2024年8月21日发(作者：镇语心)

2D clean up kit

用途：

去除盐分、脂类、核酸等干扰物质；浓缩样品。一小时内即可完成，不会造成点的

增多或丢失。回收率90%

用量：一个试剂盒可处理50个样品，每次100ul蛋白样品。

各组分作用

1。沉淀剂：沉淀蛋白

2。共沉淀剂：与蛋白共沉淀，加强沉淀效果

3。洗涤缓冲液：去除蛋白沉淀中污染物

4。洗涤添加物：促进蛋白沉淀的快速、完全的重悬

操作方法：用于1-100ul（含1-100ug蛋白/样品）的样品

1、把wash buffer置于-20度至少预冷1小时。且下述所有操作均冰浴中进行。

2、取100ul以下的蛋白样品置于1.5mlEP管中

3、加入300ul沉淀剂，vortex混匀。冰上孵育15min

4、加入300ul共沉淀剂。快速vortex混匀。

5、12 000g以上离心5分钟，之后立即进行下一步。

6、去除上清液，小心不要悬起沉淀物。

7、重复上述离心操作（可轻甩一下），并去除剩余的上清液。

8、小心加入40ul共沉淀剂于蛋白沉淀之上。并冰浴5min。

9、12 000g以上离心5分钟，之后去除上清液。

10、取25ul蒸馏水或去离子水于蛋白沉淀之上。Vortex 5-10秒。此时蛋白已经散

开，但并没有溶解。

11、加入1ml预冷的wash buffer 和5ul的wash additive。Vortex直至沉淀完全散

开。

12、-20度沉淀30分钟以上。期间每10分钟vortex 20-30秒。（蛋白可于-20冰箱

中保存1周以上，蛋白不会降解和修饰）

13、12 000g以上离心5分钟以上。

14、小心去除上清。此时可见白色蛋白沉淀，自然风干（不要超过5分钟！）注

意：蛋白沉淀不能过分干燥，否则很难再溶。

15、使用水化液或IEF loading solution 重溶蛋白。Vortex 30秒以上，可室温孵育并

颠倒以促进溶解。（如蛋白过分干燥，溶解困难，可用超声或样品研磨试剂盒以加

速蛋白溶解。）

16、12 000g以上离心5分钟，以去除不溶杂质并减少气泡。上清液变可直接用于

IEF或分装后保存于-80度冰箱中备用。

17、 之后便可直接用于IEF。

2024年8月21日发(作者：镇语心)

2D clean up kit

用途：

去除盐分、脂类、核酸等干扰物质；浓缩样品。一小时内即可完成，不会造成点的

增多或丢失。回收率90%

用量：一个试剂盒可处理50个样品，每次100ul蛋白样品。

各组分作用

1。沉淀剂：沉淀蛋白

2。共沉淀剂：与蛋白共沉淀，加强沉淀效果

3。洗涤缓冲液：去除蛋白沉淀中污染物

4。洗涤添加物：促进蛋白沉淀的快速、完全的重悬

操作方法：用于1-100ul（含1-100ug蛋白/样品）的样品

1、把wash buffer置于-20度至少预冷1小时。且下述所有操作均冰浴中进行。

2、取100ul以下的蛋白样品置于1.5mlEP管中

3、加入300ul沉淀剂，vortex混匀。冰上孵育15min

4、加入300ul共沉淀剂。快速vortex混匀。

5、12 000g以上离心5分钟，之后立即进行下一步。

6、去除上清液，小心不要悬起沉淀物。

7、重复上述离心操作（可轻甩一下），并去除剩余的上清液。

8、小心加入40ul共沉淀剂于蛋白沉淀之上。并冰浴5min。

9、12 000g以上离心5分钟，之后去除上清液。

10、取25ul蒸馏水或去离子水于蛋白沉淀之上。Vortex 5-10秒。此时蛋白已经散

开，但并没有溶解。

11、加入1ml预冷的wash buffer 和5ul的wash additive。Vortex直至沉淀完全散

开。

12、-20度沉淀30分钟以上。期间每10分钟vortex 20-30秒。（蛋白可于-20冰箱

中保存1周以上，蛋白不会降解和修饰）

13、12 000g以上离心5分钟以上。

14、小心去除上清。此时可见白色蛋白沉淀，自然风干（不要超过5分钟！）注

意：蛋白沉淀不能过分干燥，否则很难再溶。

15、使用水化液或IEF loading solution 重溶蛋白。Vortex 30秒以上，可室温孵育并

颠倒以促进溶解。（如蛋白过分干燥，溶解困难，可用超声或样品研磨试剂盒以加

速蛋白溶解。）

16、12 000g以上离心5分钟，以去除不溶杂质并减少气泡。上清液变可直接用于

IEF或分装后保存于-80度冰箱中备用。

17、 之后便可直接用于IEF。