2024年10月18日发(作者：卷绮玉)
第３ １卷，第ｌ期
２ ０ １ １年１月
光谱学与光谱分析
Ｖｏ１．３１，Ｎｏ．１，ｐｐ１３１—１３５
Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ａｎｄ Ｓｐｅｃｔｒａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ
Ｊａｎｕａｒｙ，２０１１
纳米银粒子表面增强拉曼光谱在宠物饲料中三聚氰胺的速测研究
程 劫，苏晓鸥
中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，国家饲料质量监督检验中心（北京），北京１０００８１
摘要研究将制备的纳米银粒子作为表面增强拉曼光谱的增强试剂，实现对宠物饲料中三聚氰胺的快速
定性定量分析。以７０９与１ ５４２ ｃｍ＿１处拉曼位移作为定性依据，以ｌ １４９ ｃｍ＿１峰强度作为归一化标准，在
１．０－－１０．０ ｍｇ・ｋｇ＿１浓度范围实现定量计算，检测限０．５ ｍｇ・ｋｇ。研究发现，纳米银粒子对三聚氰胺具
有较强的拉曼增强效应，特征峰信号强度与纳米银粒子加入时间，溶液涡旋强度有很大的关系，同时也受提
取溶剂的种类、提取方式及样品加入量的影响。本方法中每个样品５ ｍｉｎ内完成分析，与现有方法相比，快
速简便，对宠物饲料中三聚氰胺实现现场、快速检测。
关键词 表面增强拉曼光谱；纳米银粒子；三聚氰胺；宠物饲料；快速定性定量分析
中图分类号：０６５７．３ 文献标识码：Ａ ＤＯＩ：１０．３９６４／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００—０５９３（２０１１）Ｏ１ ０１３１－０５
也见报道＿４ｊ，但受近红外本身检测限限制，无法实现定量计
引 言
三聚氰胺（Ｍｅｌａｍｉｎｅ）简称三胺，学名三氨三嗪，俗称蜜
胺，蛋白精，是一种重要的氮杂环有机化工原料，主要用于
生产三聚氰胺 甲醛树脂，用于木材加工、塑料等行业，因
算。
表而增强拉曼光谱（ｓｕｒｆａｃｅ ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｒａｍａｎ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏ—
ｐｙ，简称ＳＥＲＳ）具有速度快，成本低，无损分析等特点，它
能检测到吸附在金属表面的分子，给出丰富的结构信息，有
关ＳＥＲＳ在快速鉴别方面已有相关的文献报道ｌ５］。目前，
ＳＥＲＳ在饲料领域尚未涉足，对饲料中三聚氰胺的快速定性
定量检测更是未见报道。本文正是利用ＳＥＲＳ快速无损分析
的特点，研究宠物饲料中三聚氰胺的快速定性定量方法，实
现现场、快速分析。
为每个ｉ聚氰胺分子巾含有６个氮原子，在原有的粗蛋白含
量的凯氏定氮法中，足通过氮的含量来确定蛋白质的含量，
这就给不法分子带来了可乘之机，通过添加含氮量高的廉价
工业原料来提高其氮的含量，造成蛋白含量虚假增高。２００７
年３月，美囤发生多起猫、狗宠物中毒死亡事件。美国食品
药品管理局调查发现初步认为宠物食品中含有的三聚氰胺是
１试验部分
１．１主要仪器与试剂
导致猫、狗中毒死亡的原因。近期，三聚氰胺毒奶粉事件“卷
土重束”，严重威胁到老百姓的生命安全。饲料安全作为食
品安伞的源头，直接关系到人民群众身体健康，是人民切身
利益所在，提高饲料检测技术水平，研发出快速便捷的分析
测试技术，对保障食品安全具有重要意义。
目前，文献报道较多的检测三聚氰胺的方法主要有液相
ＲａｍＴｒａｃｅｒ￣一２００一ＨＳ型表面增强型拉曼光谱仪（美国
ＯｐｔｏＴｒａｃｅ）；便携式离心机（５ ０００ ｒ・ｍｉｎ＿１）；三聚氰胺、空
白犬饲料（纯度大于９９ ，国家饲料质检中心提供）；０．１
ｍｏｌ・Ｌ＿１ＨＣ１溶液；乙腈，甲醇（分析纯）；１０ ｇ・Ｌ 三氯乙
酸溶液。
１．２实验方法
１．２．１样品制备
色谱、气质联用、液质联用ｌ】。ｊ，农业部发布相关行业标准
（ＮＹ／Ｔ １３７２－－２００７）规定，饲料中三聚氰胺的检测方法为
ＨＰＩ Ｃ法和（Ｘ２ ＭＳ法，并以ＧＣ－ＭＳ法作为确证法，此方法
适用于宠物饲料巾二聚氰胺含量测定，但分析时问长，前处
理繁琐，不适合现场快速检测；现有的ＥＬＩＳＡ快速筛选法虽
（１）标准溶液：三聚氰胺标准储备液：１ ｇ三聚氰胺溶于
ｌ Ｌ甲醇中（ｃ＝１ ｍｇ・ｍＬ＿１）；标准中间液：取５ ｍＬ标准储
备液于５０ ｍＬ容量瓶中，甲醇定容（ｃ一１００ ｍｇ・Ｉ ＿１）；标准
溶液：分别取１００，２００，２５０，５００和１ ０００ Ｌ标准中间液，
然较为简便，但该法受环境条件的限制，常常出现“假阳性”
情况，给柃测工作带来 便；利用近红外进行三聚氰胺检测
收稿Ｅｔ期：２０１ｏ ０４—２６。修订日期：２ＯｌＯ ０９—１１
基金项目：国家“十一五”科技支撑计划项目（２００６ＢＡＤｌ２Ｂｏ３）资助
作者简介：程劫，１９８３年生，中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所研究实习员
１３２ 光谱学与光谱分析 第３１卷
甲醇分别定容于１０ ｍＬ容量瓶中，标准液浓度分别为１，２，
２．５，５和１Ｏ ｇ・ｍＬ；（２）样品制备：分别称取ｉ．０００ ｇ（精
确到０．００１ ｇ）４０目空白犬粮于５个ｌＯ ｍＬ三角瓶中，准确
移取１ ｍＬ五个浓度的三聚氰胺标准液，室温下自然晾干，
此时犬粮中三聚氰胺含量分别为１，２，２．５，５和１０“ｇ・
ｇ一。
槽
¨！一ｌ０ｏ ｎｍ
１．２．２增强试剂制备ｌ６
在冰浴和Ｎ２保护下，向６０ ｍＩ （０．００２ ｔｏｏｌ・Ｌ ）的
ＮａＢＨ４溶液中缓慢滴加２０ ｍＬ（０．００１ ｔｏｏｌ・Ｌ＿１）ＡｇＮＯ３溶
（ａ） 【ｂ１
