2024年5月24日发(作者：集品韵)

现代农业科技2019年第12期

食品科学

高效液相色谱法测定食品中5种非法添加物

陈芩郝帅张艳芳晏晓清胡洁

(

黄冈大别山检测认证有限公司，湖北黄冈

438000)

摘要

本文建立了高效液相色谱法测定食品中罌粟碱、那可丁、吗啡、可待因和蒂巴因等

5

种非法添加物的检测方法，色谱柱

ZORBAX SB-C 18(4.6 mmx 150 mm 5-Micron)

,

流动相为

0.1

%甲酸的

10 mmol/L

乙酸铵溶液-乙精

（

10:90)

，

流速

0.3 mlVmin

，

检

测波长

280 nm

，

进样量

10 pL,

柱温

30

T

，进行定量分析。结果表明，在浓度为

0.01

〜

10.00 pg/mL

范围内

，标

准曲线线性关系良好（相关系数

/?2>0.9990

)，

罂

粟碱、那可丁、吗啡、可待因和蒂巴因的检出限分别是

0.05

、

0.03

、

0.10

、

0.10

、

0.05 |xg/mU5

种生物碱加标水平在

1.2

、

1.5 mg/kg

时，回收率为

88%

〜

93

%，

相对偏差为

1.4%

〜

3.2

%。

该方法方便快捷、成木较低、操作简便、分析快速，可用于食品中

5

种非法添加物的检测

关键词

罌粟碱；那可丁；吗啡；可待因；蒂巴因；高效液相色谱法

中图分类号

TS207.3; 0657.63

文献标识码

A

文章编号

1007-5739(2019)12-0221-02

Determination

of

Five

Kinds

of

Illegal

Additives

in

Foods

by

HPLC

CHEN

Qin

HAO

Shuai

ZHANG

Yan-fang

YAN

Xiao-qing

HU

Jie

(Huanggang Dabie Mountain Testing and Certification Co. Ltd., Huanggang Hubei 438000)

Abstract

The detection method of papaverine hydrochloride,noscapine hydrochloride,morphine,codeine and thebaine in foods by HPLC was

chromatogram conditions included ZORBAX SB-C18(4.6xl50 mm 5-Micron), 10 mmol/L ammonium acetate solution of 0.1% formic

acid and acetonitrile (volume ratio 10

：

90)as the mobile phase, isocratic elution (speed

：

0.3 mL/min), ultraviolet detector (UVD , 280 nm),10

jjl

L

injection volume and 30 column results showed that,under the concentration range of 0.01-10.00 |xg/mL,the standard curve had a

good linear relationship(correlation coefficient

R2>0.999

0) ,the detection limits of papaverine hydrochloride noscapine hydrochloride , morphine,

codeine and thebaine was 0.05 fJig/mL,0.03 jxg/mL,0.10 fxg/mL,0.10 pig/mL,0.05 |xg/mL, recoveries of five alkaloids were 88%-93%

and the relative deviations were 1.4%-3.2% at the standard addition levels of 1.2 mg/kg aiui 1.5 mg/ method is convenient,quick,low in cost,

simple in operation, fast in analysis, and can be used for detecting five illegal additives in food.

Key

words

papaverine hydrochloride ；noscapine hydrochloride ；morphine ；codeine ；thebaine

；

HPLC

罂粟壳中含有吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因、那可丁等

赛恩斯仪器有限公司生产。滤膜(0.22 jxm)。

生物碱类物质，其中吗啡、可待因和罂粟碱在罂粟壳中含量

1.2试验方法

较高，比较有代表性[11。我国于2009年发布的《食品中可能

1.2.1样品前处理。①试样提取:称取

2

g试样(精确到

0.01

g

)

