2023年12月25日发(作者：城宛秋)
01 单果重
采用德国Sartorius公司生产的CPA-1245型万分之一电子天平。
每个品种选取10个果个大小基本一致的果实，分别测定其单果重，最终取平均值即为该品种苹果平均单果重（白沙沙，2012）。
02 单果体积
采用英国Stable MicroSystem公司生产的Volscan Profiler VSP 3000045食品体积自动测定仪。
将食品体积自动测定仪开机预热30min，启动分析软件，参数设置为：转速1转/秒，垂直步长2mm，扫描数据获取率400点/秒。每个产地选取10个具有代表性的果实，分别测定其体积，其平均值代表每个产地红富士苹果单果体积（白沙沙，2012）。
03 果实密度
鲜食苹果果实密度计算方法为：将某个品种已测定的单果重与对应体积的比值作为该果实密度。以10个苹果果实密度平均值作为该产地果实密度指标值（白沙沙，2012）。
04 果心大小
采用数显游标卡尺测定。
每个品种苹果选取10个具有代表性的果实，沿果实赤道位置横切，用游标卡尺直接测定果心半径和果实半径，每个果实进行3次测量，取平均值。
果心大小=果心半径/果实半径
05 果形指数
采用日本日立公司的数显游标卡尺。每个品种选取10个具有代表性的果实，分别测量其最大纵径和最大横径，计算果形指数。以10个果实果形指数平均值作为该品种苹果果形指数指标值。
果实的最大纵径与横径的比值，精确到0.01。
06 果实形状
果实形状用于筛选畸形果，选择特征果实形状，异于此形状的果实为畸形果。
[9]
1 近圆形 2 扁圆形 3 长圆形 4 椭圆形 5 卵圆形
6 圆锥形 7 短圆锥形 8 长圆锥形 9 圆柱形 10 偏斜形
07 淀粉-碘指数-确定苹果成熟度[10]
碘溶液的配置：用30ml温水溶解8.8g碘化钾，缓慢搅拌至溶解。加入2.2g碘晶体至溶解。用水稀释至1L。浓度为2.2g/L。
取样：选取具有典型大小和颜色的果实。每种样品选取至少10个果实，每棵树上不多于2个。
测定：1.收获后24小时内测定；2.沿赤道位置将苹果切成二分；3.将苹果浸入碘液；4.等待至少一分钟；5.拍照；6.与图片对比；7.计算平均数，用1-10表示。
见尾页附件。
08 果皮（肉）颜色
采用美国Hunterlab公司生产的D25LT色彩色差计。开机预热30min，按提示点击“Measure”按钮，进行标准色板校正（即先进行黑色标准板校正，后进行白色标准板校正），设定结果参数为模式“L、a、b”、测量次数“3”、测定时间间隔“10s”，当对白色标准板测定结果为“91.44、-0.95、0.69”时，表明机器已经稳定，可以进行样品的测定。其中L称为明度指数，L=0表示黑色，L=100表示白色；a、b代表一个直角坐标的两个方向，a值为正值时越大，颜色越接近纯红色，a=0时为灰色，a为负值时绝对值越大，颜色越接近纯绿色；b为正值时值越大，颜色越接近纯黄色，b=0时为灰色，b为负值时绝对值越大，颜色越接近纯蓝色。
分别测定果实着色面和未着色面，每个品种选取6个具有代表性的果实，并将样品清洗、擦干，使用专业水果刀将果皮剔除并收集，将苹果果皮置于测量容器内，以完全遮盖透光孔为标准，铺满底层有机玻璃板，盖上黑色容器盖，使白色标线对准测定指示点，点击“Read”按钮进行测定。测得第一个读数后，在10s内转动测量容器，使红色线对准指示点测定第二次数据，按同样步骤将黄色线对准指示点测定第三次。得到色泽的相应“L、a、b”数值及其平均值（Iglesias et al.，2008）果实底色：测定未着色的一面，结果以a+b表示。[12][11]。
1 淡绿 2 黄绿 3 绿 4 绿黄 5 黄白 6 淡黄 7 黄 8 橙黄
果面盖色
1 淡红 2 橙红 3 粉红 4 鲜红 5 红 6 浓红 7 紫红 8 褐红
果肉颜色
采用美国Hunterlab公司生产的D25LT色彩色差计。操作方法与参数设置同果皮颜色，每个品种选取6个具有代表性的果实，在苹果果肉中部取一片3mm厚的薄片，将苹果果肉置于测量容器内，以完全遮盖透光孔为标准，铺满底层有机玻璃板，盖上黑色容器盖，使白色标线对准测定指示点，点击“Read”按钮进行测定。测得第一个读数后，在10s内转动测量容器，使红色线对准指示点测定第二次数据，按同样步骤将黄色线对准指示点测定第三次。得到色泽的相应“L、a、b”数值及其平均值（Iglesias et al.，2008）。
09 果皮（肉）质地
采用英国Stable MicroSystem公司生产的2i/50型物性分析仪。
参数设置如下：探头为P/2E（直径2mm）型，测试速度为1mm/s，刺入深度为10mm，每秒记录200个数据，用单位g表示。读取探头感应到的最大值为果皮硬度，探头感应力5-10s的平均值为果实硬度。每种苹果选取10个具有代表性的果实，每个苹果测定两个位置，赤道线和其垂直位置[13]，分别测定其果皮（肉）硬
度。（Karlsen et al. 1999）
10 出汁率-质量法
按照清汁和浊汁工艺分别制汁。
称取果实质量，果核+萼片+果蒂质量，果渣质量。
出汁率按公式(3)计算。
X= m1-m2 /m1×100% (3)
式中：
X— 样品出汁率，%；
m1— 鲜果重量，g；
m2— 果渣+果核+萼片+果蒂重量，g。
11 果汁颜色
果汁色泽：利用Color Quest XT A60-1011-346透射测色仪测定。将仪器设定为“L、a、b”模式，以黑板进行校正，取果汁10ml于比色皿中，测定其“L、a、b”值，每个品种测量三次，即为该品种果汁的色泽。
色度chroma C*[14]:
色调角 Hue H*:
饱和度 s：
总色差值按照下式计算[15]
。（对比不同产品的颜色或对比清汁与浊汁颜色）
不显著0-0.5， 略显著0.5-1.5，显著1.5-3.0，肉眼可见wel l visi ble (3.0 –6.0)，极显著(6.0- 12.0)
12 果汁浊度—浊度仪
清汁：直接测定。（10s内上下翻滚6次）
浊汁：原始浊度T0
离心后浊度Tc:20℃4200g离心15min
浑浊稳定性[4]（抗澄清能力）由相对浑浊度表示。
相对浑浊度（T%） T%=（Tc/T0）×100
T0和Tc分别表示原始浊度和20℃4200g离心15min后的浊度。
13 褐变度OD420 ，非酶褐变指数（NEBI）
清汁：10ml果汁，以蒸馏水为参比，直接测定420nm的吸光值。
浊汁：5ml果汁加入5ml 95%乙醇，7800g离心10min，取上清液，以蒸馏水为参比测定420nm的吸光值。
14 果汁T440
吸取混合均匀的清汁试样，用1cm比色皿，以蒸馏水为参比，在波长440 nm处测定其透光率。
吸取混合均匀的浊汁试样，用1cm比色皿，以蒸馏水为参比，在波长440 nm处测定其透光率。
15 透光率-T625，T650
吸取混合均匀的清汁试样，用1cm比色皿，以蒸馏水为参比，在波长625 nm处测定其透光率。
吸取混合均匀的浊汁试样，用1cm比色皿，以蒸馏水为参比，在波长650 nm处测定其透光率。
16 可溶性固形物的测定—手持糖量计（折光仪）测定法
1．原理
不同可溶性固形物含量的样液有不同的折射率，从仪器刻度尺上直接读出可溶性固形物的含量。
2．仪器设备
[1][16]
图2—3 RHB0-90型手持糖度仪
1．盖板 2．进光棱镜 3．折光棱镜 4．旋钮 5．调节筒 6．目镜
⑴ 手持糖量计或手持折光仪：刻度尺上的最小分度值为1%或更小，基本构造如图2——3所示。
⑵ 高速组织捣碎机：10000～12000r/min。
⑶ 电子天平天平：感量0.01g。
3．测定步骤
⑴ 样液制备
果汁的测定：按照制备工艺制备果汁后直接测定。
⑵ 测定
① 仪器校正
打开盖板，用柔软的绒布或脱脂棉蘸蒸馏水（必要时可蘸二甲苯或乙醚）将棱镜擦拭干净，注意勿损镜面，待棱镜干燥后，用干燥洁净滴管吸蒸馏水2～3滴于折光棱镜镜面上，合上盖板，使蒸馏水遍布棱镜的表面，将仪器平置，进光孔对向光源，调整目镜，使镜内的刻度数字清晰，调节螺丝使视场内所见明暗分界线的读数为0点。
② 样液测定
在与仪器校正相同的温度下，滴样液2～3滴于折光棱镜镜面上，合上盖板，使样液遍布棱镜的表面，将仪器平置，进光孔对向光源，调节指示规，使视野分成明暗两部，再旋转微调螺旋，使明暗界限清晰，并使其分界线恰在接物镜的十字交叉点上。读取目镜视野中的百分数或折光率，并记录棱镜温度。如目镜读数标尺刻度为百分数，即为可溶性固形物含量（%）；如目镜读数标尺为折光率，可按GB12143-2008饮料通用分析方法附录A换算成可溶性固形物含量（%），将上述百分含量按附录B换算成20℃时可溶性固形物含量（%）。同一样品两次测定值之差，不应大于0.5%。
