2024年3月30日发(作者：璩谷兰)

吸附剂对不同物质吸附能力不同；展开剂对不同物质溶解度不同，通过展开达到分离

的目的。即混合液点在薄层板上时，吸附剂对不同物质有不同程度的吸附，在用溶剂展开

时，因薄层上的毛细管效应，溶剂上升，当升到原点时，混合物溶解，溶解后随着不断上

升的溶剂上移于原点之上，遇到新的吸附剂又被吸附，接着又溶解、解吸，使斑点不断上

移。而在上升过程中，由于有的成分吸附得牢些，即上移速度慢些，反之则快些，从而达

到“差速迁移”，当展开至一定距离后，就可达到分离混合物的目的。

斑点上升的高度用Rf表示：Rf= 原点至斑点中心的距离 / 原点至溶剂前沿的距离,

Rf≤1 ，展开剂极性越大，溶质Rf值越大（即爬的越高），但很可能降低分离能力；另外

单一溶剂很难分离较复杂的混合物、根据相似相溶原理，要使用多元溶剂体系。

薄层层析法具体操作注意事项

（一）铺板

铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水

蒸发后，板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶G:水=1：2～3，硅胶G:羧甲基纤维素钠水

溶液=1:2。研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆

下滴的情况来判断，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，

进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。通常，板的质量对

薄层鉴别的影响不是很大，影响最大是展开剂的配制和展开系统的饱和。

（二）点样

尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。这样，点的斑点

较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量

大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样

的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。

（三）展开剂配制

选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如

果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开

缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂

的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：

取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，尽管多数时候这

不是必须的。

（四）展开系统的饱和

一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展

开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并

使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。展开时难免要打

开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该

尽量轻、快。 温湿度的控制温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分

离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响，估计主要是影响薄层

板的吸附能力，导致选择性（容量因子）的变化，湿度应根据实际情况确定。温度控制使

用空调器或冰柜，湿度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度的硫酸。

TLC切记的要点

（一）、某种样品在这种展开剂中只显示一个点，并不等于在别的展开剂中也只显示一

个点。因此在寻找展开剂时，多尝试几种比例不同，成分不同的展开剂。展开剂的极性太

小，点分不开，极性太大，也分不开.一般以目标产物的Rf值在0.3左右为最佳。

（二）、点不能点得太浓,否则容易重叠,不易判断,因为如果两个点相近的话,一浓就变

成一个点了。

（三）、板上点的展开的清晰程度和溶剂的极性和物质在该溶剂中的溶解性有关，只

有两者比较合适了，才能有一个交好的分离效果。

选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：

石油迷<己烷<苯<乙醚

往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成

的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，

常用的溶剂组合有：

Petroleum ether/Ethyl acetate, Petroleum ether/Acetone, Petroleum

ether/Ether,

Petroleum ether/CH2Cl2, CH2Cl2/ethyl acetate, ethyl acetate/ MeOH,

CHCl3/ethyl acetate

展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首

先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。很多时

候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。我在实验中，为了实现

一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了所有的溶剂用来两两组合后，最后才找到

petroleum ether/THF这类不常见的混合溶剂。

一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开

的迹象,再调整比例,达到最佳效果，如果没有分开的迹象，最好是换溶剂。

对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨

水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。当然，选择所添加的碱性物质，还必须考虑容易

从产品中除去，氨水无疑是较好的选择。

这里要特别强调的一点是：分离效果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系。

不同厂家生产的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细程度，酸性强弱不同，从而导致产品

在某个厂家的硅胶中分离效果很好，但在另一个厂家的就不行。溶剂的含水量和杂质含量

对分离效果都有明显的影响。温度对分离效果影响也很明显。我们实验室没有空调，我在

实验过程发现，在夏天分离相同的产品，所需的淋洗剂极性要比在冬天小很多，这一点大

家也是可以理解的。 鉴于此，使用的硅胶，不用时一定要密封，防止吸潮。TLC所用的硅

胶板一定要保存在干燥器里面，或使用前在红外烘箱里干燥一段时间。

在利用TLC跟踪反应时，在点板的时候往往是反应体系的混和溶液点一个点A，每

种难挥发的原料各点一个点B,C, D等等，然后所有的原料和反应体系的混合溶剂再共同点

一个混合点X，这些点在板上的位置如图所示：

这样的好处是展开后可以清楚地看见每个点的位置，把A这个点展开后的各个层份

的点与B,C,等原料比较，从而判断原料消失没有，点混合点X的目的在于，方便观察，因

为有时候，板展开后，各点的位置有些变形，或者由于边缘效应等等，使得判断不易。

利用TLC判断物质的纯度时，往往要和NMR相结合，因为某种样品在这种展开剂中

只显示一个点，并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。但有趣的是，由于H1NMR可

鉴别的纯度也就在95%左右，有时候H1NMR现示较纯的东西，一点板就会发现有几个点。

所以，两者要结合使用。但是自己以前的样品，则可以只通过点板来判断纯度。

（四）纠正以下几个错误：

1、 “由于层析柱和薄板的不同，即使两者使用的硅胶都相同，但是在把TLC分析得

到的展开剂用在柱层析时，也显得极性偏大，所以要稀释一倍”，如果使用手工铺的TLC

摸条件，则不必将洗脱剂的洗脱强度减小一倍，这种说法仅适用于使用预制高效板（HPTLC）

的情况。

2、 “对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，

氨水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。当然，选择所添加的碱性物质，还必须考虑容

易从产品中除去，氨水无疑是较好的选择”，这应区分是柱层还是TLC，对于柱层添加二

乙胺比较好，对于分析TLC添加三乙胺或用氨水薰（不是加到展开剂里）都可以。

有机TLC板显色问题的讨论

专属性显色剂

由于化合物种类繁多，因此专属性显色剂也是很多的，现将在各类化合物中最常用的

显色剂列举如下：

(1)烃类

①硝酸银／过氧化氢

检出物：卤代烃类。

溶液：硝酸银O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀释至200ml，再

加30％过氧化氢1滴。

方法：喷后置未过滤的紫外光下照射；

结果：斑点呈暗黑色。

②荧光素／溴

检出物：不饱和烃。

溶液：I．荧光素0.1g溶于乙醇lOOml；

Ⅱ．5％溴的四氯化碳溶液。

方法：先喷(I)，然后置含溴蒸气容器内，荧光素转变为四溴荧光素(曙红)，荧光消失，

不饱和烃斑点由于溴的加成，阻止生成曙红而保留荧光，多数不饱和烃在粉红色背景上呈

黄色。

③四氯邻苯二甲酸酐

检出物：芳香烃。

溶液：2％四氯邻苯二甲酸酐的丙酮与氯代苯(10：1)的溶液。

方法：喷后置紫外光下观察。

④甲醛／硫酸

检出物：多环芳烃。

溶液：37％甲醛溶液O.2ml溶于浓硫酸l0ml。

(2)醇类

①3，5一二硝基苯酰氯

检出物：醇类。

溶液：I．2％本品甲苯溶液；

Ⅱ．0.5％氢氧化钠溶液；

Ⅲ．O.002％罗丹明溶液。

方法：先喷(I)，在空气中干燥过夜，用蒸气薰2min，将纸或薄层通过试液(Ⅱ)30s，

喷水洗，趁湿通过(Ⅲ)15s，空气干燥，紫外灯下观察。

②硝酸铈铵

检出物：醇类。

溶液：I．1％硝酸铈铵的0.2mol／L硝酸溶液；

Ⅱ．N,N-二甲基-对苯二胺盐酸盐1.5g溶于甲醇、水与乙酸(128m1+25m1+1．5m1)

混合液中，用前将(I)与(Ⅱ)等量混合。喷板后于105oC加热5min。

③香草醛／硫酸

检出物：高级醇、酚、甾类及精油。

溶液：香草醛1g溶于硫酸lOOml。

方法：喷后于120oC加热至呈色最深。

④二苯基苦基偕肼 ’