违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》中就有

于50 mL聚四氟乙烯离心管中，液体样品、半固体样品加入

罂粟壳，并标注了可能添加的主要食品类别为火锅、火锅底

5 mL水，固体样品加入5 mL盐酸溶液，分別涡旋振荡30 s,

料及小吃类，另外还有可能用于卤味制品、饮料中|21。罂粟壳

加入15 mL乙腈，润旋振荡1 min,超声30 min,加入6 g无

中的生物碱虽然含量较少，但长期食用会对人体神经系统造

水硫酸镁和1.5 g无水乙酸钠的混合粉末，迅速振摇，涡旋

成损害，并可能造成慢性中毒13]。目前，同时检测吗啡、可待

振荡1 min,5 000 r/min离心5 min,取上清液待净化。②试样

因、罂粟碱、蒂巴因、那可丁等生物碱类物质的方法主要是

净化：称取150 mg

PSA、300 mg无水硫酸镁、300 mg

C

18

粉

液质联用法，但该方法成本较高、前处理较为复杂，很难得

末置于10 mL聚四氟乙烯离心管中，移取5 mL上清液至此

到普及〜51。因此，建立一种方便快捷、定量准确、线性关系

离心管中，润旋振荡1 min, 10 000 r/min离心5 min,取上清

良好的高效液相色谱法非常具有实际意义

液，经0.22 pm滤膜过滤，待检测。

1材料与方法

1.2.2仪器条件。检测器为二极管阵列检测器；色谱柱为

1.1试剂与仪器

ZORBAX SB-Ci8(4.6

mmxl50 mm 5-Micron);流动相为 0.1%

1.1.1

试剂。5种药品的纯度分別为罂粟碱99.9%、那可丁

甲酸的10 mmol/L乙酸铵溶液:乙腈（10:90);柱温30 进

98.0%、蒂巴因99.9%、可待因99.9%、吗啡99.6%,美国A

样量10 (xL;检测波长280nm。

ChemTek公司生产；其他试剂有乙腈（色谱纯）、甲酸(色谱

2结果与分析

纯）、乙酸铵（色谱纯）、无水硫酸镁（研磨后在500 *€马弗炉

2.1标准曲线

内烘5h，200t时取出装瓶,C存于干燥器中，冷却后备用）、

按照试验方法进行检测，建立标准曲线，曲线类型为线

无水乙酸钠（分析纯）、盐酸(0.1 mol/L)、乙二胺-N-丙基硅

性回归，横坐标为标准使用液浓度，纵坐标为目标物峰面

积，得到5种生物碱的相关系数均在0.999 0以上，线性关

烷(PSA)填料(粒度40~70 |xra)、C18填料(粒度40~50叫）。

系良好，结果见表1、图1~5。

1.1.2仪器。高效液相色谱仪:Agilent 1200,美国安捷伦科

2.2 S

种生物碱标准使用液

HPLC

色谱图

技有限公司（配有DAD检测器）生产。电子分析天平:AUY-

本方法分离效果明显，峰型理想，出峰时间较早，为食

220,日本岛津生产。涡旋混合器:WH-2,金坛市新航仪器厂

品中5种非法添加物的检测提供了一种快速有效的方法

生产。高速冷冻离心机:TGL -16 M,湖南湘仪实验室仪器开

(图 6)0

发有限公司生产。超声波清洗仪:AS10200T-10L,天津奥特

2.3

方法的回收率和精密度

收稿日期

2019-03-12

在不含目标的样品中添加标准物质后，按试验方法进

221

食品科学

表1标准工作曲线

检测物名称~保留时间

/min

¥

线性回归方程

磐

10.400

0.999 977=358.675 00^-1.216 40

那

粟礙

吗

可

0.999 86

y

=489.720 00^-0.402 20

可

啡

丁

11.509

蒂

待

巴

因

12.423

0.999 817=473.512 (

Xk

-0.400 00

因

13.443

0.999 51

y

=571.292 00

a

：-0.804 40

14.1790.999 36

y

=587.185 (

Xk

-2.040 40

4

3

2

5

]

