2024年9月8日发(作者：税怡乐)
中西医结合心脑血管病杂志
2023
年
7
月第
21
卷第
14
期
·
2513
·
基于网络药理学探究栀子川芎胶囊防治动脉粥样
硬化的作用机制
吴立旗
,
盛
松
,
周庆兵
,
徐凤芹
摘要
目的
:
采用网络药理学
、
基因芯片分子对接方法探讨栀子川芎胶囊防治动脉粥样硬化
(
AS
)
的作用机制
。
方法
:
利用14个数
度值
、
中介中心性
、
接近中心性和平均最短路径筛选C
T和TD网络主要核心成分和靶点
。
对治疗靶点进行富集分析
,
最后对核心
--
成分和核心靶点做分子对接验证
。
结果
:
预测得到治疗靶点162个
,
根据网络贡献指数
、
度值
、
中介中心性
、
接近中心性和平均最短
路径筛选C
T和TD网络得到叶酸和槲皮素2个核心成分
、
13个核心靶点
。
富集分析显示栀子川芎胶囊从炎症反应
、
氧化应激
、
脂
--
质和营养物质代谢等多方面防治AS
,
并且治疗靶点富集于全身多个组织器官
。
分子对接验证结果表明核心成分与核心靶点间具有
较强的结合力
。
结论
:
栀子川芎胶囊防治AS具有多成分
、
多靶点的特点
,
可以从多层次
、
多角度防治AS
。
关键词
动脉粥样硬化
;
栀子川芎胶囊
;
网络药理学
;
基因芯片
;
分子对接
;
靶点
;
富集分析
,
据库和基因芯片等预测栀子川芎胶囊防治AS的靶点
,
构建成分治疗靶点
(
C
T
)
网络
、
治疗靶点网络
(
TD
)
并计算网络贡献指数
、
---
:
/
doi
.1672-1349.2023.14.001
j
MechanismofZhiziChuanxiongCapsulesPreventingandTreatingAtherosclerosisBasedonNetworkPharmacology
WULiqi,SHENGSong,ZHOUQingbing,XUFengqin
XiyuanHospital,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100093,China
CorrespondingAuthor
XUFengqin,Email:*******************
-
Abstract
Objective:TostudythemechanismofZhiziChuanxiongCapsulesinpreventingandtreatingatherosclerosis(AS)using
s:Atotalof14databasesandgenechipswereusedto
predictthetecompositiontherapeutictarget(CT)
--
andtherapeutictargetnetwork(TD)workcontributionindex,degree,betweenness,closeness,andaverage
-
shmentanalysiswasperformedontherapeutic
therapeutictargetswerepredicted,andthetwocorecomponentsoffolicacid(FA)andquercetinand13coretargetswereobtainedby
screeningtheCTandTDnetworksaccordingtothenetworkcontributionindex,degree,betweenness,closeness,andaverageshortest
--
mentanalysisshowedthatZhiziChuanxiongCapsulesforpreventingandtreatingASbymultipleaspects,suchas
inflammatoryresponse,oxidativestress,lipidandnutrientmetabolism,andthetherapeutictargetswereenrichedinmultipletissuesand
lardockingresultsshowedtherewasastrongbindingforcebetweenthecorecomponentsandthe
sion:ThepreventionandtreatmentofASwithZhiziChuanxiongCapsulesshowedthecharacteristicsof
componentsandmultitargets,bymultilevelandmultisngle.
---
Keywords
atherosclerosis;ZhiziChuanxiongCapsule;networkpharmacology;genechip;moleculardocking;target;enrichment
analysis
targets,andfinally,moleculs:Atotalof162
AS
)
是动脉硬化血管病中最常见
、
动脉粥样硬化
(
最重要的一种
,
是心脑血管疾病共同的病理基础
。
目
“
前中医学认为
“
瘀
”
毒
”
是AS的核心病机
,
尤其在AS
易损斑块破裂进而引发急性心血管事件的过程中发挥
1
]
。
主要作用
[
研究表明
,
与传统活血化瘀治疗AS相比
,
活血化瘀与清热解毒药物配伍组合具有更强的抗AS
2
]
,
作用
[
在此基础上中国中医科学院西苑医院徐凤芹
教授团队根据多年临床经验设计了活血解毒组合栀子
川芎胶囊防治AS
。
课题组前期研究表明低剂量和高
剂量栀子川芎胶囊均能减少血管壁脂质沉积和AS斑
基金项目
国家自然科学基金面上项目
(
No.81973679
)
作者单位
中国中医科学院西苑医院
(
北京100093
)
通讯作者
徐凤芹
,
E
:
*******************
-
3
]
。
但是由于栀子川芎胶囊成分复杂性和药理
块形成
[
作用多靶点
、
多环节
、
多途径的特点
,
采用既往
“
单成
分单靶点
”
的研究思路来探索栀子川芎胶囊干预AS
-
的作用机制难以从整体上解释栀子川芎胶囊抗AS的
物质基础
。
引用信息
吴立旗
,
盛松
,
周庆兵
,
等.基于网络药理学探究栀子川芎胶
:
2023
,
21
(
14
)
25132522.
-
囊防治动脉粥样硬化的作用机制
[
J
]
.中西医结合心脑血管病杂志
,
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2514
·
CHINESEJOURNALOFINTEGRATIVEMEDICINEONCARDIO-CEREBROVASCULARDISEASE
Jul 2023 Vol.21 No.14
y
网络药理学是从系统水平研究药物与人体相互作
用规律和机制的一门新兴学科
,
因其整体性和系统性
的特点已被广泛应用于复方活性成分筛选
、
治疗靶点
4
6
]
-
。
因此
,
预测及作用机制研究
[
本研究借助网络药理
为
P
<
0.05且
|
log2foldchange
|≥
1
。
为保证预测准
确性将上述10个来源的靶点两两取交集
,
筛选至少出
现在2个数据源中的靶点作为疾病靶点
,
然后将复方
靶点与疾病靶点再次取交集最终得到治疗靶点
(
检索
。
日期截至2020年11月1日
)
1.4
CT网络构建及分析
-
治疗靶点及活性成分靶点关系导入
将活性成分
、
-
23
]
Cytoscape3.2.1
[
构建C
T网络
,
本研究引入了贡献
-
指数
(
contributionindex
,
CI
)
评估化合物对C
T网络
-
学方法
,
结合基因芯片
、
分子对接等多项生物信息学技
术试图从整体角度探究栀子川芎胶囊干预AS的作用
机制
,
为栀子川芎胶囊的系统深入研究提供理论基础
。
1
资料与方法
1.1
复方成分筛选
本研究通过中药系统药理学数据库分析平台
7
]
(
TCMSP
)
v2014
,
[
检索
30%
,
类药性
(
DL
)
HL
)
≥
0.18和药物半衰期
(
≥
4为条
件筛选活性成分
,
并结合相关文献纳入不符合筛选条
件但是经过验证抗AS作用显著的中药成分
,
如川芎
8
9
]
-
,
嗪
、
栀子苷等
[
检索日期截至2020年11月1日
。
的贡献程度
,
CI计算基于网络效能
(
networkbased
efficacy
,
NE
)
和PubMed文献数
,
如果排名前
n
个化合
物的CI之和
≥
85%
,
则这
n
个化合物是CT网络中贡
-
24
]
,
献度最大的核心成分
[
CI计算公式如下
:
栀子
、
川芎的化学成分
,
然后以口服生物利用度
(
OB
)
≥
1.2
活性成分靶点筛选
将活性化合物名称分别上传至TCMSP和
PubChem得到各化合物的mol2文件
、
SMILES和
InChI
,
将其导入
[
11
]
12
]
、、
SwissTargetPrediction
(
v2019
)
[
DrugBank
(
v5.0
)
[[
13
]
14
]
SEA
(
v2007
)
和Batman
TCM
(
v2020
)
等5个数
-
据库
,
根据反向药效基团
、
化合物分子结构相似性和成
[
10
]
、
PharmMapper
(
v2017
)
n
是与化合物
j
连接的靶点总数
,
d
(
i
)
公式
①
中
,
。
公式
②
是与化合物
j
连接的靶点
i
的度值
(
degree
)
中
,
m
是网络中的化合物总数
,
c
(
j
)
是化合物
j
治疗
AS的相关PubMed文献总数
,
检索策略在标题或摘要
中以atherosclerosis
、
arteriosclerosis
、
atherosis
、
atheroscleroticarterialdisease和网络中化合物英文
名称及常用别称作为关键词联合检索PubMed中建库
至2020年11月1日的文献
。
1.5
TD网络构建及分析
-
[
25
]
其中
“
minimum
将治疗靶点导入STRING
,
(
”,“,
organism
”
限定为
“
homosapiens
”
用治
>
0.400
)
疗靶点及靶点间的蛋白互作关系导入Cytoscape构建
TD网络