检出物：醇类、萜烯、羰基、酯与醚类。

溶液：本品15mg溶于氯仿25ml中。

方法：喷后于110oC加热5～lOmin。

结果：紫色背景呈黄色斑点。

(3)醛酮类

①品红／亚硫酸

检出物：醛基化合物。

溶液：I．0.01%品红溶液，通入二氧化硫直至无色；

Ⅱ．0.05mol／L氯化汞溶液；

Ⅲ．O.05mol／L硫酸溶液。

方法：将I、Ⅱ、Ⅲ以1：1：10混合，用水稀释至l00ml。

②邻联茴香胺

检出物：醛类、酮类。

溶液：本品乙酸饱和溶液。

③2，4-二硝基苯肼

检出物：醛基、酮基及酮糖。

溶液：I．0.4％本品的2mol／L盐酸溶液；

Ⅱ．本品O.1g溶于乙醇l00ml中，加浓盐酸lml。

方法：喷溶液I或Ⅱ后，立即喷铁氰化钾的2mol／L盐酸溶液。

结果：饱和酮立即呈蓝色；饱和醛反应慢，呈橄榄绿色；不饱和羰基化合物不显色。

④绕丹宁

检出物：类胡萝卜素醛类。

溶液：I．1%～5%绕丹宁乙醇溶液；

Ⅱ．25%氢氧化铵或27%氢氧化钠溶液。

方法：先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ，干燥。

(4)有机酸类

①溴甲酚绿

检出物：有机酸类。

溶液：溴甲酚绿0.1g溶于乙醇500ml和0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml。

方法：浸板。

结果：蓝色背景产生黄色斑点。

②高锰酸钾／硫酸

检出物：脂肪酸衍生物。

溶液：见通用显色剂酸性高锰酸钾。

③过氧化氢

检出物：芳香酸。

溶液：0.3%过氧化氢溶液。

方法：喷后置紫外光(365nm)下观察。

结果：呈强蓝色荧光。

④2，6-二氯苯酚-靛酚钠

检出物：有机酸与酮酸。

溶液：0.1%本品的乙醇溶液。

方法：喷后微温。

结果：蓝色背景呈红色。

(5)酚类

①Emerson 试剂(4-氨基安替比林／铁氰化钾(Ⅲ))

检出物：酚类、芳香胺类及挥发油。

溶液：I．4-氨基安替比林1g溶于乙醇100ml；

Ⅱ．铁氰化钾(Ⅲ)4g溶于水50ml，用乙醇稀释至100ml。

方法：先喷溶液I，在热空气中干燥5min，再喷溶液Ⅱ，再于热空气中干燥5min，

然后将板置含有氨蒸气(25％氨溶液)的密闭容器中。

结果：斑点呈橙-淡红色。挥发油在亮黄色背景下呈红色斑点。

②Boute 反应

检出物：酚类、氯、溴、烷基代酚。

方法：将薄层置有NO2蒸气(含浓硝酸)的容器中3～10min，再用NH2蒸气(浓氨液)

处理。

③氯醌(四氯代对苯醌)