0

5

0

5

0

5

s

x

n

v

s

/

姿

电

啥

0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14

浓度/|

xg

*

mL_l

图1罂粟碱标准曲线

7

6

o

o

o

o

5

4

>^489.720 Otk-0.402 20

3

2

1

S

x

n

v

s

v8

/

4

^

r

0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14

浓度/

fxg

*

mL

_1

图2那可丁标准曲线

8

7

o

6

5

o

4

o

3

2

o

o

o

o

s

x

n

v

s

vs

/

^

'

^

0'----1----1----1----1----'----1----1----1

0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16

浓度/

kg

*

mL_l

图3吗啡标准曲线

行提取、净化和测定，其回收率和精密度结果见表2。可以

看出，5种生物碱加标水平在1.2、1.5 mg/kg时，回收率为

88%~93%，相对偏差为1.4%~3.2%。表明本方法的回收率稳

定，可满足实际样品检测要求。

3结论

本文建立的方法操作简单、选择性强、灵敏度高，简化

了食品中非法添加罂粟壳的检测流程，提高了工作效率，节

省了检测成本，为打击食品中非法添加罂粟壳的行为提供了

一种行之有效的有力依据，保证了消费者的合法利益和人

身安全。

222

现代农业科技2019年第12期

0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16

浓度/|

xg

*

mL

-1

图4可待因标准曲线

8

7

o

6

o

5

o

4

s

3

o

x

n

2

o

v

s

1

o

/

o

姿

电

o

啥

0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14

农度/

jig

^

mLr

1

图5蒂巴因标准曲线

—2

7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17

时间

/min

图6 5种生物碱色谱图

表2 5种生物碱加标回收结果

检测物名称 添加水平/

n

^.

kg

-1 回收率/%

RSD

/%

磐

1

那

粟

1

3

9

1

9

.

0

.

.

.

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可

碱

1

.

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待

.

2

1

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.

J

1

.

2

巴

因

1

.

5

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.

〇

因

.

5

1

5

.

3

•

!

.

7

.

3

.

4

1

8

5

1

1

9

4参考文献

[1]

戴萌娜，张建华，井淇，等.食品添加罂粟壳根源分析与对策研究

[J].

食品工业，2018,39(1) :243-245.

[2

J

于世林.高效液相色谱方法及应用[

Mj

.北京:化学工业出版社,2005.

[3】戴维杰，钮伟民.高效液相色谱法检测掺罂粟壳食品中的罂粟碱[

J

】.

中国卫生检验杂志,2003,13(5) :607_608.

[4

J

徐丽红，王建清，陶秋，等.高效液相色谱同时测定3类食品中的5种

罂粟壳生物碱[

J

].分析测试学报，2011,30(12): 1387-1391.

[5】王力清，郦明浩,李锦清，等.超高效液相色谱-串联质谱法高通量快速

测定调料中罂粟壳生物碱含量[

J

].食品与发酵工业,2012,38(8) :168.

[6]刘敏敏，张朝正，李延志，等.液相色谱-串联质谱法检测火锅底料中

罂粟壳[

J

].食品研究与开发,2013(1 ):91-94.

2024年5月24日发(作者：集品韵)

现代农业科技2019年第12期

食品科学

高效液相色谱法测定食品中5种非法添加物

陈芩郝帅张艳芳晏晓清胡洁

(

黄冈大别山检测认证有限公司，湖北黄冈

438000)

摘要

本文建立了高效液相色谱法测定食品中罌粟碱、那可丁、吗啡、可待因和蒂巴因等

5

种非法添加物的检测方法，色谱柱

ZORBAX SB-C 18(4.6 mmx 150 mm 5-Micron)

,

流动相为

0.1

%甲酸的

10 mmol/L

乙酸铵溶液-乙精

（

10:90)