Ｆｉｇ．２ ＴｈｅＴＥＭ ｄｉａｇｒａｍ ｏｆ ｓｉｌｖｅｒ ｓｏｌ
液，不断搅拌，滴加完成后，继续冰浴搅拌１ ｈ。
１．２．３样品前处理
（１）准确称取４Ｏ目犬粮饲料样品１．０００ ｇ于ｌＯ ｍＬ的三
角瓶中，加入５．Ｏ０ ｍＬ的乙腈，手持震荡５ ｒａｉｎ，取１ Ｈ 上
层溶液于１．５ ｍＬ离心管中，５ ０００ ｒ・ｒａｉｎ 离心１ ｒａｉｎ，取
上清液待分析；（２）取制备好的胶体银溶液５００ Ｌ于２ ｍＬ
透明玻璃瓶中，加入（１）所得上清液２Ｏ Ｌ，加入１００ ｌ
ｎｌ０Ｉ・Ｌ 的ＣａＣ１２和ＮａＣＩ（ｖ／ｖ＝１：１）混合溶液，调节ＰＨ
呈弱碱性，涡旋震荡５～１０ Ｓ后测定。
１．２．４ ＳＥＲＳ分析
用乙腈对拉曼传感器进行峰位置校准，设定激光光源波
长７８５ ｎｍ，激光光源能量２２０ ｍｗ，积分时间参数１０ Ｓ，平
均扫描次数２，平滑参数２，进行单次扫描，所得图谱进行归
一
化计算。
２结果与讨论
２．１增强试剂制备方法讨论
２．１．１袁征
将制得的黄色胶体银溶液（图１）通过透射电子显微镜观
察，发现胶体银中单个银粒子约为２Ｏ Ｄ，ｍ，加入１ ｔｏｏｌ・Ｌ
的ＣａＣＩｚ和ＮａＣＩ（ｖ／ｖ＝Ｉ：１）混合溶液，单个银粒子凝聚成
较大颗粒，在透射电子显微镜下观察约为１００ ｒｉｍ（图２）。研
究发现，仅加入胶体银溶液对三聚氰胺拉曼增强效果不明
显，ｃｌ使银粒子聚集在一起形成较强的电场，在调节溶液
呈弱碱性后，三聚氰胺分子与聚集的胶体银迅速结合ｌ８］，这
使利用ＳＥＲＳ进行三聚氰胺检测提供了可能。故以“胶体银
溶液、１ ｏｔｏｌ・Ｌ～ＣａＣ１２和ＮａＣ１（ｖ／ｖ＝１：１）混合液，０．５
ｏｔｏｌ・Ｌ Ｋ０Ｈ”三者作为增强试剂。
。 ．．
Ｆｉｇ．１ Ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｓｉｌｖｅｒ ｓｏｌ
２．１．２制备方法讨论
图３是加入增强试剂前后ＳＥＲＳ光谱图。加入增强试剂
之前，三聚氰胺的拉曼光谱图噪音较大，无明显特征峰；加
入增强试剂之后，在７０９与ｌ ５４２ ｃｍ 处显示出清晰的特征
峰。
Ｒａｍａｎ ｓｈｉｆｔ／ｃｍ’。
Ｆｉｇ．３ Ｔｈｅ ＳＥＲＳ ｓｐｅｃｔｒａ ｂｙ ａｄｄｉｎｇ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ
ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｓｉｌｖｅｒ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ
目前，对胶体银的制备方法主要有杨海峰等用硝酸银和
柠檬酸三钠制备银纳米粒子（以下简称方法一）；杜一平等利
用硝酸银、柠檬酸钠和聚丙烯酸制备银纳米粒子（以下简称
方法二）。图４是从对三聚氰胺ＳＥＲＳ信号增强强度和信号
稳定性两方面进行比较，从图中可看出，本研究制得的增强
试剂效果较好，ＳＥＲＳ信号较强且稳定。不同制备方法所得
增强试剂的增强效果具有一定的选择性，这可能与不同的基
质有很大的关系。
《 ¨
Ｍｅｔｈｏｄ １ Ｏｕｒ Ｍｅｔｈｏｄ Ｍｅｔｈｏｄ ２＃
・・－－一
０ＵＩ＂Ｍｅｔｈｏｄ
—
Ｍｅｔｈｏｄ１
８００
６００
４００
２ｏ０
０
ｌＵ ２Ｕ ｊＵ ４Ｕ
Ｓｔｏｒａｇｅ ｔｉｍｅ／ｓ
Ｆｉｇ．４ （ａ）Ｔｈｅ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ Ｏｉｌ ｔｈｅ ＳＥＲＳ ｓｉｇｎａｌｓ；
（ｂ）Ｔｈｅ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｒｅｐａ—
ｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｎ ｔｈｅ ＳＥＲＳ ｓｉｇｎａｌ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ
第１期
２．２提取方法比较
２．２．１提取溶剂选择
光谱学与光谱分析 １３３
的结合力时，复合型增强型粒子被破坏，ＳＥＲＳ信号减弱。
２．４样品加入量对ＳＥＲＳ信号强度影响
本文与文献报道ｌｇ ３所用提取溶剂进行对比，１Ｏ ｇ・
实验尝试加入不同量的待测样品，以考察７０９ Ｃｌｑｌ。特征
ｇ 添加基础上从同收率和光谱信号强度两方面进行比较（表
１）。在较为复杂的饲料基质中，乙腈可以选择性提取三聚氰
峰强度的变化（图６）。样品量从１０ Ｌ增至２０ Ｌ，信号不断
增强，当样品量大于２Ｏ Ｌ，信号强度略有下降。选择２Ｏ Ｌ
样品量较佳。
胺，一方面可避开蛋白质干扰，其次ＳＥＲＳ信号强度较强，
回收率较高，便于三聚氰胺定性定量（注：对于那些含脂较
高的宠物饲料可以先用正已烷进行萃取，后用乙腈提取）。
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ＳＥｌｌＳ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｏｆ ｍｅｌａｍｉｎｅ
ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
＊注：ＧＣ－ＭＳ法计算回收率
２．２．２提取方式选择
选用超声波萃取、摇床震荡以及手持震荡三种提取方法
进行比较，超声波提取效果稍好，但提取出的非目标化合物
数量也相应增加，不利于拉曼定性定量分析。出于现场、快
速检测目的出发，选择手持式震荡简单使捷。
２．３溶液放置时间和涡旋混合强度对ＳＥＲＳ信号强度影响
加入增强试剂后，ＳＥＲＳ信号强度随溶液放置时间的增
加逐渐减弱，如 ５（ａ），这＿Ｊ能是由于三聚氰胺分子与银粒
子的相互作用力随着溶液放置时问的增加逐渐减弱，银粒子
缓慢沉降，溶液底部出现不溶物，ＳＥＲＳ信号强度减弱。