检出物：酚类。

溶液：1％本品的甲苯溶液。

④DDQ(二氯二氰基苯醌)试剂

检出物：酚类。

溶液：2％本品的甲苯溶液。

⑤TCNE (四氰基乙烯)试剂

检出物：酚类、芳香碳氢化物、杂环类、芳香胺类。

溶液：0.5%～1%本品的甲苯溶液。

⑥Gibb’s(2，6-二溴苯醌氯亚胺)试剂

检出物：酚类。

溶液：2%本品的甲醇溶液。

⑦氯化铁

检出物：酚类、羟酰胺酸。

溶液：1%～5%氯化铁的0.5mol／L盐酸溶液。

结果：酚类呈蓝色、羟酰胺酸呈红色。

(6)含氮化合物

①FCNP(硝普钠／铁氰化物)试剂

检出物：脂 肪族含氮化物，如氨基氰、胍、脲与硫脲及其衍生物，肌酸及肌酐。

溶液：10％氢氧化钠溶液、10％硝普钠溶液、10％铁氰化钾溶液与水按1：1：1：3

混合，在室温至少放置20min，冰箱保存数周，用前将混合液与丙酮等体积混合。

②Dragendorff(碘化铋钾试剂)试剂

检出物：芳香族含氮化合物，如生物碱类、抗心律不齐药物。

溶液：I．碱式硝酸铋0.85g溶于10ml冰醋酸及40ml水中；

Ⅱ．碘化钾8g溶于水20ml中。 ．

将上述溶液I及Ⅱ等量混合，置棕色瓶中作为储备液，用前取储备液lml、冰醋酸2ml

与水l0ml混合。

结果：呈橘红色斑点。

③4-甲基伞形酮

检出物：含氮杂环化合物。

溶液：本品0.02g溶于乙醇35ml，加水至100ml。

方法：喷板后置25％氨水蒸气的容器中,取出后于紫外灯(365nm)下观察。

④碘铂酸钾

检出物：生物碱类及有机含氮化物。

溶液：10％六氯铂酸溶液3ml与水97ml混合，加6％碘化钾溶液，混匀。临用前配

制。

⑤硫酸高铈铵／硫酸

检出物：生物碱及含碘有机化物。

溶液：硫酸铈1g混悬于4ml水中，加三氯乙酸1g，煮沸，逐滴加入浓硫酸直至混浊

消失。

方法：喷后薄层于1l0oC加热数分钟。

结果：阿朴吗啡、马钱子碱、秋水仙碱、罂粟碱、毒扁豆碱与有机碘化物均能检出。

⑥Ehrlich (对二甲氨基苯甲醛／盐酸)试剂

检出物：吲哚衍生物及胺类。

溶液：1％本品的浓盐酸溶液与甲醇按1：1混合。

方法：喷后板于50oC加热20min。

结果：呈不同颜色的斑点。

(7)胺类

①硝酸／乙醇

检出物：脂肪族胺类。

溶液：50滴65％硝酸于乙醇100ml中。

方法：需要时120oC加热。

②2，6-二氯醌氯亚胺

检出物：抗氧剂、酰胺(辣椒素)、伯、仲脂肪胺、仲、叔芳香胺、芳香碳氢化物、药

物、苯氧基乙酸除草剂等。

溶液：新鲜制备的0.5％～2％本品乙醇溶液。

方法：喷后薄层于110oC加热10min，再用氨蒸气处理。

③茜素

检出物：胺类。

溶液：O.1％本品的乙醇溶液。

④丁二酮单肟／氯化镍

检出物：胺类。

溶液：I．丁二酮单肟1.2g溶于热水35ml中，加氯化镍0．95g，冷却后加浓氨水

2ml；

Ⅱ．盐酸羟胺0.12g溶于200ml水中。

方法：将溶液I及Ⅱ混合，放置1天，过滤。

⑤Pauly (对氨基苯磺酸)试剂

检出物：酚类、胺类和能偶合的杂环化合物。

溶液：磺酸4．5g溶于温热的12mol／L盐酸45ml中，用水稀释至500ml，取lOml

于冰中冷却，加4．5％亚硝酸钠冷溶液lOml，于OoC放置15min。用前加等体积10％

碳酸钠溶液。

⑥硫氰酸钴(Ⅱ)．

检出物：生物碱、伯、仲、叔胺类。

溶液：硫氰酸铵3g与氯化钴1g溶于水20ml。

结果：白色至粉红色背景上呈蓝色斑点，2h后颜色消退。若将薄层喷水或放入饱和水

蒸气容器内，可重现色点。

⑦1，2-萘醌-4-磺酸钠

检出物：芳香胺类。

溶液：本品0.5g溶于95ml水，加乙酸5ml，滤去不溶物即得。

方法：喷后反应30min显色。

⑧葡萄糖／磷酸

检出物：芳香胺类。

溶液：葡萄糖2g溶于85％磷酸l0ml与水40ml混合液中，再加乙醇与正丁醇各30ml。

方法：喷后于115℃加热l0min。

(8)硝基及亚硝基化合物

①α-萘胺

检出物：3，5一二硝基苯甲酸酯、二硝基苯甲酰胺。

溶液：I．O．5％α-萘胺乙醇溶液；

Ⅱ．10％氢氧化钾甲醇溶液。

方法：先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ。

结果：呈红褐色斑点。

②二苯胺／氯化钯

检出物：亚硝胺类。

溶液：1.5％二苯胺乙醇溶液与0.1g氯化钯的0.2％氯化钠溶液lOOml，按5：1混合。

方法: 喷后置紫外光(254nm)下观察。

结果：显紫色斑点。

(9)氨基酸及肽类

①茚三酮

检出物：氨基酸、胺与氨基糖类。

溶液：本品O.2g溶于乙醇l00ml中。

方法：喷后于110oC加热。

结果：呈红紫色斑点。

②茚三酮／乙酸镉

检出物：氨基酸及杂环胺类。

溶液：茚三酮1g及乙酸镉2.5g溶于l0ml冰醋酸中，用乙醇稀释至500ml。

方法：喷后于120oC加热20min。

③1，2-萘醌-4-磺酸钠

检出物：氨基酸。

溶液：临用前将本品O.02g溶于5%碳酸钠l00ml中。

方法：喷后室温干燥。

结果：不同氨基酸呈不同色点。

④靛红／乙酸锌

检出物：氨基酸与某些肽类。

溶液：靛红1g与乙酸锌1g溶于95％异丙醇l00ml中，加热至80oC，冷却后加乙

酸1ml，冰箱保存。

方法：喷后于80～85"C加热30min。 ．

⑤茚三酮／冰醋酸

检出物：二肽及三肽。

溶液：1％茚三酮吡啶溶液与冰醋酸按5：1混合。

方法：喷后于l00oC加热5min。

⑥香草醛

检出物：氨基酸及胺类。

溶液：I．本品1g溶于丙醇50ml中;