。
使用软件NetworkAnalyzer模块计算网络
-
中度
、
中介中心性
、
接近中心性和平均最短路径评估
TD网络中节点的重要性
,
网络中节点的重要性与度
、
-
中介中心性
、
接近中心性值成正比
,
与平均最短路径成
反比
,
筛选网络中同时大于度
、
中介中心性
、
接近中心
性均值且小于平均最短路径均值的节点定义为核心
靶点
。
1.6
富集分析
、
v3.13.0
)
clusterProfiler
应用R的
(
进行基因本体
(
GO
)
和京都基因与基因组百科全书
分靶点互作相似性等3种原理预测成分靶点
。
同时
-
在上述5个网站中分别以NormFitscore
≥
0.9
、
Probability
≥
0.7
、
Similaritythreshold
≥
0.9
、
P
<
0.05
、
Scorecutoff
≥
20作为筛选条件保证靶点预测的准确
性
。
最后将从5个数据库中得到的成分靶点汇总去重
后导入UniPort中校正为genesymbol
,
检索日期截至
2020年11月1日
。
1.3
疾病靶点筛选
arteriosclerosis
、
atherosis和
以atherosclerosis
、
atheroscleroticarterialdisease作为检索词检索治疗
[[
15
]
12
]
、、
靶标数据库
(
TTD
,
v2020
)
DrugBank
(
v5.0
)
[
18
]
19
]
(、、
v2018
)
[
GeneCards
(
v5.2
)
NCBI
、
DisGeNET
[[
20
]
21
]
(、
v2019
)
HAGR
(
v2018
)
等9个数据库
。
同时在
16
]
17
]
、、
OMIM
(
v2020Oct
)
[
GAD
(
v2014
)
[
PharmGKB
requiredinteractionscore
”
设定为
“
mediumconfidence
GEO中以相同关键词检索得到AS相关的基因芯片
1个
。
GSE28829是一个由荷兰Maastricht大学血管
病理中心提供的包括13例早期和16例晚期颈动脉
22
]
。
本研究
AS斑块尸体活检标本的基因表达数据集
[
(、
v4.0.0
)
enrichplot
(
v1.13.0
)
包和ggplot2
(
v3.3.3
)
包
使用Perl将探针ID批量转换为Genesymbol
,
然后应
用R4.0.0的impute
(
v3.1.3
)
包和limma
(
v4.1
)
包来插
补缺失值
、
归一化处理和确定差异基因
,
差异基因阈值
(
KEGG
)
富集分析和结果可视化
,
根据adjusted
P
<
0.05筛选GO和KEGG富集条目
。
使用TissueEnrich
(
https
:
///
,
v2018
)
进行组织富
26
]
,
集分析和可视化
[
同样根据adjusted
P
<
0.05筛选
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2515
·
显著富集的组织器官
。
1.7
分子对接
同时在
在TCMSP中下载核心成分的mol2文件
,
PDB中下载核心靶点的pdb文件
。
对接前使用
DiscoveryStudio
(
v2019
)
对所有靶点蛋白进行去水
、
加氢
、
删除原始配体等预处理
,
删除的配体另存为
mol2格式文件
。
分子对接应用GEMDOCK
(
v2.1
)
软
27
]
,
件
[
软件采用standarddocking对接
,
其余对接参
分和核心靶点的结合能强于核心靶点原配小分子和核
心靶点的结合能时
,
则核心成分与核心治疗靶点结合
亲和力较好
。
最后使用R的pheatmap包
(
v1.0.12
)
绘
制对接能量值热图
,
如果pdb中下载的靶点蛋白自带
,
的是多个配体小分子
(
ligandgroup
)
则把多个配体小
分子分别与靶点蛋白对接计算能量值然后取平均值绘
6
]
。
制热图
[
数均为默认
。
结合亲和力由结合自由能决定的
,
结合
能
(
负值
)
的绝对值越大
,
结合构象越稳定
。
当核心成
1.8
研究流程
从多项生物信息学技术深入研究栀子川芎胶囊干
预AS的作用
。
详见图1
。
图1
研究流程图
2
结
果
2.1
复方成分筛选
为条件筛选
,
并结合文献得到化合物18个
,
其中栀子
成分12个
,
川芎成分7个
,
其中mandenol为两药共
有成分
。
栀子川芎胶囊活性成分见表1
。
DL
≥
0.18和HL
≥
4
在TCMSP中以OB
≥
30%
,
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y
中药
栀子/川芎
栀子
栀子
栀子
栀子
栀子
栀子
栀子
栀子
栀子
栀子
栀子
川芎
川芎
川芎
川芎
川芎
川芎
成分编码
M1494
M98
M9038
M7245
M4561
M449
M422
M358
M3095
M2883
M1663
M4557
M433
M359
M2157
M2140
M2135
M2202
mandenol
quercetin
GBGB
3
methylkempferol
-
sudan
Ⅲ
stigmasterol
kaempferol
beta
sitosterol
-
5
hydroxy7methoxy2(3,4,5trimethoxyphenyl)chromone
------
ethyloleate(NF)
(4aS,6aR,6aS,6bR,8aR,10R,12aR
,
14bS)10hydroxy2,2,6a,
---
6b,9,9,12aheptamethyl1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b
---
tetradecahydropicene4acarboxylicacid
--
geniposide
FA
sitosterol
wallichilide
perlolyrine
myricanone
tetramethylpyrazine
活性成分名称
表1
栀子川芎胶囊活性成分
OB
(
%
)
42.00
46.43
45.58
60.16
84.07
43.83
41.88
36.91
51.96
32.40
32.03
14.64
68.96
36.91
42.31
65.95
40.60
20.01
DL
0.19
0.28
0.83
0.26
0.59
0.76
0.24
0.75
0.41
0.19
0.76
0.44
0.71
0.75
0.71
0.27
0.51
0.03
HL
5.39
14.40
10.25
16.36
8.99
5.57
14.74
5.36
15.98
4.85
4.34
24.81
5.37
6.85
12.62
4.39
2.2
活性成分靶点筛选
包括川芎靶
5个数据库筛选到456个成分靶点
,
点172个
,
栀子靶点328个
。
2.3
疾病靶点筛选
成
将疾病靶点两两取交集得到AS靶点1991个
,
分靶点与AS靶点再取交集共得栀子川芎胶囊治疗
AS靶点162个
,
其中川芎61个
,
栀子129个
,
共有靶
点14个
,
这表明栀子川芎胶囊在防治AS过程中既有
各自的特异性靶点单独发挥作用
,
又有共同靶点协同
发挥作用
,
两药可相须相使防治AS
。
2.4
CT网络构建及分析
-
T网络删除孤立节点及连边后有节点176个
,
C
-
代表14个化合物成分
,
其中川芎5个
,
栀子8个
,
共有
成分1个和治疗靶点162个
;
263条边代表263个成
,
分靶点关系
(
见图2
)
图中红色圆圈代表栀子成分
,
蓝
-
色圆圈代表两药共有成分
,
黄色圆圈代表川芎成分
,
紫
色方块代表治疗靶点
,
线代表成分靶点关系
。
根据上
-
述公式计算C
T网络中每个化合物的CI
,
结果表明叶
-
酸
(
FA
)
和槲皮素
(
quercetin
)
2个化合物的CI之和
≥
85%
,
是网络中贡献度最大的核心成分
。
详见图3
。
图2
CT网络构建分析
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·
、
核心靶点
,
共筛选得到胰岛素
(
INS
)
丝氨酸/苏氨酸蛋
、、
白激酶1
(
AKT1
)
酪氨酸蛋白激酶
(
SRC
)
表皮生长因
(、
表皮生长因子
(、
雌激素受体1PTGS2
)
EGF
)
(、、
ESR1
)
过氧化物酶体增生激活受体
γ
(
PPARG
)
白
()、
、
细胞介素
1
IL
1
白细胞介素
10
(
IL10
)
基质金属
----
ββ
、、
蛋白酶
9
(
MMP9
)
人固醇调节元件结合蛋白
(
SREBF1
)
-
热休克蛋白90HSP90AA1
)
这13
α
家族A类成员1
(
。
进一步提取13个核心靶个核心靶点
(
见表2
、
图5
)
点及其相邻节点构建核心靶点网络得到137个节点和
,
1397个边
(
见图6
)
该13个核心靶点与原始TD网
-
络中74.5%
(
137/161
)
的靶点和92.6%
(
1397/1508
)
的边有关联
,
红色
、
黄色
、
绿色分别代表高度值
、
中等度
值和低度值的节点
。
因此
,
T
D网络符合无标度网络
。
-
、
前列腺素内过氧化物合酶2子受体
(
EGFR
)
图3
网络贡献指数
2.5
TD网络构建及分析
-
D网络中有161个节点和
删除孤立节点后T
-
,
1508条边
(
见图4
)
在网络中选取满足同时度
0.015和小于平均最短路径均值
(
1.916
)
的节点定义为
值
>
33.431%
、
接近中心性
>
0.525
、
中介中心性均值
>
图4
原始T
D网络
-
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2518
·
平均
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y
核心
靶点
INS
AKT1
SRC
EGFR
PTGS2
EGF
ESR1
PPARG
IL1B
IL10
MMP9
SREBF1
HSP90AA1