增强试剂与待测溶液混合时的涡旋ｌｊ虽度对信号强度也有
较大的影响，强度较大的涡旋式混合不利于ＳＥＲＳ信号，如
图５（ｂ），这可能是由于起初的涡旋强度有利于银粒子与三聚
氰胺分子的结合， 涡旋离心力大于■聚氰胺分子与银粒子
ｊ ８００
言６００
．
ｇ ４００
２００
Ｏ
０ ３０ ６０ ９０ Ｉ２Ｏ ｌ５Ｏ ｌ８Ｏ
Ｓｔｏｒａｇｅ ｔｉｍｅ／ｓ
：８００
喜６
８
００
４ｏｏ
鑫
２０Ｏ
Ｏ
１ ２ ３ ４
Ｍｉｘｉｎｇ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ／ａ．Ｕ
Ｆｉｇ．５ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｏｒａｇｅ ｔｉｍｅ（ａ）ａｎｄ ｍｉｘｉｎｇ
ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ（ｂ）ｏｎ ＳＥＲＳ ｓｉｇｎａｌ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ
８００
６００
三ｌ４００
２００
０
１０ ｌ５ ２０ ２５ ３０
Ｓａｍｐｌｅ ａｍｏｕｔ
Ｆｉｇ．６ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆｔｈｅ ｓａｍｐｌｅａｍｏｕｎｔ
ｏｎ ＳＥＲＳ ｓｉｇｎａｌ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ
２．５定性定量分析
２．５．１定性分析
图７（ａ）是空白犬料和ｊ聚氰胺固体粉末、（ｂ）足５ ｇ・
ｇ＿１和１０ ｇ・ｇ 添加水平的犬料的ＳＥＲＳ图。
１
暑
量
量
暑８００
‘晶
星４００
量
０
５
Ｒａｌｎａｏ ｓｈｉｌｆ／ｃｍ一
Ｆｉｇ．７ Ｔｈｅ ７０９ ｃｍ一 ＳＥＲＳ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ
从图７可看到，佗于７０９ ｊ １ ５４２ ｃｍ 拉曼位移处，特
征峰变化较为明显，空白饲料在７０９与１ ５４２ ｃｍ 附近没有
峰（只在７３０ ｃｍ 附近有一特征峰），且７０９与１５４２ ｃｍ 处
峰强随着浓度的增大而增强，山此知７０９与１ ５４２ ＣＩＴＩ 为火
粮料中三聚氰胺的特征峰，以此位置的拉曼峰作为定性的依
据。
２．５．２定量分析
（１）样品基质对定量的影响
拉曼光谱的定量与常见定量方式不同，实验尝试通过不
同浓度三聚氰胺标准溶液进行考察，发现线性与重现性非常
差，这与增强试剂和三聚氰胺的结合度以及增强试剂稳定件
有很大关系【 。。ＳＥＲＳ的定量必须以本底中特行的特 峰作
为内标信号进行归一化讣算。本研究确定了犬料基质中，以
１ １４９ ｃｍ 处的特征峰作基准，７０９ ｃｍ。。处三聚氰胺特 峰
进行归一化计算．实现定量分析。
（２）方法线性与检测限
采用内标归一化法，以犬料中 三聚氰胺浓度（ ｇ・
１３４ 光谱学与光谱分析
一
第３１卷
ｍＬ ）为横坐标，以７０９ ｃｍ 处峰相对强度为纵坐标，１．０
～
９９．８７５ｘ＋４０．３７５，相关系数０．９９４ ９，检测限０．５ ｍｇ・
１０．０／ｌｇ・ｍＬ 浓度范围绘制标准工作曲线，线性方程
５０
４０
０．５ｍｇ ｋｇ
ｋｇ （图８）。
２．６样品分析
墨３ｏ
ｌ ２０
Ｈ ｌ０
Ｏ
… …
．
／＼／＼ ＾ ．Ｈ…一…
（ｃ＝０．５ ｍｇ・ｋｇ－ ）
＾
本方法能在判定值（２．５ ｍｇ・ｋｇ～ ）ｌ 附近实现较为准 １
确的定量分析，在含量较高（１０ ｍｇ・ｋｇ ）时，定量呈现较
好的正相关关系，以此来判定含量较高（１０ ｍｇ・ｋｇ ）样品。
对来自１７个省的５５批次的猫粮、狗粮进行了样品测试中７
个含量超标（≥２．５ ｍｇ・ｋｇ＿１）的样品测定情况（表２），与
ＧＣ－ＭＳ法进行了对比，发现本方法准确可靠。
Ｆｉｇ．８ Ｔｈｅ ｄｉａｇｒａｍ ｏｆｔｈｅ ＳＥＲＳ ｓｉｇｎａｌｓ
３结
Ｔａｂｌｅ ３ Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｊｅｃｔｅｄ
ｐｒｏｄｕｃｔ（ｃ￣２．５ ｍｇ・ｋｇ－ ）
论
（１）首次利用制备的银胶体溶液作为表面增强型拉曼光
谱的增强试剂，实现对宠物饲料中三聚氰胺含量的速测，每
个样品分析时间需约５ ｒａｉｎ，１．Ｏ～１０．０ ｍｇ・ｋｇ＿１浓度范围
内的实现定量测定，含量大于１０．０ ｍｇ・ｋｇ＿１时，实现快速
判定。方法涉及仪器都为便携式，样品前处理简单，分析时
间短，结果可靠，适合对突发事件的现场、快速检测。
（２）胶体银对三聚氰胺具有较强的拉曼增强效应，信号
强度与增强试剂的加入时间和涡旋强度有很大的关系，同
时，提取溶剂的种类、方式及样品加入量对ＳＥＲＳ信号强度
也有较大的影响。
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ
ｅｅ Ｈ
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Ｈｅ Ｉ
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３］
Ｍｉ
ｔｕｒｅ，ＮＯ．１２１８（中华人民共和国农业部１２１８号公告）．２００９．
第ｌ期 光谱学与光谱分析 １３５
Ｒａｐｉｄ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｅｌａｍｉｎｅ ｉｎ Ｐｅｔ Ｆｏｏｄ ｂｙ Ｓｕｒｆａｃｅ Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｒａ—
