2024年5月11日发(作者：求千柳)
试验研究
微量大鼠血浆中对乙酰氨基酚的LC/
MS/MS定量检测方法的建立
张亮袁廖宏俊袁丁文杰袁王小雪袁郁杰
渊江苏农牧科技职业学院袁江苏泰州225300冤
摘要院采用微量大鼠血浆袁构建满足GLP法规要求的对乙酰氨基酚的LC/MS/MS定量检测方法遥通过分析待分析
物的基质效应袁内标的基质效应袁待分析物和内标的回收率以及稀释效应袁证明了微量取样方法的准确性袁微量取样下
PK数据分析的可靠性袁成功的构建了微量取样下的LC/MS/MS定量方法遥
关键词院生物分析曰微量取样曰对乙酰氨基酚曰LC/MS/MS
DOI:10援3969/援1671-6027援2021援10.022
非那西丁的体内代谢产物对乙酰氨基酚袁又名泰诺林尧mL袁400000ng/mL袁800000ng/mL袁1000000ng/mL的标准曲线
必理通尧百服宁遥对于治疗普通感冒引起的发热以及缓解头工作液袁以及质控样品工作液LLOQQC袁LQC袁GMQC袁MQC袁
疼袁关节疼等有良好的效果遥作为分析化学的一个分支袁生物HQC袁浓度分别为渊1000ng/mL袁3000ng/mL袁20000ng/mL袁
分析广泛的应用于外源性物质渊化学合成或天然提取的候选500000ng/mL袁750000ng/mL冤袁于-30益到-10益条件下储存遥
药物袁基因改造的生物分子及它们的代谢产物或转化后再修Acetaminophen-d4储备液院室温黄光条件下精密称取
饰的产物冤和生物系统中生物大分子渊蛋白质尧DNA尧大分子Acetaminophen-d42.135mg袁放入玻璃瓶中袁然后加入
药物和代谢产物冤等的定量测定遥2.135mLDMSO溶解即为所需工作液袁然后用50%ACN稀释
LC/MS技术是以质谱为检测手段的色谱技术袁它既有液得到1000ng/mL的内标工作液袁并于-30益到-10益条件下
相色谱的高分离能力也有质谱的高灵敏度和高专属性遥在药储存遥
物微量杂质尧药物降解产物尧及其生物转化产物的分析鉴定尧
药代动力学等研究领域得到广泛的应用遥本文采用
LC/MS/MS建立了微量大鼠血浆中对乙酰氨基酚的定量检测C18
渊
1.
1冤
7滋
色谱条件
m2.1伊50m
院色谱柱
m曰流动相
院Water
院
s袁
流动相
ACQUITY
B院0.
U
1%
PLC
FA
BEH
and
方法袁并进行了方法学的验证遥2mMNH
4
OAcinH
2
O曰流动相A院0.1%FAand2mMNH
4
OAc
1材料和方法inACN/H
2
O渊95:5曰v:v冤曰洗液院R3:0.1%FAinACN/MeOH/I-
仪器院ABSCIEX公司的TriplePA/H
2
O(1:1:1:1袁v:v:v:v)曰R0袁R1院50%MeOH曰流速院0.400
Quad6500plus曰ShimadzuLC-30AD超高效液相色谱仪和mL/min袁柱温院40益曰进样量院15滋L遥
SIL-30ACMP自动进样器曰大龙MX-S涡旋混合仪曰Eppen-
dorf5810R低温高速离心机遥数据处理系统院Analyst1.6.3遥
大鼠血浆购于BioreclamationINT袁批号
渊
渊2冤质谱条件院溶剂挥发温度600益袁电喷雾离子源
反
ESI
应
冤
监
正离子模式
测渊MRM
袁
冤袁
离子源喷射电压为
分析物4-Acetam
5000V
idophenol
袁扫描方式为多
离子对为
RAT353600曰Acetaminophen-d4购自于TorontoResearchChe152.2/110.2袁内标Acetamidophenol-d4离子对为156.2/114.2遥
micalsInc袁批号院A161222曰4-Acetamidophenol购自于梯希爱在室温条件下融解样品袁并逐个涡旋遥取
渊
10.0滋L标曲样品尧质控样品或测试样品袁对于双空白样品
M
上海
A渊色谱纯
冤化成工业发展有限公司
冤曰乙腈购于SIGMA渊
袁批号
色谱纯
院5I
冤曰
XZK
还有去离子水
曰甲醇购于SI
袁
G
及
-
和单空白样品取10.0滋L空白基质加入到新96深孔板中遥
其它分析纯试剂遥在双空白样品孔中加入30.0滋L50%ACN袁对其它孔内袁分
4-Acetamidophenol储备液院室温黄光条件下精密称取别加入30.0滋L内标工作溶液渊1000ng/mL冤袁混合均匀遥