表2
TD网络中核心靶点信息
-
中介
最短路径
1.368750
1.525000
1.637500
1.650000
1.675000
1.712500
1.731250
1.743750
1.787500
1.812500
1.818750
1.831250
1.837500
中心性
0.216917
0.074165
0.050867
0.035818
0.037179
0.025948
0.024044
0.027775
0.025988
0.017014
0.019160
0.029908
0.016271
接近
中心性
0.730594
0.655738
0.610687
0.606061
0.597015
0.583942
0.577617
0.573477
0.559441
0.551724
0.549828
0.546075
0.544218
度值
105
83
71
66
65
60
51
52
51
46
45
42
40
图5
13个核心靶点网络
图6
13个核心靶点及其相邻节点提取网络
2.6
富集分析
其中
根据
P
<
0.05确定2195个GO富集条目
,
细胞成分
(
CC
)
有40个
,
主要关于RNA聚合酶
Ⅱ
转录
个
,
主要包括核受体活性
、
配体激活转录因子活性
、
类
固醇激素受体活性等
;
生物过程
(
BP
)
条目2009个
,
主
要涉及类固醇代谢
、
炎症反应调控
、
维生素代谢
、
活性
氧代谢和调控
、
脂质代谢调控
、
对营养水平的反应等
调节复合物
、
膜筏
、
微畴膜等
;
分子功能
(
MF
)
结146
(,
见图7
)
图中条带长度对应该条目中的富集基因数
以
P
<
0.05为条件筛选得到115条通路
,
包括磷脂酰
肌醇
3
激酶蛋白激酶B
(
PI3K
AKT
)
通路
、
低氧诱导因
----
应力和动脉粥样硬化
、
白细胞介素17
(
IL
17
)
信号通
-
路
、
辅助性T细胞17
(
Th17
)
细胞分化和脂肪细胞脂肪
量
,
条带颜色由红到蓝代表条目富集的
P
逐渐增大
。
子
1
(
HIF1
)
通路
、
内分泌抵抗
、
甲状腺激素信号通路
、
--
胰岛素抵抗
、
甲状旁腺激素合成分泌和作用
、
流体剪切
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中西医结合心脑血管病杂志
2023
年
7
月第
21
卷第
14
期
·
2519
·
,
分解的调节等
(
见图8
)
图中横坐标代表通路富集基
因数量占通路中所有基因的比例
,
圆圈面积大小与通
路富集基因数量成正比
,
圆圈颜色由红到蓝代表通路
富集的adjusted
P
值逐渐增大
。
组织富集分析显示
。
162个治疗靶点富集于肝脏等多个组织
(
见图9
)
图7
GO分析
图8
KEGG富集分析
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·
2520
·
CHINESEJOURNALOFINTEGRATIVEMEDICINEONCARDIO-CEREBROVASCULARDISEASE
Jul 2023 Vol.21 No.14
y
图9
组织富集结果
2.7
分子对接
槲皮素和11个核
对筛选出的2个核心成分叶酸
、
PPARG
、
IL1B
、
MMP9
、
SREBF1
、
HSP90AA1
(
EGF和
PTGS2
、
SREBF
、
INS
、
AKT1
、
EGFR1的对接能量强于
原配体和靶点间的能量值
,
核心成分与其余靶点的对
接能量值和原配体和靶点间的能量相比近似或略低
,
因此
,
可以认为核心成分和核心靶点间对接较好
,
具有
较强的结合力
。
详见图10
、
图11
。
心靶点INS
、
AKT1
、
SRC
、
EGFR
、
PTGS2
、
ESR1
、
IL10未在PDB找到相应自带配体的蛋白结构
)
进行
-
分子对接
。
对接结果显示核心成分与PPARG
、
图10
分子对接能量热图
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2023
年
7
月第
21
卷第
14
期
·
2521
·
亡
、
胆固醇逆向转运等
,
因此
,
通过某个化合物和某个
靶点防治AS往往难以取得理想的临床疗效
。
中药复
方中含有多种活性成分
,
具有多成分
、
多靶点
、
多通路
的作用特点
,
是治疗AS这类由多种机制共同介导的
慢性疾病的理想药物
。
本研究通过网络药理学角度探究了栀子川芎胶囊
治疗AS的潜在的分子机制和靶点通路
。
C
T网络及
-
CI结果显示叶酸和槲皮素是网络中的核心成分
,
在栀
子川芎胶囊抗AS中发挥主要作用
。
T
D网络分析显
-
PPARG
、
IL1B
、
IL10
、
MMP9
、
SREBF1
、
HSP90AA1这
13个核心靶点在栀子川芎胶囊治疗AS中尤为重要
。
通过进一步提取13个核心靶点及其相邻节点构建核
心靶点网络
,
可知T
D网络符合无标度网络
,
即网络中
-
少数的节点拥有大量的连接
,
说明它们对保证T
D网
-
络的稳定起着至关重要的作用
,
可见这13个核心靶点
是栀子川芎胶囊治疗AS的潜在靶点
。
既往研究证实
ESR1
[
34
]
28
]
29
]
30
]
31
]
32
]
33
]
、、、、、、
INS
[
AKT1
[
SRC
[
EGFR
[
PTGS2
[
EGF
[
示
,
INS
、
AKT1
、
SRC
、
EGFR
、
PTGS2
、
EGF
、
ESR1
、
SREBF1
[
39
]
、
PPARG
[
35
]
研究靶点预测的准确性
。
GO与KEGG分析显示
,
栀
子川芎胶囊通过干预类固醇代谢
、
炎症反应
、
维生素代
谢
、
活性氧代谢
、
脂质代谢
、
对营养水平反应等
,
进而调
控PI3K
AKT通路
、
HIF1通路
、
内分泌抵抗
、
胰岛素抵
--
抗
、
IL
17信号通路
、
Th17细胞分化和脂肪细胞脂肪分
-
解调节等多个信号通路
,
从炎症反应
、
氧化应激
、
脂质
和营养物质代谢等多方面干预AS
,
发挥其治疗AS的
作用
。
GO
、
KEGG分析表明
,
栀子川芎胶囊活性成分
的作用靶点分布于不同的生物学功能和通路
,
多成分
、
多靶点整体相互调节是其防治AS的作用机制
。
组织
富集分析显示
,
治疗靶点富集于肝脏等多个组织和器
官
,
说明栀子川芎胶囊防治AS是对全身多个组织和
器官综合整体调控的结果
。
分子对接表明叶酸和槲皮
素与核心靶点间有较强的结合力
,
也进一步间接证明
41
42
]
-
。
了网络药理学预测的准确性
[
40
]
、
HSP90AA1
[
和AS密切相关
,
证实了本
、
IL1B
[
36
]
、
IL10
[
37
]
、
MMP9
[
38
]
、
本研究通过网络药理学等方法分析和探索了栀子
川芎胶囊防治AS的潜在物质基础与靶点通路
,
为后
续机制研究提供了理论基础
。
但是需要注意的是
,
网
图11
分子对接结构图
络药理学研究尚存在一定局限性
,
如忽视了药物剂量
、
中药炮制
、
个体化差异带来的影响
,
因此
,
仍需进一步
试验结果的验证与支持
。
参考文献
:
[
1
]
瘀毒
”
病因病机的研究
陈浩,苏伟,龚少愚,等.动脉粥样硬化中医
“
进展
[
J
]
.中西医结合心脑血管病杂志,2011,9(9):1104
1106.
-
[
2
]
D
]
.济
张京春.解毒活血干预动脉粥样硬化易损斑块的综合研究
[
南:山东中医药大学,2007.
3
讨
论
近年来的研
AS是心脑血管疾病共同的病理基础
,
究证实AS是一个多因素参与
、
多基因异常调控的复
杂病理过程
,
包括炎症
、
脂质浸润
、
血栓形成
、
细胞凋
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·
2522
·
CHINESEJOURNALOFINTEGRATIVEMEDICINEONCARDIO-CEREBROVASCULARDISEASE
Jul 2023 Vol.21 No.14
y
[
3
]
ZHOUQB,WULQ,ZHANGY,
etal.
EffectsofZhiziChuanxiong
Capsule(栀子川芎胶囊)onabnormalmethylationinrabbitswith
atherosclerosis
[
J
]
.ChineseJournalofIntegrativeMedicine,2018,
24(7):512517.
-
[
4
]
kpharmacology:thenextparadigmindrug
discovery
[
J
]
.NatureChemicalBiology,2008,4(11):682690.
-
[
5
]
ZHANGB,WANGX,grativeplatformofTCMnetwork
pharmacologyanditsapplicationonaherbalformula,QingLuo
--
Yin
[
J
]
.EvidenceBasedComplementaryandAlternative
-
Medicine:ECAM,2013,2013:456747.
[
6
]
based
SHENGS,YANGZX,XUFQ,
etal.
Networkpharmacology
-
explorationofsynergisticmechanismofguanxin
Ⅱ
formula(
Ⅱ
)
forCoronaryHeartDisease
[
J
]
.ChineseJournalofIntegrative
Medicine,2021,27(2):106114.
-
[
7
]
RUJL,LIP,WANGJN,
etal.
TCMSP:adatabaseofsystems
pharmacologyfordrugdiscoveryfromherbalmedicines
[
J
]
.
JournalofCheminformatics,2014,6:13.
[
8
]
J
]
.时珍国医
魏恩韬,张琪.川芎嗪抗动脉粥样硬化的作用与机制
[
国药,2019,30(5):1192
1194.