ｍａｎ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ｉｎ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ａｇ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
ＣＨＥＮＧ Ｊｉｅ，ＳＵ Ｘｉａｏ－ｏｕ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ Ａｇｒｏ－ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｆｅｅｄ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８１，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｅｌａｍｉｎｅ ｉｎ ｐｅｔ ｆｏｏｄ ｗａｓ ｒｅａｌｉｚｅｄ ｂｙ ｓｕｒｆａｃｅ－ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｒａｍａｎ ｓｐｅｃ—
ｔｒｏｓｃｏｐｙ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ａｇ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ．Ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔｕｄｙ，ｔｈｅ ７０９ ａｎｄ １ ５４２ ｃｍ＿。Ｒａｒｎａｎ ｓｈｉｆｔ ｗａｓ ｃｈｏｓｅｎ ａｓ ｑｕａｌｉｔａ—
ｔｉｖｅ ｂａｓｉｓ．Ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒａｎｇｅ ｂｅｔｗｅｅｎ １．０ ａｎｄ １０．０ ｍｇ・ｋｇ ｗａｓ ａｃｈｉｅｖｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎ—
ｔｅｎｓｉｔｙ ｏｆ １ １４９ ｃｍ～Ｒａｍａｎ ｐｅａｋ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ａ ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｔａｎｄａｒｄ．Ｔｈｅ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｓ ０．５ ｍｇ・ｋｇ一．Ｔｈｅ
Ａｇ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｈａｄ ａ ｓｔｒｏｎｇ Ｒａｍａｎ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｍｅｌａｍｉｎｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｗａｓ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ａｄｄｉｎｇ ｔｉｍｅ ｏｆ Ａｇ
ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｖｏｒｔｅｘ ｓｔｒｅｎｇｔｈ．Ａｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｉｍｅ，ｔｈｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｏｆ ＳＥＲＳ ｗａｓ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ ｔｙｐｅ，ａｎｄ
ｔｈｅ ｍａｎｎｅｒ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｏｎ．Ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｔｉｍｅ ｏｆ ｅａｃｈ ｓａｍｐｌｅ ｗａｓ ａｂｏｕｔ ５ ｍｉｎ．Ｉｔ ｗａｓ ｓｏ ｑｕｉｃｋ ｔｈａｔ ｉｔ ｗａｓ ｅａｓｙ ｔｏ ｒｅａｌｉｚｅ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｌａｍｉｎｅ ｉｎ ｐｅｔ ｆｏｏｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｅｘｉｓｔｉｎｇ ｍｅｔｈ０ｄｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｓｕｒｆａｃｅ ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｒａｍａｎ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ；Ａｇ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ；Ｍｅｌａｍｉｎｅ；Ｐｅｔ ｆｏｄ；Ｒａｐｉｄ ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａ—
ｎａｌｙｓｉｓ
（Ｒｅｃｅｉｖｅｄ Ａｐｒ．２６，２０１０；ａｃｃｅｐｔｅｄ Ｓｅｐ．１ １，２０１０）
2024年10月18日发(作者：卷绮玉)
第３ １卷，第ｌ期
２ ０ １ １年１月
光谱学与光谱分析
Ｖｏ１．３１，Ｎｏ．１，ｐｐ１３１—１３５
Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ａｎｄ Ｓｐｅｃｔｒａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ
Ｊａｎｕａｒｙ，２０１１
纳米银粒子表面增强拉曼光谱在宠物饲料中三聚氰胺的速测研究
程 劫，苏晓鸥
中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，国家饲料质量监督检验中心（北京），北京１０００８１
摘要研究将制备的纳米银粒子作为表面增强拉曼光谱的增强试剂，实现对宠物饲料中三聚氰胺的快速
定性定量分析。以７０９与１ ５４２ ｃｍ＿１处拉曼位移作为定性依据，以ｌ １４９ ｃｍ＿１峰强度作为归一化标准，在
１．０－－１０．０ ｍｇ・ｋｇ＿１浓度范围实现定量计算，检测限０．５ ｍｇ・ｋｇ。研究发现，纳米银粒子对三聚氰胺具
有较强的拉曼增强效应，特征峰信号强度与纳米银粒子加入时间，溶液涡旋强度有很大的关系，同时也受提
取溶剂的种类、提取方式及样品加入量的影响。本方法中每个样品５ ｍｉｎ内完成分析，与现有方法相比，快
速简便，对宠物饲料中三聚氰胺实现现场、快速检测。
关键词 表面增强拉曼光谱；纳米银粒子；三聚氰胺；宠物饲料；快速定性定量分析
中图分类号：０６５７．３ 文献标识码：Ａ ＤＯＩ：１０．３９６４／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００—０５９３（２０１１）Ｏ１ ０１３１－０５
也见报道＿４ｊ，但受近红外本身检测限限制，无法实现定量计
引 言
三聚氰胺（Ｍｅｌａｍｉｎｅ）简称三胺，学名三氨三嗪，俗称蜜
胺，蛋白精，是一种重要的氮杂环有机化工原料，主要用于
生产三聚氰胺 甲醛树脂，用于木材加工、塑料等行业，因
算。
表而增强拉曼光谱（ｓｕｒｆａｃｅ ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｒａｍａｎ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏ—
ｐｙ，简称ＳＥＲＳ）具有速度快，成本低，无损分析等特点，它
能检测到吸附在金属表面的分子，给出丰富的结构信息，有
关ＳＥＲＳ在快速鉴别方面已有相关的文献报道ｌ５］。目前，
ＳＥＲＳ在饲料领域尚未涉足，对饲料中三聚氰胺的快速定性
定量检测更是未见报道。本文正是利用ＳＥＲＳ快速无损分析
的特点，研究宠物饲料中三聚氰胺的快速定性定量方法，实
现现场、快速分析。
为每个ｉ聚氰胺分子巾含有６个氮原子，在原有的粗蛋白含
量的凯氏定氮法中，足通过氮的含量来确定蛋白质的含量，
这就给不法分子带来了可乘之机，通过添加含氮量高的廉价
工业原料来提高其氮的含量，造成蛋白含量虚假增高。２００７
年３月，美囤发生多起猫、狗宠物中毒死亡事件。美国食品
药品管理局调查发现初步认为宠物食品中含有的三聚氰胺是
１试验部分
１．１主要仪器与试剂
导致猫、狗中毒死亡的原因。近期，三聚氰胺毒奶粉事件“卷
土重束”，严重威胁到老百姓的生命安全。饲料安全作为食
品安伞的源头，直接关系到人民群众身体健康，是人民切身
利益所在，提高饲料检测技术水平，研发出快速便捷的分析
测试技术，对保障食品安全具有重要意义。
目前，文献报道较多的检测三聚氰胺的方法主要有液相
ＲａｍＴｒａｃｅｒ￣一２００一ＨＳ型表面增强型拉曼光谱仪（美国
ＯｐｔｏＴｒａｃｅ）；便携式离心机（５ ０００ ｒ・ｍｉｎ＿１）；三聚氰胺、空
白犬饲料（纯度大于９９ ，国家饲料质检中心提供）；０．１
ｍｏｌ・Ｌ＿１ＨＣ１溶液；乙腈，甲醇（分析纯）；１０ ｇ・Ｌ 三氯乙
酸溶液。
１．２实验方法
１．２．１样品制备
色谱、气质联用、液质联用ｌ】。ｊ，农业部发布相关行业标准
（ＮＹ／Ｔ １３７２－－２００７）规定，饲料中三聚氰胺的检测方法为
ＨＰＩ Ｃ法和（Ｘ２ ＭＳ法，并以ＧＣ－ＭＳ法作为确证法，此方法
适用于宠物饲料巾二聚氰胺含量测定，但分析时问长，前处
理繁琐，不适合现场快速检测；现有的ＥＬＩＳＡ快速筛选法虽
（１）标准溶液：三聚氰胺标准储备液：１ ｇ三聚氰胺溶于
ｌ Ｌ甲醇中（ｃ＝１ ｍｇ・ｍＬ＿１）；标准中间液：取５ ｍＬ标准储
备液于５０ ｍＬ容量瓶中，甲醇定容（ｃ一１００ ｍｇ・Ｉ ＿１）；标准
溶液：分别取１００，２００，２５０，５００和１ ０００ Ｌ标准中间液，
然较为简便，但该法受环境条件的限制，常常出现“假阳性”
情况，给柃测工作带来 便；利用近红外进行三聚氰胺检测
收稿Ｅｔ期：２０１ｏ ０４—２６。修订日期：２ＯｌＯ ０９—１１
基金项目：国家“十一五”科技支撑计划项目（２００６ＢＡＤｌ２Ｂｏ３）资助
作者简介：程劫，１９８３年生，中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所研究实习员
１３２ 光谱学与光谱分析 第３１卷
甲醇分别定容于１０ ｍＬ容量瓶中，标准液浓度分别为１，２，
２．５，５和１Ｏ ｇ・ｍＬ；（２）样品制备：分别称取ｉ．０００ ｇ（精
确到０．００１ ｇ）４０目空白犬粮于５个ｌＯ ｍＬ三角瓶中，准确
移取１ ｍＬ五个浓度的三聚氰胺标准液，室温下自然晾干，
此时犬粮中三聚氰胺含量分别为１，２，２．５，５和１０“ｇ・
ｇ一。
槽
¨！一ｌ０ｏ ｎｍ
１．２．２增强试剂制备ｌ６
在冰浴和Ｎ２保护下，向６０ ｍＩ （０．００２ ｔｏｏｌ・Ｌ ）的
ＮａＢＨ４溶液中缓慢滴加２０ ｍＬ（０．００１ ｔｏｏｌ・Ｌ＿１）ＡｇＮＯ３溶
（ａ） 【ｂ１
Ｆｉｇ．２ ＴｈｅＴＥＭ ｄｉａｇｒａｍ ｏｆ ｓｉｌｖｅｒ ｓｏｌ
液，不断搅拌，滴加完成后，继续冰浴搅拌１ ｈ。
１．２．３样品前处理
（１）准确称取４Ｏ目犬粮饲料样品１．０００ ｇ于ｌＯ ｍＬ的三
角瓶中，加入５．Ｏ０ ｍＬ的乙腈，手持震荡５ ｒａｉｎ，取１ Ｈ 上
