2024年9月18日发(作者：储依霜)
丝路建设
国内刊号 CN61-1499/C91
含水层视为统一均匀含水层，采用理想状态模式无限边界稳定承
压水大井法进行的简化矿坑涌水量计算。
3.本次涌水量计算，
采用承压水大井法。根据水文地质调
查，谦比希矿一号、二号矿区矿坑涌水，实际上是地表潜水和深
部承压水对矿床联合充水的结果。特别是在400中段以上，地表
潜水与深部承压水通过渗流和越流方式相互补充，有密切的水力
联系。西矿体氧化矿的分布特征就是对这一论证的合理解释。
4.含水层厚度（M）和渗透系数（K），分别采用以往区域
水文地质调查的数据，经过分析对比后选取的。
因此，预测区域
W19-2
W19-1
CH90
CH83
WP10
WP9
WP8
的真实的含水层厚度和渗透系数可能与选取数值有一定偏差。
另外，相关分析预测流量是建立在数理统计的基础上，在注重数
据的代表性和独立性同时，只能尽可能地选取有代表性的实测数
据。该方法外推范围有限，更深部的预测结果只可用来做定性分
析。
参考文献：
[1]施普德.井水量计算的理论与实践
[2]GB12719-91矿区水文地质工程地质勘探规范
[3]肖长来.地下水动力学讲义.2006
[4]SL373-2007水利水电工程水文地质勘察规范
[5]DLT5213-2005水电水利工程抽水试验规程
[6]王秀兰、刘忠席.矿山水文地质
1200m
87mL
1000m
287mL
800m
487mL
图 例
200m
W19-1
钻孔及编号
硫化矿体
氧化矿体
盐析液液萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定
牛奶中的四环素类兽药
罗瑞涟（佛山市质量计量监督检测中心 广东佛山 528225）
摘 要：本文研究并建立了牛奶中四环素、土霉素、金霉
素和强力霉素这4种四环素类兽药的盐析液-液微萃取-超高
效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）的检测方法。牛
奶样品经Na
2
EDTA-Mcllvaine 缓冲液提取，在硫酸铵辅助下
采用乙腈萃取浓缩后，以0.1%（V/V）甲酸水溶液和乙腈为
流动相梯度洗脱，经BEH C
18
柱分离，电喷雾正离子扫描，
多反应监测模式（MRM）检测，外标法进行定量。结果显
示，该方法下4种四环素类兽药的最低检出限为0.71μg/kg；
4种化合物在1～100μg/kg浓度范围内线性关系良好，相关
系数均大于0.999；在1、5、50μg/kg加标水平下回收率为
81.71~109.06%，相对标准偏差均小于8%。本方法简单快速、
灵敏度高，经济可靠，环境友好，适用于牛奶中四环素类兽
药的定性定量分析。
关键词：盐析液液萃取；超高效液相色谱-串联质谱法；
四环素类兽药
目前，牛奶中四环素类兽药的检测方法主要有液相色谱-
紫外检测法、高效液相色谱-串联质谱法和超高效液相色谱-
串联质谱法。样品中四环素类兽药的提取净化方法主要有固
相萃取法和液-液萃取法。近年来，在液-液萃取法的基础
上，又衍生出了盐析液-液萃取法。这种方法是向样品溶液
和强极性有机溶剂组成的混合物中加入适当的盐类化合物，
促使有机溶剂更好地从混合物中分离出来
[8]
。该方法简单、快
速，在大大减少有机溶剂使用量的同时，能够提高像四环素
类兽药这类极性化合物的萃取效率。
盐酸四环素（Tetracycline hydrochloride，97.7%）、盐酸
土霉素（Oxytetracycline hydrochloride，97.5%）、盐酸金霉
素（Chlortetracycline hydrochloride，93%）、盐酸强力霉素
（Doxycycline hyclate，98%），4种标准品购于Sigma公司。
乙腈、甲醇、甲酸，购于德国CNW公司，均为色谱纯。
乙酸乙酯、乙腈、十二水合磷酸氢二钠、一水合柠檬酸、
乙二胺四乙酸二钠、硫酸铵、草酸铵均为分析纯。
牛奶，由佛山市南海区水牛奶研究开发有限公司提供。