-
[
9
]
周庆兵,吴立旗,徐凤芹.栀子苷对ox
LDL诱导的RAW264.7来源
-
泡沫细胞DNA异常甲基化的双向调节作用
[
J
]
.中国中西医结合
杂志,2019,39(7):853
858.
-
[
10
]
WANGX,SHENYH,WANGSW,
etal.
PharmMapper2017
update:awebserverforpotentialdrugtargetidentificationwitha
comprehensivetargetpharmacophoredatabase
[
J
]
.Nucleic
AcidsResearch,2017,45(W1):W356W360.
-
[
11
]
DAINAA,MICHIELINO,argetPrediction:updated
dataandnewfeaturesforefficientpredictionofproteintargetsof
smallmolecules
[
J
]
.NucleicAcidsResearch,2019,47(W1):W357
-
W364.
[
12
]
WISHARTDS,FEUNANGYD,GUOAC,
etal.
DrugBank5.0:a
majorupdatetotheDrugBankdatabasefor2018
[
J
]
.Nucleic
AcidsResearch,2018,46(D1):D1074D1082.
-
[
13
]
WANGZH,LIANGL,YINZ,
etal.
Improvingchemicalsimilarity
ensembleapproachintargetprediction
[
J
]
.Journalof
Cheminformatics,2016,8:20.
[
14
]
TCM:abioinformatics
LIUZY,GUOFF,WANGY,
etal.
BATMAN
-
analysistoolformolecularmechANismoftraditionalChinese
medicine
[
J
]
.ScientificReports,2016,6:21146.
[
15
]
WANGYX,ZHANGS,LIFC,
etal.
Therapeutictargetdatabase
2020:enrichedresourceforfacilitatingresearchandearly
developmentoftargetedtherapeutics
[
J
]
.NucleicAcids
Research,2020,48(D1):D1031D1041.
-
[]
16
AMBERGERJS,ingOnlineMendelian
InheritanceinMan(OMIM):aknowledgebaseofhumangenes
andgeneticphenotypes
[
J
]
.CurrProtocBioinformatics,2017,58
(1):121126.
-
[
17
]
BECKERKG,BARNESKC,BRIGHTTJ,
etal.
Thegenetic
associationdatabase
[
J
]
.NatGenet,2004.36(5):431432.
-
[
18
]
BARBARINOJM,WHIRLCARRILLOM,ALTMANRB,
etal.
-
PharmGKB:aworldwideresourceforpharmacogenomic
information
[
J
]
.WileyInterdisciplinaryReviewsSystemsBiology
andMedicine,2018,10(4):e1417.
[
19
]
SAFRANM,DALAHI,ALEXANDERJ,
etal.
GeneCardsVersion3:
thehumangeneintegrator
[
J
]
.Database,2010,2010:baq020.
[
20
]
PIEROJ,RAMREZANGUITAJM,SA
Ü
CHPITARCHJ,
etal.
ÑÍ--
TheDisGeNETknowledgeplatformfordiseasegenomics:2019
update
[
J
]
.NucleicAcidsResearch,2020,48(D1):D845D855.
-
[
21
]
TACUTUR,THORNTOND,JOHNSONE,
etal.
HumanAgeing
GenomicResources:newandupdateddatabases
[
J
]
.Nucleic
AcidsResearch,2018,46(D1):D1083D1090.
-
[
22
]
antigenic
D
Ö
RINGY,MANTHEYHD,DRECHSLERM,
etal.
Auto
-
proteinDNAcomplexesstimulateplasmacytoiddendriticcellsto
-
promoteatherosclerosis
[
J
]
.Circulation,2012,125(13):16731683.
-
[
23
]
SHANNONP,MARKIELA,OZIERO,
etal.
Cytoscape:asoftware
environmentforintegratedmodelsofbiomolecularinteraction
networks
[
J
]
.GenomeResearch,2003,13(11):24982504.
-
[
24
]
based
YUESJ,LIUJ,FENGWW,
etal.
Systempharmacology
-
dissectionofthesynergisticmechanismofHuangqiand
Huanglianfordiabetesmellitus
[
J
]
.FrontiersinPharmacology,
2017,8:694.
[
25
]
SZKLARCZYKD,GABLEAL,LYOND,
etal.
STRINGv11:protein
-
proteinassociationnetworkswithincreasedcoverage,supporting
functionaldiscoveryingenomewideexperimentaldatasets
[
J
]
.
-
NucleicAcidsResearch,2019,47(D1):D607D613.
-
[
26
]
JAINA,Enrich:tissuespecificgeneenrichment
-
analysis
[
J
]
.Bioinformatics,2019,35(11):19661967.
-
[]
27
YANGJM,K:agenericevolutionarymethod
formoleculardocking
[
J
]
.Proteins,2004,55(2):288304.
-
[
28
]
JIAM,ZHONGWT,CAIP,
etal.
Correlationbetweeninsulin
-
inducedestrogenreceptormethylationandatherosclerosis
[
J
]
.
CardiovascularDiabetology,2016,15(1):156.
[
29
]
1555pinhibitsthe
CHENL,ZHENGSY,YANGCQ,
etal.
miR
--
proliferationandmigrationofVSMCsandHUVECsin
atherosclerosisbytargetingAKT1
[
J
]
.EuropeanReviewfor
MedicalandPharmacologicalSciences,2019,23(5):22232233.
-
[
30
]
BYUNS,JUNGH,CHENJ,
etal.
Phosphorylationofhepatic
farnesoidXreceptorbyFGF19signalingactivatedSrcmaintains
-
cholesterollevelsandprotectsfromatherosclerosis
[
J
]
.JBiol
Chem,2019.294(22):87328744.
-
[
31
]
WANGL,HUANGZ,HUANGW,
etal.
Inhibitionofepidermal
growthfactorreceptorattenuatesatherosclerosisviadecreasing
inflammationandoxidativestress
[
J
]
.SciRep,2017,7(1):933944.
-
[
32
]
ZHOUYQ,ZHOUHX,HUAL,
etal.
Verificationofferroptosisand
pyroptosisandidentificationofPTGS2asthehubgeneinhuman
coronaryarteryatherosclerosis
[
J
]
.FreeRadicalBiology&
Medicine,2021,171:5568.
-
[
33
]
ZEBOUDJL,MATREM,GUYONNETL,
etal.
SelectiveEGF
Î-
receptorinhibitioninCD4(
+
)Tcellsinducesanergyandlimits
atherosclerosis
[
J
]
.JournaloftheAmericanCollegeof
Cardiology,2018,71(2):160172.
-
[
34
]
LEHTIM
Ä
KIT,KUNNASTA,MATTILAKM,
etal.
Coronaryartery
wallatherosclerosisinrelationtotheestrogenreceptor1gene
polymorphism:anautopsystudy
[
J
]
.JournalofMolecular
Medicine,2002,80(3):176180.
-
[
35
]
CHENS,TSYBOULEVAN,BALLANTYNECM,
etal.
Effectsof
PPARalpha,gammaanddeltahaplotypesonplasmalevelsof
lipids,severityandprogressionofcoronaryatherosclerosisand
responsetostatintherapyinthelipoproteincoronary
atherosclerosisstudy
[
J
]
.Pharmacogenetics,2004,14(1):6171.
-
[
36
]
M
É
N
É
GAUTL,THOMASC,JALILA,
etal.
InterplaybetweenliverX
receptorandhypoxiainduciblefactor11
α
potentiatesinterleukin
-
β
productioninhumanmacrophages
[
J
]
.CellReports,2020,31(7):
107665.
[
37
]
PROTOJD,DORANAC,GUSAROVAG,
etal.
RegulatoryTcells
promotemacrophageefferocytosisduringinflammation
resolution
[
J
]
.Immunity,2018,49(4):666677.
-
[
38
]
Bmal1mediatesMMP9
WUXY,CHENLJ,ZEBF,
etal.
Clock
-
inductioninacroleinpromotedatherosclerosisassociatedwith
-
gutmicrobiotaregulation
[
J
]
.EnvironmentalPollution,2019,252(PtB):
14551463.
-
[
39
]
33baxis
NISHINOT,HORIET,BABAO,
etal.
SREBF1/MicroRNA
-
exhibitspotenteffectonunstableatheroscleroticplaque
formationinvivo
[
J
]
.Arteriosclerosis,Thrombosis,andVascular
Biology,2018,38(10):24602473.
-
[
40
]
LAZAROI,OGUIZAA,RECIOC,
etal.
InterplaybetweenHSP90
andNrf2pathwaysindiabetesassociatedatherosclerosis
[
J
]
.
-
ClinicaeInvestigacionEnArteriosclerosis:PublicacionOficialDe
LaSociedadEspanolaDeArteriosclerosis,2017,29(2):5159.
-
[
41
]
CUISS,LIW,LVX,
etal.
Folicacidattenuateshomocysteineand
enhancesantioxidativecapacityinatheroscleroticrats
[
J
]
.
PhysiologieAppliquee,NutritionetMetabolisme,2017,42(10):
10151022.
-
[
42
]
JIAQL,CAOH,SHENDZ,
etal.
Quercetinprotectsagainst
atherosclerosisbyregulatingtheexpressionofPCSK9,CD36,
PPAR,LXRJ
]
.InternationalJournalofMolecular
γα
andABCA1
[
Medicine,2019,44(3):893902.
