2024年4月9日发(作者：謇安莲)
在欧洲药典EP9.0、美国药典USP40-NF35的色谱法通则及2020版《中国药典》通则0512
征求意见中可以找到这个问题的答案。这些通则中列出了液相色谱和气相色谱中的一些
性能参数，只要符合系统适用性的要求，这些参数即使改变也无需重新验证，各国药典
相关要求如下表所示：
高效液相色谱法
USP
EP
Chp2020
不得改变固定相的理化性质，如填料材质，表
固定相
/
/
面修饰及 键合相均需保持一致；从全多孔填料
到表面多孔填料的 改变，在满足上述条件的前
提下是被允许的
色谱柱长度
±70%
可调整，但线速度
不变
可以减小50%，不
能增加
±50%，线速度不
流速
变，调整幅度可以
更高
柱温
±10 ℃
±10%
±50%
±70%
改变色谱柱粒径和柱长后，L/dp 值(或 N 值)
应在原有数值 的-25%～+50%范围内
/
内径
±25%
可以减小50%，不能
增加
粒径
同柱长要求
F2=F1×[(dc2 2×dp1)/(dc1 2×dp2)]，在此基
础上可以根据实际 使用时系统压力和保留时
间，允许流速在±50%的范围内 进行调整
当温度有规定时，可在±10℃范围内调整
Vinj2=Vinj1×(L2×dc2 2)/(L1×dc1 2)，并根
进样量
可以减小（LOD和
重复性没问题）
可以减小（LOD和重
复性没问题）
据灵敏度的需求进行
调整。即便没有对色谱柱尺寸进行调整，进样
体积也可调整以满 足系统适用性的要求
pH
UV波长
缓冲液中盐浓度
±0.2
不允许调整
±10%
±0.2（中性物质±1）
不允许调整
±10%
除另有规定外，流动相中水相 pH 值可在±0.2
pH 范围内进 行调整
不允许改变
可在±10%范围内调整
等度洗脱流动相比例：最小比例的流动相组分
少量组分（<50%）
流动相组成
相对变化量±30%
或绝对变化量为±1
0%，取二者较小者
少量组分相对变化量
±30%或绝对变化量
为±2%，取二者较小
者
可在相对值±30%或者绝对值±2% 的范围内进
行调整（两者之间选择最大值）；最小比例流
动 相组分的比例需小于（100/n）%，n 为流
动相中组分的个 数
梯度洗脱程序：tG2=tG1×(F1/F2)×[(L2×dc2
2)/(L1×dc1 2)]，保持不同规格色谱
柱的洗脱体积倍数相同，从而保证梯度变化相
同，并需要 考虑不同仪器系统体积的差异
气相色谱法
色谱柱长度
色谱柱内径
粒径
液膜厚度
流速
柱温
进样量
USP
±70%
±50%
允许变化必须通过
系统适用性实验
-50~100%
±50%
±10 %
可以减小（如果LO
D和重复性没问题）
EP
±70%
±50%
-50%，不得增大
-50~100%
±50%
±10 %
可以减小（如果LOD
和重复性没问题）
不涉及
Chp2020
Chp相关备注：F1：原方法中的流速 F2：调整后方法中的流速 dc1：原方法中色谱柱
的内径dc2：调整后方法中色谱柱的内径 dp1：原方法中色谱柱的粒径 dp2：调整后
方法中色谱柱的粒径；Vinj1：原方法中进样体积；Vinj2：调整后方法中进样体积；L1：
原方法中色谱柱柱长 L2：调整后方法中色谱柱柱长 tG1：原方法的梯度段洗脱时
间 tG2：调整后的梯度段洗脱时间，可通过相关软件计算表 1 中流速、进样体积和
梯度洗脱程序的调整范围，并根据色谱峰分离情况进行微调。若调整超出上表中规定的
范围，调整的方法应进行相应的方法学验证。
色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、灵敏度、拖尾因子和重复性
等五个参数。按各品种正文项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对
照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可对色谱
系统进行适当调整，以符合要求。
参数
理论踏
板数
2020版《中国药典》
按 n = 16(t
R
/W)
2
或 n = 5.54(t
R
/
W
h/2
)
2
计算色谱柱的理论板数。tR、
USP
计算公式同《中国药典》
峰谷比（p/v）峰谷比用于当分离两峰的
EP
仅收录了半峰宽的
计算公式， n = 5.