，

流速

0.3 mlVmin

，

检

测波长

280 nm

，

进样量

10 pL,

柱温

30

T

，进行定量分析。结果表明，在浓度为

0.01

〜

10.00 pg/mL

范围内

，标

准曲线线性关系良好（相关系数

/?2>0.9990

)，

罂

粟碱、那可丁、吗啡、可待因和蒂巴因的检出限分别是

0.05

、

0.03

、

0.10

、

0.10

、

0.05 |xg/mU5

种生物碱加标水平在

1.2

、

1.5 mg/kg

时，回收率为

88%

〜

93

%，

相对偏差为

1.4%

〜

3.2

%。

该方法方便快捷、成木较低、操作简便、分析快速，可用于食品中

5

种非法添加物的检测

关键词

罌粟碱；那可丁；吗啡；可待因；蒂巴因；高效液相色谱法

中图分类号

TS207.3; 0657.63

文献标识码

A

文章编号

1007-5739(2019)12-0221-02

Determination

of

Five

Kinds

of

Illegal

Additives

in

Foods

by

HPLC

CHEN

Qin

HAO

Shuai

ZHANG

Yan-fang

YAN

Xiao-qing

HU

Jie

(Huanggang Dabie Mountain Testing and Certification Co. Ltd., Huanggang Hubei 438000)

Abstract

The detection method of papaverine hydrochloride,noscapine hydrochloride,morphine,codeine and thebaine in foods by HPLC was

chromatogram conditions included ZORBAX SB-C18(4.6xl50 mm 5-Micron), 10 mmol/L ammonium acetate solution of 0.1% formic

acid and acetonitrile (volume ratio 10

：

90)as the mobile phase, isocratic elution (speed

：

0.3 mL/min), ultraviolet detector (UVD , 280 nm),10

jjl

L

injection volume and 30 column results showed that,under the concentration range of 0.01-10.00 |xg/mL,the standard curve had a

good linear relationship(correlation coefficient

R2>0.999

0) ,the detection limits of papaverine hydrochloride noscapine hydrochloride , morphine,

codeine and thebaine was 0.05 fJig/mL,0.03 jxg/mL,0.10 fxg/mL,0.10 pig/mL,0.05 |xg/mL, recoveries of five alkaloids were 88%-93%

and the relative deviations were 1.4%-3.2% at the standard addition levels of 1.2 mg/kg aiui 1.5 mg/ method is convenient,quick,low in cost,

simple in operation, fast in analysis, and can be used for detecting five illegal additives in food.

Key

words

papaverine hydrochloride ；noscapine hydrochloride ；morphine ；codeine ；thebaine

；

HPLC

罂粟壳中含有吗啡、可待因、罂粟碱、蒂巴因、那可丁等

赛恩斯仪器有限公司生产。滤膜(0.22 jxm)。

生物碱类物质，其中吗啡、可待因和罂粟碱在罂粟壳中含量

1.2试验方法

较高，比较有代表性[11。我国于2009年发布的《食品中可能

1.2.1样品前处理。①试样提取:称取

2

g试样(精确到

0.01

g

)