4-Acetamidophenol2.531mg袁放入玻璃瓶中袁后加入2.531mL向每个样品孔内添加260滋L0.1%的甲酸乙腈溶液袁封
DMSO溶解,然后用50%ACN稀释储备液袁得到浓度为96孔板袁涡旋约10min袁然后于4益袁3200伊g条件下离心
1000ng/mL袁2000ng/mL袁10000ng/mL袁50000ng/mL袁200000ng/10min遥取30.0滋L上清至另一新96孔板中袁每个样品孔中
添加570滋L去离子水袁涡旋至少5min遥
基金项目院江苏农牧科技职业学院大学生创新创业训练计划
2结果与讨论
(2H)
用移液器吸取
作者简介院张亮渊1987耀冤袁硕士袁讲师袁研究方向院药物分析遥
190滋L空白大鼠血浆至离心管中袁然后分别加入10.0滋L标
曲和质控样品工作液袁涡旋混匀袁即得到浓度为50.0ng/mL袁
畜牧兽医科技信息2021年第10期
31
.. All Rights Reserved.
试验研究
图14-Acetamidophenol标准曲线图
图24-Acetamidophenol双空白样品图谱
图34-Acetamidophenol单空白样品图谱
图44-Acetamidophenol定量下限样品谱图
32
2021年第10期畜牧兽医科技信息
.. All Rights Reserved.
100ng/mL袁500ng/mL袁2500ng/mL袁10000ng/mL袁20000ngmL袁
40000ng/mL袁50000ng/mL标曲和质控样品遥
在分析批的开始加入双空白样品和单空白样品袁然后加
入标准曲线样品袁并在分析批的最后再加入一条标准曲线遥
通过液相质谱得到相关数据袁用Analyst软件进行拟合袁得到
如图1所示的标准曲线图遥如图2尧图3尧图4分别是双空白
样品图谱尧单空白样品图谱及定量下限样品谱图袁从所得图
谱的结果可以得出对乙酰氨基酚及内标的峰形良好袁对乙酰
氨基酚及内标的分析不受基质中内源性物质的干扰遥对乙酰
氨基酚的出峰时间为0.95min袁内标出峰时间为0.93min遥
准确度和精密度主要根据LLOQ尧
LQC尧GMQC尧MQC尧HQC浓度水平的质控样品来进行评估遥
依据法规要求袁各浓度水平QC样品平均值的偏差百分比
渊
渊
D
CV
EV
%
%
从表
冤
冤
不得超过
不得超过
1试验结果来看
15.
依
0%
15%
渊
渊
LLO
LLOQ不得超过依20%冤袁变异系数
10
Q
滋
不得超过
L样品处理量方法下
依20%冤遥
袁超过
2/3的质控样品满足接受标准袁且每个浓度都有超过50%的
样品满足接受标准遥因此袁该方法的分析结果满足法规要求遥
表1分析物4-Acetamidophenol质控样品的DEV%与CV%
试验考察了该处理方法下袁低浓度和高浓度
水平下基质对化合物和内标的影响遥基质效应因子渊MF冤袁是
用每个批次的空白基质提取后加上中间溶液得到的样品中
分析物和内标的峰面积袁除以相应浓度的纯溶液样品中分析
物和内标峰面积袁计算得出遥内标归一化的MF由分析物的
MF除以内标的MF得到遥从表2尧3尧4的结果可以看出袁该方
法下内标归一化的MF的变异系数均在8.2%以内袁满足接受
标准渊内标归一化变异系数不大于15%冤遥该方法下化合物及
内标没有明显的基质效应影响遥
表2分析物4-Acetamidophenol的基质效应
从表5和表6的结果可知低浓度和高浓度水
平的质控样品中袁分析物在每个浓度水平以及所有低高浓度
水平的提取回收率的变异系数均在8.0%以下袁内标的提取
回收率的变异系数均在12.1%以内袁满足变异系数在15%以
畜牧兽医科技信息
试验研究
表3内标Acetamidophenol-d4的基质效应
表4内标Acetamidophenol-d4归一化基质效应
表5分析物4-Acetamidophenol回收率
表6内标Acetamidophenol-d4回收率
表7分析物4-Acetamidophenol稀释效应
内的要求遥因此该处理方法下袁化合物和内标的回收率均满
足GLP法规下的要求遥
另外试验测试了DQC样品在20倍稀释下
的稀释效应袁10滋L的样品处理方法中三个重复样品之间的
变异系数为4.0袁所有稀释样品的浓度与理论浓度之间的偏
2021年第10期
33
.. All Rights Reserved.