-
(
收稿日期
:
2022
1008
)
--
(
本文编辑王雅洁
)
Copyright©博看网. All Rights Reserved.
2024年9月8日发(作者：税怡乐)
中西医结合心脑血管病杂志
2023
年
7
月第
21
卷第
14
期
·
2513
·
基于网络药理学探究栀子川芎胶囊防治动脉粥样
硬化的作用机制
吴立旗
,
盛
松
,
周庆兵
,
徐凤芹
摘要
目的
:
采用网络药理学
、
基因芯片分子对接方法探讨栀子川芎胶囊防治动脉粥样硬化
(
AS
)
的作用机制
。
方法
:
利用14个数
度值
、
中介中心性
、
接近中心性和平均最短路径筛选C
T和TD网络主要核心成分和靶点
。
对治疗靶点进行富集分析
,
最后对核心
--
成分和核心靶点做分子对接验证
。
结果
:
预测得到治疗靶点162个
,
根据网络贡献指数
、
度值
、
中介中心性
、
接近中心性和平均最短
路径筛选C
T和TD网络得到叶酸和槲皮素2个核心成分
、
13个核心靶点
。
富集分析显示栀子川芎胶囊从炎症反应
、
氧化应激
、
脂
--
质和营养物质代谢等多方面防治AS
,
并且治疗靶点富集于全身多个组织器官
。
分子对接验证结果表明核心成分与核心靶点间具有
较强的结合力
。
结论
:
栀子川芎胶囊防治AS具有多成分
、
多靶点的特点
,
可以从多层次
、
多角度防治AS
。
关键词
动脉粥样硬化
;
栀子川芎胶囊
;
网络药理学
;
基因芯片
;
分子对接
;
靶点
;
富集分析
,
据库和基因芯片等预测栀子川芎胶囊防治AS的靶点
,
构建成分治疗靶点
(
C
T
)
网络
、
治疗靶点网络
(
TD
)
并计算网络贡献指数
、
---
:
/
doi
.1672-1349.2023.14.001
j
MechanismofZhiziChuanxiongCapsulesPreventingandTreatingAtherosclerosisBasedonNetworkPharmacology
WULiqi,SHENGSong,ZHOUQingbing,XUFengqin
XiyuanHospital,ChinaAcademyofChineseMedicalSciences,Beijing100093,China
CorrespondingAuthor
XUFengqin,Email:*******************
-
Abstract
Objective:TostudythemechanismofZhiziChuanxiongCapsulesinpreventingandtreatingatherosclerosis(AS)using
s:Atotalof14databasesandgenechipswereusedto
predictthetecompositiontherapeutictarget(CT)
--
andtherapeutictargetnetwork(TD)workcontributionindex,degree,betweenness,closeness,andaverage
-
shmentanalysiswasperformedontherapeutic
therapeutictargetswerepredicted,andthetwocorecomponentsoffolicacid(FA)andquercetinand13coretargetswereobtainedby
screeningtheCTandTDnetworksaccordingtothenetworkcontributionindex,degree,betweenness,closeness,andaverageshortest
--
mentanalysisshowedthatZhiziChuanxiongCapsulesforpreventingandtreatingASbymultipleaspects,suchas
inflammatoryresponse,oxidativestress,lipidandnutrientmetabolism,andthetherapeutictargetswereenrichedinmultipletissuesand
lardockingresultsshowedtherewasastrongbindingforcebetweenthecorecomponentsandthe
sion:ThepreventionandtreatmentofASwithZhiziChuanxiongCapsulesshowedthecharacteristicsof
componentsandmultitargets,bymultilevelandmultisngle.
---
Keywords
atherosclerosis;ZhiziChuanxiongCapsule;networkpharmacology;genechip;moleculardocking;target;enrichment
analysis
targets,andfinally,moleculs:Atotalof162
AS
)
是动脉硬化血管病中最常见
、
动脉粥样硬化
(
最重要的一种
,
是心脑血管疾病共同的病理基础
。
目
“
前中医学认为
“
瘀
”
毒
”
是AS的核心病机
,
尤其在AS
易损斑块破裂进而引发急性心血管事件的过程中发挥
1
]
。
主要作用
[
研究表明
,
与传统活血化瘀治疗AS相比
,
活血化瘀与清热解毒药物配伍组合具有更强的抗AS
2
]
,
作用
[
在此基础上中国中医科学院西苑医院徐凤芹
教授团队根据多年临床经验设计了活血解毒组合栀子
川芎胶囊防治AS
。
课题组前期研究表明低剂量和高
剂量栀子川芎胶囊均能减少血管壁脂质沉积和AS斑
基金项目
国家自然科学基金面上项目
(
No.81973679
)
作者单位
中国中医科学院西苑医院
(
北京100093
)
通讯作者
徐凤芹
,
E
:
*******************
-
3
]
。
但是由于栀子川芎胶囊成分复杂性和药理
块形成
[
作用多靶点
、
多环节
、
多途径的特点
,
采用既往
“
单成
分单靶点
”
的研究思路来探索栀子川芎胶囊干预AS
-
的作用机制难以从整体上解释栀子川芎胶囊抗AS的
物质基础
。
引用信息
吴立旗
,
盛松
,
周庆兵
,
等.基于网络药理学探究栀子川芎胶
:
2023
,
21
(
14
)
25132522.
-
囊防治动脉粥样硬化的作用机制
[
J
]
.中西医结合心脑血管病杂志
,
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2514
·
CHINESEJOURNALOFINTEGRATIVEMEDICINEONCARDIO-CEREBROVASCULARDISEASE
Jul 2023 Vol.21 No.14
y
网络药理学是从系统水平研究药物与人体相互作
用规律和机制的一门新兴学科
,
因其整体性和系统性
的特点已被广泛应用于复方活性成分筛选
、
治疗靶点
4
6
]
-
。
因此
,
预测及作用机制研究
[
本研究借助网络药理
为
P
<
0.05且
|
log2foldchange
|≥
1
。
为保证预测准
确性将上述10个来源的靶点两两取交集
,
筛选至少出
现在2个数据源中的靶点作为疾病靶点
,
然后将复方
靶点与疾病靶点再次取交集最终得到治疗靶点
(
检索
。
日期截至2020年11月1日
)
1.4
CT网络构建及分析
-
治疗靶点及活性成分靶点关系导入
将活性成分
、
-
23
]
Cytoscape3.2.1
[
构建C
T网络
,
本研究引入了贡献
-
指数
(
contributionindex
,
CI
)
评估化合物对C
T网络
-
学方法
,
结合基因芯片
、
分子对接等多项生物信息学技
术试图从整体角度探究栀子川芎胶囊干预AS的作用
机制
,
为栀子川芎胶囊的系统深入研究提供理论基础
。
1
资料与方法
1.1
复方成分筛选
本研究通过中药系统药理学数据库分析平台
7
]
(
TCMSP
)
v2014
,
[
检索
30%
,
类药性
(
DL
)
HL
)
≥
0.18和药物半衰期
(
≥
4为条
件筛选活性成分
,
并结合相关文献纳入不符合筛选条
件但是经过验证抗AS作用显著的中药成分
,
如川芎
8
9
]
-
,
嗪
、
栀子苷等
[
检索日期截至2020年11月1日
。
的贡献程度
,
CI计算基于网络效能
(
networkbased
efficacy
,
NE
)
和PubMed文献数
,
如果排名前
n
个化合
物的CI之和
≥
85%
,
则这
n
个化合物是CT网络中贡
-
24
]
,
献度最大的核心成分
[
CI计算公式如下
:
栀子
、
川芎的化学成分
,
然后以口服生物利用度
(
OB
)
≥
1.2
活性成分靶点筛选
将活性化合物名称分别上传至TCMSP和
PubChem得到各化合物的mol2文件
、
SMILES和
InChI
,
将其导入
[
11
]
12
]
、、
SwissTargetPrediction
(
v2019
)
[
DrugBank
(
v5.0
)
[[
13
]
14
]
SEA
(
v2007
)
和Batman
TCM
(
v2020
)
等5个数
-
据库
,
根据反向药效基团
、
化合物分子结构相似性和成
[
10
]
、
PharmMapper
(
v2017
)
n
是与化合物
j
连接的靶点总数
,
d
(
i
)
公式
①
中
,
。
公式
②
是与化合物
j
连接的靶点
i
的度值
(
degree
)
中
,
m
是网络中的化合物总数
,
c
(
j
)
是化合物
j
治疗
AS的相关PubMed文献总数
,
检索策略在标题或摘要
中以atherosclerosis
、
arteriosclerosis
、
atherosis
、
atheroscleroticarterialdisease和网络中化合物英文
名称及常用别称作为关键词联合检索PubMed中建库
至2020年11月1日的文献
。
1.5
TD网络构建及分析
-
[
25
]
其中
“
minimum
将治疗靶点导入STRING
,
(
”,“,
organism
”
限定为
“
homosapiens
”
