2024年6月5日发(作者：孝雁菱)
免疫沉淀（ Immunoprecipitation IP ）
美国芝加哥大学分子肿瘤实验室提供
一、准备试剂： IP裂解液配制方法（100毫升体积）：
50mM Tris-HCl pH 7.5 1M 5ml
100mM NaCl 5M 2ml
0.5% NP-40 (10% stock) 10ml
0.3mM NaVO3 5.52mg
50mM Na F 210mg
20mM Na Pyrphosphate 892mg
1mM PMSF 17.42mg
加水至总体积达到100 ml
二、实验步骤：（本方法适用于从细胞培养来源的蛋白质）
1． 将细胞培养液移去，加入裂解液-蛋白酶抑制剂混合液（IP-PI buffer）（T25培养
瓶中加入1毫升，T75中加入3毫升），充分裂解后，将混合液转入微量离心管中。
2． 冰上放置20分钟，偶尔轻微震荡。
3． 4℃下，微量离心机最高速离心5分钟。将上清液转移至另一微量离心管中。
4． 加入30ul protein G- Sepharose beads（与IP-PI buffer 1：1混合）至样
品中，4℃下充分混合震荡反应1小时。
5． 微量离心机最高速离心1分钟，将上清转移至另一微量离心管中。
6． 加入抗需要沉淀的蛋白质的抗体（2-5ug/ 样品），4℃下充分混合震荡反应1小
时。
7． 加入30ul protein G- Sepharose beads，4℃下充分混合震荡反应1小时。
8． 微量离心机最高速离心1分钟，将上清吸弃，收集beads沉淀。
9． 沉淀中加入2ul 2-巯基乙醇，煮沸10分钟，离心后取上清，行SDS-PAGE胶电
泳及Wester-blotting 检测。
Western Blot(NC膜)
重庆医科大学感染病分子生物学实验室
一、 SDS－PAGE胶电泳
1. 75％酒精擦洗洁净玻片及加样梳，组装制胶槽；
2024年6月5日发(作者：孝雁菱)
免疫沉淀（ Immunoprecipitation IP ）
美国芝加哥大学分子肿瘤实验室提供
一、准备试剂： IP裂解液配制方法（100毫升体积）：
50mM Tris-HCl pH 7.5 1M 5ml
100mM NaCl 5M 2ml
0.5% NP-40 (10% stock) 10ml
0.3mM NaVO3 5.52mg
50mM Na F 210mg
20mM Na Pyrphosphate 892mg
1mM PMSF 17.42mg
加水至总体积达到100 ml
二、实验步骤：（本方法适用于从细胞培养来源的蛋白质）
1． 将细胞培养液移去，加入裂解液-蛋白酶抑制剂混合液（IP-PI buffer）（T25培养
瓶中加入1毫升，T75中加入3毫升），充分裂解后，将混合液转入微量离心管中。
2． 冰上放置20分钟，偶尔轻微震荡。
3． 4℃下，微量离心机最高速离心5分钟。将上清液转移至另一微量离心管中。
4． 加入30ul protein G- Sepharose beads（与IP-PI buffer 1：1混合）至样
品中，4℃下充分混合震荡反应1小时。
5． 微量离心机最高速离心1分钟，将上清转移至另一微量离心管中。
6． 加入抗需要沉淀的蛋白质的抗体（2-5ug/ 样品），4℃下充分混合震荡反应1小
时。
7． 加入30ul protein G- Sepharose beads，4℃下充分混合震荡反应1小时。
8． 微量离心机最高速离心1分钟，将上清吸弃，收集beads沉淀。
9． 沉淀中加入2ul 2-巯基乙醇，煮沸10分钟，离心后取上清，行SDS-PAGE胶电
泳及Wester-blotting 检测。
Western Blot(NC膜)
重庆医科大学感染病分子生物学实验室
一、 SDS－PAGE胶电泳
1. 75％酒精擦洗洁净玻片及加样梳，组装制胶槽；