ】．中国饲料，２００２（１５）；１７．１８．Ａｔｔａｃｈｅｄｆｉｇｕｒｅ．Ｖａｒｉａｔｉｏｎｏｆｅｎｚｙｍｅｅｃｔｉｖｉｔｙｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ［２】沈萍，范秀容，李广武微生物实验ＩＭ】．北京：高等教育出版社，１９９９．［３】吴凌伟，王水兴，严有明．利用甘蔗渣固态发酵生产木聚糖酶并且从表２和附图可知，适于黑根霉生产木聚糖酶叨食品与发酵工业，２００２．２９（８）：１００．１０２．的优势组合为Ａ｜Ｂ４Ｃ２ＤｓＥ：，为进一步验证正交试验结［４】张建新，李学梅．姜丽娜．黑曲霉固态发酵木聚糖酶中试条件果，按正交最佳组合和表观最佳组合的配方进行验证的研究田．微生物学杂志，２００３，２３（４）：２０．２２．试验，结果见表３。【５】曾莹，杨明发酵啤酒糟产饲用木聚糖酶的基质条件及其由表３可见，按正交分析所得最佳组合Ａ，ＢａＣ２１）；Ｅ。进。酶学性质研究叨．中国酿造，２００６，１６２（９）：１２—１５行产酶试验，产酶量达４０６７１８Ｕ／ｇ，试验起到了优化固态［６】周德庆．微生物学教程［ｈ们．北京：高等教育出版社，２００２．奄ｆ告奄冰珂牌全自动酿醋机为不锈钢设备，全自动电脑控制，无需稻糠、谷壳等作透气物。本机可使小麦、玉米、高梁、大米、苹果、葡萄、白酒等任何一种粮食或水果快速糖化发酵，２４ｈＨＰ可生产成品醋。所产醋气味清香，口感好，品质优。本机利用同态经糖化而成液态，液态回流醋酸苗发酵法，酿成成品醋，此酿醋机改变了原始的手工作坊式生产工艺，是酿醋行业的高科技、新工艺与新技术的高度综合。本场有多年高级酿造师亲自上门安装指导。可承接年产４００吨以上香醋生产线交钥匙工程。－如珂一牌今自一动＊酿。醋ｍ机联系电话：０３９４－２３８７３５８手机：１３８４９４３２９９２邮编：４６６６４１联系人：尹文忠邮局帐号：６０５０８３１０５２０００９７８１４办事处：广东省东莞市清溪镇渔粱围电话：０７６９—２３２４９１５５河南省西华县黄泛区农场三分厂冰珂酱醋厂万 方数据
黑根霉固态发酵产木聚糖酶的研究作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：被引用次数：吴萍， 史钧， 李正鹏， WU Ping， SHI Jun， LI Zheng-peng安徽科技学院,生命科学学院,安徽,凤阳,233100中国酿造CHINA BREWING2007(9)2次
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