用治
>
0.400
)
疗靶点及靶点间的蛋白互作关系导入Cytoscape构建
TD网络
。
使用软件NetworkAnalyzer模块计算网络
-
中度
、
中介中心性
、
接近中心性和平均最短路径评估
TD网络中节点的重要性
,
网络中节点的重要性与度
、
-
中介中心性
、
接近中心性值成正比
,
与平均最短路径成
反比
,
筛选网络中同时大于度
、
中介中心性
、
接近中心
性均值且小于平均最短路径均值的节点定义为核心
靶点
。
1.6
富集分析
、
v3.13.0
)
clusterProfiler
应用R的
(
进行基因本体
(
GO
)
和京都基因与基因组百科全书
分靶点互作相似性等3种原理预测成分靶点
。
同时
-
在上述5个网站中分别以NormFitscore
≥
0.9
、
Probability
≥
0.7
、
Similaritythreshold
≥
0.9
、
P
<
0.05
、
Scorecutoff
≥
20作为筛选条件保证靶点预测的准确
性
。
最后将从5个数据库中得到的成分靶点汇总去重
后导入UniPort中校正为genesymbol
,
检索日期截至
2020年11月1日
。
1.3
疾病靶点筛选
arteriosclerosis
、
atherosis和
以atherosclerosis
、
atheroscleroticarterialdisease作为检索词检索治疗
[[
15
]
12
]
、、
靶标数据库
(
TTD
,
v2020
)
DrugBank
(
v5.0
)
[
18
]
19
]
(、、
v2018
)
[
GeneCards
(
v5.2
)
NCBI
、
DisGeNET
[[
20
]
21
]
(、
v2019
)
HAGR
(
v2018
)
等9个数据库
。
同时在
16
]
17
]
、、
OMIM
(
v2020Oct
)
[
GAD
(
v2014
)
[
PharmGKB
requiredinteractionscore
”
设定为
“
mediumconfidence
GEO中以相同关键词检索得到AS相关的基因芯片
1个
。
GSE28829是一个由荷兰Maastricht大学血管
病理中心提供的包括13例早期和16例晚期颈动脉
22
]
。
本研究
AS斑块尸体活检标本的基因表达数据集
[
(、
v4.0.0
)
enrichplot
(
v1.13.0
)
包和ggplot2
(
v3.3.3
)
包
使用Perl将探针ID批量转换为Genesymbol
,
然后应
用R4.0.0的impute
(
v3.1.3
)
包和limma
(
v4.1
)
包来插
补缺失值
、
归一化处理和确定差异基因
,
差异基因阈值
(
KEGG
)
富集分析和结果可视化
,
根据adjusted
P
<
0.05筛选GO和KEGG富集条目
。
使用TissueEnrich
(
https
:
///
,
v2018
)
进行组织富
26
]
,
集分析和可视化
[
同样根据adjusted
P
<
0.05筛选
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2515
·
显著富集的组织器官
。
1.7
分子对接
同时在
在TCMSP中下载核心成分的mol2文件
,
PDB中下载核心靶点的pdb文件
。
对接前使用
DiscoveryStudio
(
v2019
)
对所有靶点蛋白进行去水
、
加氢
、
删除原始配体等预处理
,
删除的配体另存为
mol2格式文件
。
分子对接应用GEMDOCK
(
v2.1
)
软
27
]
,
件
[
软件采用standarddocking对接
,
其余对接参
分和核心靶点的结合能强于核心靶点原配小分子和核
心靶点的结合能时
,
则核心成分与核心治疗靶点结合
亲和力较好
。
最后使用R的pheatmap包
(
v1.0.12
)
绘
制对接能量值热图
,
如果pdb中下载的靶点蛋白自带
,
的是多个配体小分子
(
ligandgroup
)
则把多个配体小
分子分别与靶点蛋白对接计算能量值然后取平均值绘
6
]
。
制热图
[
数均为默认
。
结合亲和力由结合自由能决定的
,
结合
能
(
负值
)
的绝对值越大
,
结合构象越稳定
。
当核心成
1.8
研究流程
从多项生物信息学技术深入研究栀子川芎胶囊干
预AS的作用
。
详见图1
。
图1
研究流程图
2
结
果
2.1
复方成分筛选
为条件筛选
,
并结合文献得到化合物18个
,
其中栀子
成分12个
,
川芎成分7个
,
其中mandenol为两药共
有成分
。
栀子川芎胶囊活性成分见表1
。
DL
≥
0.18和HL
≥
4
在TCMSP中以OB
≥
30%
,
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y
中药
栀子/川芎
栀子
栀子
栀子
栀子
栀子
栀子
栀子
栀子
栀子
栀子
栀子
川芎
川芎
川芎
川芎
川芎
川芎
成分编码
M1494
M98
M9038
M7245
M4561
M449
M422
M358
M3095
M2883
M1663
M4557
M433
M359
M2157
M2140
M2135
M2202
mandenol
quercetin
GBGB
3
methylkempferol
-
sudan
Ⅲ
stigmasterol
kaempferol
beta
sitosterol
-
5
hydroxy7methoxy2(3,4,5trimethoxyphenyl)chromone
------
ethyloleate(NF)
(4aS,6aR,6aS,6bR,8aR,10R,12aR
,
14bS)10hydroxy2,2,6a,
---
6b,9,9,12aheptamethyl1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b
---
tetradecahydropicene4acarboxylicacid
--
geniposide
FA
sitosterol
wallichilide
perlolyrine
myricanone
tetramethylpyrazine
活性成分名称
表1
栀子川芎胶囊活性成分
OB
(
%
)
42.00
46.43
45.58
60.16
84.07
43.83
41.88
36.91
51.96
32.40
32.03
14.64
68.96
36.91
42.31
65.95
40.60
20.01
DL
0.19
0.28
0.83
0.26
0.59
0.76
0.24
0.75
0.41
0.19
0.76
0.44
0.71
0.75
0.71
0.27
0.51
0.03
HL
5.39
14.40
10.25
16.36
8.99
5.57
14.74
5.36
15.98
4.85
4.34
24.81
5.37
6.85
12.62
4.39
2.2
活性成分靶点筛选
包括川芎靶
5个数据库筛选到456个成分靶点
,
点172个
,
栀子靶点328个
。
2.3
疾病靶点筛选
成
将疾病靶点两两取交集得到AS靶点1991个
,
分靶点与AS靶点再取交集共得栀子川芎胶囊治疗
AS靶点162个
,
其中川芎61个
,
栀子129个
,
共有靶
点14个
,
这表明栀子川芎胶囊在防治AS过程中既有
各自的特异性靶点单独发挥作用
,
又有共同靶点协同
发挥作用
,
两药可相须相使防治AS
。
2.4
CT网络构建及分析
-
T网络删除孤立节点及连边后有节点176个
,
C
-
代表14个化合物成分
,
其中川芎5个
,
栀子8个
,
共有
成分1个和治疗靶点162个
;
263条边代表263个成
,
分靶点关系
(
见图2
)
图中红色圆圈代表栀子成分
,
蓝
-
色圆圈代表两药共有成分
,
黄色圆圈代表川芎成分
,
紫
色方块代表治疗靶点
,
线代表成分靶点关系
。
根据上
-
述公式计算C
T网络中每个化合物的CI
,
结果表明叶
-
酸
(
FA
)
和槲皮素
(
quercetin
)
2个化合物的CI之和
≥
85%
,
是网络中贡献度最大的核心成分
。
详见图3
。
图2
CT网络构建分析
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2517
·
、
核心靶点
,
共筛选得到胰岛素
(
INS
)
丝氨酸/苏氨酸蛋
、、
白激酶1
(
AKT1
)
酪氨酸蛋白激酶
(
SRC
)
表皮生长因
(、
表皮生长因子
(、
雌激素受体1PTGS2
)
EGF
)
(、、
ESR1
)
过氧化物酶体增生激活受体
γ
(
PPARG
)
白
()、
、
细胞介素
1
IL
1
白细胞介素
10
(
IL10
)
基质金属
----
ββ
、、
蛋白酶
9
(
MMP9
)
人固醇调节元件结合蛋白
(
SREBF1
)
-
热休克蛋白90HSP90AA1
)
这13
α
家族A类成员1
(
。
进一步提取13个核心靶个核心靶点
(
见表2
、
图5
)
点及其相邻节点构建核心靶点网络得到137个节点和
,
1397个边
(
见图6
)
该13个核心靶点与原始TD网
-
络中74.5%
(
137/161
)
的靶点和92.6%
(
1397/1508
)
的边有关联
,
红色
、
黄色
、
绿色分别代表高度值
、
中等度
值和低度值的节点
。
因此
,
T
D网络符合无标度网络
。
-
、
前列腺素内过氧化物合酶2子受体
(
EGFR
)
图3
网络贡献指数
2.5
TD网络构建及分析
-
D网络中有161个节点和
删除孤立节点后T
-
,
1508条边
(
见图4
)
在网络中选取满足同时度
0.015和小于平均最短路径均值
(
1.916
)
的节点定义为
值
>
33.431%
、
接近中心性
>
0.525
、
中介中心性均值
>
图4
原始T
D网络
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2518
·
平均
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y
核心
靶点
INS
AKT1
SRC
EGFR
PTGS2
EGF
ESR1
PPARG
IL1B