54(t
R
/W
h/2
)
2
峰谷比同USP
（n）
W、Wh/2可用时间或长度计（下同），
基线无法达到时，作为在有关物质的测定
但应取相同单位。
时的系统适用性参数，如下图所示，
当使用了电子积分仪时，可能以n = 5.5
4(t
R
/W
h/2
)
2
方便的测定理论踏板数，当有
争议时，将只使用基于基线处的峰宽度的
方程式。
分离度
（R）
除另有规定外，待测物质色谱峰与相
邻色谱峰之间的分离度应大于 1.5。
分离度的计算公式为：
R=2(t
R2
-t
R1
)/(W
1
+W
2
)或R=2(t
R2
-t
R1
)/1.70( W
1,h/2
+ W
2,h/2
)
当使用电子积分仪时，R=1.18(t
R2
-t
R1
)/
( W
1,h/2
+ W
2,h/2
)，其它同《中国药典》
对于基线分离，分
离度应大于1.5，R
=1.18(t
R2
-t
R1
)/
( W
1,h/2
+ W
2,h/2
)
如果不是基线分
离，上述公式不适
用
式中 tR2为相邻两色谱峰中后一峰
的保留时间；
tR1为相邻两色谱峰中前一峰的保留
时间；
W1、W2及W1,h/2、W2,h/2分别
为此相邻两色谱峰的峰宽及半高峰
宽，
当对测定结果有异议时，色谱柱的理
论板数（n）和分离度（R）均以峰宽
（W）的计算结果为准。
灵敏度
定量测定时，信噪比应不小于 10；
定性测定时，信噪比应不小于 3
信噪比S/N=2H/h
定量测定时，信噪比应不小于 10；定性测
定时，信噪比应不小于 3
定量限需满足准确度和精密度的相关要
求。
同USP相关要求
拖尾因T=W
0.05h
/2d
1
W0.05h为 5％峰高计算公式同《中国药典》
计算公式同《中国
药典》
通常对称因子要求
0.8-1.5
子（T）
处的峰宽；d1为峰顶在 5%峰高处
横坐标平行线的投影点至峰前沿与
此平行线交点的距离（如图）
以峰高作定量参数时，除另有规定
外，T 值应在 0.95～1.05 之间
以峰面积作定量参数时，一般的峰拖
尾或前伸不会影响峰面积积分，但严
重拖尾会影响基线和色谱峰起止的
判断和峰面积积分的准确性，此时应
在品种正文项下对拖尾因子作出规
定。
重复性
除另有规定，外标法，连续5针RS
D应不大于2.0%；内标法，配制8
0%、100%、120%三种不同浓度溶
液，分别至少进样2次，平均校正因
子的RSD不得过2.0%，当待测成分
是微量或痕量，进样量少或其色谱峰
响应值较小时，对相对标准偏差的要
求可适当放宽。
RSD%=KB√n/t90%，n-1，RSD为
相对标准偏差，K为常数0.349，B为各
论中给出的上限减去100%（引申为含量
的范围要求），n为参考溶液重复进样的
次数（3 ≤n ≤6），t90%是在n-1自由
度90%的概率下的一组t值（双侧）
同USP
结论：各国药典对系统适用性的要求不尽相同，但涉及的计算公式基本一致，研究中应根据具体品种的特
性，制定适合自己的系统适用性要求，确保检测数据的准确，可重现。
2024年4月9日发(作者：謇安莲)
在欧洲药典EP9.0、美国药典USP40-NF35的色谱法通则及2020版《中国药典》通则0512
征求意见中可以找到这个问题的答案。这些通则中列出了液相色谱和气相色谱中的一些
性能参数，只要符合系统适用性的要求，这些参数即使改变也无需重新验证，各国药典
相关要求如下表所示：
高效液相色谱法
USP
EP
Chp2020
不得改变固定相的理化性质，如填料材质，表
固定相
/
/
面修饰及 键合相均需保持一致；从全多孔填料
到表面多孔填料的 改变，在满足上述条件的前
提下是被允许的
色谱柱长度
±70%
可调整，但线速度