做三次平行，取算术平均值作为结果，精确到小数点后一位。
17 还原糖的测定-3，5-二硝基水杨酸比色法一、原理
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖的含量。
[17]
二、实验材料、主要仪器和试剂
1. 实验材料
苹果；
2. 主要仪器
（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11
（2）大离心管：50mL×2
（3）烧杯：100mL×1
（4）三角瓶：100mL×1
（5）容量瓶：100mL×3
（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1
（7）恒温水浴锅
（8）沸水浴
（9）离心机
（10）电子天平
（11）分光光度计
（12）组织捣碎机
（13）pH计
3. 试剂
（1）1mg/mL 葡萄糖标准液
准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖1000mg（或称取含1000mg葡萄糖的一水葡萄糖），置于烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到1000mL 容量瓶中，用蒸馏水定容，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂
将6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
（3）100g·L-1中性醋酸铅溶液：20g醋酸铅加入煮沸后冷却的蒸馏水，超声溶解，加醋酸调节pH为中性，定容至200mL（中性醋酸铅可除去蛋白质、单宁、果胶，适用于植物性萃取液；碱性醋酸铅适用于深色的蔗糖溶液，可除色素、有机酸、蛋白质、沉淀颗粒较大，可带走果糖）。
（4）无水硫酸钠
三、操作步骤
1. 制作葡萄糖标准曲线
取7支20mL 具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
管号 1mg/ml葡萄糖标准液（mL） 蒸馏水（mL） DNS(mL)
0
1
2
3
4
5
6
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
葡萄糖浓度
（mg）
0
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
光密度值
（OD540nm）
表1 葡萄糖标准曲线制作
2. 样品中还原糖的测定
（1）还原糖的提取
准确称取2.0ml苹果汁，放入100mL锥形瓶中，加入30mL 蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。加入2ml中性醋酸铅溶液，摇动10min，加入0.5g无水硫酸钠（沉淀铅）摇匀，将浸出液
（含沉淀）转移到50mL 离心管中，于8000r/min下离心20min,沉淀可用20mL 蒸馏水洗一次，于8000r/min下再离心20min，合并二次离心的上清液收集在100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）显色和比色
取3支20mL 具塞刻度试管，编号，按表2 所示分别加入待测液和显色剂，空白调零使用制作标准曲线的0号管。
将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。波长540nm。
样品重复测定三次。
（3）测定
将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容，加塞后颠倒混匀，在分光光度上进行比色。调波长540nm，用0号管调零点，测值，以光密度为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标做图。
表2 样品还原糖测定
管号 还原糖待测液（mL）
7
8
9
0.2
0.2
0.2
1.8
1.8
1.8
1.5
1.5
1.5
蒸馏水（mL） DNS(mL) 光密度值（OD540nm）
查曲线葡萄糖量
四、结果与计算：
计算出7、8、9号管光密度值的平均值在标准曲线上分别查出相应的还原糖浓度，计算出样品中还原糖含量。
18 总糖的测定-苯酚硫酸法苯酚-硫酸法测定总糖
（1）原理
多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。
（2）试剂
1． 浓硫酸：分析纯，95.5%
2． 80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
3． 6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。（每次测定均需现配,急救措施见本方案末尾。）
4．分析纯葡萄糖。
5． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
6． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
7． 6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。（急救措施见本方案末尾。）
8． 6mol/L 盐酸
[18]
（3）操作
1．制作标准曲线：准确称取标准葡萄糖储备液（1mg/ml）5ml于50ml容量瓶中，定容得到0.1mg/ml(100μg/ml)标准使用液，分别吸取0,0.2，0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
管号
0
1
2
3
4
5
6
2．样品含量测定：
①取样品5ml苹果汁
②水浴，在向比色管中加入5毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
③定容取样。水浴后，用流水冷却后加入5毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升。
吸取1ml处理后的样品液稀释100倍。
吸取0.3 ml的样品液，以蒸馏补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml（顺序不能颠倒，酸入水，缓慢加入）,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。三次重复。以标准曲线计算总糖含量。
管号
1
2
3
19 糖和有机酸的测定-离子色谱法（王轩师兄毕业论文word P61）
1.试验试剂
葡萄糖标准液，果糖标准液，蔗糖标准液，乳酸标准液，乙酸标准液，苹果酸标准液，酒石酸标准液，草酸标准液，氢氧化钠，氢氧化钾，无水乙醇
2.试验设备
ICS-3000离子色谱仪（美国戴安公司），CarbpacTMPA10(4×250mm)阴离子交换（美国戴安公司），万分之一电子天平CPA-1245（德国Sartorius公司）
样品（mL）
0.3
0.3
0.3
蒸馏水（mL） 6%苯酚
1.7
1.7
1.7
1.0
1.0
1.0
浓硫酸
5.0
5.0
5.0
光密度值
（OD540nm）
葡萄糖含量
100μg/ml葡萄糖标准液（mL）
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
蒸馏水（mL） 6%苯酚
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
浓硫酸
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
葡萄糖浓度 光密度值
（μg/ml） （OD540nm）
0
2.5
5.0
7.5
10
12.5
15
3.糖、酸样品的制备
参照《烟草及烟草制品中葡萄糖、果糖、蔗糖的测定》、张磊等（2012）和李芳（2011）的方法并加以改进。
准确称取10g 苹果果肉匀浆，加入一定量超纯水（约80mL），80℃水浴30min。待冷却至室温，定容至100mL，抽滤，再稀释1000倍，即为单糖待测液。
