2024年9月24日发(作者：受芳林)
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方法验证报告
方法名称:《生活饮用水标准检验方法 感官性状和物理指标》GB/T5750.4-
2006 挥发酚 4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法、直接分光光度法
项目负责人：
报告编写人：
报告日期：
目 录
1方法概要 ....................................................................................................................................................... 3
1.1目的 ........................................................................................................................................................ 3
1.2测定原理 ................................................................................................................................................ 3
2 仪器与化学试剂 ......................................................................................................................................... 3
2.1仪器 ........................................................................................................................................................ 3
2.2试剂 ........................................................................................................................................................ 3
3简要操作步骤 ............................................................................................................................................... 4
4方法确认程序 ............................................................................................................................................... 5
4.1 标准曲线的绘制： .............................................................................................................................. 5
4.2 方法检出限： ...................................................................................................................................... 6
4.3方法精密度实验 .................................................................................................................................... 6
4.4方法准确度实验： ................................................................................................................................ 7
5评价与验证结论 ........................................................................................................................................... 9
5.1评价 ........................................................................................................................................................ 9
5.1.1空白值最低检出限评价 ................................................................................................................. 9
5.1.2精密度评价 ..................................................................................................................................... 9
5.1.3准确度评价 ..................................................................................................................................... 9
5.2结论 ........................................................................................................................................................ 9
1方法概要
1.1目的
根据实验室的检测能力和条件以及检测检验机构资质认定评审准则的要求，确认开展挥
发酚类《生活饮用水标准检验方法 感官性状和物理指标》GB/T5750.4-2006 项目的检测能
力，通过试验进行分析总结，编制此方法验证报告。
1.2测定原理
在PH=10±0.2和有氧化剂铁氰化钾存在的溶液中，酚与4- 氨基安替吡啉形成红色的安
替吡啉染料，用三氯甲烷萃取后比色定量。
酚的对位取代基可阻止酚与安替吡啉的反应，但羟基（—OH）、卤素、磺酰基（—SO
2
H） 、
羧基（—COOH）、甲氧基（—OCH
3
）除外。因此，邻位硝基也阻止反应，间位硝基部分
地阻止反应。
2 仪器与化学试剂
2.1仪器
仪器名称
全玻璃蒸馏
器
分液漏斗
具塞比色皿
容量瓶
分光光度计
2.2试剂
名称
氢氧化钠
三氯甲烷
五水硫酸铜
氯化铵
氨水
4- 氨基安替吡啉
铁氰化钾
规格型号
仪器
出厂编号
性能状况
（计量/校准状态、量程、灵敏度）
有效期
500mL
500mL
10mL
250mL
生产厂家
纯度/规格
ρ
20
=0.88g/mL
溴化钾
溴酸钾
可溶性淀粉
水杨酸
氧化锌
硫酸溶液
苯酚
盐酸
碘化钾
硫代硫酸钠
重铬酸钾溶液
1+9
ρ
20
=1.19g/mL
c（1/6K
2
Cr
2
O
7
）=0.1000mol/L
3简要操作步骤
4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法：
取样250mL水样，置于500mL全玻璃蒸馏瓶中。以甲基橙为指示剂用硫酸溶液调PH
至4.0以下，使水样由桔黄色变为橙色，加入5mL硫酸铜溶液及数粒玻璃珠，加热蒸馏。待
蒸馏出总体积的90%左右，停止蒸馏。稍冷，向蒸馏瓶内加入25mL纯水，继续蒸馏，知道
收集250mL馏出液为止。
注：由于酚随水蒸气挥发，速度缓慢，收集馏出液的体积应与原水体积相等。试验证明接受的馏出液体积若不与原水
样相等，将影响回收率。
比色测定
将水样馏出液全部转入500mL分液漏斗中，另取酚标准使用溶液0mL，0.5mL，1.00mL，
2mL，4mL，6mL，8mL和10mL，分别置于预先盛有100mL纯水的500mL分液漏斗中，
最后补加纯水至250mL。
向各分液漏斗中加入2mL氨水-氯化铵缓冲液，混匀。再各加1.5mL的4-氨基安替吡啉
溶液，混匀，最后加入1.50mL铁氰化钾溶液，充分混匀，准确静置10min。加入10.0mL三
氯甲烷，振摇2min，静置分层。在分液漏斗颈部塞入滤纸卷将三氯甲烷萃取溶液缓缓放入
干燥比色管中，用分光光度计，于460nm波长，用2cm比色皿，以三氯甲烷为参比，测量
吸光度。
绘制标准曲线，从标准曲线上查处挥发酚的质量。
直接分光光度法：
水样处理同上。
吸取50mL蒸馏液（或取适量用纯水稀释至50mL）于50mL具塞比色管中。
另取50mL比色管7支，分别加入每毫升含10μg酚（以苯酚计）的标准使用液0 mL、
0.5 mL，1.00 mL，3.00mL，5.00mL，7.00 mL和10.00 mL，用纯水稀释至50mL。
向水样及标准中各加入0.5mL缓冲液，摇匀。加1.0mL4-氨基安替吡啉溶液混匀。最后
加入1.0mL铁氰化钾溶液，充分混匀，准确放置10min。于510nm波长，用2cm比色皿，
以空白管为参比，测量吸光度。
绘制标准曲线，从标准曲线上查处挥发酚的质量。用（1）式计算。
计算
ρ（
C
6
H
5
OH
）
m
-----------------------------（1）
v
式中：ρ（C
6
H
5
OH）------水样中挥发酚（以苯酚计）的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）
m-----从标准曲线上查得的样品管中挥发酚的质量(以苯酚计)，单位为
微克（μg）
V------水样体积，单位为毫克（mL）
4方法确认程序
4.1 标准曲线的绘制：
4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法：
浓度点
体积（mL）
吸光度
校准曲线
线性相关系数
1#
0
2#
0.50
3#
1.00
4#
2.00
5#
4.00
6#
6.00
7#
8.00
8#
10.00
直接分光光度法
浓度点
1# 2# 3# 4# 5# 6# 7#
体积（mL）
吸光度
校准曲线
线性相关系数
0
0.50
1.00
3.00
5.00
7.00
10.00
4.2 方法检出限：
参考《环境监测 分析方法标准制修订技术导则》（HJ 168-2010），根据扣除空白值后
的与0.01吸光度相对应的浓度值作为检出限，根据（2）式计算
MDL=0.01/b-------------------(2)
4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法检出限为：
直接分光光度法检出限为：
4.3方法精密度实验
配制6份浓度为0.1C、0.5C、0.9C的样品溶液，（C即标准曲线最高浓度点），按照
给定分析方法的全过程进行处理和测定，记录6个平行样的测定结果，统计其相对标准偏差。
4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法：
试样
平行号
0.1C
1
2
测定结果
（mg/L）
3
4
5
6
平均值
x
（mg/L）
标准偏差S（mg/L）
相对标准偏差RSD(%)
0.5C
0.9C