层溶液于１．５ ｍＬ离心管中，５ ０００ ｒ・ｒａｉｎ 离心１ ｒａｉｎ，取
上清液待分析；（２）取制备好的胶体银溶液５００ Ｌ于２ ｍＬ
透明玻璃瓶中，加入（１）所得上清液２Ｏ Ｌ，加入１００ ｌ
ｎｌ０Ｉ・Ｌ 的ＣａＣ１２和ＮａＣＩ（ｖ／ｖ＝１：１）混合溶液，调节ＰＨ
呈弱碱性，涡旋震荡５～１０ Ｓ后测定。
１．２．４ ＳＥＲＳ分析
用乙腈对拉曼传感器进行峰位置校准，设定激光光源波
长７８５ ｎｍ，激光光源能量２２０ ｍｗ，积分时间参数１０ Ｓ，平
均扫描次数２，平滑参数２，进行单次扫描，所得图谱进行归
一
化计算。
２结果与讨论
２．１增强试剂制备方法讨论
２．１．１袁征
将制得的黄色胶体银溶液（图１）通过透射电子显微镜观
察，发现胶体银中单个银粒子约为２Ｏ Ｄ，ｍ，加入１ ｔｏｏｌ・Ｌ
的ＣａＣＩｚ和ＮａＣＩ（ｖ／ｖ＝Ｉ：１）混合溶液，单个银粒子凝聚成
较大颗粒，在透射电子显微镜下观察约为１００ ｒｉｍ（图２）。研
究发现，仅加入胶体银溶液对三聚氰胺拉曼增强效果不明
显，ｃｌ使银粒子聚集在一起形成较强的电场，在调节溶液
呈弱碱性后，三聚氰胺分子与聚集的胶体银迅速结合ｌ８］，这
使利用ＳＥＲＳ进行三聚氰胺检测提供了可能。故以“胶体银
溶液、１ ｏｔｏｌ・Ｌ～ＣａＣ１２和ＮａＣ１（ｖ／ｖ＝１：１）混合液，０．５
ｏｔｏｌ・Ｌ Ｋ０Ｈ”三者作为增强试剂。
。 ．．
Ｆｉｇ．１ Ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｓｉｌｖｅｒ ｓｏｌ
２．１．２制备方法讨论
图３是加入增强试剂前后ＳＥＲＳ光谱图。加入增强试剂
之前，三聚氰胺的拉曼光谱图噪音较大，无明显特征峰；加
入增强试剂之后，在７０９与ｌ ５４２ ｃｍ 处显示出清晰的特征
峰。
Ｒａｍａｎ ｓｈｉｆｔ／ｃｍ’。
Ｆｉｇ．３ Ｔｈｅ ＳＥＲＳ ｓｐｅｃｔｒａ ｂｙ ａｄｄｉｎｇ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ
ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｓｉｌｖｅｒ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ
目前，对胶体银的制备方法主要有杨海峰等用硝酸银和
柠檬酸三钠制备银纳米粒子（以下简称方法一）；杜一平等利
用硝酸银、柠檬酸钠和聚丙烯酸制备银纳米粒子（以下简称
方法二）。图４是从对三聚氰胺ＳＥＲＳ信号增强强度和信号
稳定性两方面进行比较，从图中可看出，本研究制得的增强
试剂效果较好，ＳＥＲＳ信号较强且稳定。不同制备方法所得
增强试剂的增强效果具有一定的选择性，这可能与不同的基
质有很大的关系。
《 ¨
Ｍｅｔｈｏｄ １ Ｏｕｒ Ｍｅｔｈｏｄ Ｍｅｔｈｏｄ ２＃
・・－－一
０ＵＩ＂Ｍｅｔｈｏｄ
—
Ｍｅｔｈｏｄ１
８００
６００
４００
２ｏ０
０
ｌＵ ２Ｕ ｊＵ ４Ｕ
Ｓｔｏｒａｇｅ ｔｉｍｅ／ｓ
Ｆｉｇ．４ （ａ）Ｔｈｅ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ Ｏｉｌ ｔｈｅ ＳＥＲＳ ｓｉｇｎａｌｓ；
（ｂ）Ｔｈｅ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐｒｅｐａ—
ｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｎ ｔｈｅ ＳＥＲＳ ｓｉｇｎａｌ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ
第１期
２．２提取方法比较
２．２．１提取溶剂选择
光谱学与光谱分析 １３３
的结合力时，复合型增强型粒子被破坏，ＳＥＲＳ信号减弱。
２．４样品加入量对ＳＥＲＳ信号强度影响
本文与文献报道ｌｇ ３所用提取溶剂进行对比，１Ｏ ｇ・
实验尝试加入不同量的待测样品，以考察７０９ Ｃｌｑｌ。特征
ｇ 添加基础上从同收率和光谱信号强度两方面进行比较（表
１）。在较为复杂的饲料基质中，乙腈可以选择性提取三聚氰
峰强度的变化（图６）。样品量从１０ Ｌ增至２０ Ｌ，信号不断
增强，当样品量大于２Ｏ Ｌ，信号强度略有下降。选择２Ｏ Ｌ
样品量较佳。
胺，一方面可避开蛋白质干扰，其次ＳＥＲＳ信号强度较强，
回收率较高，便于三聚氰胺定性定量（注：对于那些含脂较
高的宠物饲料可以先用正已烷进行萃取，后用乙腈提取）。
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ＳＥｌｌＳ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｏｆ ｍｅｌａｍｉｎｅ
ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
＊注：ＧＣ－ＭＳ法计算回收率
２．２．２提取方式选择
选用超声波萃取、摇床震荡以及手持震荡三种提取方法
进行比较，超声波提取效果稍好，但提取出的非目标化合物
数量也相应增加，不利于拉曼定性定量分析。出于现场、快
速检测目的出发，选择手持式震荡简单使捷。
２．３溶液放置时间和涡旋混合强度对ＳＥＲＳ信号强度影响
加入增强试剂后，ＳＥＲＳ信号强度随溶液放置时间的增
加逐渐减弱，如 ５（ａ），这＿Ｊ能是由于三聚氰胺分子与银粒
子的相互作用力随着溶液放置时问的增加逐渐减弱，银粒子
缓慢沉降，溶液底部出现不溶物，ＳＥＲＳ信号强度减弱。
增强试剂与待测溶液混合时的涡旋ｌｊ虽度对信号强度也有
较大的影响，强度较大的涡旋式混合不利于ＳＥＲＳ信号，如
图５（ｂ），这可能是由于起初的涡旋强度有利于银粒子与三聚
氰胺分子的结合， 涡旋离心力大于■聚氰胺分子与银粒子
ｊ ８００
言６００