准确称取10g苹果果肉匀浆，加入8mL无水乙醇，再加超纯水约至80mL，超声提取30min。再定容至100mL，抽滤，稀释10倍，即为有机酸待测液。
4.糖、酸标准溶液的配置
分别取葡萄糖、蔗糖和果糖0.01g，用超纯水定容至100mL，即得糖标准品待测液，浓度为0.1mg/mL（100μg/mL），标准品进样浓度分别为0.5、1、4、10μg/mL。
分别取乳酸、乙酸、苹果酸、酒石酸、草酸及柠檬酸各0.01g，用超纯水定容至100mL，即得有机酸标准品待测液，浓度为0.1mg/mL（100μg/mL），进样浓度为1、4、10、50μg/mL。
5.离子色谱条件
糖测定色谱条件为：CarbpacTMPA10(4×250mm)阴离子交换柱，柱温35℃，流动相A为超纯水，B为NaOH水溶液（200mmol），A : B为91% : 9%，流速为1mL/min，进样量为5μL。
有机酸测定色谱条件为：CarbpacTMPA10(4×250mm)阴离子交换柱，柱温30℃，流动相为KOH，流速为1mL/min，梯度洗脱时间间隔及容量为：0～12min(0.8mmol)；12～40min(34mmol)；40～50min(34mmol)，进样量5μL。外标法定量。
20 可滴定酸的测定—指示剂滴定法
使用国外文献多采用的方法—pH电位法1．试剂
⑴ 氢氧化钠标准滴定溶液：c (NaOH)=0.1mol/L。
（2）氢氧化钠标准溶液的标定（0.1M）：准确称取约0.6g在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾，加80ml新煮沸过的冷水，超声波辅助溶解，加2滴酚酞指示液，用本溶液滴定至溶液呈粉红色，30s不褪色。同时做试剂空白试验。（果品质量安全分析技术）
2．样液制备
【果实，清洗去皮后将果实放入高速组织捣碎机内捣碎混匀称取25g匀浆，加入到100mL烧杯中，加40mL新煮沸放凉的蒸馏水，置75～80℃水浴上加热30min，期间摇动数次，冷却，移入250mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀过滤。（称取10ml果汁，加入到100mL烧杯中，加40mL新煮沸放凉的蒸馏水，置75～80℃水浴上加热30min，期间摇动数次，冷却，移入250mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀过滤。）】
3．测定步骤
AOAC：取10ml果汁加到250ml锥形瓶中加入90ml煮沸放凉的蒸馏水，磁力搅拌，用0.1M NaOH滴定至pH8.2±0.1，记录所消耗的体积，经计算得到可滴定酸的含量。平行测定三次，取其平均值。
（用移液管吸取10mL样液与100ml锥形瓶中，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定，至出现微红色30s内不退色，如接近终点时出现黄褐色，加入20ml热蒸馏水稀释，加入10滴酚酞指示剂，再继续滴定，使酚酞变色[19-21]
易于观察。记录所消耗的体积，经计算得到可滴定酸的含量。平行测定三次，取9其平均值。）
6．计算
结果以苹果酸记，（ml NaOH×0.1N/样品质量）×0.067×100
酸的换算系数[22]：苹果酸：0.067，乙酸：0.060，酒石酸：0.075，柠檬酸：0.064，一水合柠檬酸：0.070，乳酸：0.090，盐酸：0.036，磷酸：0.049
21 pH值-采用电子pH计法[23]
依照GB/T 10468-1989《水果和蔬菜产品pH值的测定方法——电子pH计》测定。
1.样品制备：果汁样品
2.仪器标准：操作程序按仪器说明书进行。先将样品处理液和标准缓冲溶液调至同一温度，并将仪器温度补偿旋钮调至该温度上。
3.样品测定：在玻璃或塑料容器中加入样品处理液，使其容量足够浸没电极，用pH测定装置测定样品处理液，并记录pH值，精确至0.02单位，同一制备样品至少进行两次测定。
对于同一操作者连续两次测定的结果之差不超过0.1单位，否则重新测定，重复三次测定的算术平均值作为测定结果。准确到小数点后第二位。
4.仪器校正：用雷磁pH计自带标准缓冲溶液进行标准pH校正（pH4.0,pH6.86），长时间未用需用3mol/L KCL溶液浸泡至读数稳定。
22 维生素C的测定—2, 6－二氯靛酚滴定法[24]
该方法不适用于深色样品。（含花青素、叶绿素等色素的水果会使滴定结果不易判断）
⑴ 原理
2, 6–二氯靛酚的颜色反应表现两种特性，一是取决于其氧化还原状态，氧化态为深蓝色；还原态变为无色；二是受其介质的酸度影响，在碱性溶液中呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。用蓝色的碱性2, 6–二氯靛酚标准溶液，对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定，2, 6–二氯靛酚被还原为无色，当到达滴定终点时，多余的2, 6–二氯靛酚在酸性介质中则表现为浅红色，由2, 6–二氯靛酚用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。
⑵ 试剂
① 2%（W/V）草酸溶液：称取20g草酸，用蒸馏水溶解定容至1000mL。
② 抗坏血酸标准溶液（1mg/mL）：称取100mg (准确至0.1mg)抗坏血酸，用2％（W/V）草酸溶液溶解定容至100mL。现用现配。
③ 2, 6–二氯靛酚（2, 6–二氯靛酚吲哚酚钠盐）溶液：称取碳酸氢钠52mg溶解在200mL热蒸馏水中，然后称取2, 6–二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却后定容至250mL，过滤至棕色瓶内，保存在冰箱中。每次使用前，用标准抗坏血酸标定其滴定度。即，加入10mL2%（W/V）草酸溶液于50mL锥形瓶中，加入1mL抗坏血酸标准溶液，摇匀，用2, 6–二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同
时，另取11mL2%（W/V）草酸溶液作空白试验。滴定度按式（2–28）计算。
TCV„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„(2–28)
V1V2T—
滴定度，即每毫升2, 6–二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的量，mg/mL；
C—
抗坏血酸的浓度，mg/mL；
V—
吸取抗坏血酸标准溶液的体积，mL；
V1—
滴定抗坏血酸标准溶液所用2, 6–二氯靛酚溶液的体积，mL；
V2—
滴定空白所用2, 6–二氯靛酚溶液的体积，mL。
式中：
④高岭土：对维生素C无吸附作用。
⑶ 仪器设备
① 高速组织捣碎机：8000～12000r/min。
② 分析天平。
③ 滴定管：25mL、10mL。
④ 容量瓶：100mL。
⑤ 锥形瓶：100mL、50mL。
⑥ 吸管：10mL、5mL、2mL、1mL。
⑦ 烧杯：250mL、50mL。
⑧ 漏斗。
⑷ 操作步骤
① 样液制备
将榨出的果汁立即量取50ml与装有约30ml 2%（W/V）草酸溶液的烧杯中，用2%（W/V）草酸溶液将样品移入100mL容量瓶中，并定容至刻度，摇匀过滤。若滤液有色，可按每克样品加0.4g高岭土脱色后再过滤。
② 滴定
吸取20mL滤液放入100mL锥形瓶中，用已标定过的2, 6–二氯靛酚溶液滴定，直至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时以10ml蒸馏水加10ml 2%（W/V）草酸溶液做空白试验。平行测定三次（同时量取至锥形瓶后一一测定），取平均值。
⑸ 计算
按式（2–29）计算维生素C含量。
XVV0TA100m„„„„„„„„„„„„„„„„„(2–29)
式中：
X—
样品中维生素C的含量，mg/100g；
V—
滴定样液所用2, 6–二氯靛酚溶液的体积，mL；
V0—
滴定空白所用2, 6–二氯靛酚溶液的体积，mL；
T—
2, 6–二氯靛酚溶液的滴定度，mg/mL；
A—
稀释倍数；
m—
样品质量，g。
23 果胶的测定-间羟基联苯法（MHDP）
[25, 26]
（1）原理MHDP间羟基联苯法为发色试剂，MHDP/5FF为发色基团，研究了520nm下从开始到反应时的不同半乳糖醛酸浓度。
（2）试剂：