试验研究
宽甸地区中华蟾蜍色斑多样性探究
张秋怡
1
渊1.沈阳农业大学生物科学技术学院
袁
袁
刘宣岐
2
辽宁沈阳
袁邹若男
2
沈阳农业大学动物科学与医学学院
袁邢迦盈
1
袁周圣博
1
绎
110866曰2.袁辽宁沈阳110866冤
摘要院2020年9~10月袁采用随机捕捉方法袁对辽宁省丹东市宽甸地区的中华蟾蜍体色多样性进行了观察和比较袁结
果表明袁在同一环境条件下袁中华蟾蜍具有两种不同的色斑类型袁按照其背部是否有棕红黑色块状或条带状斑可分为
常态型渊玉型冤和背部有色斑型渊域型冤袁且域型内可按照色斑分为三大类院域-a型尧域-b型和域-c型曰域型多数个体瘰
粒不显袁体侧黑线明显遥玉尧域型比值为1院0.14遥
关键词院宽甸曰中华蟾蜍曰色斑多样性
DOI:10援3969/援1671-6027援2021援10.023
宽甸地区位于辽宁省东部袁地处辽东断块山地丘陵区袁该点地形为河边多个静水塘袁总面积约450m
2
为长白山脉与千山山脉过渡地带袁其得天独厚的地理位置和生袁分布有蝼蛄渊Gryllotalpaspps.冤袁飞蝗渊Locus
袁
ta
四周杂草丛
migratoria冤
优越自然环境袁有着省内较为丰富的两栖动物资源遥其中蟾等多种昆虫袁为中华蟾蜍提供了理想的栖息地和食物资源遥
蜍科渊Bufonidae冤蟾蜍属渊Bufo冤的中华蟾蜍渊Bufogargarizans冤
为宽甸地区的优势物种遥因其耳后腺及皮肤腺分泌物的干燥野外随机捕捉中华蟾蜍袁观察其外部形态特征袁使用佳
加工品蟾酥可入药袁而被列入东北地区重要经济两栖动物袁能渊EOS60d冤数码相机拍照袁根据其背部是否有棕红黑色块
作者于该地进行考察时袁发现相似生境中中华蟾蜍有着两种状或条带状斑可分为常态型渊玉型冤和背部有色斑型渊域型冤袁
不同的色斑类型遥固对此现象进行了初步探究并报道如下遥而后进行整理尧编号和归类袁统计不同色斑类型个体的出现
1采集地环境与方法频度并将域型个体进行进一步归类袁部分个体带回实验室统
计形态学数据及量度遥
宽甸满族自治县地处124毅21爷耀125毅43爷E袁40毅13爷2结果与分析
耀
水资源丰富
40毅09爷N
袁
袁
水系发达
年均气温
袁
6.
固适宜两栖动物栖息的生境较多
8益袁属东亚季风性气候袁降水集中
遥观
袁
工作期间共采集中华蟾蜍94只用于观察袁带回实验室
察地点位于丹东市宽甸满族自治县红石镇袁平均海拔485m袁14只成体用于统计形态学数据及量度袁而后全部放归采集
绎通信作者
地遥根据观察袁在同一环境条件下袁中华蟾蜍皮肤颜色主要为
差均在依4.8%以内袁满足接受标准袁因此该方法在稀释效应GLP法规的要求遥另外袁稀释效应也均满足GLP法规要求遥
方面满足GLP法规要求渊见表7冤遥因此从整个试验结果的对比发现袁微量取样的数据是可靠
生物分析的样品大多来源于各种动物的血浆尧
的袁微量取样也可以满足各方面的要求遥因此袁微量大鼠血浆
血清或全血袁也包括粪便其它体液遥因此袁动物福利是生物分
中定量检测对乙酰氨基酚的LC/MS/MS方法成功构建袁也是
析需要考虑的一个因素遥动物福利要求袁在动物饲养和给药
可行的遥
采集样品期间袁要让动物很好的适应所处的环境袁并采取一
参考文献
些措施来满足试验动物基本的自然需求遥从动物福利角度来
[1]余自成袁等.生物分析的液相色谱方法认证[J].国外医学.药学分
考虑袁血液采集时严格按照体重的比例来采集袁而我们通常
册袁2001袁20(03):14-15.