不变
可以减小50%，不
能增加
±50%，线速度不
流速
变，调整幅度可以
更高
柱温
±10 ℃
±10%
±50%
±70%
改变色谱柱粒径和柱长后，L/dp 值(或 N 值)
应在原有数值 的-25%～+50%范围内
/
内径
±25%
可以减小50%，不能
增加
粒径
同柱长要求
F2=F1×[(dc2 2×dp1)/(dc1 2×dp2)]，在此基
础上可以根据实际 使用时系统压力和保留时
间，允许流速在±50%的范围内 进行调整
当温度有规定时，可在±10℃范围内调整
Vinj2=Vinj1×(L2×dc2 2)/(L1×dc1 2)，并根
进样量
可以减小（LOD和
重复性没问题）
可以减小（LOD和重
复性没问题）
据灵敏度的需求进行
调整。即便没有对色谱柱尺寸进行调整，进样
体积也可调整以满 足系统适用性的要求
pH
UV波长
缓冲液中盐浓度
±0.2
不允许调整
±10%
±0.2（中性物质±1）
不允许调整
±10%
除另有规定外，流动相中水相 pH 值可在±0.2
pH 范围内进 行调整
不允许改变
可在±10%范围内调整
等度洗脱流动相比例：最小比例的流动相组分
少量组分（<50%）
流动相组成
相对变化量±30%
或绝对变化量为±1
0%，取二者较小者
少量组分相对变化量
±30%或绝对变化量
为±2%，取二者较小
者
可在相对值±30%或者绝对值±2% 的范围内进
行调整（两者之间选择最大值）；最小比例流
动 相组分的比例需小于（100/n）%，n 为流
动相中组分的个 数
梯度洗脱程序：tG2=tG1×(F1/F2)×[(L2×dc2
2)/(L1×dc1 2)]，保持不同规格色谱
柱的洗脱体积倍数相同，从而保证梯度变化相
同，并需要 考虑不同仪器系统体积的差异
气相色谱法
色谱柱长度
色谱柱内径
粒径
液膜厚度
流速
柱温
进样量
USP
±70%
±50%
允许变化必须通过
系统适用性实验
-50~100%
±50%
±10 %
可以减小（如果LO
D和重复性没问题）
EP
±70%
±50%
-50%，不得增大
-50~100%
±50%
±10 %
可以减小（如果LOD
和重复性没问题）
不涉及
Chp2020
Chp相关备注：F1：原方法中的流速 F2：调整后方法中的流速 dc1：原方法中色谱柱
的内径dc2：调整后方法中色谱柱的内径 dp1：原方法中色谱柱的粒径 dp2：调整后
方法中色谱柱的粒径；Vinj1：原方法中进样体积；Vinj2：调整后方法中进样体积；L1：
原方法中色谱柱柱长 L2：调整后方法中色谱柱柱长 tG1：原方法的梯度段洗脱时
间 tG2：调整后的梯度段洗脱时间，可通过相关软件计算表 1 中流速、进样体积和
梯度洗脱程序的调整范围，并根据色谱峰分离情况进行微调。若调整超出上表中规定的
范围，调整的方法应进行相应的方法学验证。
色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、灵敏度、拖尾因子和重复性
等五个参数。按各品种正文项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对
照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可对色谱
系统进行适当调整，以符合要求。
参数
理论踏
板数
2020版《中国药典》
按 n = 16(t
R
/W)
2
或 n = 5.54(t
R
/
W
h/2
)
2
计算色谱柱的理论板数。tR、
USP
计算公式同《中国药典》
峰谷比（p/v）峰谷比用于当分离两峰的
EP
仅收录了半峰宽的
计算公式， n = 5.