．
ｇ ４００
２００
Ｏ
０ ３０ ６０ ９０ Ｉ２Ｏ ｌ５Ｏ ｌ８Ｏ
Ｓｔｏｒａｇｅ ｔｉｍｅ／ｓ
：８００
喜６
８
００
４ｏｏ
鑫
２０Ｏ
Ｏ
１ ２ ３ ４
Ｍｉｘｉｎｇ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ／ａ．Ｕ
Ｆｉｇ．５ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｏｒａｇｅ ｔｉｍｅ（ａ）ａｎｄ ｍｉｘｉｎｇ
ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ（ｂ）ｏｎ ＳＥＲＳ ｓｉｇｎａｌ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ
８００
６００
三ｌ４００
２００
０
１０ ｌ５ ２０ ２５ ３０
Ｓａｍｐｌｅ ａｍｏｕｔ
Ｆｉｇ．６ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆｔｈｅ ｓａｍｐｌｅａｍｏｕｎｔ
ｏｎ ＳＥＲＳ ｓｉｇｎａｌ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ
２．５定性定量分析
２．５．１定性分析
图７（ａ）是空白犬料和ｊ聚氰胺固体粉末、（ｂ）足５ ｇ・
ｇ＿１和１０ ｇ・ｇ 添加水平的犬料的ＳＥＲＳ图。
１
暑
量
量
暑８００
‘晶
星４００
量
０
５
Ｒａｌｎａｏ ｓｈｉｌｆ／ｃｍ一
Ｆｉｇ．７ Ｔｈｅ ７０９ ｃｍ一 ＳＥＲＳ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ
从图７可看到，佗于７０９ ｊ １ ５４２ ｃｍ 拉曼位移处，特
征峰变化较为明显，空白饲料在７０９与１ ５４２ ｃｍ 附近没有
峰（只在７３０ ｃｍ 附近有一特征峰），且７０９与１５４２ ｃｍ 处
峰强随着浓度的增大而增强，山此知７０９与１ ５４２ ＣＩＴＩ 为火
粮料中三聚氰胺的特征峰，以此位置的拉曼峰作为定性的依
据。
２．５．２定量分析
（１）样品基质对定量的影响
拉曼光谱的定量与常见定量方式不同，实验尝试通过不
同浓度三聚氰胺标准溶液进行考察，发现线性与重现性非常
差，这与增强试剂和三聚氰胺的结合度以及增强试剂稳定件
有很大关系【 。。ＳＥＲＳ的定量必须以本底中特行的特 峰作
为内标信号进行归一化讣算。本研究确定了犬料基质中，以
１ １４９ ｃｍ 处的特征峰作基准，７０９ ｃｍ。。处三聚氰胺特 峰
进行归一化计算．实现定量分析。
（２）方法线性与检测限
采用内标归一化法，以犬料中 三聚氰胺浓度（ ｇ・
１３４ 光谱学与光谱分析
一
第３１卷
ｍＬ ）为横坐标，以７０９ ｃｍ 处峰相对强度为纵坐标，１．０
～
９９．８７５ｘ＋４０．３７５，相关系数０．９９４ ９，检测限０．５ ｍｇ・
１０．０／ｌｇ・ｍＬ 浓度范围绘制标准工作曲线，线性方程
５０
４０
０．５ｍｇ ｋｇ
ｋｇ （图８）。
２．６样品分析
墨３ｏ
ｌ ２０
Ｈ ｌ０
Ｏ
… …
．
／＼／＼ ＾ ．Ｈ…一…
（ｃ＝０．５ ｍｇ・ｋｇ－ ）
＾
本方法能在判定值（２．５ ｍｇ・ｋｇ～ ）ｌ 附近实现较为准 １
确的定量分析，在含量较高（１０ ｍｇ・ｋｇ ）时，定量呈现较
好的正相关关系，以此来判定含量较高（１０ ｍｇ・ｋｇ ）样品。
对来自１７个省的５５批次的猫粮、狗粮进行了样品测试中７
个含量超标（≥２．５ ｍｇ・ｋｇ＿１）的样品测定情况（表２），与
ＧＣ－ＭＳ法进行了对比，发现本方法准确可靠。
Ｆｉｇ．８ Ｔｈｅ ｄｉａｇｒａｍ ｏｆｔｈｅ ＳＥＲＳ ｓｉｇｎａｌｓ
３结
Ｔａｂｌｅ ３ Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｊｅｃｔｅｄ
ｐｒｏｄｕｃｔ（ｃ￣２．５ ｍｇ・ｋｇ－ ）
论
（１）首次利用制备的银胶体溶液作为表面增强型拉曼光
谱的增强试剂，实现对宠物饲料中三聚氰胺含量的速测，每
个样品分析时间需约５ ｒａｉｎ，１．Ｏ～１０．０ ｍｇ・ｋｇ＿１浓度范围
内的实现定量测定，含量大于１０．０ ｍｇ・ｋｇ＿１时，实现快速
判定。方法涉及仪器都为便携式，样品前处理简单，分析时
间短，结果可靠，适合对突发事件的现场、快速检测。
（２）胶体银对三聚氰胺具有较强的拉曼增强效应，信号
强度与增强试剂的加入时间和涡旋强度有很大的关系，同
时，提取溶剂的种类、方式及样品加入量对ＳＥＲＳ信号强度
也有较大的影响。
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ
ｅｅ Ｈ
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ＣＡＩ
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ＬＩＵ Ｍｅｉ，Ｉ
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Ｈｅ Ｉ
ｎｉｓｔｒｙ ０ｆ Ａｇｒｉｃｕｈｕｒｅ ｏｆ Ｐ．Ｒ．ｏｆ Ｃｈｉｎａ（中华人民共和国农业部）．Ｔｈｅ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ Ｒｅｐｕｂｌｉｃ ｏｆ Ｃｈｉｎａ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌ—
３］
Ｍｉ
ｔｕｒｅ，ＮＯ．１２１８（中华人民共和国农业部１２１８号公告）．２００９．
第ｌ期 光谱学与光谱分析 １３５