间羟基联苯溶液：0.15%间羟基联苯的0.5% NaOH溶液，用铝箔包裹避光保存。(避光在冰箱中保存，可保存一个月)
0.0125M四硼酸钠浓硫酸溶液：四硼酸钠俗称硼砂，Na2B4O7·10H2O，分子量378，四硼酸钠0.475g，加浓硫酸100ml溶解，超声波辅助溶解（注意安全）。
半乳糖醛酸标准储备液：无水半乳糖醛酸1.000g，用水溶解，加入5ml 1M NaOH，定容至1000ml，混匀，半乳糖醛酸质量浓度为1mg/ml。
（3）提取：
水溶性果胶的提取按照Robertson(1979)的方法进行：
20ml果汁分别放入的100ml烧杯中。加入20ml 75℃95%乙醇（用于高酯化果胶沉淀），混合物在85℃水浴中加热10min，用玻璃棒不时搅拌。转移到50ml离心管中（离心管中加入滤纸屑），室温下10000 r/min离心15min，轻轻倒出上清液，弃去上清液。倒入100ml烧杯中加入30ml 75℃63%乙醇，混合物在85℃水浴中加热10min，用玻璃棒不时搅拌。10000 r/min离心10min，轻轻倒出上清液，弃去上清液。
总果胶：沉淀物离心管加蒸馏水洗涤并转移至100ml容量瓶中，加入1M氢氧化钠 5ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，放置15min同时间歇地倒置若干次，过滤。滤液用于比色测定。
总可溶性果胶的提取方法[27]
（水溶性果胶：5ml的蒸馏水分散沉淀，继续加至35ml，漩涡混合多次，室温下10000 r/min 离心10min，将液体轻轻倒入100mL容量瓶，加入1N氢氧化钠（5ml），蒸馏水定容至刻度，在比色前至少放置15min（不时震荡）。
草酸铵溶性果胶：在离心管的残留物中加入5ml 0.75%草酸铵溶液使沉淀物溶解。继续加0.75%草酸铵溶液至35ml，漩涡混合，室温下10000 r/min离心10min，上清液轻轻倒入100ml容量瓶中，加入1N氢氧化钠（5ml），蒸馏水定容，在比色前至少放置15min（不时震荡）。
碱溶性果胶：把离心管内残渣全部注入100ml容量瓶中，加入1M NaOH 5ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。放置15min，间歇倒置若干次，过滤，滤液用于比色测定。）
提取物分别用比色法测定。
（每100ml带淡粉红色的提取物加入1ml 10%焦亚硫酸钠。）
（4）测定：
20mL试管中加入0.5ml提取物，1.5ml蒸馏水，加入5ml四硼酸钠硫酸溶液，漩涡混合器混匀（混匀硫酸溶液）。立即放入冰水浴。放入80±0.5℃水浴持续6min，立即放入冰水浴至室温（为避免硫酸产热导致的过度反应）。加入0.1ml间羟基联苯溶液，漩涡混合，立即于525nm处测定吸光度。记录最大吸光值，然后在第二个样品中加入间羟基联苯溶液立即测定，避免同时测定！！！
管号
半乳糖醛酸标准液（mL）
0
0.1
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
样品
0.5
0.5
0.5
蒸馏水（mL）
2
1.9
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
蒸馏水（mL）
1.5
1.5
1.5
四硼酸钠硫酸溶液
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
四硼酸钠硫酸溶液
5.0
5.0
5.0
半乳糖醛酸间羟基联苯溶液 浓度
（μg/ml）
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
间羟基联苯溶液
0.1
0.1
0.1
0
10
20
40
60
80
100
光密度值
（OD525nm）
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
24 钾、钠、钙、镁的测定-原子发射光谱法/原子吸收法
参考
钾钠GB/T 5009.91-2003 食品中钾钠的测定钙GB/T 5009.92-2003食品中钙的测定[29][28]
[30]镁GB/T 5009.90-2003食品中钛、镁、锰的测定25 总酚样品前处理[21, 31]
[32]：1.果浆和果渣 ：-30度冷冻，72小时冻干，制粉，粉末在-30度的干燥器中冷冻保存，用于多酚分析用；用液氮冷冻，立即磨碎（为减少样品的不均匀性），湿粉在-30度冷冻保存，用于分析多酚。
2.果汁：150g果汁立即与150mg NaF混合（避免酚类物质被PPO氧化），-30度冷冻保存。（在此文献里也看到这样处理[33]）
样品制备：清汁：直接测定
浊汁：量取20ml果汁（5000r·min）离心15min，取上清液，加入90%乙醇15mL，摇匀后离心得到样液。
标准曲线制作：用10mL乙醇溶液溶解0.5g没食子酸，定容至100mL，得到5mg/ml标准液。分别移取1mL到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容得到50μg/ml标准使用液。按照测定方法测定，绘制标准曲线。
测定：0.5ml样品，加入1ml 10%（v/v）Folin-Ciocalteu显色剂，放置6min，加入2ml 20%碳酸钠溶液，定容至10mL，30℃放置60min（75℃10min），并于765nm波长下测定其吸光度。每个浓度做三次平行，取平均值。
计算：结果以μg GAE没食子酸/ml样品计算。
-1
管号
0
1
2
3
4
5
6
样品
1
2
3
4
5
6
没食子酸标准液（mL）
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
蒸馏水
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
FC显色剂（mL）
1
1
1
1
1
1
1
FC显色剂（mL）
1
1
1
1
1
1
20%碳酸钠
（mL）
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
没食子酸浓度
（mg/L）
0
1
2
3
4
5
6
光密度值
（OD765nm）
光密度值
（OD765nm）
样品溶液（ml） 蒸馏水
0.5
0.5
0.5
1
1
1
1.5
1.5
1.5
1
1
1
26 蛋白质-考马斯亮蓝染色法
（一）实验原理
1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。
考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（lmax），由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。经研究认为，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。
（二）试剂与器材
1. 试剂：
（1）标准蛋白质溶液，用 g—球蛋白或牛血清清蛋白(BSA)，配制成1.0mg/ml和0.1mg/ml的标准蛋白质溶液。
（2）考马斯亮兰G—250染料试剂：称100mg考马斯亮兰G—250，溶于50ml 95%的乙醇后，再加入100ml 85%的磷酸，用水稀释至1升。
2. 器材：
（1）可见光分光光度计 （2）旋涡混合器
（三）操作方法
1. 标准方法
（1）取16支试管，1支作空白，3支留作未知样品，其余试管分为两组按表中顺序，分别加入样品、水和试剂，即用0.1mg/ml的标准蛋白质溶液给各试管分别加入：0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，然后用去离子水补充到1.0ml。最后各试管中分别加入5.0ml考马斯亮兰G—250试剂，每加完一管，立即在旋涡混合器上混合（注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除）。定容至10ml，摇匀待测。未知样品的加样量见下表中的第8、9、10管。
考马斯亮兰法实验表
管号
标准蛋白质
(100μg/ml)
蒸馏水
考马斯亮蓝
G－250试剂
每管中的蛋白浓度
（μg/ml ）
光吸收值（A595）
（2）样品处理：清汁：直接测定
浊汁：滤纸过滤后直接测定
量取5ml果汁，加入0.2%NaOH 20ml(先加入约5ml溶解，在缓慢加入，边加边搅拌，)，搅拌10min，于25度