注1：0.1C，0.5C，0.9C中的C即标准曲线最高浓度点
配制6份浓度为0.1C、0.5C、0.9C的样品溶液，（C即标准曲线最高浓度点），按照
给定分析方法的全过程进行处理和测定，记录6个平行样的测定结果，统计其相对标准偏差。
直接分光光度法：
试样
平行号
0.1C
1
2
测定结果
（（mg/L））
3
4
5
6
平均值
x
（mg/L）
标准偏差S（mg/L）
相对标准偏差RSD(%)
0.5C
0.9C
注1：0.1C，0.5C，0.9C中的C即标准曲线最高浓度点
4.4方法准确度实验：
（1）采用水中挥发酚成分分析标准物质 ，进行准确度实验。
有证标准物质/标准样品测试数据
有证标准物质/标准样品
平行号
1
2
测定结果
（mg/L）
3
4
5
6
平均值
x
（mg/L）
有证标准物质/标准样品
浓度（含量）µ
a
备注
（mg/L）
相对误差RE
a
国家有证标准物质/标准样品的标准值±不确定度。
（2）分别取三种不同的水样进行实际样品测试和加标实验。分别取三个样品 500mL,
在样品中分别添加水中挥发酚成分分析标准物质 mL、 mL、 mL，按全程序每个样品平
行测定6次，分别计算每个样品的加标回收率，统计其相对标准偏差。
4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法：
实际样品加标测试数据
实际样品
平行号
样品1
样品 加标样品
1
2
测定
结果
（mg/L）
3
4
5
6
平均值
x
、
y
（mg/L）
加标量µ（mL）
加标回收率P
样品2
样品 加标样品
样品3
样品 加标样品
备
注
注1：
x
为实际样品测试均值，
y
为加标样品测试均值。
直接分光光度法：
实际样品
平行号
样品1
样品 加标样品
1
测定
结果
（mg/L）
2
3
4
样品2
样品 加标样品
样品3
样品 加标样品
备
注
5
6
平均值
x
、
y
（mg/L）
加标量µ（mL）
加标回收率P
注1：
x
为实际样品测试均值，
y
为加标样品测试均值。
5评价与验证结论
5.1评价
5.1.1空白值最低检出限评价
本方法的最低检出限为 ；本实验的最低检出限为 ,符合方法要求。
5.1.2精密度评价
本方法挥发酚浓度在 时，相对标准偏差为 。本实验的相对标准偏差（变异系数）
在 ，符合规范要求。
5.1.3准确度评价
根据方法条件，检测环标准物质挥发酚含量，其结果均在其不确定度范围内。
5.2结论
本次方法验证，所有参加人员均经培训持证上岗；所用仪器设备均经检定并在有效期
内；检测方法为有效版本；实验过程中本项目未收到其他项目干扰；分析实验过程中均使用
符合国家标准的试剂和蒸馏水。
该项目测定结果标准曲线的相关系数能达到0.999以上，实验所得方法检出限
为 ，满足方法要求。方法精密度达到标准要求。质控样品检测合格，加标回收率在标
准范围内，实验室检测结果准确可靠，人员操作熟练，技术水平符合要求，已达到该方法各
项条件。
该项目各项指标均达到《生活饮用水标准检验方法 感官性状和物理指标》GB/T5750.4-
2006标准要求，表明此项目可在本站开展。
2024年9月24日发(作者：受芳林)
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方法验证报告
方法名称:《生活饮用水标准检验方法 感官性状和物理指标》GB/T5750.4-
2006 挥发酚 4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法、直接分光光度法
项目负责人：
报告编写人：
报告日期：
目 录
1方法概要 ....................................................................................................................................................... 3
1.1目的 ........................................................................................................................................................ 3
1.2测定原理 ................................................................................................................................................ 3
2 仪器与化学试剂 ......................................................................................................................................... 3
2.1仪器 ........................................................................................................................................................ 3
2.2试剂 ........................................................................................................................................................ 3
3简要操作步骤 ............................................................................................................................................... 4