2.仪器与设备
Quattro Premier XE超高效液相色谱-三重四级杆串联质
谱仪(UPLC-MS/MS)，美国Waters公司；OA-SYS水浴氮吹
仪，美国Organomation公司；电子天平；旋涡混合器；超声
波清洗器；振荡器；离心机。
3.实验方法
(1)溶液配制
Na
2
EDTA-Mcllvaine 缓冲液：分别称取2.10g柠檬
酸和2.84g磷酸氢二钠，用水溶解并定容至100mL；将
100mL0.1mol/L柠檬酸溶液与62.5mL0.2mol/mL磷酸氢二钠溶
液混合，并加入6.05g乙二胺四乙酸二钠，使其溶解，摇匀，
必要时用氢氧化钠或盐酸调pH至4.0±0.05，即得0.1mol/L的
Na2EDTA-Mcllvaine 缓冲液。
标准溶液配制：分别精确称取4种四环素类兽药标准
品2.5mg，用甲醇溶解并定容至25mL，配制成质量浓度为
100μg/mL的标准储备液，于-18℃下避光保存。根据需要用
50%乙腈水溶液逐级稀释，配制成合适浓度的混合标准工作
液。
(2)样品溶液的制备
一、材料与方法
1.材料与试剂
92国内刊号 CN61-1499/C
丝路建设
称取1g样品置于50mL离心管中，添加5mL Na2EDTA-
Mcllvaine 缓冲溶液，于旋涡混合器上充分混匀后，置于超
声波清洗器中超声20min。然后，加入5mL乙腈，置于振荡
器上振荡混匀15min。随后，加入5g（NH4）2SO4，涡旋混
匀后，4500rpm离心5min，上清液于50℃下N2吹干。残渣用
1mL50%乙腈水溶液溶解定容，过0.22μmPTFE滤膜，滤液供
超高效液相色谱-串联质谱仪测定。
(3)UPLC-MS/MS检测条件
UPLC条件：色谱柱：Acquity UPLC BEH C18，1.7
μm，100×2.1 mm；柱温：30 ℃；进样体积：5 μL；流动
相：A为0.1%的甲酸水溶液，B为色谱纯乙腈；流速：0.2 mL/
min；采用梯度洗脱。
质谱参数：电离方式：电喷雾正离子(ESI+)模式；毛细管
电压：2.5 kV；离子源温度：120 ℃；脱溶剂温度：300 ℃；
脱溶剂气流：N2，流速500 L/h；锥孔气流：N2，流速50 L/
h；碰撞气：氩气，流速0.12mL/min；扫描模式：多反应监测
(MRM)。
或分解，从而避免对质谱造成损害，是一类质谱友好的盐类
化合物。本文研究了硫酸铵和草酸铵在液液萃取方法中对相
分离程度的影响。从目标化合物的加标回收率实验结果图2可
见，硫酸铵在液-液萃取过程中，能更好地促进乙腈和水相的
分离，从而提高目标化合物的萃取效率，而且回收率的重现
性也比草酸铵的要好。
根据国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)对检出限的定
义，本实验在阴性牛奶中添加低浓度的混合标准溶液，使各
标准品浓度水平分别为0.5μg/kg和1μg/kg，按1.3.2的方法
处理，每个水平平行测定6次，计算标准偏差，以3倍标准偏
差计算各个化合物的检出限(置信水平P=95%)，最终选取检出
限最低的化合物所对应的结果作为本方法的检出限。结果显
示，这两个水平的检出限分别为0.71μg/kg和0.95μg/kg。然
后，向阴性牛奶中添加0.71μg/kg的混合标准溶液，按照1.3.2
中的方法验证，结果显示4种四环素类兽药在超高效液相色
谱-质谱联用仪上仍然有响应，且信噪比S/N>3，因此，确定
本方法的检出限为0.71μg/kg。
二、结果与讨论
1.质谱条件的优化
本实验在调谐条件下通过注射器直接进样，分别对1μg/
mL的各个标准溶液进行母离子和子离子扫描，确定定量和定
性离子对，对毛细管电压、锥孔电压、碰撞能和驻留时间等
参数进行了优化，表2列出了主要的优化参数。4种四环素类
兽药混标的总离子中可看出 4种兽药在4min内即可实现快速分
离检测。
三、结论
本文研究了盐析液液萃取-超高效液相色谱-串联质谱法