6000r/min离心10min，轻轻倒出上清液，重复一次，经滤纸过滤后定容至50ml容量瓶中。
（3）加完试剂5分钟后，即可开始用比色皿，在分光光度计上测定各样品在595nm处的光吸收值A595，空白对照为第1号试管。
（4）用标准蛋白质量（mg）为横座标，用吸光度值A595为纵座标，作图，即得到一条标准曲线。由此标准曲线，根据测出的未知样品的A595值，即可查出未知样品的蛋白质含量。
27 多酚氧化酶活性的测定
一、原理
多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，在有氧的条件下，能使一元酚和二元酚氧化产生醌。用分光光度法在420nm波长下测其吸光度，即可计算出多酚氧化酶的活力和比活性。反应式如下：
多酚氧化酶
邻苯二酚（儿茶酚）＋1∕2 O2 ——————→ 邻醌 ＋ H2O
二、材料、仪器及试剂
0 1 2 4 6 8 10
1
0
2
0.1
3
0.2
4
0.4
5
0.6
6
0.8
7
1.0
8
0.5
9
0.5
10
0.5
1.0
5.0
0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 3 3 3
5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
1. 材料：苹果等
2. 仪器：分光光度计；离心机；恒温水浴；匀浆机；试管；移液管
3. 试剂：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）；
0.2mol•L－1pH7.0磷酸缓冲液；
Triton X-100；
50mM 邻苯二酚（0.2M pH7.0磷酸缓冲液配置）；
三、实验步骤
1. 粗酶液的制备[19]
称取去皮苹果5g经液氮速冻后在研钵中迅速研磨，组织充分破碎后，加入0.1g PVPP不溶性聚乙烯吡咯烷酮,0.01g Triton X-100和8 ml 0.2 mol•L－1 pH 7.0磷酸缓冲液,磨成匀浆，放入冰水浴中保存，于10000r/min 4℃离心30min取上清液，经四层纱布过滤后，量取上清液体积，即为粗制酶液。
2. 活性酶的测定[34]
空白：3mL 50mM 邻苯二酚（0.2M pH7.0磷酸缓冲液配置）
样品：2.9mL 50mM 邻苯二酚（0.2M pH7.0磷酸缓冲液配置）+0.1ml粗酶液
迅速摇匀，倒入比色杯内，于420nm波长处以时间扫描方式，在1～2min内测定吸光度变化（A）值。
五、酶活性的计算
以每min内A420值变化0.001为1个酶活力单位，按下式计算多酚氧化酶的活力和比活性。
A 酶提取液总量（ml）
酶活力（0.001A•min1）＝———————×———————————
－ 0.001×反应时间 测定时酶液用量（ml）
A 酶提取液总量（ml）
酶的比活性(0.001A•g1Fw•min)＝—————————×——————————
－ 0.001×W×反应时间 测定时酶液用量（ml）
公式中：A —为反应时间内吸光度的变化值；W为样品鲜重（g）。
28 淀粉试验试剂：
冷碘液：加入等量0.1M 碘溶液与5%（m/v）碘化钾溶液用冷蒸馏水稀释至浓度126.9mg/L；冷蒸馏水：将蒸馏水放入冰水浴中30min；玉米淀粉；2M NaOH；2M HCl；0.1M pH4.6醋酸缓冲液；
标准曲线制作：
取0.1g玉米淀粉溶于50ml 2M NaOH中，加入等量50ml 2M HCL，加热使溶液澄清。滤纸过滤。用2M HCL或2M NaOH调节成pH4.6。0.1M pH4.6醋酸缓冲液定容至100ml容量瓶，标准储备液浓度为1mg/ml。
[35]
标准使用液用0.1M pH4.6醋酸缓冲液稀释待用。
样品处理：10ml果汁样品在1000g下离心20min，过滤至20ml试管，用蒸馏水定容至10ml，比色法测定可溶性淀粉含量。
沉淀用5ml 2M NaOH室温下溶解，转移至试管中，加等量2M HCL，沸水浴至淀粉糊化，过滤，调节pH至4.6，用0.1M pH4.6醋酸缓冲液定容，比色法测定不溶性淀粉含量。
测定：5ml经处理后的样品与2.5ml冷碘液混合，定容至10ml，室温下10min后于615nm测定吸光度。上清液中可溶性淀粉用蒸馏水稀释，比色法测定。沉淀同样用比色法测定。
管号
0
1
2
3
4
5
6
7
样品
1
2
3
29 抗氧化能力淀粉标准液（mL）
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
样品溶液（ml）
[16, 21]冷碘液（mL）
2.5
2.5
2.5
2.5
2.5
2.5
2.5
2.5
冷碘液（mL）
2.5
2.5
2.5
定容至10ml，放置10min
淀粉含量
（mg/ml）
0
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.07
光密度值
（OD615nm）
光密度值
（OD615nm）
30 粗纤维-重量法[36]选取6个代表性的果实，清洗去皮后将果实放入高速组织捣碎机内捣碎混匀，称取20g试样，移入500mL锥形瓶中，加入200mL煮沸的1.25%硫酸，加热使微沸，保持体积恒定维持30min。取下锥形瓶，立即用亚麻布过滤后，用沸水洗涤至洗液不呈酸性。再用200mL煮沸的1.25%氢氧化钠溶液，将亚麻布上存留液移入圆锥型瓶内加热煮沸30min后取下锥形瓶，立即用以亚麻布过滤。以沸水洗涤2～3次后，移入已干燥称量的G2垂融坩埚中抽滤，用热水洗涤后抽干将坩埚及内容物放入105℃烘箱中烘干后称量，重复操作直至恒重。
31 水分含量
采用德国Sartorius公司生产的LMA200PM-000EU微波快速水分测定仪进行测定。
开机预热30min，调用“Powder”三段式程序，设定参数为“70%—1 stage；50%—2 stage；30%—Auto end”，即第1阶段以70%的微波功率对样品进行干燥，第2阶段以50%的微波功率对样品进行干燥，第3阶段以30%的微波功率对样品进行干燥直至结束。
选取6个具有代表性的果实，清洗去皮后将果实放入高速组织捣碎机内捣碎混匀，称取2g匀浆于玻璃纤维纸上，盖好仪器上盖，点击“Analysis”按钮进行测定。平均测定3次，取其平均值（白沙沙，2012）。
32 单酚
苹果中主要酚类物质的测定-高效液相色谱法
一、原理
苹果中的酚类物质经乙醇溶液超声提取， C18固相萃取小柱净化，高效液相色谱-紫外/二极管阵列检测器测定，以保留时间定性，外标法定量。
二、试剂
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
1. 没食子酸、原儿茶酸、新绿原酸、原花青素B1、儿茶素、绿原酸、原花青素B2、咖啡酸、表儿茶素、P-香豆酸、芦丁、阿魏酸、槲皮苷、根皮苷、槲皮素和根皮素对照品≥95%
2. 乙醇
3. 乙腈：色谱纯。
4. 甲酸：色谱纯。
5.乙醇溶液（8+2）：取80ml乙醇与20ml水混合。
6. 2%甲酸溶液：取甲酸2ml，用水溶解并稀释至100ml。
7. 2%甲酸乙腈溶液：取2%甲酸溶液95ml，加5ml乙腈混合均匀。
8. 有机相微孔滤膜：0.45μm。
9. C18固相萃取小柱：200mg，6mL。
10. 1000μg/ml多酚混合标准贮备液：精密称取多酚标准品5mg，于5ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1000 μg/ml的多酚混合标准贮备液。-20℃以下避光贮存，有效期6个月。
11. 200μg/ml多酚混合标准工作液：精密量取1000 μg/ml多酚混合标准贮备液1ml，于5ml棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配置成浓度为200μg/ml多酚混合标准工作液。-20℃以下避光贮存，有效期6个月。
三、仪器
1.液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。
2.分析天平，感量±0.0001 g、感量±0.01 g。
3.冷冻研磨仪
4.离心机：10000 r/min。
5.氮吹仪
6.漩涡混合器
7.旋转蒸发仪
8.超声波清洗器
9.固相萃取装置
10.圆底烧瓶：100ml
11.聚四氟乙烯离心管：50ml
四、试料制备与保存