Ⅱ．1mol／L氢氧化钾溶液lml，用乙醇稀释至lOOml。

方法：先喷溶液I后于110oC干燥l0min，再喷溶液Ⅱ，于110oC再干燥l0min，

于紫外光(365nm)下观察。

(10)甾类

①香草醛／硫酸

检出物：甾体激素。

溶液：1％香草醛浓硫酸溶液。

方法：喷后于105℃加热5min。

②氯化锰

检出物：雌激素类。

溶液：氯化锰0.2g溶于含硫酸2ml的甲醇60ml中。

方法：喷后置紫外光(365nm)下观察。

③高氯酸

检出物：甾体激素。

溶液：5％高氯酸甲醇溶液。

方法：喷后于110oC加热5min，置紫外光(365nm)下观察。

④三氯化锑／乙酸

检出物：甾类与二萜类。

溶液：三氯化锑20g溶于乙酸20ml与氯仿60ml混合液中。

方法：喷后于100oC加热5min，紫外光长波下观察。

结果：二萜类斑点呈红黄-蓝紫色。

⑤对甲苯磺酸

检出物：甾族化合物、黄酮类与儿茶酸类。

溶液：20％本品的氯仿溶液。

方法：喷后于100oC加热数分钟，紫外光长波下观察。

结果：斑点呈荧光。

⑥氯磺酸／乙酸

检出物：三萜、甾醇与甾族化合物。

溶液：氯磺酸5ml在冷却下加乙酸l0ml溶解。

方法：喷后于130oC加热5～l0min，置紫外光长波下观察。

结果；斑点显荧光。

(11)糖类

①茴香胺、邻苯二酸试剂

检出物：碳氢化合物。

溶液：1.23g茴香胺及1.66g邻苯二酸于l00ml 95％乙醇中的溶液。

方法：喷雾或浸渍。

结果：己糖呈绿色、甲基戊糖呈黄绿色、戊糖呈紫色、糖醛酸呈棕色。

②四乙酸铅／2，7一二氯荧光素

检出物：甙类、酚类、糖酸类

溶液：I．2％四乙酸铅的冰醋酸溶液；

Ⅱ．1％2，7一二氯荧光素乙醇溶液。

取溶液I、Ⅱ 各5ml混匀，用干燥的苯或甲苯稀释至200ml，试剂溶液只能稳定2h。

方法：浸板。

⑧邻氨基联苯／磷酸

检出物：糖类。

溶液：O.3g邻氨基联苯加85％磷酸5ml与乙醇95ml。

方法：喷板后llOoC加热15～20min。

结果：斑点呈褐色。

④苯胺／二苯胺／磷酸

检出物：还原糖。

溶液：4g二苯胺、4ml苯胺与20ml 85％磷酸共溶于200ml丙酮中。

方法：喷后于85℃加热l0min。

结果：产生各种颜色。1，4-己醛糖、低聚糖呈蓝色。

⑤双甲酮／磷酸

检出物：酮糖。

溶液：双甲酮(5，5-二甲基环己烷-1，3-二酮)10.3g溶于90ml乙醇与l0ml 85％磷

酸中。

方法：喷板后于110oC加热15～20min。

结果：日光下观察，白色背景上呈黄色斑点，紫外光长波下呈蓝色荧光。

⑥联苯胺／三氯乙酸

检出物：糖类。

溶液：0.5g联苯胺溶于l0ml乙酸，再加10ml40％三氯乙酸水溶液，用乙醇稀释至

l00ml。

方法：喷后置紫外光下照射15min。

结果：斑点呈灰棕-红褐色。

⑦对二甲氨基苯甲醛／乙酰丙酮

检出物：氨基糖类。

溶液：I. 5ml 50％氢氧化钾溶液与20ml乙醇混匀，取此溶液0.5ml，加乙酰丙酮0.5ml

与正丁醇50ml的混合液l0ml，此两种溶液均需新鲜配制，临用前混合；

Ⅱ. 1g对二甲氨基苯甲醛溶于30ml乙醇中，再加30ml浓盐酸，需要时此溶液可用

正丁醇180ml稀释。

方法：先喷I后于105oC加热5min，再喷Ⅱ，然后于90℃干燥5min。

结果：斑点呈红色。

(12)杀虫剂

①甲基黄

检出物：氯化杀虫剂及抗菌化合物。

溶液：O.1g甲基黄于70ml乙醇中，加25ml水并用乙醇稀释至l00ml。

方法：喷板后于室温干燥，并在无滤光片紫外光下照射5min。

结果：黄色背景上呈红色斑点。

②溴／四氯化碳

检出物：有机磷杀虫剂。

溶液：10％溴的四氯化碳溶液。

方法：薰溴蒸气。

③锰／水杨醛

检出物：有机硫代磷杀虫剂。

溶液：I．100mg氯化锰溶于100ml 80％乙醇；

Ⅱ．溶解1.3g 2-肼喹啉于小量热乙醇中，溶1g水杨醛于5ml乙醇并加1～2滴冰

醋酸，合并两溶液并回流30min，冷却后析出水杨-2-醛-2-喹啉腙沉淀，并用乙醇重结晶。

用50mg此衍生物溶于100ml乙醇中。

方法：等量溶液I及Ⅱ混合后，喷板。

④二苯胺／氯化锌

检出物：氯化杀虫剂(DDT、CPCA、氯-DDT、克菌丹、甲氧氯、毒杀芬)。

溶液：二苯胺及氯化锌各0.5g溶于100ml丙酮中。

方法：喷后200oC加热5min。

⑤溴／荧光素／硝酸银

检出物：杀虫剂。

溶液；I．5％溴的四氯化碳溶液；

Ⅱ．1ml 0.25％荧光素的二甲基甲酰胺溶液，用乙醇稀释至50ml；

Ⅲ．1.7g硝酸银溶于5ml水中，加2-苯氧基乙醇，用丙酮稀释至200ml。

方法：展开后的薄层置试液I容器中薰30s，取出先喷溶液Ⅱ，再喷溶液Ⅲ，再置紫

外光下7min。

(13)黄酮类

①乙醇胺二苯硼酸盐

检出物：黄酮类。

溶液：I. 1％乙醇胺二苯硼酸盐的甲醇溶液；

Ⅱ. 5％聚乙二醇的乙醇溶液。

方法：先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ使荧光稳定，再在紫外光长波下照射2min。

结果：紫外灯下观察荧光。

②三氯化锑

检出物：黄酮类。

溶液：10％三氯化锑的氯仿溶液。

方法：喷板。

结果：紫外光长波下呈荧光。

⑧三氯化铝

检出物：黄酮类。

溶液：1％三氯化铝乙醇溶液。

方法：喷板。

结果：紫外光长波下显黄色荧光。

④Benedict(硫酸铜／枸橼酸钠)试剂

检出物：含邻二羟基的黄酮类及香豆精类。

溶液：1.73g 硫酸铜(CuS04?5H20)：17.3g 枸橼酸钠及10g 无水碳酸钠溶于水并稀

释至1 00ml。

方法：喷板。

结果：紫外光长波下观察，含邻二羟基的化合物，斑点荧光减弱或猝灭。

(14)含硫化合物

①硝普钠

检出物：巯基-SH基(半胱氨酸)、双硫化物、-s-s-基(胱氨酸)及精氨酸。

溶液：I. 1.5g 硝普钠溶于5ml 2mol／L盐酸溶液及95ml甲醇中，加10ml 25％氢

氧化铵溶液，过滤，即得；

Ⅱ. 2g氰化钠溶于5ml水，用甲醇稀释至100ml。

方法：先喷溶液I、再喷溶液Ⅱ。

结果：巯基化合物呈红色；精氨酸由橙变为灰蓝色；双硫化物在黄色背景上显红色。

②FCNP(硝普钠／铁氰化物)试剂

检出物：脂肪族含硫化台物，如氨基氰、硫脲及其衍生物。

溶液：10％氢氧化钠溶液、10％硝普钠溶液，10％铁氰化钾溶液与水按1：1：1：3

混合，用前与等体积丙酮混合，用时新鲜配制。

○3氯化铁／磺基水杨酸

检出物：硫代磷酸酯类。

溶液：I．1％氯化铁的80％乙醇溶液；

Ⅱ．1％磺基水杨酸的80％乙醇溶液，

方法：薄层先置溴蒸气中10min后，喷溶液I，干燥15min，再喷溶液Ⅱ。

结果：紫色背景上呈白色。 、 ：

④叠氮化碘

检出物：含硫氨基酸、硫化物与青霉素。

溶液：叠氮碘溶液-叠氮钠3g 溶乎100ml 0.05mol／L碘溶液中(新鲜配制，固体叠

氮碘有爆炸性)。

⑤靛红／硫酸

检出物：噻吩衍生物。

溶液；0.4g靛红溶于100ml浓硫酸中。

方法：喷板后120oC加热。

结果：呈不同颜色。

(15)类脂化合物

①磷钼酸

检出物：胆酸、类脂化物、脂肪酸及甾类。

溶液：250mg 磷钼酸于50ml乙醇中。

方法：唆后予120oC加热。

②罗丹明6G

检出物；类脂化物。

溶液：lg 罗丹明6G溶于100ml丙酮中．

方法：喷后置紫外光长波下观察。

③溴百里酚蓝

检出物：类脂化物。

溶液：O．04g溴百里酚蓝溶于100ml O．01mol／L氢氧化钠溶液中。

(16)阳离子

①双硫腙

检出物：金属离子。

溶液：20mg双硫腙溶于100ml丙酮中，置棕色瓶中于冰箱内保存。

方法：上述溶液喷板后再喷25％氢氧化铵溶液。

②红氨酸 (二硫代草酰胺)

检出物：重金属离子。

溶液：0.5％红氨酸乙醇溶液。

方法：先喷上述溶液，稍干后置薄层于氨蒸气中。。

③茜素

检出物：众多阳离子、稀土及铀。

溶液：茜素乙醇饱和溶液。

方法：喷板后直接放入氨蒸气中。

④亚铁氰化钾

检出物：Fe3+、Cu2+、Cl、Mo、V、W离子。

溶液：新配制的2％亚铁氰化钾溶液。

⑤二苯卡巴肼

检出物：Ag+、pb2+、Hg2+、Cu2+、Sn2+、Mn2+、Zn2+、Ni2+、Co2+及Ca2+

离子。

溶液：I．1％～2％二苯卡巴肼乙醇溶液；

Ⅱ．25％氢氧化铵溶液。

方法：先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ。

结果：Ni2+呈蓝色、Co2+呈橙褐色、Zn2+呈红紫色，Ag+、pb2+、Cu2+、Sn2+、

Mn2+呈褐色、乙酸汞加成物于80oC加热片刻，斑点呈蓝色。

(17)阴离子

①硝酸银

检出物：含硫阴离子、砷酸盐、亚砷酸盐磷酸盐、亚磷酸盐及除氟外的卤素。

溶液：0.1～0.5mol／L硝酸银溶液中加氨水直至沉淀溶解。临用前配制、储存会形成

易爆物质。

方法：喷后于110～120oC加热l0min，必要时置紫外光下l0min。

②硝酸银／氢氧化铵／荧光素

检出物：卤素离子。

溶液：I．1g硝酸银溶于l00ml O.5mol／L氢氧化铵溶液中；

Ⅱ．1g荧光索溶于l00ml乙醇中。

方法：先喷溶液I，稍干，再喷溶液Ⅱ。

③钼酸铵／亚硫酸钠

检出物：硫化物、硫代硫酸盐与磷酸盐。 ：

溶液：I．5％钼酸铵的lmol／L硫酸溶液；

Ⅱ．5％亚硫酸钠溶液。

方法：先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ，于105℃加热30min。

结果：硫化物及硫代硫酸盐呈深蓝色，磷酸盐呈蓝灰色。

④番木鳖碱

检出物：溴酸盐、硝酸盐、氯酸盐。

溶液：I．0.02％番木鳖碱的lmol／L硫酸溶液；

Ⅱ．2mol／L氢氧化钠溶液。

方法：先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ。

结果：溴酸盐、氯酸盐呈血红色，硝酸盐呈橙黄色。

（四）.其他常用与专用显色剂：

碘：

适用于不饱和或者芳香族化合物

配制方法：在100ml 广口瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒。

或者在瓶中，加入10g 碘粒，30g 硅胶

高锰酸钾

适用于含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛

配制方法：1.5g KMnO4 + 10g K2CO3 + 1.25mL 10% NaOH +200mL 水. 使

用期3 个月

磷钼酸(PMA)

广谱

配制方法：10 g of 磷钼酸+100 mL 乙醇

紫外灯

适用于含共轭基团的化合物，芳香化合物

硫酸铈：

生物碱

配制方法：10%硫酸铈(IV)+15%硫酸的水溶液氯化铁

苯酚类化合物

配制方法：1% FeCl3 + 50% 乙醇水溶液.

桑色素(羟基黄酮)

广谱, 有荧光活性

配制方法：0.1% 桑色素+甲醇

茚三酮

适用于氨基酸

配制方法：1.5g 茚三酮+ 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸

二硝基苯肼(DNP)

适用于醛和酮

配制方法：12g 二硝基苯肼+ 60mL 浓硫酸+ 80mL 水+ 200mL乙醇

香草醛(香兰素)

广谱

配制方法：15g 香草醛+ 250mL 乙醇+2.5mL 浓硫酸

溴甲酚绿

适用于羧酸，pKa<=5.0

配制方法：在100ml 乙醇中，加入0.04g 溴甲酚绿，缓慢滴加0.1M的NaOH 水

溶液，刚好出现蓝色即至。

钼酸铈

广谱

配制方法：235 mL 水+ 12 g 钼酸氨+ 0.5 g 钼酸铈氨+ 15 mL浓硫酸

茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1

广谱

配制方法：135 乙醇+ 5 mL 浓硫酸+ 1.5 mL of 冰醋酸+ 3.7 mL茴香醛，剧烈搅

拌，使混合均匀.

茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2

适用于萜烯，桉树脑(cineoles), withanolides, 出油柑碱(acronycine)

配制方法：茴香醛:HClO4:丙酮:水(1:10:20:80)经常需要利用溶剂的极性大小，对展

开剂的极性予以调整。

2024年3月30日发(作者：璩谷兰)

吸附剂对不同物质吸附能力不同；展开剂对不同物质溶解度不同，通过展开达到分离

的目的。即混合液点在薄层板上时，吸附剂对不同物质有不同程度的吸附，在用溶剂展开

时，因薄层上的毛细管效应，溶剂上升，当升到原点时，混合物溶解，溶解后随着不断上

升的溶剂上移于原点之上，遇到新的吸附剂又被吸附，接着又溶解、解吸，使斑点不断上

移。而在上升过程中，由于有的成分吸附得牢些，即上移速度慢些，反之则快些，从而达

到“差速迁移”，当展开至一定距离后，就可达到分离混合物的目的。

斑点上升的高度用Rf表示：Rf= 原点至斑点中心的距离 / 原点至溶剂前沿的距离,

Rf≤1 ，展开剂极性越大，溶质Rf值越大（即爬的越高），但很可能降低分离能力；另外

单一溶剂很难分离较复杂的混合物、根据相似相溶原理，要使用多元溶剂体系。

薄层层析法具体操作注意事项

（一）铺板

铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水

蒸发后，板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶G:水=1：2～3，硅胶G:羧甲基纤维素钠水

溶液=1:2。研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆

下滴的情况来判断，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，

进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。通常，板的质量对

薄层鉴别的影响不是很大，影响最大是展开剂的配制和展开系统的饱和。

（二）点样

尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。这样，点的斑点

较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量

大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样

的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。

（三）展开剂配制

选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如

果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开

缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂

的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：

取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，尽管多数时候这

不是必须的。

（四）展开系统的饱和

一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展

开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并

使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。展开时难免要打

开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该

尽量轻、快。 温湿度的控制温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分

离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响，估计主要是影响薄层

板的吸附能力，导致选择性（容量因子）的变化，湿度应根据实际情况确定。温度控制使

用空调器或冰柜，湿度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度的硫酸。

TLC切记的要点

（一）、某种样品在这种展开剂中只显示一个点，并不等于在别的展开剂中也只显示一

个点。因此在寻找展开剂时，多尝试几种比例不同，成分不同的展开剂。展开剂的极性太

小，点分不开，极性太大，也分不开.一般以目标产物的Rf值在0.3左右为最佳。

（二）、点不能点得太浓,否则容易重叠,不易判断,因为如果两个点相近的话,一浓就变

成一个点了。

（三）、板上点的展开的清晰程度和溶剂的极性和物质在该溶剂中的溶解性有关，只

有两者比较合适了，才能有一个交好的分离效果。

选择适当的展开剂是首要任务.一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：

石油迷<己烷<苯<乙醚

往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成

的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，

常用的溶剂组合有：

Petroleum ether/Ethyl acetate, Petroleum ether/Acetone, Petroleum

ether/Ether,

Petroleum ether/CH2Cl2, CH2Cl2/ethyl acetate, ethyl acetate/ MeOH,

CHCl3/ethyl acetate

展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首

先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。很多时

候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。我在实验中，为了实现

一个配体与其他杂质有效分离，曾经尝试了所有的溶剂用来两两组合后，最后才找到

petroleum ether/THF这类不常见的混合溶剂。

一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开

的迹象,再调整比例,达到最佳效果，如果没有分开的迹象，最好是换溶剂。

对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨

水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。当然，选择所添加的碱性物质，还必须考虑容易

从产品中除去，氨水无疑是较好的选择。

这里要特别强调的一点是：分离效果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系。

不同厂家生产的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细程度，酸性强弱不同，从而导致产品

在某个厂家的硅胶中分离效果很好，但在另一个厂家的就不行。溶剂的含水量和杂质含量

对分离效果都有明显的影响。温度对分离效果影响也很明显。我们实验室没有空调，我在

实验过程发现，在夏天分离相同的产品，所需的淋洗剂极性要比在冬天小很多，这一点大

家也是可以理解的。 鉴于此，使用的硅胶，不用时一定要密封，防止吸潮。TLC所用的硅

胶板一定要保存在干燥器里面，或使用前在红外烘箱里干燥一段时间。

在利用TLC跟踪反应时，在点板的时候往往是反应体系的混和溶液点一个点A，每

种难挥发的原料各点一个点B,C, D等等，然后所有的原料和反应体系的混合溶剂再共同点

一个混合点X，这些点在板上的位置如图所示：

这样的好处是展开后可以清楚地看见每个点的位置，把A这个点展开后的各个层份

的点与B,C,等原料比较，从而判断原料消失没有，点混合点X的目的在于，方便观察，因

为有时候，板展开后，各点的位置有些变形，或者由于边缘效应等等，使得判断不易。

利用TLC判断物质的纯度时，往往要和NMR相结合，因为某种样品在这种展开剂中

只显示一个点，并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。但有趣的是，由于H1NMR可

鉴别的纯度也就在95%左右，有时候H1NMR现示较纯的东西，一点板就会发现有几个点。

所以，两者要结合使用。但是自己以前的样品，则可以只通过点板来判断纯度。

（四）纠正以下几个错误：

1、 “由于层析柱和薄板的不同，即使两者使用的硅胶都相同，但是在把TLC分析得

到的展开剂用在柱层析时，也显得极性偏大，所以要稀释一倍”，如果使用手工铺的TLC

摸条件，则不必将洗脱剂的洗脱强度减小一倍，这种说法仅适用于使用预制高效板（HPTLC）

的情况。

2、 “对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，

氨水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。当然，选择所添加的碱性物质，还必须考虑容

易从产品中除去，氨水无疑是较好的选择”，这应区分是柱层还是TLC，对于柱层添加二

乙胺比较好，对于分析TLC添加三乙胺或用氨水薰（不是加到展开剂里）都可以。

有机TLC板显色问题的讨论

专属性显色剂

由于化合物种类繁多，因此专属性显色剂也是很多的，现将在各类化合物中最常用的

显色剂列举如下：

(1)烃类

①硝酸银／过氧化氢

检出物：卤代烃类。

溶液：硝酸银O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀释至200ml，再

加30％过氧化氢1滴。

方法：喷后置未过滤的紫外光下照射；

结果：斑点呈暗黑色。

②荧光素／溴

检出物：不饱和烃。

溶液：I．荧光素0.1g溶于乙醇lOOml；

Ⅱ．5％溴的四氯化碳溶液。

方法：先喷(I)，然后置含溴蒸气容器内，荧光素转变为四溴荧光素(曙红)，荧光消失，

不饱和烃斑点由于溴的加成，阻止生成曙红而保留荧光，多数不饱和烃在粉红色背景上呈

黄色。

③四氯邻苯二甲酸酐

检出物：芳香烃。

溶液：2％四氯邻苯二甲酸酐的丙酮与氯代苯(10：1)的溶液。

方法：喷后置紫外光下观察。

④甲醛／硫酸

检出物：多环芳烃。

溶液：37％甲醛溶液O.2ml溶于浓硫酸l0ml。

(2)醇类

①3，5一二硝基苯酰氯

检出物：醇类。

溶液：I．2％本品甲苯溶液；

Ⅱ．0.5％氢氧化钠溶液；

Ⅲ．O.002％罗丹明溶液。

方法：先喷(I)，在空气中干燥过夜，用蒸气薰2min，将纸或薄层通过试液(Ⅱ)30s，

喷水洗，趁湿通过(Ⅲ)15s，空气干燥，紫外灯下观察。

②硝酸铈铵

检出物：醇类。

溶液：I．1％硝酸铈铵的0.2mol／L硝酸溶液；

Ⅱ．N,N-二甲基-对苯二胺盐酸盐1.5g溶于甲醇、水与乙酸(128m1+25m1+1．5m1)

混合液中，用前将(I)与(Ⅱ)等量混合。喷板后于105oC加热5min。

③香草醛／硫酸

检出物：高级醇、酚、甾类及精油。

溶液：香草醛1g溶于硫酸lOOml。

方法：喷后于120oC加热至呈色最深。

④二苯基苦基偕肼 ’