4方法确认程序 ............................................................................................................................................... 5
4.1 标准曲线的绘制： .............................................................................................................................. 5
4.2 方法检出限： ...................................................................................................................................... 6
4.3方法精密度实验 .................................................................................................................................... 6
4.4方法准确度实验： ................................................................................................................................ 7
5评价与验证结论 ........................................................................................................................................... 9
5.1评价 ........................................................................................................................................................ 9
5.1.1空白值最低检出限评价 ................................................................................................................. 9
5.1.2精密度评价 ..................................................................................................................................... 9
5.1.3准确度评价 ..................................................................................................................................... 9
5.2结论 ........................................................................................................................................................ 9
1方法概要
1.1目的
根据实验室的检测能力和条件以及检测检验机构资质认定评审准则的要求，确认开展挥
发酚类《生活饮用水标准检验方法 感官性状和物理指标》GB/T5750.4-2006 项目的检测能
力，通过试验进行分析总结，编制此方法验证报告。
1.2测定原理
在PH=10±0.2和有氧化剂铁氰化钾存在的溶液中，酚与4- 氨基安替吡啉形成红色的安
替吡啉染料，用三氯甲烷萃取后比色定量。
酚的对位取代基可阻止酚与安替吡啉的反应，但羟基（—OH）、卤素、磺酰基（—SO
2
H） 、
羧基（—COOH）、甲氧基（—OCH
3
）除外。因此，邻位硝基也阻止反应，间位硝基部分
地阻止反应。
2 仪器与化学试剂
2.1仪器
仪器名称
全玻璃蒸馏
器
分液漏斗
具塞比色皿
容量瓶
分光光度计
2.2试剂
名称
氢氧化钠
三氯甲烷
五水硫酸铜
氯化铵
氨水
4- 氨基安替吡啉
铁氰化钾
规格型号
仪器
出厂编号
性能状况
（计量/校准状态、量程、灵敏度）
有效期
500mL
500mL
10mL
250mL
生产厂家
纯度/规格
ρ
20
=0.88g/mL
溴化钾
溴酸钾
可溶性淀粉
水杨酸
氧化锌
硫酸溶液
苯酚
盐酸
碘化钾
硫代硫酸钠
重铬酸钾溶液
1+9
ρ
20
=1.19g/mL
c（1/6K
2
Cr
2
O
7
）=0.1000mol/L
3简要操作步骤
4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法：
取样250mL水样，置于500mL全玻璃蒸馏瓶中。以甲基橙为指示剂用硫酸溶液调PH
至4.0以下，使水样由桔黄色变为橙色，加入5mL硫酸铜溶液及数粒玻璃珠，加热蒸馏。待
蒸馏出总体积的90%左右，停止蒸馏。稍冷，向蒸馏瓶内加入25mL纯水，继续蒸馏，知道
收集250mL馏出液为止。
注：由于酚随水蒸气挥发，速度缓慢，收集馏出液的体积应与原水体积相等。试验证明接受的馏出液体积若不与原水
样相等，将影响回收率。
比色测定
将水样馏出液全部转入500mL分液漏斗中，另取酚标准使用溶液0mL，0.5mL，1.00mL，
2mL，4mL，6mL，8mL和10mL，分别置于预先盛有100mL纯水的500mL分液漏斗中，
最后补加纯水至250mL。
向各分液漏斗中加入2mL氨水-氯化铵缓冲液，混匀。再各加1.5mL的4-氨基安替吡啉
溶液，混匀，最后加入1.50mL铁氰化钾溶液，充分混匀，准确静置10min。加入10.0mL三