1.试料制备
将苹果样品清洗干净后，用纱布擦干，取可食部分约500g，切碎，充分混匀，用液氮冷冻后，于冷冻研磨仪中研磨成粉末，混匀，装入洁净容器作为试料，密封备用。
2.试料保存
-20℃以下保存。
五、分析步骤
1.提取
称取5g试料（精确到0.01g）于50mL聚四氟乙烯离心管中，加入20 mL乙醇+水（8+2），混合，室温下超声15min，以10000r/min转速在4℃离心10min，上清液倒入50mL棕色容量瓶中，再使用20mL乙醇+水（8+2）重复提取1次，上清液均倒入50mL容量瓶中，定容至50mL，备用。
2. 浓缩
准确吸取10 mL样品提取液（7.1）于100mL圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪上35℃以下减压蒸发除去乙醇，约为3mL，待净化。
3.净化
将C18固相萃取小柱放在固相萃取仪上依次用5mL甲醇和5mL一级用水（4.1）活化，控制流速1ml/min，将7.2待净化液加入固相萃取小柱中，用5mL水清洗旋转蒸发瓶，加入固相萃取小柱中，3ml水淋洗，再5mL甲醇分2次清洗旋转蒸发瓶，加入到固相萃取小柱中，收集洗脱液，过0.45μm有机相微孔滤膜，供高效液相色谱测定。
4.标准曲线制备
精密量取200μg/ml多酚混合标准工作液适量，用2%甲酸乙腈溶液稀释，配制成浓度为0.5、1、5、10、20、50和100μg/ml的系列混合标准溶液，供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
5.测定
5.1 液相色谱参考条件
色谱柱：C18色谱柱，5μm，4.6mm×250mm，或相当者；
流动相：2%甲酸，乙腈，梯度洗脱程序见表1；
检测波长：280nm，320nm，360nm；
柱温：40℃；
流速：0.8mL/min；
进样量：10μL。
流动相梯度洗脱程序见表1。
表1 流动相梯度洗脱程序
时间
min
2%甲酸
%
100%乙腈
%
0
30
45
50
51
60
5.2 高效液相色谱测定
95
75
60
60
95
95
5
25
40
40
5
5
取试料溶液和相应的标准工作液进样测定，多点校准，以色谱峰保留时间定性，以色谱峰峰面积定量。在上述色谱条件下，标准工作液和试料溶液的高效液相色谱图见附录A。
6. 结果计算
苹果中被测酚类物质以质量分数计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按式⑴计算。
X式中：
V0V2 …………………………………………………………………… ⑴
mV11000X—试料中被测酚类物质的含量，单位以毫克每千克(mg/kg)；
—试料中相应的酚类物质质量浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
V0—试料提取液定容体积，单位为毫升(mL)；
V1—试料体积，单位为毫升(mL)；
V2—溶解样品试料体积，单位为毫升(mL)；
m—试料质量，单位为克(g) ；
1000—mg转化为g时的转化系数。
计算结果保留三位有效数字。
序号
1
2
3
4
5
6
中文名
没食子酸
原儿茶酸
新绿原酸
原花青素B1
儿茶素
绿原酸
CAS号
149-91-7
99-50-3
906-33-2
20315-25-7
154-23-4
327-97-9
纯度，%
定量波长，nm
280
280
320
280
280
320
7
8
9
10
11
12
13
原花青素B2
咖啡酸
表儿茶素
p-香豆酸
芦丁
阿魏酸
槲皮苷
29106-49-8
331-39-5
490-46-0
501-98-4
153-18-4
537-98-4
522-12-3
280
320
280
320
360
320
360
280
360
280
（槲皮素-鼠李糖苷）
14
15
16
33 芳香成分（王轩，2011）
样品处理：在每个产地随机选取5个具有代表性的果实，果实放入高速组织捣碎机内捣碎混匀，取1g匀浆放入样品瓶中，将固相微萃取的萃取头在气相色谱的进样口老化，老化温度为250℃，载气体积流量为0.8mL/min，分流比50 : 1，老化时间2h。将盖好样品盖的样品瓶置于60℃水浴锅中，固相微萃取头通过瓶盖进入到样品瓶中，切忌将伸出的纤维头接触到样品，吸附40min后抽出纤维头同时将萃取头拔出，再使萃取头插进气相色谱仪并推出纤维头，在250℃下解析1min，将纤维头抽出并取出萃取头，收集数据。
色谱条件：弹性石英毛细管柱PEG20M，柱长30m，内径0.25mm，液膜厚度0.25tam，载气He，不分流，恒压35kPa，进样口温度250℃，接口温度250℃，起始柱温35℃，保持2min，以5℃/min升温至60℃，再以8℃/min升温至140℃，最后以12℃/min升温至230℃，保持8min。
质谱条件：离子源温度200℃，电离方式EI，电子能量70eV，扫描质量范围为33～450u。
定性分析：取固相微萃取的香气成分，用气相色谱-质谱计算机联用仪进行分析鉴定。通过G1701BA化学工作站数据处理系统，检索NIST98谱图库，并分别与八峰索引及EPA/NIH质谱图集的标准谱图进行对照，复合，再结合有关文献进行人工谱图解析，确定香气里的各个化学成分。
定量分析：通过G1701BA化学工作站数据处理系统，按峰面积归一化法进行定量分析，分别求得各化学成分在苹果的香气成分中的相对百分含量。
根皮苷
槲皮素
根皮素
7061-54-3
6151-25-3
60-82-2
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2023年12月25日发(作者：城宛秋)
01 单果重
采用德国Sartorius公司生产的CPA-1245型万分之一电子天平。
每个品种选取10个果个大小基本一致的果实，分别测定其单果重，最终取平均值即为该品种苹果平均单果重（白沙沙，2012）。
02 单果体积
采用英国Stable MicroSystem公司生产的Volscan Profiler VSP 3000045食品体积自动测定仪。
将食品体积自动测定仪开机预热30min，启动分析软件，参数设置为：转速1转/秒，垂直步长2mm，扫描数据获取率400点/秒。每个产地选取10个具有代表性的果实，分别测定其体积，其平均值代表每个产地红富士苹果单果体积（白沙沙，2012）。
03 果实密度
鲜食苹果果实密度计算方法为：将某个品种已测定的单果重与对应体积的比值作为该果实密度。以10个苹果果实密度平均值作为该产地果实密度指标值（白沙沙，2012）。
04 果心大小
采用数显游标卡尺测定。
每个品种苹果选取10个具有代表性的果实，沿果实赤道位置横切，用游标卡尺直接测定果心半径和果实半径，每个果实进行3次测量，取平均值。
果心大小=果心半径/果实半径
05 果形指数
采用日本日立公司的数显游标卡尺。每个品种选取10个具有代表性的果实，分别测量其最大纵径和最大横径，计算果形指数。以10个果实果形指数平均值作为该品种苹果果形指数指标值。
果实的最大纵径与横径的比值，精确到0.01。
06 果实形状
果实形状用于筛选畸形果，选择特征果实形状，异于此形状的果实为畸形果。
[9]
1 近圆形 2 扁圆形 3 长圆形 4 椭圆形 5 卵圆形
6 圆锥形 7 短圆锥形 8 长圆锥形 9 圆柱形 10 偏斜形
07 淀粉-碘指数-确定苹果成熟度[10]
碘溶液的配置：用30ml温水溶解8.8g碘化钾，缓慢搅拌至溶解。加入2.2g碘晶体至溶解。用水稀释至1L。浓度为2.2g/L。
取样：选取具有典型大小和颜色的果实。每种样品选取至少10个果实，每棵树上不多于2个。
测定：1.收获后24小时内测定；2.沿赤道位置将苹果切成二分；3.将苹果浸入碘液；4.等待至少一分钟；5.拍照；6.与图片对比；7.计算平均数，用1-10表示。
见尾页附件。
08 果皮（肉）颜色
采用美国Hunterlab公司生产的D25LT色彩色差计。开机预热30min，按提示点击“Measure”按钮，进行标准色板校正（即先进行黑色标准板校正，后进行白色标准板校正），设定结果参数为模式“L、a、b”、测量次数“3”、测定时间间隔“10s”，当对白色标准板测定结果为“91.44、-0.95、0.69”时，表明机器已经稳定，可以进行样品的测定。其中L称为明度指数，L=0表示黑色，L=100表示白色；a、b代表一个直角坐标的两个方向，a值为正值时越大，颜色越接近纯红色，a=0时为灰色，a为负值时绝对值越大，颜色越接近纯绿色；b为正值时值越大，颜色越接近纯黄色，b=0时为灰色，b为负值时绝对值越大，颜色越接近纯蓝色。