检测牛奶中四环素、土霉素、金霉素和强力霉素这4种四环素
类兽药的检测方法。该方法下4种四环素类兽药最低检出限为
0.71μg/kg；4种化合物在1~100μg/kg质量浓度范围内线性相
关性较好，相关系数均大于0.999；在1、5、50μg/kg加标水
平下平均回收率为81.71~109.06%，相对标准偏差均小于7%，
满足四环素类兽药日常检测工作的需要。本方法简单快速、
经济可靠、灵敏度高、环境友好，适用于牛奶中四环素类兽
药的定性定量分析。
参考文献：
[1]中华人民共和国农业部.中华人民共和国农业部公告第
235号[EB/OL].2011-07-30
[2]GB/T 22990-2008牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金
霉素、强力霉素残留量的测定液相色谱-紫外检测法[S].北京:
中国标准出版社，2008
[3]连英杰、吴敏、黎翠玉等.直接提取-超高压液相色谱-
电喷雾串联质谱法检测原料奶及奶制品中的四环素类抗生素
[J].食品安全质量检测学报，2013.4(2):489-495
作者
简介：
罗
瑞涟
（1991-
-）女，
硕士，主
要从事食
品风险检
测的工
作。
2.提取条件的优化
液-液萃取方法中，有机萃取溶剂的选择至关重要。在日
常的食品安全检测中，常用的有机溶剂有甲醇、乙腈、乙酸
乙酯、丙酮等。本文选取了乙腈和乙酸乙酯作为研究对象，
按照1.3.2的方法处理样品，通过目标化合物的平均回收率来
评价两者的萃取效果，结果见图1。从图中数据可见，采用乙
腈作为萃取溶剂时，4种四环素类兽药的平均回收率较高，说
明相比于极性较弱的乙酸乙酯，具有强极性的乙腈萃取含有
极性基团的四环素类兽药的效果更好。而且，乙腈还具有沉
淀蛋白质的能力，能够提高净化效果。
不同类型的铵盐对液-液微萃取过程中相分离的程度存在
一定的影响。铵盐相比于其它盐类，在电离室能够轻易挥发
图1 不同有机溶剂的萃取效果 图2 不同类型铵盐对相分离程度的影响
2024年9月18日发(作者：储依霜)
丝路建设
国内刊号 CN61-1499/C91
含水层视为统一均匀含水层，采用理想状态模式无限边界稳定承
压水大井法进行的简化矿坑涌水量计算。
3.本次涌水量计算，
采用承压水大井法。根据水文地质调
查，谦比希矿一号、二号矿区矿坑涌水，实际上是地表潜水和深
部承压水对矿床联合充水的结果。特别是在400中段以上，地表
潜水与深部承压水通过渗流和越流方式相互补充，有密切的水力
联系。西矿体氧化矿的分布特征就是对这一论证的合理解释。
4.含水层厚度（M）和渗透系数（K），分别采用以往区域
水文地质调查的数据，经过分析对比后选取的。
因此，预测区域
W19-2
W19-1
CH90
CH83
WP10
WP9
WP8
的真实的含水层厚度和渗透系数可能与选取数值有一定偏差。
另外，相关分析预测流量是建立在数理统计的基础上，在注重数
据的代表性和独立性同时，只能尽可能地选取有代表性的实测数
据。该方法外推范围有限，更深部的预测结果只可用来做定性分
析。
参考文献：
[1]施普德.井水量计算的理论与实践
[2]GB12719-91矿区水文地质工程地质勘探规范
[3]肖长来.地下水动力学讲义.2006
[4]SL373-2007水利水电工程水文地质勘察规范
[5]DLT5213-2005水电水利工程抽水试验规程
[6]王秀兰、刘忠席.矿山水文地质
1200m
87mL
1000m
287mL
800m
487mL
图 例
200m
W19-1
钻孔及编号
硫化矿体
氧化矿体
盐析液液萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定
牛奶中的四环素类兽药
罗瑞涟（佛山市质量计量监督检测中心 广东佛山 528225）
摘 要：本文研究并建立了牛奶中四环素、土霉素、金霉
素和强力霉素这4种四环素类兽药的盐析液-液微萃取-超高
效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）的检测方法。牛