的试验中会经常用到大鼠遥一般样品分析需要处理30滋L的
[2]杨叶袁等.抗氧化营养素对丙烯酰胺所致雄性大鼠生殖氧化损伤
样品袁由于大鼠等小型动物采样量有限袁为了满足多时间点
的保护作用[J].南京医科大学学报(自然科学版).2011袁5(12):58-61.
采样的要求袁不得不需要更多的试验动物袁来进行交叉采样袁
[3]陈连国袁等.ID-LC-MS/MS方法对被动吸烟大鼠肺组织DNA中
这就增加了动物个体之间的差异对PK数据的影响遥而如果
8-oxo-dGsn的检测[J].医学研究杂志.2013袁25(6):36-39.
将30滋L的样品处理量降至10滋L袁一只动物就能满足整个
[4]古丽努尔窑塔西铁木尔,等.液相色谱-串联质谱法测定Beagle犬
试验设计中各时间点采样的要求袁不仅可以减少试验动物的
血浆中黄体酮浓度及其药动学[J].药物分析杂志.2011袁26(11):
使用量袁采血量袁减少动物之间的差异对PK数据分析准确性
24-29.
[5]张重丽袁等.浅谈动物福利[J].草业科学袁2011袁15(6)院24-26
的影响袁还可以满足动物福利的法规要求遥
[6]贺争鸣袁等.关注和提高实验动物福利[J].中国比较医学杂志袁
从试验结果来看袁不管是从待分析物还是内标来看袁该
2004袁16(6)院16-17
方式下内标及待分析物之间的基质效应还是回收率均满足
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试验研究
微量大鼠血浆中对乙酰氨基酚的LC/
MS/MS定量检测方法的建立
张亮袁廖宏俊袁丁文杰袁王小雪袁郁杰
渊江苏农牧科技职业学院袁江苏泰州225300冤
摘要院采用微量大鼠血浆袁构建满足GLP法规要求的对乙酰氨基酚的LC/MS/MS定量检测方法遥通过分析待分析
物的基质效应袁内标的基质效应袁待分析物和内标的回收率以及稀释效应袁证明了微量取样方法的准确性袁微量取样下
PK数据分析的可靠性袁成功的构建了微量取样下的LC/MS/MS定量方法遥
关键词院生物分析曰微量取样曰对乙酰氨基酚曰LC/MS/MS
DOI:10援3969/援1671-6027援2021援10.022
非那西丁的体内代谢产物对乙酰氨基酚袁又名泰诺林尧mL袁400000ng/mL袁800000ng/mL袁1000000ng/mL的标准曲线
必理通尧百服宁遥对于治疗普通感冒引起的发热以及缓解头工作液袁以及质控样品工作液LLOQQC袁LQC袁GMQC袁MQC袁
疼袁关节疼等有良好的效果遥作为分析化学的一个分支袁生物HQC袁浓度分别为渊1000ng/mL袁3000ng/mL袁20000ng/mL袁
分析广泛的应用于外源性物质渊化学合成或天然提取的候选500000ng/mL袁750000ng/mL冤袁于-30益到-10益条件下储存遥
药物袁基因改造的生物分子及它们的代谢产物或转化后再修Acetaminophen-d4储备液院室温黄光条件下精密称取
饰的产物冤和生物系统中生物大分子渊蛋白质尧DNA尧大分子Acetaminophen-d42.135mg袁放入玻璃瓶中袁然后加入
药物和代谢产物冤等的定量测定遥2.135mLDMSO溶解即为所需工作液袁然后用50%ACN稀释
LC/MS技术是以质谱为检测手段的色谱技术袁它既有液得到1000ng/mL的内标工作液袁并于-30益到-10益条件下
相色谱的高分离能力也有质谱的高灵敏度和高专属性遥在药储存遥
物微量杂质尧药物降解产物尧及其生物转化产物的分析鉴定尧
药代动力学等研究领域得到广泛的应用遥本文采用
LC/MS/MS建立了微量大鼠血浆中对乙酰氨基酚的定量检测C18
渊
1.