分别测定果实着色面和未着色面，每个品种选取6个具有代表性的果实，并将样品清洗、擦干，使用专业水果刀将果皮剔除并收集，将苹果果皮置于测量容器内，以完全遮盖透光孔为标准，铺满底层有机玻璃板，盖上黑色容器盖，使白色标线对准测定指示点，点击“Read”按钮进行测定。测得第一个读数后，在10s内转动测量容器，使红色线对准指示点测定第二次数据，按同样步骤将黄色线对准指示点测定第三次。得到色泽的相应“L、a、b”数值及其平均值（Iglesias et al.，2008）果实底色：测定未着色的一面，结果以a+b表示。[12][11]。
1 淡绿 2 黄绿 3 绿 4 绿黄 5 黄白 6 淡黄 7 黄 8 橙黄
果面盖色
1 淡红 2 橙红 3 粉红 4 鲜红 5 红 6 浓红 7 紫红 8 褐红
果肉颜色
采用美国Hunterlab公司生产的D25LT色彩色差计。操作方法与参数设置同果皮颜色，每个品种选取6个具有代表性的果实，在苹果果肉中部取一片3mm厚的薄片，将苹果果肉置于测量容器内，以完全遮盖透光孔为标准，铺满底层有机玻璃板，盖上黑色容器盖，使白色标线对准测定指示点，点击“Read”按钮进行测定。测得第一个读数后，在10s内转动测量容器，使红色线对准指示点测定第二次数据，按同样步骤将黄色线对准指示点测定第三次。得到色泽的相应“L、a、b”数值及其平均值（Iglesias et al.，2008）。
09 果皮（肉）质地
采用英国Stable MicroSystem公司生产的2i/50型物性分析仪。
参数设置如下：探头为P/2E（直径2mm）型，测试速度为1mm/s，刺入深度为10mm，每秒记录200个数据，用单位g表示。读取探头感应到的最大值为果皮硬度，探头感应力5-10s的平均值为果实硬度。每种苹果选取10个具有代表性的果实，每个苹果测定两个位置，赤道线和其垂直位置[13]，分别测定其果皮（肉）硬
度。（Karlsen et al. 1999）
10 出汁率-质量法
按照清汁和浊汁工艺分别制汁。
称取果实质量，果核+萼片+果蒂质量，果渣质量。
出汁率按公式(3)计算。
X= m1-m2 /m1×100% (3)
式中：
X— 样品出汁率，%；
m1— 鲜果重量，g；
m2— 果渣+果核+萼片+果蒂重量，g。
11 果汁颜色
果汁色泽：利用Color Quest XT A60-1011-346透射测色仪测定。将仪器设定为“L、a、b”模式，以黑板进行校正，取果汁10ml于比色皿中，测定其“L、a、b”值，每个品种测量三次，即为该品种果汁的色泽。
色度chroma C*[14]:
色调角 Hue H*:
饱和度 s：
总色差值按照下式计算[15]
。（对比不同产品的颜色或对比清汁与浊汁颜色）
不显著0-0.5， 略显著0.5-1.5，显著1.5-3.0，肉眼可见wel l visi ble (3.0 –6.0)，极显著(6.0- 12.0)
12 果汁浊度—浊度仪
清汁：直接测定。（10s内上下翻滚6次）
浊汁：原始浊度T0
离心后浊度Tc:20℃4200g离心15min
浑浊稳定性[4]（抗澄清能力）由相对浑浊度表示。
相对浑浊度（T%） T%=（Tc/T0）×100
T0和Tc分别表示原始浊度和20℃4200g离心15min后的浊度。
13 褐变度OD420 ，非酶褐变指数（NEBI）
清汁：10ml果汁，以蒸馏水为参比，直接测定420nm的吸光值。
浊汁：5ml果汁加入5ml 95%乙醇，7800g离心10min，取上清液，以蒸馏水为参比测定420nm的吸光值。
14 果汁T440
吸取混合均匀的清汁试样，用1cm比色皿，以蒸馏水为参比，在波长440 nm处测定其透光率。
吸取混合均匀的浊汁试样，用1cm比色皿，以蒸馏水为参比，在波长440 nm处测定其透光率。
15 透光率-T625，T650
吸取混合均匀的清汁试样，用1cm比色皿，以蒸馏水为参比，在波长625 nm处测定其透光率。
吸取混合均匀的浊汁试样，用1cm比色皿，以蒸馏水为参比，在波长650 nm处测定其透光率。
16 可溶性固形物的测定—手持糖量计（折光仪）测定法
1．原理
不同可溶性固形物含量的样液有不同的折射率，从仪器刻度尺上直接读出可溶性固形物的含量。
2．仪器设备
[1][16]
图2—3 RHB0-90型手持糖度仪
1．盖板 2．进光棱镜 3．折光棱镜 4．旋钮 5．调节筒 6．目镜
⑴ 手持糖量计或手持折光仪：刻度尺上的最小分度值为1%或更小，基本构造如图2——3所示。
⑵ 高速组织捣碎机：10000～12000r/min。
⑶ 电子天平天平：感量0.01g。
3．测定步骤
⑴ 样液制备
果汁的测定：按照制备工艺制备果汁后直接测定。
⑵ 测定
① 仪器校正
打开盖板，用柔软的绒布或脱脂棉蘸蒸馏水（必要时可蘸二甲苯或乙醚）将棱镜擦拭干净，注意勿损镜面，待棱镜干燥后，用干燥洁净滴管吸蒸馏水2～3滴于折光棱镜镜面上，合上盖板，使蒸馏水遍布棱镜的表面，将仪器平置，进光孔对向光源，调整目镜，使镜内的刻度数字清晰，调节螺丝使视场内所见明暗分界线的读数为0点。
② 样液测定
在与仪器校正相同的温度下，滴样液2～3滴于折光棱镜镜面上，合上盖板，使样液遍布棱镜的表面，将仪器平置，进光孔对向光源，调节指示规，使视野分成明暗两部，再旋转微调螺旋，使明暗界限清晰，并使其分界线恰在接物镜的十字交叉点上。读取目镜视野中的百分数或折光率，并记录棱镜温度。如目镜读数标尺刻度为百分数，即为可溶性固形物含量（%）；如目镜读数标尺为折光率，可按GB12143-2008饮料通用分析方法附录A换算成可溶性固形物含量（%），将上述百分含量按附录B换算成20℃时可溶性固形物含量（%）。同一样品两次测定值之差，不应大于0.5%。
做三次平行，取算术平均值作为结果，精确到小数点后一位。
17 还原糖的测定-3，5-二硝基水杨酸比色法一、原理
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖的含量。
[17]
二、实验材料、主要仪器和试剂
1. 实验材料
苹果；
2. 主要仪器
（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11
（2）大离心管：50mL×2
（3）烧杯：100mL×1
（4）三角瓶：100mL×1
（5）容量瓶：100mL×3
（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1
（7）恒温水浴锅
（8）沸水浴
（9）离心机
（10）电子天平
（11）分光光度计
（12）组织捣碎机
（13）pH计
3. 试剂
（1）1mg/mL 葡萄糖标准液
准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖1000mg（或称取含1000mg葡萄糖的一水葡萄糖），置于烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到1000mL 容量瓶中，用蒸馏水定容，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂
将6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
（3）100g·L-1中性醋酸铅溶液：20g醋酸铅加入煮沸后冷却的蒸馏水，超声溶解，加醋酸调节pH为中性，定容至200mL（中性醋酸铅可除去蛋白质、单宁、果胶，适用于植物性萃取液；碱性醋酸铅适用于深色的蔗糖溶液，可除色素、有机酸、蛋白质、沉淀颗粒较大，可带走果糖）。
（4）无水硫酸钠
三、操作步骤
1. 制作葡萄糖标准曲线
取7支20mL 具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL 的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
管号 1mg/ml葡萄糖标准液（mL） 蒸馏水（mL） DNS(mL)
0
1
2
3
4
5
6
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
葡萄糖浓度
（mg）
0
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