检出物：醇类、萜烯、羰基、酯与醚类。

溶液：本品15mg溶于氯仿25ml中。

方法：喷后于110oC加热5～lOmin。

结果：紫色背景呈黄色斑点。

(3)醛酮类

①品红／亚硫酸

检出物：醛基化合物。

溶液：I．0.01%品红溶液，通入二氧化硫直至无色；

Ⅱ．0.05mol／L氯化汞溶液；

Ⅲ．O.05mol／L硫酸溶液。

方法：将I、Ⅱ、Ⅲ以1：1：10混合，用水稀释至l00ml。

②邻联茴香胺

检出物：醛类、酮类。

溶液：本品乙酸饱和溶液。

③2，4-二硝基苯肼

检出物：醛基、酮基及酮糖。

溶液：I．0.4％本品的2mol／L盐酸溶液；

Ⅱ．本品O.1g溶于乙醇l00ml中，加浓盐酸lml。

方法：喷溶液I或Ⅱ后，立即喷铁氰化钾的2mol／L盐酸溶液。

结果：饱和酮立即呈蓝色；饱和醛反应慢，呈橄榄绿色；不饱和羰基化合物不显色。

④绕丹宁

检出物：类胡萝卜素醛类。

溶液：I．1%～5%绕丹宁乙醇溶液；

Ⅱ．25%氢氧化铵或27%氢氧化钠溶液。

方法：先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ，干燥。

(4)有机酸类

①溴甲酚绿

检出物：有机酸类。

溶液：溴甲酚绿0.1g溶于乙醇500ml和0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml。

方法：浸板。

结果：蓝色背景产生黄色斑点。

②高锰酸钾／硫酸

检出物：脂肪酸衍生物。

溶液：见通用显色剂酸性高锰酸钾。

③过氧化氢

检出物：芳香酸。

溶液：0.3%过氧化氢溶液。

方法：喷后置紫外光(365nm)下观察。

结果：呈强蓝色荧光。

④2，6-二氯苯酚-靛酚钠

检出物：有机酸与酮酸。

溶液：0.1%本品的乙醇溶液。

方法：喷后微温。

结果：蓝色背景呈红色。

(5)酚类

①Emerson 试剂(4-氨基安替比林／铁氰化钾(Ⅲ))

检出物：酚类、芳香胺类及挥发油。

溶液：I．4-氨基安替比林1g溶于乙醇100ml；

Ⅱ．铁氰化钾(Ⅲ)4g溶于水50ml，用乙醇稀释至100ml。

方法：先喷溶液I，在热空气中干燥5min，再喷溶液Ⅱ，再于热空气中干燥5min，

然后将板置含有氨蒸气(25％氨溶液)的密闭容器中。

结果：斑点呈橙-淡红色。挥发油在亮黄色背景下呈红色斑点。

②Boute 反应

检出物：酚类、氯、溴、烷基代酚。

方法：将薄层置有NO2蒸气(含浓硝酸)的容器中3～10min，再用NH2蒸气(浓氨液)

处理。

③氯醌(四氯代对苯醌)