1冤
7滋
色谱条件
m2.1伊50m
院色谱柱
m曰流动相
院Water
院
s袁
流动相
ACQUITY
B院0.
U
1%
PLC
FA
BEH
and
方法袁并进行了方法学的验证遥2mMNH
4
OAcinH
2
O曰流动相A院0.1%FAand2mMNH
4
OAc
1材料和方法inACN/H
2
O渊95:5曰v:v冤曰洗液院R3:0.1%FAinACN/MeOH/I-
仪器院ABSCIEX公司的TriplePA/H
2
O(1:1:1:1袁v:v:v:v)曰R0袁R1院50%MeOH曰流速院0.400
Quad6500plus曰ShimadzuLC-30AD超高效液相色谱仪和mL/min袁柱温院40益曰进样量院15滋L遥
SIL-30ACMP自动进样器曰大龙MX-S涡旋混合仪曰Eppen-
dorf5810R低温高速离心机遥数据处理系统院Analyst1.6.3遥
大鼠血浆购于BioreclamationINT袁批号
渊
渊2冤质谱条件院溶剂挥发温度600益袁电喷雾离子源
反
ESI
应
冤
监
正离子模式
测渊MRM
袁
冤袁
离子源喷射电压为
分析物4-Acetam
5000V
idophenol
袁扫描方式为多
离子对为
RAT353600曰Acetaminophen-d4购自于TorontoResearchChe152.2/110.2袁内标Acetamidophenol-d4离子对为156.2/114.2遥
micalsInc袁批号院A161222曰4-Acetamidophenol购自于梯希爱在室温条件下融解样品袁并逐个涡旋遥取
渊
10.0滋L标曲样品尧质控样品或测试样品袁对于双空白样品
M
上海
A渊色谱纯
冤化成工业发展有限公司
冤曰乙腈购于SIGMA渊
袁批号
色谱纯
院5I
冤曰
XZK
还有去离子水
曰甲醇购于SI
袁
G
及
-
和单空白样品取10.0滋L空白基质加入到新96深孔板中遥
其它分析纯试剂遥在双空白样品孔中加入30.0滋L50%ACN袁对其它孔内袁分
4-Acetamidophenol储备液院室温黄光条件下精密称取别加入30.0滋L内标工作溶液渊1000ng/mL冤袁混合均匀遥
4-Acetamidophenol2.531mg袁放入玻璃瓶中袁后加入2.531mL向每个样品孔内添加260滋L0.1%的甲酸乙腈溶液袁封
DMSO溶解,然后用50%ACN稀释储备液袁得到浓度为96孔板袁涡旋约10min袁然后于4益袁3200伊g条件下离心
1000ng/mL袁2000ng/mL袁10000ng/mL袁50000ng/mL袁200000ng/10min遥取30.0滋L上清至另一新96孔板中袁每个样品孔中
添加570滋L去离子水袁涡旋至少5min遥
基金项目院江苏农牧科技职业学院大学生创新创业训练计划
2结果与讨论
(2H)
用移液器吸取
作者简介院张亮渊1987耀冤袁硕士袁讲师袁研究方向院药物分析遥
190滋L空白大鼠血浆至离心管中袁然后分别加入10.0滋L标
曲和质控样品工作液袁涡旋混匀袁即得到浓度为50.0ng/mL袁
畜牧兽医科技信息2021年第10期
31
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试验研究
图14-Acetamidophenol标准曲线图
图24-Acetamidophenol双空白样品图谱
图34-Acetamidophenol单空白样品图谱
图44-Acetamidophenol定量下限样品谱图
32
2021年第10期畜牧兽医科技信息
.. All Rights Reserved.