IL10
MMP9
SREBF1
HSP90AA1
表2
TD网络中核心靶点信息
-
中介
最短路径
1.368750
1.525000
1.637500
1.650000
1.675000
1.712500
1.731250
1.743750
1.787500
1.812500
1.818750
1.831250
1.837500
中心性
0.216917
0.074165
0.050867
0.035818
0.037179
0.025948
0.024044
0.027775
0.025988
0.017014
0.019160
0.029908
0.016271
接近
中心性
0.730594
0.655738
0.610687
0.606061
0.597015
0.583942
0.577617
0.573477
0.559441
0.551724
0.549828
0.546075
0.544218
度值
105
83
71
66
65
60
51
52
51
46
45
42
40
图5
13个核心靶点网络
图6
13个核心靶点及其相邻节点提取网络
2.6
富集分析
其中
根据
P
<
0.05确定2195个GO富集条目
,
细胞成分
(
CC
)
有40个
,
主要关于RNA聚合酶
Ⅱ
转录
个
,
主要包括核受体活性
、
配体激活转录因子活性
、
类
固醇激素受体活性等
;
生物过程
(
BP
)
条目2009个
,
主
要涉及类固醇代谢
、
炎症反应调控
、
维生素代谢
、
活性
氧代谢和调控
、
脂质代谢调控
、
对营养水平的反应等
调节复合物
、
膜筏
、
微畴膜等
;
分子功能
(
MF
)
结146
(,
见图7
)
图中条带长度对应该条目中的富集基因数
以
P
<
0.05为条件筛选得到115条通路
,
包括磷脂酰
肌醇
3
激酶蛋白激酶B
(
PI3K
AKT
)
通路
、
低氧诱导因
----
应力和动脉粥样硬化
、
白细胞介素17
(
IL
17
)
信号通
-
路
、
辅助性T细胞17
(
Th17
)
细胞分化和脂肪细胞脂肪
量
,
条带颜色由红到蓝代表条目富集的
P
逐渐增大
。
子
1
(
HIF1
)
通路
、
内分泌抵抗
、
甲状腺激素信号通路
、
--
胰岛素抵抗
、
甲状旁腺激素合成分泌和作用
、
流体剪切
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·
,
分解的调节等
(
见图8
)
图中横坐标代表通路富集基
因数量占通路中所有基因的比例
,
圆圈面积大小与通
路富集基因数量成正比
,
圆圈颜色由红到蓝代表通路
富集的adjusted
P
值逐渐增大
。
组织富集分析显示
。
162个治疗靶点富集于肝脏等多个组织
(
见图9
)
图7
GO分析
图8
KEGG富集分析
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2520
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y
图9
组织富集结果
2.7
分子对接
槲皮素和11个核
对筛选出的2个核心成分叶酸
、
PPARG
、
IL1B
、
MMP9
、
SREBF1
、
HSP90AA1
(
EGF和
PTGS2
、
SREBF
、
INS
、
AKT1
、
EGFR1的对接能量强于
原配体和靶点间的能量值
,
核心成分与其余靶点的对
接能量值和原配体和靶点间的能量相比近似或略低
,
因此
,
可以认为核心成分和核心靶点间对接较好
,
具有
较强的结合力
。
详见图10
、
图11
。
心靶点INS
、
AKT1
、
SRC
、
EGFR
、
PTGS2
、
ESR1
、
IL10未在PDB找到相应自带配体的蛋白结构
)
进行
-
分子对接
。
对接结果显示核心成分与PPARG
、
图10
分子对接能量热图
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2521
·
亡
、
胆固醇逆向转运等
,
因此
,
通过某个化合物和某个
靶点防治AS往往难以取得理想的临床疗效
。
中药复
方中含有多种活性成分
,
具有多成分
、
多靶点
、
多通路
的作用特点
,
是治疗AS这类由多种机制共同介导的
慢性疾病的理想药物
。
本研究通过网络药理学角度探究了栀子川芎胶囊
治疗AS的潜在的分子机制和靶点通路
。
C
T网络及
-
CI结果显示叶酸和槲皮素是网络中的核心成分
,
在栀
子川芎胶囊抗AS中发挥主要作用
。
T
D网络分析显
-
PPARG
、
IL1B
、
IL10
、
MMP9
、
SREBF1
、
HSP90AA1这
13个核心靶点在栀子川芎胶囊治疗AS中尤为重要
。
通过进一步提取13个核心靶点及其相邻节点构建核
心靶点网络
,
可知T
D网络符合无标度网络
,
即网络中
-
少数的节点拥有大量的连接
,
说明它们对保证T
D网
-
络的稳定起着至关重要的作用
,
可见这13个核心靶点
是栀子川芎胶囊治疗AS的潜在靶点
。
既往研究证实
ESR1
[
34
]
28
]
29
]
30
]
31
]
32
]
33
]
、、、、、、
INS
[
AKT1
[
SRC
[
EGFR
[
PTGS2
[
EGF
[
示
,
INS
、
AKT1
、
SRC
、
EGFR
、
PTGS2
、
EGF
、
ESR1
、
SREBF1
[
39
]
、
PPARG
[
35
]
研究靶点预测的准确性
。
GO与KEGG分析显示
,
栀
子川芎胶囊通过干预类固醇代谢
、
炎症反应
、
维生素代
谢
、
活性氧代谢
、
脂质代谢
、
对营养水平反应等
,
进而调
控PI3K
AKT通路
、
HIF1通路
、
内分泌抵抗
、
胰岛素抵
--
抗
、
IL
17信号通路
、
Th17细胞分化和脂肪细胞脂肪分
-
解调节等多个信号通路
,
从炎症反应
、
氧化应激
、
脂质
和营养物质代谢等多方面干预AS
,
发挥其治疗AS的
作用
。
GO
、
KEGG分析表明
,
栀子川芎胶囊活性成分
的作用靶点分布于不同的生物学功能和通路
,
多成分
、
多靶点整体相互调节是其防治AS的作用机制
。
组织
富集分析显示
,
治疗靶点富集于肝脏等多个组织和器
官
,
说明栀子川芎胶囊防治AS是对全身多个组织和
器官综合整体调控的结果
。
分子对接表明叶酸和槲皮
素与核心靶点间有较强的结合力
,
也进一步间接证明
41
42
]
-
。
了网络药理学预测的准确性
[
40
]
、
HSP90AA1
[
和AS密切相关
,
证实了本
、
IL1B
[
36
]
、
IL10
[
37
]
、
MMP9
[
38
]
、
本研究通过网络药理学等方法分析和探索了栀子
川芎胶囊防治AS的潜在物质基础与靶点通路
,
为后
续机制研究提供了理论基础
。
但是需要注意的是
,
网
图11
分子对接结构图
络药理学研究尚存在一定局限性
,
如忽视了药物剂量
、
中药炮制
、
个体化差异带来的影响
,
因此
,
仍需进一步
试验结果的验证与支持
。
参考文献
:
[
1
]
瘀毒
”
病因病机的研究
陈浩,苏伟,龚少愚,等.动脉粥样硬化中医
“
进展
[
J
]
.中西医结合心脑血管病杂志,2011,9(9):1104
1106.
-
[
2
]
D
]
.济
张京春.解毒活血干预动脉粥样硬化易损斑块的综合研究
[
南:山东中医药大学,2007.
3
讨
论
近年来的研
AS是心脑血管疾病共同的病理基础
,
究证实AS是一个多因素参与
、
多基因异常调控的复
杂病理过程
,
包括炎症
、
脂质浸润
、
血栓形成
、
细胞凋
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·
2522
·
CHINESEJOURNALOFINTEGRATIVEMEDICINEONCARDIO-CEREBROVASCULARDISEASE
Jul 2023 Vol.21 No.14
y
[
3
]
ZHOUQB,WULQ,ZHANGY,
etal.
EffectsofZhiziChuanxiong
Capsule(栀子川芎胶囊)onabnormalmethylationinrabbitswith
atherosclerosis
[
J
]
.ChineseJournalofIntegrativeMedicine,2018,
24(7):512517.
-
[
4
]
kpharmacology:thenextparadigmindrug
discovery
[
J
]
.NatureChemicalBiology,2008,4(11):682690.
-
[
5
]
ZHANGB,WANGX,grativeplatformofTCMnetwork
pharmacologyanditsapplicationonaherbalformula,QingLuo
--
Yin
[
J
]
.EvidenceBasedComplementaryandAlternative
-
Medicine:ECAM,2013,2013:456747.
[
6
]
based
SHENGS,YANGZX,XUFQ,
etal.
Networkpharmacology
-
explorationofsynergisticmechanismofguanxin
Ⅱ
formula(
Ⅱ
)
forCoronaryHeartDisease
[
J
]
.ChineseJournalofIntegrative
Medicine,2021,27(2):106114.
-
[
7
]
RUJL,LIP,WANGJN,
etal.
TCMSP:adatabaseofsystems
pharmacologyfordrugdiscoveryfromherbalmedicines
[
J
]
.
JournalofCheminformatics,2014,6:13.
[
8
]
J
]
.时珍国医
魏恩韬,张琪.川芎嗪抗动脉粥样硬化的作用与机制
[
国药,2019,30(5):1192
1194.
-
[
9
]
周庆兵,吴立旗,徐凤芹.栀子苷对ox
LDL诱导的RAW264.7来源
-
泡沫细胞DNA异常甲基化的双向调节作用
[
J
]
.中国中西医结合
杂志,2019,39(7):853
858.