检出物：酚类。

溶液：1％本品的甲苯溶液。

④DDQ(二氯二氰基苯醌)试剂

检出物：酚类。

溶液：2％本品的甲苯溶液。

⑤TCNE (四氰基乙烯)试剂

检出物：酚类、芳香碳氢化物、杂环类、芳香胺类。

溶液：0.5%～1%本品的甲苯溶液。

⑥Gibb’s(2，6-二溴苯醌氯亚胺)试剂

检出物：酚类。

溶液：2%本品的甲醇溶液。

⑦氯化铁

检出物：酚类、羟酰胺酸。

溶液：1%～5%氯化铁的0.5mol／L盐酸溶液。

结果：酚类呈蓝色、羟酰胺酸呈红色。

(6)含氮化合物

①FCNP(硝普钠／铁氰化物)试剂

检出物：脂 肪族含氮化物，如氨基氰、胍、脲与硫脲及其衍生物，肌酸及肌酐。

溶液：10％氢氧化钠溶液、10％硝普钠溶液、10％铁氰化钾溶液与水按1：1：1：3

混合，在室温至少放置20min，冰箱保存数周，用前将混合液与丙酮等体积混合。

②Dragendorff(碘化铋钾试剂)试剂

检出物：芳香族含氮化合物，如生物碱类、抗心律不齐药物。

溶液：I．碱式硝酸铋0.85g溶于10ml冰醋酸及40ml水中；

Ⅱ．碘化钾8g溶于水20ml中。 ．

将上述溶液I及Ⅱ等量混合，置棕色瓶中作为储备液，用前取储备液lml、冰醋酸2ml

与水l0ml混合。

结果：呈橘红色斑点。

③4-甲基伞形酮

检出物：含氮杂环化合物。

溶液：本品0.02g溶于乙醇35ml，加水至100ml。

方法：喷板后置25％氨水蒸气的容器中,取出后于紫外灯(365nm)下观察。

④碘铂酸钾

检出物：生物碱类及有机含氮化物。

溶液：10％六氯铂酸溶液3ml与水97ml混合，加6％碘化钾溶液，混匀。临用前配

制。

⑤硫酸高铈铵／硫酸

检出物：生物碱及含碘有机化物。

溶液：硫酸铈1g混悬于4ml水中，加三氯乙酸1g，煮沸，逐滴加入浓硫酸直至混浊

消失。

方法：喷后薄层于1l0oC加热数分钟。

结果：阿朴吗啡、马钱子碱、秋水仙碱、罂粟碱、毒扁豆碱与有机碘化物均能检出。

⑥Ehrlich (对二甲氨基苯甲醛／盐酸)试剂

检出物：吲哚衍生物及胺类。

溶液：1％本品的浓盐酸溶液与甲醇按1：1混合。

方法：喷后板于50oC加热20min。

结果：呈不同颜色的斑点。

(7)胺类

①硝酸／乙醇

检出物：脂肪族胺类。

溶液：50滴65％硝酸于乙醇100ml中。

方法：需要时120oC加热。

②2，6-二氯醌氯亚胺

检出物：抗氧剂、酰胺(辣椒素)、伯、仲脂肪胺、仲、叔芳香胺、芳香碳氢化物、药

物、苯氧基乙酸除草剂等。

溶液：新鲜制备的0.5％～2％本品乙醇溶液。

方法：喷后薄层于110oC加热10min，再用氨蒸气处理。

③茜素

检出物：胺类。

溶液：O.1％本品的乙醇溶液。

④丁二酮单肟／氯化镍

检出物：胺类。

溶液：I．丁二酮单肟1.2g溶于热水35ml中，加氯化镍0．95g，冷却后加浓氨水

2ml；

Ⅱ．盐酸羟胺0.12g溶于200ml水中。

方法：将溶液I及Ⅱ混合，放置1天，过滤。

⑤Pauly (对氨基苯磺酸)试剂

检出物：酚类、胺类和能偶合的杂环化合物。

溶液：磺酸4．5g溶于温热的12mol／L盐酸45ml中，用水稀释至500ml，取lOml

于冰中冷却，加4．5％亚硝酸钠冷溶液lOml，于OoC放置15min。用前加等体积10％

碳酸钠溶液。

⑥硫氰酸钴(Ⅱ)．

检出物：生物碱、伯、仲、叔胺类。

溶液：硫氰酸铵3g与氯化钴1g溶于水20ml。

结果：白色至粉红色背景上呈蓝色斑点，2h后颜色消退。若将薄层喷水或放入饱和水

蒸气容器内，可重现色点。

⑦1，2-萘醌-4-磺酸钠

检出物：芳香胺类。

溶液：本品0.5g溶于95ml水，加乙酸5ml，滤去不溶物即得。

方法：喷后反应30min显色。

⑧葡萄糖／磷酸

检出物：芳香胺类。

溶液：葡萄糖2g溶于85％磷酸l0ml与水40ml混合液中，再加乙醇与正丁醇各30ml。

方法：喷后于115℃加热l0min。

(8)硝基及亚硝基化合物

①α-萘胺

检出物：3，5一二硝基苯甲酸酯、二硝基苯甲酰胺。

溶液：I．O．5％α-萘胺乙醇溶液；

Ⅱ．10％氢氧化钾甲醇溶液。

方法：先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ。

结果：呈红褐色斑点。

②二苯胺／氯化钯

检出物：亚硝胺类。

溶液：1.5％二苯胺乙醇溶液与0.1g氯化钯的0.2％氯化钠溶液lOOml，按5：1混合。

方法: 喷后置紫外光(254nm)下观察。

结果：显紫色斑点。

(9)氨基酸及肽类

①茚三酮

检出物：氨基酸、胺与氨基糖类。

溶液：本品O.2g溶于乙醇l00ml中。

方法：喷后于110oC加热。

结果：呈红紫色斑点。

②茚三酮／乙酸镉

检出物：氨基酸及杂环胺类。

溶液：茚三酮1g及乙酸镉2.5g溶于l0ml冰醋酸中，用乙醇稀释至500ml。

方法：喷后于120oC加热20min。

③1，2-萘醌-4-磺酸钠

检出物：氨基酸。

溶液：临用前将本品O.02g溶于5%碳酸钠l00ml中。

方法：喷后室温干燥。

结果：不同氨基酸呈不同色点。

④靛红／乙酸锌

检出物：氨基酸与某些肽类。

溶液：靛红1g与乙酸锌1g溶于95％异丙醇l00ml中，加热至80oC，冷却后加乙

酸1ml，冰箱保存。

方法：喷后于80～85"C加热30min。 ．

⑤茚三酮／冰醋酸

检出物：二肽及三肽。

溶液：1％茚三酮吡啶溶液与冰醋酸按5：1混合。

方法：喷后于l00oC加热5min。

⑥香草醛

检出物：氨基酸及胺类。

溶液：I．本品1g溶于丙醇50ml中;