100ng/mL袁500ng/mL袁2500ng/mL袁10000ng/mL袁20000ngmL袁
40000ng/mL袁50000ng/mL标曲和质控样品遥
在分析批的开始加入双空白样品和单空白样品袁然后加
入标准曲线样品袁并在分析批的最后再加入一条标准曲线遥
通过液相质谱得到相关数据袁用Analyst软件进行拟合袁得到
如图1所示的标准曲线图遥如图2尧图3尧图4分别是双空白
样品图谱尧单空白样品图谱及定量下限样品谱图袁从所得图
谱的结果可以得出对乙酰氨基酚及内标的峰形良好袁对乙酰
氨基酚及内标的分析不受基质中内源性物质的干扰遥对乙酰
氨基酚的出峰时间为0.95min袁内标出峰时间为0.93min遥
准确度和精密度主要根据LLOQ尧
LQC尧GMQC尧MQC尧HQC浓度水平的质控样品来进行评估遥
依据法规要求袁各浓度水平QC样品平均值的偏差百分比
渊
渊
D
CV
EV
%
%
从表
冤
冤
不得超过
不得超过
1试验结果来看
15.
依
0%
15%
渊
渊
LLO
LLOQ不得超过依20%冤袁变异系数
10
Q
滋
不得超过
L样品处理量方法下
依20%冤遥
袁超过
2/3的质控样品满足接受标准袁且每个浓度都有超过50%的
样品满足接受标准遥因此袁该方法的分析结果满足法规要求遥
表1分析物4-Acetamidophenol质控样品的DEV%与CV%
试验考察了该处理方法下袁低浓度和高浓度
水平下基质对化合物和内标的影响遥基质效应因子渊MF冤袁是
用每个批次的空白基质提取后加上中间溶液得到的样品中
分析物和内标的峰面积袁除以相应浓度的纯溶液样品中分析
物和内标峰面积袁计算得出遥内标归一化的MF由分析物的
MF除以内标的MF得到遥从表2尧3尧4的结果可以看出袁该方
法下内标归一化的MF的变异系数均在8.2%以内袁满足接受
标准渊内标归一化变异系数不大于15%冤遥该方法下化合物及
内标没有明显的基质效应影响遥
表2分析物4-Acetamidophenol的基质效应
从表5和表6的结果可知低浓度和高浓度水
平的质控样品中袁分析物在每个浓度水平以及所有低高浓度
水平的提取回收率的变异系数均在8.0%以下袁内标的提取
回收率的变异系数均在12.1%以内袁满足变异系数在15%以
畜牧兽医科技信息
试验研究
表3内标Acetamidophenol-d4的基质效应
表4内标Acetamidophenol-d4归一化基质效应
表5分析物4-Acetamidophenol回收率
表6内标Acetamidophenol-d4回收率
表7分析物4-Acetamidophenol稀释效应
内的要求遥因此该处理方法下袁化合物和内标的回收率均满
足GLP法规下的要求遥
另外试验测试了DQC样品在20倍稀释下
的稀释效应袁10滋L的样品处理方法中三个重复样品之间的
变异系数为4.0袁所有稀释样品的浓度与理论浓度之间的偏
2021年第10期
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试验研究
宽甸地区中华蟾蜍色斑多样性探究
张秋怡
1
渊1.沈阳农业大学生物科学技术学院
袁
袁
刘宣岐
2
辽宁沈阳
袁邹若男
2
沈阳农业大学动物科学与医学学院
袁邢迦盈
1
袁周圣博
1
绎
110866曰2.袁辽宁沈阳110866冤
摘要院2020年9~10月袁采用随机捕捉方法袁对辽宁省丹东市宽甸地区的中华蟾蜍体色多样性进行了观察和比较袁结
果表明袁在同一环境条件下袁中华蟾蜍具有两种不同的色斑类型袁按照其背部是否有棕红黑色块状或条带状斑可分为
常态型渊玉型冤和背部有色斑型渊域型冤袁且域型内可按照色斑分为三大类院域-a型尧域-b型和域-c型曰域型多数个体瘰
粒不显袁体侧黑线明显遥玉尧域型比值为1院0.14遥
关键词院宽甸曰中华蟾蜍曰色斑多样性
DOI:10援3969/援1671-6027援2021援10.023
宽甸地区位于辽宁省东部袁地处辽东断块山地丘陵区袁该点地形为河边多个静水塘袁总面积约450m
2
为长白山脉与千山山脉过渡地带袁其得天独厚的地理位置和生袁分布有蝼蛄渊Gryllotalpaspps.冤袁飞蝗渊Locus
袁
ta
四周杂草丛
migratoria冤
优越自然环境袁有着省内较为丰富的两栖动物资源遥其中蟾等多种昆虫袁为中华蟾蜍提供了理想的栖息地和食物资源遥
蜍科渊Bufonidae冤蟾蜍属渊Bufo冤的中华蟾蜍渊Bufogargarizans冤
为宽甸地区的优势物种遥因其耳后腺及皮肤腺分泌物的干燥野外随机捕捉中华蟾蜍袁观察其外部形态特征袁使用佳
加工品蟾酥可入药袁而被列入东北地区重要经济两栖动物袁能渊EOS60d冤数码相机拍照袁根据其背部是否有棕红黑色块
作者于该地进行考察时袁发现相似生境中中华蟾蜍有着两种状或条带状斑可分为常态型渊玉型冤和背部有色斑型渊域型冤袁
不同的色斑类型遥固对此现象进行了初步探究并报道如下遥而后进行整理尧编号和归类袁统计不同色斑类型个体的出现
1采集地环境与方法频度并将域型个体进行进一步归类袁部分个体带回实验室统
计形态学数据及量度遥
宽甸满族自治县地处124毅21爷耀125毅43爷E袁40毅13爷2结果与分析
耀
水资源丰富
40毅09爷N
袁
袁
水系发达
年均气温
袁
6.