54(t
R
/W
h/2
)
2
峰谷比同USP
（n）
W、Wh/2可用时间或长度计（下同），
基线无法达到时，作为在有关物质的测定
但应取相同单位。
时的系统适用性参数，如下图所示，
当使用了电子积分仪时，可能以n = 5.5
4(t
R
/W
h/2
)
2
方便的测定理论踏板数，当有
争议时，将只使用基于基线处的峰宽度的
方程式。
分离度
（R）
除另有规定外，待测物质色谱峰与相
邻色谱峰之间的分离度应大于 1.5。
分离度的计算公式为：
R=2(t
R2
-t
R1
)/(W
1
+W
2
)或R=2(t
R2
-t
R1
)/1.70( W
1,h/2
+ W
2,h/2
)
当使用电子积分仪时，R=1.18(t
R2
-t
R1
)/
( W
1,h/2
+ W
2,h/2
)，其它同《中国药典》
对于基线分离，分
离度应大于1.5，R
=1.18(t
R2
-t
R1
)/
( W
1,h/2
+ W
2,h/2
)
如果不是基线分
离，上述公式不适
用
式中 tR2为相邻两色谱峰中后一峰
的保留时间；
tR1为相邻两色谱峰中前一峰的保留
时间；
W1、W2及W1,h/2、W2,h/2分别
为此相邻两色谱峰的峰宽及半高峰
宽，
当对测定结果有异议时，色谱柱的理
论板数（n）和分离度（R）均以峰宽
（W）的计算结果为准。
灵敏度
定量测定时，信噪比应不小于 10；
定性测定时，信噪比应不小于 3
信噪比S/N=2H/h
定量测定时，信噪比应不小于 10；定性测
定时，信噪比应不小于 3
定量限需满足准确度和精密度的相关要
求。
同USP相关要求
拖尾因T=W
0.05h
/2d
1
W0.05h为 5％峰高计算公式同《中国药典》
计算公式同《中国
药典》
通常对称因子要求
0.8-1.5
子（T）
处的峰宽；d1为峰顶在 5%峰高处
横坐标平行线的投影点至峰前沿与
此平行线交点的距离（如图）
以峰高作定量参数时，除另有规定
外，T 值应在 0.95～1.05 之间
以峰面积作定量参数时，一般的峰拖
尾或前伸不会影响峰面积积分，但严
重拖尾会影响基线和色谱峰起止的
判断和峰面积积分的准确性，此时应
在品种正文项下对拖尾因子作出规
定。
重复性
除另有规定，外标法，连续5针RS
D应不大于2.0%；内标法，配制8
0%、100%、120%三种不同浓度溶
液，分别至少进样2次，平均校正因
子的RSD不得过2.0%，当待测成分
是微量或痕量，进样量少或其色谱峰
响应值较小时，对相对标准偏差的要
求可适当放宽。
RSD%=KB√n/t90%，n-1，RSD为
相对标准偏差，K为常数0.349，B为各
论中给出的上限减去100%（引申为含量
的范围要求），n为参考溶液重复进样的
次数（3 ≤n ≤6），t90%是在n-1自由
度90%的概率下的一组t值（双侧）
同USP
结论：各国药典对系统适用性的要求不尽相同，但涉及的计算公式基本一致，研究中应根据具体品种的特
性，制定适合自己的系统适用性要求，确保检测数据的准确，可重现。