奶样品经Na
2
EDTA-Mcllvaine 缓冲液提取，在硫酸铵辅助下
采用乙腈萃取浓缩后，以0.1%（V/V）甲酸水溶液和乙腈为
流动相梯度洗脱，经BEH C
18
柱分离，电喷雾正离子扫描，
多反应监测模式（MRM）检测，外标法进行定量。结果显
示，该方法下4种四环素类兽药的最低检出限为0.71μg/kg；
4种化合物在1～100μg/kg浓度范围内线性关系良好，相关
系数均大于0.999；在1、5、50μg/kg加标水平下回收率为
81.71~109.06%，相对标准偏差均小于8%。本方法简单快速、
灵敏度高，经济可靠，环境友好，适用于牛奶中四环素类兽
药的定性定量分析。
关键词：盐析液液萃取；超高效液相色谱-串联质谱法；
四环素类兽药
目前，牛奶中四环素类兽药的检测方法主要有液相色谱-
紫外检测法、高效液相色谱-串联质谱法和超高效液相色谱-
串联质谱法。样品中四环素类兽药的提取净化方法主要有固
相萃取法和液-液萃取法。近年来，在液-液萃取法的基础
上，又衍生出了盐析液-液萃取法。这种方法是向样品溶液
和强极性有机溶剂组成的混合物中加入适当的盐类化合物，
促使有机溶剂更好地从混合物中分离出来
[8]
。该方法简单、快
速，在大大减少有机溶剂使用量的同时，能够提高像四环素
类兽药这类极性化合物的萃取效率。
盐酸四环素（Tetracycline hydrochloride，97.7%）、盐酸
土霉素（Oxytetracycline hydrochloride，97.5%）、盐酸金霉
素（Chlortetracycline hydrochloride，93%）、盐酸强力霉素
（Doxycycline hyclate，98%），4种标准品购于Sigma公司。
乙腈、甲醇、甲酸，购于德国CNW公司，均为色谱纯。
乙酸乙酯、乙腈、十二水合磷酸氢二钠、一水合柠檬酸、
乙二胺四乙酸二钠、硫酸铵、草酸铵均为分析纯。
牛奶，由佛山市南海区水牛奶研究开发有限公司提供。
2.仪器与设备
Quattro Premier XE超高效液相色谱-三重四级杆串联质
谱仪(UPLC-MS/MS)，美国Waters公司；OA-SYS水浴氮吹
仪，美国Organomation公司；电子天平；旋涡混合器；超声
波清洗器；振荡器；离心机。
3.实验方法
(1)溶液配制
Na
2
EDTA-Mcllvaine 缓冲液：分别称取2.10g柠檬
酸和2.84g磷酸氢二钠，用水溶解并定容至100mL；将
100mL0.1mol/L柠檬酸溶液与62.5mL0.2mol/mL磷酸氢二钠溶
液混合，并加入6.05g乙二胺四乙酸二钠，使其溶解，摇匀，
必要时用氢氧化钠或盐酸调pH至4.0±0.05，即得0.1mol/L的
Na2EDTA-Mcllvaine 缓冲液。
标准溶液配制：分别精确称取4种四环素类兽药标准
品2.5mg，用甲醇溶解并定容至25mL，配制成质量浓度为
100μg/mL的标准储备液，于-18℃下避光保存。根据需要用
50%乙腈水溶液逐级稀释，配制成合适浓度的混合标准工作
液。
(2)样品溶液的制备
一、材料与方法
1.材料与试剂
92国内刊号 CN61-1499/C
丝路建设
称取1g样品置于50mL离心管中，添加5mL Na2EDTA-
Mcllvaine 缓冲溶液，于旋涡混合器上充分混匀后，置于超
声波清洗器中超声20min。然后，加入5mL乙腈，置于振荡
器上振荡混匀15min。随后，加入5g（NH4）2SO4，涡旋混
匀后，4500rpm离心5min，上清液于50℃下N2吹干。残渣用
1mL50%乙腈水溶液溶解定容，过0.22μmPTFE滤膜，滤液供
超高效液相色谱-串联质谱仪测定。
(3)UPLC-MS/MS检测条件
UPLC条件：色谱柱：Acquity UPLC BEH C18，1.7
μm，100×2.1 mm；柱温：30 ℃；进样体积：5 μL；流动
相：A为0.1%的甲酸水溶液，B为色谱纯乙腈；流速：0.2 mL/
min；采用梯度洗脱。