氯甲烷，振摇2min，静置分层。在分液漏斗颈部塞入滤纸卷将三氯甲烷萃取溶液缓缓放入
干燥比色管中，用分光光度计，于460nm波长，用2cm比色皿，以三氯甲烷为参比，测量
吸光度。
绘制标准曲线，从标准曲线上查处挥发酚的质量。
直接分光光度法：
水样处理同上。
吸取50mL蒸馏液（或取适量用纯水稀释至50mL）于50mL具塞比色管中。
另取50mL比色管7支，分别加入每毫升含10μg酚（以苯酚计）的标准使用液0 mL、
0.5 mL，1.00 mL，3.00mL，5.00mL，7.00 mL和10.00 mL，用纯水稀释至50mL。
向水样及标准中各加入0.5mL缓冲液，摇匀。加1.0mL4-氨基安替吡啉溶液混匀。最后
加入1.0mL铁氰化钾溶液，充分混匀，准确放置10min。于510nm波长，用2cm比色皿，
以空白管为参比，测量吸光度。
绘制标准曲线，从标准曲线上查处挥发酚的质量。用（1）式计算。
计算
ρ（
C
6
H
5
OH
）
m
-----------------------------（1）
v
式中：ρ（C
6
H
5
OH）------水样中挥发酚（以苯酚计）的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）
m-----从标准曲线上查得的样品管中挥发酚的质量(以苯酚计)，单位为
微克（μg）
V------水样体积，单位为毫克（mL）
4方法确认程序
4.1 标准曲线的绘制：
4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法：
浓度点
体积（mL）
吸光度
校准曲线
线性相关系数
1#
0
2#
0.50
3#
1.00
4#
2.00
5#
4.00
6#
6.00
7#
8.00
8#
10.00
直接分光光度法
浓度点
1# 2# 3# 4# 5# 6# 7#
体积（mL）
吸光度
校准曲线
线性相关系数
0
0.50
1.00
3.00
5.00
7.00
10.00
4.2 方法检出限：
参考《环境监测 分析方法标准制修订技术导则》（HJ 168-2010），根据扣除空白值后
的与0.01吸光度相对应的浓度值作为检出限，根据（2）式计算
MDL=0.01/b-------------------(2)
4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法检出限为：
直接分光光度法检出限为：
4.3方法精密度实验
配制6份浓度为0.1C、0.5C、0.9C的样品溶液，（C即标准曲线最高浓度点），按照
给定分析方法的全过程进行处理和测定，记录6个平行样的测定结果，统计其相对标准偏差。
4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法：
试样
平行号
0.1C
1
2
测定结果
（mg/L）
3
4
5
6
平均值
x
（mg/L）
标准偏差S（mg/L）
相对标准偏差RSD(%)
0.5C
0.9C
注1：0.1C，0.5C，0.9C中的C即标准曲线最高浓度点
配制6份浓度为0.1C、0.5C、0.9C的样品溶液，（C即标准曲线最高浓度点），按照
给定分析方法的全过程进行处理和测定，记录6个平行样的测定结果，统计其相对标准偏差。
直接分光光度法：
试样
平行号
0.1C
1
2
测定结果
（（mg/L））
3
4
5
6
平均值
x
（mg/L）
标准偏差S（mg/L）
相对标准偏差RSD(%)
0.5C
0.9C
注1：0.1C，0.5C，0.9C中的C即标准曲线最高浓度点
4.4方法准确度实验：
（1）采用水中挥发酚成分分析标准物质 ，进行准确度实验。
有证标准物质/标准样品测试数据
有证标准物质/标准样品
平行号
1
2
测定结果
（mg/L）
3
4
5
6
平均值
x
（mg/L）
有证标准物质/标准样品
浓度（含量）µ
a
备注
（mg/L）
相对误差RE
a
国家有证标准物质/标准样品的标准值±不确定度。
（2）分别取三种不同的水样进行实际样品测试和加标实验。分别取三个样品 500mL,
在样品中分别添加水中挥发酚成分分析标准物质 mL、 mL、 mL，按全程序每个样品平
行测定6次，分别计算每个样品的加标回收率，统计其相对标准偏差。
4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法：
实际样品加标测试数据
实际样品
平行号
样品1
样品 加标样品
1
2
测定
结果
（mg/L）
3
4
5
6
平均值
x
、
y
（mg/L）
加标量µ（mL）
加标回收率P
样品2
样品 加标样品
样品3
样品 加标样品
备
注
注1：
x
为实际样品测试均值，
y
为加标样品测试均值。
直接分光光度法：
实际样品
平行号
样品1
样品 加标样品
1
测定
结果
（mg/L）
2
3
4
样品2
样品 加标样品
样品3
样品 加标样品
备
注
5
6
平均值
x
、
y
（mg/L）
加标量µ（mL）
加标回收率P
注1：
x
为实际样品测试均值，
y
为加标样品测试均值。
5评价与验证结论
5.1评价
5.1.1空白值最低检出限评价
本方法的最低检出限为 ；本实验的最低检出限为 ,符合方法要求。
5.1.2精密度评价
本方法挥发酚浓度在 时，相对标准偏差为 。本实验的相对标准偏差（变异系数）
在 ，符合规范要求。
5.1.3准确度评价
根据方法条件，检测环标准物质挥发酚含量，其结果均在其不确定度范围内。
5.2结论
本次方法验证，所有参加人员均经培训持证上岗；所用仪器设备均经检定并在有效期
内；检测方法为有效版本；实验过程中本项目未收到其他项目干扰；分析实验过程中均使用
符合国家标准的试剂和蒸馏水。
该项目测定结果标准曲线的相关系数能达到0.999以上，实验所得方法检出限
为 ，满足方法要求。方法精密度达到标准要求。质控样品检测合格，加标回收率在标
准范围内，实验室检测结果准确可靠，人员操作熟练，技术水平符合要求，已达到该方法各
项条件。
该项目各项指标均达到《生活饮用水标准检验方法 感官性状和物理指标》GB/T5750.4-
2006标准要求，表明此项目可在本站开展。