固适宜两栖动物栖息的生境较多
8益袁属东亚季风性气候袁降水集中
遥观
袁
工作期间共采集中华蟾蜍94只用于观察袁带回实验室
察地点位于丹东市宽甸满族自治县红石镇袁平均海拔485m袁14只成体用于统计形态学数据及量度袁而后全部放归采集
绎通信作者
地遥根据观察袁在同一环境条件下袁中华蟾蜍皮肤颜色主要为
差均在依4.8%以内袁满足接受标准袁因此该方法在稀释效应GLP法规的要求遥另外袁稀释效应也均满足GLP法规要求遥
方面满足GLP法规要求渊见表7冤遥因此从整个试验结果的对比发现袁微量取样的数据是可靠
生物分析的样品大多来源于各种动物的血浆尧
的袁微量取样也可以满足各方面的要求遥因此袁微量大鼠血浆
血清或全血袁也包括粪便其它体液遥因此袁动物福利是生物分
中定量检测对乙酰氨基酚的LC/MS/MS方法成功构建袁也是
析需要考虑的一个因素遥动物福利要求袁在动物饲养和给药
可行的遥
采集样品期间袁要让动物很好的适应所处的环境袁并采取一
参考文献
些措施来满足试验动物基本的自然需求遥从动物福利角度来
[1]余自成袁等.生物分析的液相色谱方法认证[J].国外医学.药学分
考虑袁血液采集时严格按照体重的比例来采集袁而我们通常
册袁2001袁20(03):14-15.
的试验中会经常用到大鼠遥一般样品分析需要处理30滋L的
[2]杨叶袁等.抗氧化营养素对丙烯酰胺所致雄性大鼠生殖氧化损伤
样品袁由于大鼠等小型动物采样量有限袁为了满足多时间点
的保护作用[J].南京医科大学学报(自然科学版).2011袁5(12):58-61.
采样的要求袁不得不需要更多的试验动物袁来进行交叉采样袁
[3]陈连国袁等.ID-LC-MS/MS方法对被动吸烟大鼠肺组织DNA中
这就增加了动物个体之间的差异对PK数据的影响遥而如果
8-oxo-dGsn的检测[J].医学研究杂志.2013袁25(6):36-39.
将30滋L的样品处理量降至10滋L袁一只动物就能满足整个
[4]古丽努尔窑塔西铁木尔,等.液相色谱-串联质谱法测定Beagle犬
试验设计中各时间点采样的要求袁不仅可以减少试验动物的
血浆中黄体酮浓度及其药动学[J].药物分析杂志.2011袁26(11):
使用量袁采血量袁减少动物之间的差异对PK数据分析准确性
24-29.
[5]张重丽袁等.浅谈动物福利[J].草业科学袁2011袁15(6)院24-26
的影响袁还可以满足动物福利的法规要求遥
[6]贺争鸣袁等.关注和提高实验动物福利[J].中国比较医学杂志袁
从试验结果来看袁不管是从待分析物还是内标来看袁该
2004袁16(6)院16-17
方式下内标及待分析物之间的基质效应还是回收率均满足
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2021年第10期畜牧兽医科技信息
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