违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》中就有

于50 mL聚四氟乙烯离心管中，液体样品、半固体样品加入

罂粟壳，并标注了可能添加的主要食品类别为火锅、火锅底

5 mL水，固体样品加入5 mL盐酸溶液，分別涡旋振荡30 s,

料及小吃类，另外还有可能用于卤味制品、饮料中|21。罂粟壳

加入15 mL乙腈，润旋振荡1 min,超声30 min,加入6 g无

中的生物碱虽然含量较少，但长期食用会对人体神经系统造

水硫酸镁和1.5 g无水乙酸钠的混合粉末，迅速振摇，涡旋

成损害，并可能造成慢性中毒13]。目前，同时检测吗啡、可待

振荡1 min,5 000 r/min离心5 min,取上清液待净化。②试样

因、罂粟碱、蒂巴因、那可丁等生物碱类物质的方法主要是

净化：称取150 mg

PSA、300 mg无水硫酸镁、300 mg

C

18

粉

液质联用法，但该方法成本较高、前处理较为复杂，很难得

末置于10 mL聚四氟乙烯离心管中，移取5 mL上清液至此

到普及〜51。因此，建立一种方便快捷、定量准确、线性关系

离心管中，润旋振荡1 min, 10 000 r/min离心5 min,取上清

良好的高效液相色谱法非常具有实际意义

液，经0.22 pm滤膜过滤，待检测。

1材料与方法

1.2.2仪器条件。检测器为二极管阵列检测器；色谱柱为

1.1试剂与仪器

ZORBAX SB-Ci8(4.6

mmxl50 mm 5-Micron);流动相为 0.1%

1.1.1

试剂。5种药品的纯度分別为罂粟碱99.9%、那可丁

甲酸的10 mmol/L乙酸铵溶液:乙腈（10:90);柱温30 进

98.0%、蒂巴因99.9%、可待因99.9%、吗啡99.6%,美国A

样量10 (xL;检测波长280nm。

ChemTek公司生产；其他试剂有乙腈（色谱纯）、甲酸(色谱

2结果与分析

纯）、乙酸铵（色谱纯）、无水硫酸镁（研磨后在500 *€马弗炉

2.1标准曲线

内烘5h，200t时取出装瓶,C存于干燥器中，冷却后备用）、

按照试验方法进行检测，建立标准曲线，曲线类型为线

无水乙酸钠（分析纯）、盐酸(0.1 mol/L)、乙二胺-N-丙基硅

性回归，横坐标为标准使用液浓度，纵坐标为目标物峰面

积，得到5种生物碱的相关系数均在0.999 0以上，线性关

烷(PSA)填料(粒度40~70 |xra)、C18填料(粒度40~50叫）。

系良好，结果见表1、图1~5。

1.1.2仪器。高效液相色谱仪:Agilent 1200,美国安捷伦科

2.2 S

种生物碱标准使用液

HPLC

色谱图

技有限公司（配有DAD检测器）生产。电子分析天平:AUY-

本方法分离效果明显，峰型理想，出峰时间较早，为食

220,日本岛津生产。涡旋混合器:WH-2,金坛市新航仪器厂

品中5种非法添加物的检测提供了一种快速有效的方法

生产。高速冷冻离心机:TGL -16 M,湖南湘仪实验室仪器开

(图 6)0

发有限公司生产。超声波清洗仪:AS10200T-10L,天津奥特

2.3

方法的回收率和精密度

收稿日期

2019-03-12

在不含目标的样品中添加标准物质后，按试验方法进

221

食品科学

表1标准工作曲线

检测物名称~保留时间

/min

¥

线性回归方程

磐

10.400

0.999 977=358.675 00^-1.216 40

那

粟礙

吗

可

0.999 86

y

=489.720 00^-0.402 20

可

啡

丁

11.509

蒂

待

巴

因

12.423

0.999 817=473.512 (

Xk

-0.400 00

因

13.443

0.999 51

y

=571.292 00

a

：-0.804 40

14.1790.999 36

y

=587.185 (

Xk

-2.040 40

4

3

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电

啥

0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14

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*

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图1罂粟碱标准曲线

7

6

o

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>^489.720 Otk-0.402 20

3

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r

0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14

浓度/

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mL

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图2那可丁标准曲线

8

7

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0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16

浓度/

kg

*

mL_l

图3吗啡标准曲线

行提取、净化和测定，其回收率和精密度结果见表2。可以

看出，5种生物碱加标水平在1.2、1.5 mg/kg时，回收率为

88%~93%，相对偏差为1.4%~3.2%。表明本方法的回收率稳

定，可满足实际样品检测要求。

3结论

本文建立的方法操作简单、选择性强、灵敏度高，简化

了食品中非法添加罂粟壳的检测流程，提高了工作效率，节

省了检测成本，为打击食品中非法添加罂粟壳的行为提供了

一种行之有效的有力依据，保证了消费者的合法利益和人

身安全。

222

现代农业科技2019年第12期

0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16

浓度/|

xg

*

mL

-1

图4可待因标准曲线

8

7

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0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14

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图5蒂巴因标准曲线

—2

7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17

时间

/min

图6 5种生物碱色谱图

表2 5种生物碱加标回收结果

检测物名称 添加水平/

n

^.

kg

-1 回收率/%

RSD

/%

磐

1

那

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1

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1

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