-
[
10
]
WANGX,SHENYH,WANGSW,
etal.
PharmMapper2017
update:awebserverforpotentialdrugtargetidentificationwitha
comprehensivetargetpharmacophoredatabase
[
J
]
.Nucleic
AcidsResearch,2017,45(W1):W356W360.
-
[
11
]
DAINAA,MICHIELINO,argetPrediction:updated
dataandnewfeaturesforefficientpredictionofproteintargetsof
smallmolecules
[
J
]
.NucleicAcidsResearch,2019,47(W1):W357
-
W364.
[
12
]
WISHARTDS,FEUNANGYD,GUOAC,
etal.
DrugBank5.0:a
majorupdatetotheDrugBankdatabasefor2018
[
J
]
.Nucleic
AcidsResearch,2018,46(D1):D1074D1082.
-
[
13
]
WANGZH,LIANGL,YINZ,
etal.
Improvingchemicalsimilarity
ensembleapproachintargetprediction
[
J
]
.Journalof
Cheminformatics,2016,8:20.
[
14
]
TCM:abioinformatics
LIUZY,GUOFF,WANGY,
etal.
BATMAN
-
analysistoolformolecularmechANismoftraditionalChinese
medicine
[
J
]
.ScientificReports,2016,6:21146.
[
15
]
WANGYX,ZHANGS,LIFC,
etal.
Therapeutictargetdatabase
2020:enrichedresourceforfacilitatingresearchandearly
developmentoftargetedtherapeutics
[
J
]
.NucleicAcids
Research,2020,48(D1):D1031D1041.
-
[]
16
AMBERGERJS,ingOnlineMendelian
InheritanceinMan(OMIM):aknowledgebaseofhumangenes
andgeneticphenotypes
[
J
]
.CurrProtocBioinformatics,2017,58
(1):121126.
-
[
17
]
BECKERKG,BARNESKC,BRIGHTTJ,
etal.
Thegenetic
associationdatabase
[
J
]
.NatGenet,2004.36(5):431432.
-
[
18
]
BARBARINOJM,WHIRLCARRILLOM,ALTMANRB,
etal.
-
PharmGKB:aworldwideresourceforpharmacogenomic
information
[
J
]
.WileyInterdisciplinaryReviewsSystemsBiology
andMedicine,2018,10(4):e1417.
[
19
]
SAFRANM,DALAHI,ALEXANDERJ,
etal.
GeneCardsVersion3:
thehumangeneintegrator
[
J
]
.Database,2010,2010:baq020.
[
20
]
PIEROJ,RAMREZANGUITAJM,SA
Ü
CHPITARCHJ,
etal.
ÑÍ--
TheDisGeNETknowledgeplatformfordiseasegenomics:2019
update
[
J
]
.NucleicAcidsResearch,2020,48(D1):D845D855.
-
[
21
]
TACUTUR,THORNTOND,JOHNSONE,
etal.
HumanAgeing
GenomicResources:newandupdateddatabases
[
J
]
.Nucleic
AcidsResearch,2018,46(D1):D1083D1090.
-
[
22
]
antigenic
D
Ö
RINGY,MANTHEYHD,DRECHSLERM,
etal.
Auto
-
proteinDNAcomplexesstimulateplasmacytoiddendriticcellsto
-
promoteatherosclerosis
[
J
]
.Circulation,2012,125(13):16731683.
-
[
23
]
SHANNONP,MARKIELA,OZIERO,
etal.
Cytoscape:asoftware
environmentforintegratedmodelsofbiomolecularinteraction
networks
[
J
]
.GenomeResearch,2003,13(11):24982504.
-
[
24
]
based
YUESJ,LIUJ,FENGWW,
etal.
Systempharmacology
-
dissectionofthesynergisticmechanismofHuangqiand
Huanglianfordiabetesmellitus
[
J
]
.FrontiersinPharmacology,
2017,8:694.
[
25
]
SZKLARCZYKD,GABLEAL,LYOND,
etal.
STRINGv11:protein
-
proteinassociationnetworkswithincreasedcoverage,supporting
functionaldiscoveryingenomewideexperimentaldatasets
[
J
]
.
-
NucleicAcidsResearch,2019,47(D1):D607D613.
-
[
26
]
JAINA,Enrich:tissuespecificgeneenrichment
-
analysis
[
J
]
.Bioinformatics,2019,35(11):19661967.
-
[]
27
YANGJM,K:agenericevolutionarymethod
formoleculardocking
[
J
]
.Proteins,2004,55(2):288304.
-
[
28
]
JIAM,ZHONGWT,CAIP,
etal.
Correlationbetweeninsulin
-
inducedestrogenreceptormethylationandatherosclerosis
[
J
]
.
CardiovascularDiabetology,2016,15(1):156.
[
29
]
1555pinhibitsthe
CHENL,ZHENGSY,YANGCQ,
etal.
miR
--
proliferationandmigrationofVSMCsandHUVECsin
atherosclerosisbytargetingAKT1
[
J
]
.EuropeanReviewfor
MedicalandPharmacologicalSciences,2019,23(5):22232233.
-
[
30
]
BYUNS,JUNGH,CHENJ,
etal.
Phosphorylationofhepatic
farnesoidXreceptorbyFGF19signalingactivatedSrcmaintains
-
cholesterollevelsandprotectsfromatherosclerosis
[
J
]
.JBiol
Chem,2019.294(22):87328744.
-
[
31
]
WANGL,HUANGZ,HUANGW,
etal.
Inhibitionofepidermal
growthfactorreceptorattenuatesatherosclerosisviadecreasing
inflammationandoxidativestress
[
J
]
.SciRep,2017,7(1):933944.
-
[
32
]
ZHOUYQ,ZHOUHX,HUAL,
etal.
Verificationofferroptosisand
pyroptosisandidentificationofPTGS2asthehubgeneinhuman
coronaryarteryatherosclerosis
[
J
]
.FreeRadicalBiology&
Medicine,2021,171:5568.
-
[
33
]
ZEBOUDJL,MATREM,GUYONNETL,
etal.
SelectiveEGF
Î-
receptorinhibitioninCD4(
+
)Tcellsinducesanergyandlimits
atherosclerosis
[
J
]
.JournaloftheAmericanCollegeof
Cardiology,2018,71(2):160172.
-
[
34
]
LEHTIM
Ä
KIT,KUNNASTA,MATTILAKM,
etal.
Coronaryartery
wallatherosclerosisinrelationtotheestrogenreceptor1gene
polymorphism:anautopsystudy
[
J
]
.JournalofMolecular
Medicine,2002,80(3):176180.
-
[
35
]
CHENS,TSYBOULEVAN,BALLANTYNECM,
etal.
Effectsof
PPARalpha,gammaanddeltahaplotypesonplasmalevelsof
lipids,severityandprogressionofcoronaryatherosclerosisand
responsetostatintherapyinthelipoproteincoronary
atherosclerosisstudy
[
J
]
.Pharmacogenetics,2004,14(1):6171.
-
[
36
]
M
É
N
É
GAUTL,THOMASC,JALILA,
etal.
InterplaybetweenliverX
receptorandhypoxiainduciblefactor11
α
potentiatesinterleukin
-
β
productioninhumanmacrophages
[
J
]
.CellReports,2020,31(7):
107665.
[
37
]
PROTOJD,DORANAC,GUSAROVAG,
etal.
RegulatoryTcells
promotemacrophageefferocytosisduringinflammation
resolution
[
J
]
.Immunity,2018,49(4):666677.
-
[
38
]
Bmal1mediatesMMP9
WUXY,CHENLJ,ZEBF,
etal.
Clock
-
inductioninacroleinpromotedatherosclerosisassociatedwith
-
gutmicrobiotaregulation
[
J
]
.EnvironmentalPollution,2019,252(PtB):
14551463.
-
[
39
]
33baxis
NISHINOT,HORIET,BABAO,
etal.
SREBF1/MicroRNA
-
exhibitspotenteffectonunstableatheroscleroticplaque
formationinvivo
[
J
]
.Arteriosclerosis,Thrombosis,andVascular
Biology,2018,38(10):24602473.
-
[
40
]
LAZAROI,OGUIZAA,RECIOC,
etal.
InterplaybetweenHSP90
andNrf2pathwaysindiabetesassociatedatherosclerosis
[
J
]
.
-
ClinicaeInvestigacionEnArteriosclerosis:PublicacionOficialDe
LaSociedadEspanolaDeArteriosclerosis,2017,29(2):5159.
-
[
41
]
CUISS,LIW,LVX,
etal.
Folicacidattenuateshomocysteineand
enhancesantioxidativecapacityinatheroscleroticrats
[
J
]
.
PhysiologieAppliquee,NutritionetMetabolisme,2017,42(10):
10151022.
-
[
42
]
JIAQL,CAOH,SHENDZ,
etal.
Quercetinprotectsagainst
atherosclerosisbyregulatingtheexpressionofPCSK9,CD36,
PPAR,LXRJ
]
.InternationalJournalofMolecular
γα
andABCA1
[
Medicine,2019,44(3):893902.
-
(
收稿日期
:
2022
1008
)
--
(
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