2024年5月11日发(作者：宰父融雪)

过氧化氢含量测定

原理：

在pH=9.6～11.0的甘氨酸-NaOH缓冲溶液中,以辣根过氧化物酶作催化剂, H

2

O

2

与钙试

剂羧酸钠发生催化反应，钙试剂羧酸钠偶氮键遭到破坏，导致溶液颜色变浅，630nm处吸光

度减小，H

2

O

2

量越大，吸光度减小的越多，通过测定的A

630

的变化值可测得H

2

O

2

的含量。

试剂：

H

2

O

2

标准溶液:由30% H

2

O

2

稀释配制,贮备液用高锰酸钾法标定,4℃保存,操作液临用时

稀释.

0.02g/mL

钙试剂羧酸钠溶液:15 g/L水溶液.

甘氨酸-NaOH缓冲溶液:0.25 mol/L甘氨酸与0.25 mol/L NaOH溶液按体积比为3∶2

混合,用酸度计调节pH值至10.2.所用试剂均为分析纯,水为二次去离子水.

草酸钠标定KMnO

4

：0.15g Na

2

C

2

O

4

基准物3份，分别置于250ml的锥形瓶中，加入50ml

水使之溶解，加入10ml 3mol/L H

2

SO

4

，在水浴加热到75-85℃，趁热滴定。开始滴定时反

2+

应速度慢，待生成Mn后，滴定速度可加快。

-2-+2+

2MnO

4

+5C

2

O

4

+16H→2Mn+10CO

2

+ 8H

2

O

m2



1345

1000

C

KMnO



V(ml)

0.02mol/L

4

方法

：

标准曲线的绘制：

按顺序依次加入下列试剂，50℃恒温水浴中保温30min,取出后经流水冷却3min，在630nm

处以ddH

2

O为参比测定吸光度A

630

。以A

630

为纵坐标，过氧化氢量（µmol）为横坐标绘制H

2

O

2

标准曲线。

H

2

O

2

标准曲线的制作

编号

甘氨酸-NaOH缓冲溶液(mL)

钙试剂羧酸钠溶液(mL)

辣根过氧化物酶(mL)

H

2

O

2

标准溶液（mL）

ddH

2

O(mL)

0.5

0.45

0.4

0.35

0.3

0.25

0.2

01234

y = -0.053x + 0.4535

R² = 0.9965

1

5

1

0.2

0

3.8

2

5

1

0.2

0.5

3.3

3

5

1

0.2

1

2.8

4

5

1

0.2

1.5

2.3

5

5

1

0.2

2

1.8

6

5

1

0.2

2.5

1.3

7

5

1

0.2

3

0.8

菌液中H

2

O

2

含量的测定：根据表8中确定的条件，依次加入各溶液，其中菌液为原待测液稀

释5倍，50℃恒温水浴中保温17min,取出后经流水冷却3min，在630nm处以ddH

2

O为参比

测定吸光度A

630

.根据标准方程，计算待测液中H

2

O

2

的含量。重复3次。

2024年5月11日发(作者：宰父融雪)

过氧化氢含量测定

原理：

在pH=9.6～11.0的甘氨酸-NaOH缓冲溶液中,以辣根过氧化物酶作催化剂, H

2

O

2

与钙试

剂羧酸钠发生催化反应，钙试剂羧酸钠偶氮键遭到破坏，导致溶液颜色变浅，630nm处吸光

度减小，H

2

O

2

量越大，吸光度减小的越多，通过测定的A

630

的变化值可测得H

2

O

2

的含量。

试剂：

H

2

O

2

标准溶液:由30% H

2

O

2

稀释配制,贮备液用高锰酸钾法标定,4℃保存,操作液临用时

稀释.

0.02g/mL

钙试剂羧酸钠溶液:15 g/L水溶液.

甘氨酸-NaOH缓冲溶液:0.25 mol/L甘氨酸与0.25 mol/L NaOH溶液按体积比为3∶2

混合,用酸度计调节pH值至10.2.所用试剂均为分析纯,水为二次去离子水.

草酸钠标定KMnO

4

：0.15g Na

2

C

2

O

4

基准物3份，分别置于250ml的锥形瓶中，加入50ml

水使之溶解，加入10ml 3mol/L H

2

SO

4

，在水浴加热到75-85℃，趁热滴定。开始滴定时反

2+

应速度慢，待生成Mn后，滴定速度可加快。

-2-+2+

2MnO

4

+5C

2

O

4

+16H→2Mn+10CO

2

+ 8H

2

O

m2



1345

1000

C

KMnO



V(ml)

0.02mol/L

4

方法

：

标准曲线的绘制：

按顺序依次加入下列试剂，50℃恒温水浴中保温30min,取出后经流水冷却3min，在630nm

处以ddH

2

O为参比测定吸光度A

630

。以A

630

为纵坐标，过氧化氢量（µmol）为横坐标绘制H

2

O

2

标准曲线。

H

2

O

2

标准曲线的制作

编号

甘氨酸-NaOH缓冲溶液(mL)

钙试剂羧酸钠溶液(mL)

辣根过氧化物酶(mL)

H

2

O

2

标准溶液（mL）

ddH

2

O(mL)

0.5

0.45

0.4

0.35

0.3

0.25

0.2

01234

y = -0.053x + 0.4535

R² = 0.9965

1

5

1

0.2

0

3.8

2

5

1

0.2

0.5

3.3

3

5

1

0.2

1

2.8

4

5

1

0.2

1.5

2.3

5

5

1

0.2

2

1.8

6

5

1

0.2

2.5

1.3

7

5

1

0.2

3

0.8

菌液中H

2

O

2

含量的测定：根据表8中确定的条件，依次加入各溶液，其中菌液为原待测液稀

释5倍，50℃恒温水浴中保温17min,取出后经流水冷却3min，在630nm处以ddH

2

O为参比

测定吸光度A

630

.根据标准方程，计算待测液中H

2

O

2

的含量。重复3次。