Ｒａｐｉｄ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｅｌａｍｉｎｅ ｉｎ Ｐｅｔ Ｆｏｏｄ ｂｙ Ｓｕｒｆａｃｅ Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｒａ—
ｍａｎ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ｉｎ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ａｇ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
ＣＨＥＮＧ Ｊｉｅ，ＳＵ Ｘｉａｏ－ｏｕ
Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｆｏｒ Ａｇｒｏ－ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ｆｅｅｄ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００８１，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｅｌａｍｉｎｅ ｉｎ ｐｅｔ ｆｏｏｄ ｗａｓ ｒｅａｌｉｚｅｄ ｂｙ ｓｕｒｆａｃｅ－ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｒａｍａｎ ｓｐｅｃ—
ｔｒｏｓｃｏｐｙ ｉｎ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ａｇ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ．Ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔｕｄｙ，ｔｈｅ ７０９ ａｎｄ １ ５４２ ｃｍ＿。Ｒａｒｎａｎ ｓｈｉｆｔ ｗａｓ ｃｈｏｓｅｎ ａｓ ｑｕａｌｉｔａ—
ｔｉｖｅ ｂａｓｉｓ．Ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒａｎｇｅ ｂｅｔｗｅｅｎ １．０ ａｎｄ １０．０ ｍｇ・ｋｇ ｗａｓ ａｃｈｉｅｖｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎ—
ｔｅｎｓｉｔｙ ｏｆ １ １４９ ｃｍ～Ｒａｍａｎ ｐｅａｋ ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ａ ｎｏｒｍａｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｔａｎｄａｒｄ．Ｔｈｅ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｓ ０．５ ｍｇ・ｋｇ一．Ｔｈｅ
Ａｇ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｈａｄ ａ ｓｔｒｏｎｇ Ｒａｍａｎ ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｍｅｌａｍｉｎｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｗａｓ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ａｄｄｉｎｇ ｔｉｍｅ ｏｆ Ａｇ
ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｖｏｒｔｅｘ ｓｔｒｅｎｇｔｈ．Ａｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｉｍｅ，ｔｈｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｏｆ ＳＥＲＳ ｗａｓ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｏｌｖｅｎｔ ｔｙｐｅ，ａｎｄ
ｔｈｅ ｍａｎｎｅｒ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｏｎ．Ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｔｉｍｅ ｏｆ ｅａｃｈ ｓａｍｐｌｅ ｗａｓ ａｂｏｕｔ ５ ｍｉｎ．Ｉｔ ｗａｓ ｓｏ ｑｕｉｃｋ ｔｈａｔ ｉｔ ｗａｓ ｅａｓｙ ｔｏ ｒｅａｌｉｚｅ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｌａｍｉｎｅ ｉｎ ｐｅｔ ｆｏｏｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｅｘｉｓｔｉｎｇ ｍｅｔｈ０ｄｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ Ｓｕｒｆａｃｅ ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｒａｍａｎ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ；Ａｇ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ；Ｍｅｌａｍｉｎｅ；Ｐｅｔ ｆｏｄ；Ｒａｐｉｄ ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａ—
ｎａｌｙｓｉｓ
（Ｒｅｃｅｉｖｅｄ Ａｐｒ．２６，２０１０；ａｃｃｅｐｔｅｄ Ｓｅｐ．１ １，２０１０）