质谱参数：电离方式：电喷雾正离子(ESI+)模式；毛细管
电压：2.5 kV；离子源温度：120 ℃；脱溶剂温度：300 ℃；
脱溶剂气流：N2，流速500 L/h；锥孔气流：N2，流速50 L/
h；碰撞气：氩气，流速0.12mL/min；扫描模式：多反应监测
(MRM)。
或分解，从而避免对质谱造成损害，是一类质谱友好的盐类
化合物。本文研究了硫酸铵和草酸铵在液液萃取方法中对相
分离程度的影响。从目标化合物的加标回收率实验结果图2可
见，硫酸铵在液-液萃取过程中，能更好地促进乙腈和水相的
分离，从而提高目标化合物的萃取效率，而且回收率的重现
性也比草酸铵的要好。
根据国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)对检出限的定
义，本实验在阴性牛奶中添加低浓度的混合标准溶液，使各
标准品浓度水平分别为0.5μg/kg和1μg/kg，按1.3.2的方法
处理，每个水平平行测定6次，计算标准偏差，以3倍标准偏
差计算各个化合物的检出限(置信水平P=95%)，最终选取检出
限最低的化合物所对应的结果作为本方法的检出限。结果显
示，这两个水平的检出限分别为0.71μg/kg和0.95μg/kg。然
后，向阴性牛奶中添加0.71μg/kg的混合标准溶液，按照1.3.2
中的方法验证，结果显示4种四环素类兽药在超高效液相色
谱-质谱联用仪上仍然有响应，且信噪比S/N>3，因此，确定
本方法的检出限为0.71μg/kg。
二、结果与讨论
1.质谱条件的优化
本实验在调谐条件下通过注射器直接进样，分别对1μg/
mL的各个标准溶液进行母离子和子离子扫描，确定定量和定
性离子对，对毛细管电压、锥孔电压、碰撞能和驻留时间等
参数进行了优化，表2列出了主要的优化参数。4种四环素类
兽药混标的总离子中可看出 4种兽药在4min内即可实现快速分
离检测。
三、结论
本文研究了盐析液液萃取-超高效液相色谱-串联质谱法
检测牛奶中四环素、土霉素、金霉素和强力霉素这4种四环素
类兽药的检测方法。该方法下4种四环素类兽药最低检出限为
0.71μg/kg；4种化合物在1~100μg/kg质量浓度范围内线性相
关性较好，相关系数均大于0.999；在1、5、50μg/kg加标水
平下平均回收率为81.71~109.06%，相对标准偏差均小于7%，
满足四环素类兽药日常检测工作的需要。本方法简单快速、
经济可靠、灵敏度高、环境友好，适用于牛奶中四环素类兽
药的定性定量分析。
参考文献：
[1]中华人民共和国农业部.中华人民共和国农业部公告第
235号[EB/OL].2011-07-30
[2]GB/T 22990-2008牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金
霉素、强力霉素残留量的测定液相色谱-紫外检测法[S].北京:
中国标准出版社，2008
[3]连英杰、吴敏、黎翠玉等.直接提取-超高压液相色谱-
电喷雾串联质谱法检测原料奶及奶制品中的四环素类抗生素
[J].食品安全质量检测学报，2013.4(2):489-495
作者
简介：
罗
瑞涟
（1991-
-）女，
硕士，主
要从事食
品风险检
测的工
作。
2.提取条件的优化
液-液萃取方法中，有机萃取溶剂的选择至关重要。在日
常的食品安全检测中，常用的有机溶剂有甲醇、乙腈、乙酸
乙酯、丙酮等。本文选取了乙腈和乙酸乙酯作为研究对象，
按照1.3.2的方法处理样品，通过目标化合物的平均回收率来
评价两者的萃取效果，结果见图1。从图中数据可见，采用乙
腈作为萃取溶剂时，4种四环素类兽药的平均回收率较高，说
明相比于极性较弱的乙酸乙酯，具有强极性的乙腈萃取含有
极性基团的四环素类兽药的效果更好。而且，乙腈还具有沉
淀蛋白质的能力，能够提高净化效果。
不同类型的铵盐对液-液微萃取过程中相分离的程度存在
一定的影响。铵盐相比于其它盐类，在电离室能够轻易挥发
图1 不同有机溶剂的萃取效果 图2 不同类型铵盐对相分离程度的影响