Ⅱ．1mol／L氢氧化钾溶液lml，用乙醇稀释至lOOml。

方法：先喷溶液I后于110oC干燥l0min，再喷溶液Ⅱ，于110oC再干燥l0min，

于紫外光(365nm)下观察。

(10)甾类

①香草醛／硫酸

检出物：甾体激素。

溶液：1％香草醛浓硫酸溶液。

方法：喷后于105℃加热5min。

②氯化锰

检出物：雌激素类。

溶液：氯化锰0.2g溶于含硫酸2ml的甲醇60ml中。

方法：喷后置紫外光(365nm)下观察。

③高氯酸

检出物：甾体激素。

溶液：5％高氯酸甲醇溶液。

方法：喷后于110oC加热5min，置紫外光(365nm)下观察。

④三氯化锑／乙酸

检出物：甾类与二萜类。

溶液：三氯化锑20g溶于乙酸20ml与氯仿60ml混合液中。

方法：喷后于100oC加热5min，紫外光长波下观察。

结果：二萜类斑点呈红黄-蓝紫色。

⑤对甲苯磺酸

检出物：甾族化合物、黄酮类与儿茶酸类。

溶液：20％本品的氯仿溶液。

方法：喷后于100oC加热数分钟，紫外光长波下观察。

结果：斑点呈荧光。

⑥氯磺酸／乙酸

检出物：三萜、甾醇与甾族化合物。

溶液：氯磺酸5ml在冷却下加乙酸l0ml溶解。

方法：喷后于130oC加热5～l0min，置紫外光长波下观察。

结果；斑点显荧光。

(11)糖类

①茴香胺、邻苯二酸试剂

检出物：碳氢化合物。

溶液：1.23g茴香胺及1.66g邻苯二酸于l00ml 95％乙醇中的溶液。

方法：喷雾或浸渍。

结果：己糖呈绿色、甲基戊糖呈黄绿色、戊糖呈紫色、糖醛酸呈棕色。

②四乙酸铅／2，7一二氯荧光素

检出物：甙类、酚类、糖酸类

溶液：I．2％四乙酸铅的冰醋酸溶液；

Ⅱ．1％2，7一二氯荧光素乙醇溶液。

取溶液I、Ⅱ 各5ml混匀，用干燥的苯或甲苯稀释至200ml，试剂溶液只能稳定2h。

方法：浸板。

⑧邻氨基联苯／磷酸

检出物：糖类。

溶液：O.3g邻氨基联苯加85％磷酸5ml与乙醇95ml。

方法：喷板后llOoC加热15～20min。

结果：斑点呈褐色。

④苯胺／二苯胺／磷酸

检出物：还原糖。

溶液：4g二苯胺、4ml苯胺与20ml 85％磷酸共溶于200ml丙酮中。

方法：喷后于85℃加热l0min。

结果：产生各种颜色。1，4-己醛糖、低聚糖呈蓝色。

⑤双甲酮／磷酸

检出物：酮糖。

溶液：双甲酮(5，5-二甲基环己烷-1，3-二酮)10.3g溶于90ml乙醇与l0ml 85％磷

酸中。

方法：喷板后于110oC加热15～20min。

结果：日光下观察，白色背景上呈黄色斑点，紫外光长波下呈蓝色荧光。

⑥联苯胺／三氯乙酸

检出物：糖类。

溶液：0.5g联苯胺溶于l0ml乙酸，再加10ml40％三氯乙酸水溶液，用乙醇稀释至

l00ml。

方法：喷后置紫外光下照射15min。

结果：斑点呈灰棕-红褐色。

⑦对二甲氨基苯甲醛／乙酰丙酮

检出物：氨基糖类。

溶液：I. 5ml 50％氢氧化钾溶液与20ml乙醇混匀，取此溶液0.5ml，加乙酰丙酮0.5ml

与正丁醇50ml的混合液l0ml，此两种溶液均需新鲜配制，临用前混合；

Ⅱ. 1g对二甲氨基苯甲醛溶于30ml乙醇中，再加30ml浓盐酸，需要时此溶液可用

正丁醇180ml稀释。

方法：先喷I后于105oC加热5min，再喷Ⅱ，然后于90℃干燥5min。

结果：斑点呈红色。

(12)杀虫剂

①甲基黄

检出物：氯化杀虫剂及抗菌化合物。

溶液：O.1g甲基黄于70ml乙醇中，加25ml水并用乙醇稀释至l00ml。

方法：喷板后于室温干燥，并在无滤光片紫外光下照射5min。

结果：黄色背景上呈红色斑点。

②溴／四氯化碳

检出物：有机磷杀虫剂。

溶液：10％溴的四氯化碳溶液。

方法：薰溴蒸气。

③锰／水杨醛

检出物：有机硫代磷杀虫剂。

溶液：I．100mg氯化锰溶于100ml 80％乙醇；

Ⅱ．溶解1.3g 2-肼喹啉于小量热乙醇中，溶1g水杨醛于5ml乙醇并加1～2滴冰

醋酸，合并两溶液并回流30min，冷却后析出水杨-2-醛-2-喹啉腙沉淀，并用乙醇重结晶。

用50mg此衍生物溶于100ml乙醇中。

方法：等量溶液I及Ⅱ混合后，喷板。

④二苯胺／氯化锌

检出物：氯化杀虫剂(DDT、CPCA、氯-DDT、克菌丹、甲氧氯、毒杀芬)。

溶液：二苯胺及氯化锌各0.5g溶于100ml丙酮中。

方法：喷后200oC加热5min。

⑤溴／荧光素／硝酸银

检出物：杀虫剂。

溶液；I．5％溴的四氯化碳溶液；

Ⅱ．1ml 0.25％荧光素的二甲基甲酰胺溶液，用乙醇稀释至50ml；

Ⅲ．1.7g硝酸银溶于5ml水中，加2-苯氧基乙醇，用丙酮稀释至200ml。

方法：展开后的薄层置试液I容器中薰30s，取出先喷溶液Ⅱ，再喷溶液Ⅲ，再置紫

外光下7min。

(13)黄酮类

①乙醇胺二苯硼酸盐

检出物：黄酮类。

溶液：I. 1％乙醇胺二苯硼酸盐的甲醇溶液；

Ⅱ. 5％聚乙二醇的乙醇溶液。

方法：先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ使荧光稳定，再在紫外光长波下照射2min。

结果：紫外灯下观察荧光。

②三氯化锑

检出物：黄酮类。

溶液：10％三氯化锑的氯仿溶液。

方法：喷板。

结果：紫外光长波下呈荧光。

⑧三氯化铝

检出物：黄酮类。

溶液：1％三氯化铝乙醇溶液。

方法：喷板。

结果：紫外光长波下显黄色荧光。

④Benedict(硫酸铜／枸橼酸钠)试剂

检出物：含邻二羟基的黄酮类及香豆精类。

溶液：1.73g 硫酸铜(CuS04?5H20)：17.3g 枸橼酸钠及10g 无水碳酸钠溶于水并稀

释至1 00ml。

方法：喷板。

结果：紫外光长波下观察，含邻二羟基的化合物，斑点荧光减弱或猝灭。

(14)含硫化合物

①硝普钠

检出物：巯基-SH基(半胱氨酸)、双硫化物、-s-s-基(胱氨酸)及精氨酸。

溶液：I. 1.5g 硝普钠溶于5ml 2mol／L盐酸溶液及95ml甲醇中，加10ml 25％氢

氧化铵溶液，过滤，即得；

Ⅱ. 2g氰化钠溶于5ml水，用甲醇稀释至100ml。

方法：先喷溶液I、再喷溶液Ⅱ。

结果：巯基化合物呈红色；精氨酸由橙变为灰蓝色；双硫化物在黄色背景上显红色。

②FCNP(硝普钠／铁氰化物)试剂

检出物：脂肪族含硫化台物，如氨基氰、硫脲及其衍生物。

溶液：10％氢氧化钠溶液、10％硝普钠溶液，10％铁氰化钾溶液与水按1：1：1：3

混合，用前与等体积丙酮混合，用时新鲜配制。

○3氯化铁／磺基水杨酸

检出物：硫代磷酸酯类。

溶液：I．1％氯化铁的80％乙醇溶液；

Ⅱ．1％磺基水杨酸的80％乙醇溶液，

方法：薄层先置溴蒸气中10min后，喷溶液I，干燥15min，再喷溶液Ⅱ。

结果：紫色背景上呈白色。 、 ：

④叠氮化碘

检出物：含硫氨基酸、硫化物与青霉素。

溶液：叠氮碘溶液-叠氮钠3g 溶乎100ml 0.05mol／L碘溶液中(新鲜配制，固体叠

氮碘有爆炸性)。

⑤靛红／硫酸

检出物：噻吩衍生物。

溶液；0.4g靛红溶于100ml浓硫酸中。

方法：喷板后120oC加热。

结果：呈不同颜色。

(15)类脂化合物

①磷钼酸

检出物：胆酸、类脂化物、脂肪酸及甾类。

溶液：250mg 磷钼酸于50ml乙醇中。

方法：唆后予120oC加热。

②罗丹明6G

检出物；类脂化物。

溶液：lg 罗丹明6G溶于100ml丙酮中．

方法：喷后置紫外光长波下观察。

③溴百里酚蓝

检出物：类脂化物。

溶液：O．04g溴百里酚蓝溶于100ml O．01mol／L氢氧化钠溶液中。

(16)阳离子

①双硫腙

检出物：金属离子。

溶液：20mg双硫腙溶于100ml丙酮中，置棕色瓶中于冰箱内保存。

方法：上述溶液喷板后再喷25％氢氧化铵溶液。

②红氨酸 (二硫代草酰胺)

检出物：重金属离子。

溶液：0.5％红氨酸乙醇溶液。

方法：先喷上述溶液，稍干后置薄层于氨蒸气中。。

③茜素

检出物：众多阳离子、稀土及铀。

溶液：茜素乙醇饱和溶液。

方法：喷板后直接放入氨蒸气中。

④亚铁氰化钾

检出物：Fe3+、Cu2+、Cl、Mo、V、W离子。

溶液：新配制的2％亚铁氰化钾溶液。

⑤二苯卡巴肼

检出物：Ag+、pb2+、Hg2+、Cu2+、Sn2+、Mn2+、Zn2+、Ni2+、Co2+及Ca2+

离子。

溶液：I．1％～2％二苯卡巴肼乙醇溶液；

Ⅱ．25％氢氧化铵溶液。

方法：先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ。

结果：Ni2+呈蓝色、Co2+呈橙褐色、Zn2+呈红紫色，Ag+、pb2+、Cu2+、Sn2+、

Mn2+呈褐色、乙酸汞加成物于80oC加热片刻，斑点呈蓝色。

(17)阴离子

①硝酸银

检出物：含硫阴离子、砷酸盐、亚砷酸盐磷酸盐、亚磷酸盐及除氟外的卤素。

溶液：0.1～0.5mol／L硝酸银溶液中加氨水直至沉淀溶解。临用前配制、储存会形成

易爆物质。

方法：喷后于110～120oC加热l0min，必要时置紫外光下l0min。

②硝酸银／氢氧化铵／荧光素

检出物：卤素离子。

溶液：I．1g硝酸银溶于l00ml O.5mol／L氢氧化铵溶液中；

Ⅱ．1g荧光索溶于l00ml乙醇中。

方法：先喷溶液I，稍干，再喷溶液Ⅱ。

③钼酸铵／亚硫酸钠

检出物：硫化物、硫代硫酸盐与磷酸盐。 ：

溶液：I．5％钼酸铵的lmol／L硫酸溶液；

Ⅱ．5％亚硫酸钠溶液。

方法：先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ，于105℃加热30min。

结果：硫化物及硫代硫酸盐呈深蓝色，磷酸盐呈蓝灰色。

④番木鳖碱

检出物：溴酸盐、硝酸盐、氯酸盐。

溶液：I．0.02％番木鳖碱的lmol／L硫酸溶液；

Ⅱ．2mol／L氢氧化钠溶液。

方法：先喷溶液I，再喷溶液Ⅱ。

结果：溴酸盐、氯酸盐呈血红色，硝酸盐呈橙黄色。

（四）.其他常用与专用显色剂：

碘：

适用于不饱和或者芳香族化合物

配制方法：在100ml 广口瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒。

或者在瓶中，加入10g 碘粒，30g 硅胶

高锰酸钾

适用于含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛

配制方法：1.5g KMnO4 + 10g K2CO3 + 1.25mL 10% NaOH +200mL 水. 使

用期3 个月

磷钼酸(PMA)

广谱

配制方法：10 g of 磷钼酸+100 mL 乙醇

紫外灯

适用于含共轭基团的化合物，芳香化合物

硫酸铈：

生物碱

配制方法：10%硫酸铈(IV)+15%硫酸的水溶液氯化铁

苯酚类化合物

配制方法：1% FeCl3 + 50% 乙醇水溶液.

桑色素(羟基黄酮)

广谱, 有荧光活性

配制方法：0.1% 桑色素+甲醇

茚三酮

适用于氨基酸

配制方法：1.5g 茚三酮+ 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸

二硝基苯肼(DNP)

适用于醛和酮

配制方法：12g 二硝基苯肼+ 60mL 浓硫酸+ 80mL 水+ 200mL乙醇

香草醛(香兰素)

广谱

配制方法：15g 香草醛+ 250mL 乙醇+2.5mL 浓硫酸

溴甲酚绿

适用于羧酸，pKa<=5.0

配制方法：在100ml 乙醇中，加入0.04g 溴甲酚绿，缓慢滴加0.1M的NaOH 水

溶液，刚好出现蓝色即至。

钼酸铈

广谱

配制方法：235 mL 水+ 12 g 钼酸氨+ 0.5 g 钼酸铈氨+ 15 mL浓硫酸

茴香醛(对甲氧基苯甲醛)1

广谱

配制方法：135 乙醇+ 5 mL 浓硫酸+ 1.5 mL of 冰醋酸+ 3.7 mL茴香醛，剧烈搅

拌，使混合均匀.

茴香醛(对甲氧基苯甲醛)2

适用于萜烯，桉树脑(cineoles), withanolides, 出油柑碱(acronycine)

配制方法：茴香醛:HClO4:丙酮:水(1:10:20:80)经常需要利用溶剂的极性大小，对展

开剂的极性予以调整。