2024年3月9日发(作者：李谷蕊)
STR简易操作说明
1. 提取细胞DNA；
2. 以细胞DNA提取物为模板PCR，每个细胞样品都需检测10个STR位点，分别为Amelogenin,CSF1PO,D13S317,D16S539,D5S818,TPOX,D7S820,D21S11,TH01,vWA，与之对应的有10对引物，其中一条有荧光标记；
PCR反应体系：
1×体系 10×体系
ddH2O 33.3 333
5×Buffer
引物1
引物2
模板
Taq酶
10
4
1
1
0.2
0.5
100
40
10
10
X
5
*2.5mM dNTP
50μl 498μl
说明：大体系混好后96孔板每孔分49.8μl， X指9个细胞样品分别加0.2μl，96孔板的具体分布参考下图。
PCR反应条件：
1 Cycle
95℃
5 min
95℃
30 sec
35 Cycles
58℃
30 sec
72℃
30 sec
1 Cycle
72℃
8 min
1 Cycle
16℃
∞
3. 每个PCR样品取5ul加Loading电泳检测，勿直接往96孔板中加Loading；
4. 电泳确认每个样品都有条带后送测基康生物；
5. 信息查询与结果比对。
i. 打开ATCC网站，查询各细胞STR分型数据，以细胞Saos-2为例，搜索结果见下图；
Fig.1
ii. 打开该株细胞链接，选择SPECIFICATIONS即可看到该株细胞的STR分型数据，见下图；
Fig.2
注意：如果ATCC上查不到某细胞的STR分型数据，还可以去国家实验细胞共享平台查询，网址/，以细胞Saos-2为例，搜索结果见下图。
Fig.3
Fig.4
Fig.5
iii. 打开网站/biotech/strbase/，点击STR Fact Sheets 查询各分型相对应的PCR产物大小，依次见下图所示；
Fig.6
Fig.7
Fig.8
说明：在Fig.8中，我们需要依据合成引物的序列找到与其对应的Set，再依据此Set，查询其PCR产物大小，见下图。
iv.
Fig.9
将各细胞STR检测数据汇总，下图为Saos-2细胞株CSF1PO位点的检测结果，PCR大小为306.53bp，实际大小与理论大小误差控制在2个bp以内；
Fig.10
v. 下图为Saos-2细胞株10个STR位点的综合数据，黄色标记为不匹配部分，数据吻合≥90%，则可认定该细胞株就是Saos-2。
分型判断标准：
若10个位点中出现2个或以上位点出现三个分型，则说明此细胞株纯在交叉污染；
若与标准分型相比，某些位点包含标准分型及另外一种分型，则判断此株细胞和标准细胞为杂合子与纯合子关系；
若出现50%或以上分型不符合，则说明此细胞株并非为鉴定的细胞株。
Fig.11
2024年3月9日发(作者：李谷蕊)
STR简易操作说明
1. 提取细胞DNA；
2. 以细胞DNA提取物为模板PCR，每个细胞样品都需检测10个STR位点，分别为Amelogenin,CSF1PO,D13S317,D16S539,D5S818,TPOX,D7S820,D21S11,TH01,vWA，与之对应的有10对引物，其中一条有荧光标记；
PCR反应体系：
1×体系 10×体系
ddH2O 33.3 333
5×Buffer
引物1
引物2
模板
Taq酶
10
4
1
1
0.2
0.5
100
40
10
10
X
5
*2.5mM dNTP
50μl 498μl
说明：大体系混好后96孔板每孔分49.8μl， X指9个细胞样品分别加0.2μl，96孔板的具体分布参考下图。
PCR反应条件：
1 Cycle
95℃
5 min
95℃
30 sec
35 Cycles
58℃
30 sec
72℃
30 sec
1 Cycle
72℃
8 min
1 Cycle
16℃
∞
3. 每个PCR样品取5ul加Loading电泳检测，勿直接往96孔板中加Loading；
4. 电泳确认每个样品都有条带后送测基康生物；
5. 信息查询与结果比对。
i. 打开ATCC网站，查询各细胞STR分型数据，以细胞Saos-2为例，搜索结果见下图；
Fig.1
ii. 打开该株细胞链接，选择SPECIFICATIONS即可看到该株细胞的STR分型数据，见下图；
Fig.2
注意：如果ATCC上查不到某细胞的STR分型数据，还可以去国家实验细胞共享平台查询，网址/，以细胞Saos-2为例，搜索结果见下图。
Fig.3
Fig.4
Fig.5
iii. 打开网站/biotech/strbase/，点击STR Fact Sheets 查询各分型相对应的PCR产物大小，依次见下图所示；
Fig.6
Fig.7
Fig.8
说明：在Fig.8中，我们需要依据合成引物的序列找到与其对应的Set，再依据此Set，查询其PCR产物大小，见下图。
iv.
Fig.9
将各细胞STR检测数据汇总，下图为Saos-2细胞株CSF1PO位点的检测结果，PCR大小为306.53bp，实际大小与理论大小误差控制在2个bp以内；
Fig.10
v. 下图为Saos-2细胞株10个STR位点的综合数据，黄色标记为不匹配部分，数据吻合≥90%，则可认定该细胞株就是Saos-2。
分型判断标准：
若10个位点中出现2个或以上位点出现三个分型，则说明此细胞株纯在交叉污染；
若与标准分型相比，某些位点包含标准分型及另外一种分型，则判断此株细胞和标准细胞为杂合子与纯合子关系；
若出现50%或以上分型不符合，则说明此细胞株并非为鉴定的细胞株。
Fig.11