光密度值
（OD540nm）
表1 葡萄糖标准曲线制作
2. 样品中还原糖的测定
（1）还原糖的提取
准确称取2.0ml苹果汁，放入100mL锥形瓶中，加入30mL 蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。加入2ml中性醋酸铅溶液，摇动10min，加入0.5g无水硫酸钠（沉淀铅）摇匀，将浸出液
（含沉淀）转移到50mL 离心管中，于8000r/min下离心20min,沉淀可用20mL 蒸馏水洗一次，于8000r/min下再离心20min，合并二次离心的上清液收集在100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）显色和比色
取3支20mL 具塞刻度试管，编号，按表2 所示分别加入待测液和显色剂，空白调零使用制作标准曲线的0号管。
将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。波长540nm。
样品重复测定三次。
（3）测定
将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5min，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容，加塞后颠倒混匀，在分光光度上进行比色。调波长540nm，用0号管调零点，测值，以光密度为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标做图。
表2 样品还原糖测定
管号 还原糖待测液（mL）
7
8
9
0.2
0.2
0.2
1.8
1.8
1.8
1.5
1.5
1.5
蒸馏水（mL） DNS(mL) 光密度值（OD540nm）
查曲线葡萄糖量
四、结果与计算：
计算出7、8、9号管光密度值的平均值在标准曲线上分别查出相应的还原糖浓度，计算出样品中还原糖含量。
18 总糖的测定-苯酚硫酸法苯酚-硫酸法测定总糖
（1）原理
多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。
（2）试剂
1． 浓硫酸：分析纯，95.5%
2． 80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
3． 6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。（每次测定均需现配,急救措施见本方案末尾。）
4．分析纯葡萄糖。
5． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
6． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
7． 6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。（急救措施见本方案末尾。）
8． 6mol/L 盐酸
[18]
（3）操作
1．制作标准曲线：准确称取标准葡萄糖储备液（1mg/ml）5ml于50ml容量瓶中，定容得到0.1mg/ml(100μg/ml)标准使用液，分别吸取0,0.2，0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
管号
0
1
2
3
4
5
6
2．样品含量测定：
①取样品5ml苹果汁
②水浴，在向比色管中加入5毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
③定容取样。水浴后，用流水冷却后加入5毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升。
吸取1ml处理后的样品液稀释100倍。
吸取0.3 ml的样品液，以蒸馏补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml（顺序不能颠倒，酸入水，缓慢加入）,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。三次重复。以标准曲线计算总糖含量。
管号
1
2
3
19 糖和有机酸的测定-离子色谱法（王轩师兄毕业论文word P61）
1.试验试剂
葡萄糖标准液，果糖标准液，蔗糖标准液，乳酸标准液，乙酸标准液，苹果酸标准液，酒石酸标准液，草酸标准液，氢氧化钠，氢氧化钾，无水乙醇
2.试验设备
ICS-3000离子色谱仪（美国戴安公司），CarbpacTMPA10(4×250mm)阴离子交换（美国戴安公司），万分之一电子天平CPA-1245（德国Sartorius公司）
样品（mL）
0.3
0.3
0.3
蒸馏水（mL） 6%苯酚
1.7
1.7
1.7
1.0
1.0
1.0
浓硫酸
5.0
5.0
5.0
光密度值
（OD540nm）
葡萄糖含量
100μg/ml葡萄糖标准液（mL）
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
蒸馏水（mL） 6%苯酚
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
浓硫酸
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
葡萄糖浓度 光密度值
（μg/ml） （OD540nm）
0
2.5
5.0
7.5
10
12.5
15
3.糖、酸样品的制备
参照《烟草及烟草制品中葡萄糖、果糖、蔗糖的测定》、张磊等（2012）和李芳（2011）的方法并加以改进。
准确称取10g 苹果果肉匀浆，加入一定量超纯水（约80mL），80℃水浴30min。待冷却至室温，定容至100mL，抽滤，再稀释1000倍，即为单糖待测液。
准确称取10g苹果果肉匀浆，加入8mL无水乙醇，再加超纯水约至80mL，超声提取30min。再定容至100mL，抽滤，稀释10倍，即为有机酸待测液。
4.糖、酸标准溶液的配置
分别取葡萄糖、蔗糖和果糖0.01g，用超纯水定容至100mL，即得糖标准品待测液，浓度为0.1mg/mL（100μg/mL），标准品进样浓度分别为0.5、1、4、10μg/mL。
分别取乳酸、乙酸、苹果酸、酒石酸、草酸及柠檬酸各0.01g，用超纯水定容至100mL，即得有机酸标准品待测液，浓度为0.1mg/mL（100μg/mL），进样浓度为1、4、10、50μg/mL。
5.离子色谱条件
糖测定色谱条件为：CarbpacTMPA10(4×250mm)阴离子交换柱，柱温35℃，流动相A为超纯水，B为NaOH水溶液（200mmol），A : B为91% : 9%，流速为1mL/min，进样量为5μL。
有机酸测定色谱条件为：CarbpacTMPA10(4×250mm)阴离子交换柱，柱温30℃，流动相为KOH，流速为1mL/min，梯度洗脱时间间隔及容量为：0～12min(0.8mmol)；12～40min(34mmol)；40～50min(34mmol)，进样量5μL。外标法定量。
20 可滴定酸的测定—指示剂滴定法
使用国外文献多采用的方法—pH电位法1．试剂
⑴ 氢氧化钠标准滴定溶液：c (NaOH)=0.1mol/L。
（2）氢氧化钠标准溶液的标定（0.1M）：准确称取约0.6g在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾，加80ml新煮沸过的冷水，超声波辅助溶解，加2滴酚酞指示液，用本溶液滴定至溶液呈粉红色，30s不褪色。同时做试剂空白试验。（果品质量安全分析技术）
2．样液制备
【果实，清洗去皮后将果实放入高速组织捣碎机内捣碎混匀称取25g匀浆，加入到100mL烧杯中，加40mL新煮沸放凉的蒸馏水，置75～80℃水浴上加热30min，期间摇动数次，冷却，移入250mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀过滤。（称取10ml果汁，加入到100mL烧杯中，加40mL新煮沸放凉的蒸馏水，置75～80℃水浴上加热30min，期间摇动数次，冷却，移入250mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀过滤。）】
3．测定步骤
AOAC：取10ml果汁加到250ml锥形瓶中加入90ml煮沸放凉的蒸馏水，磁力搅拌，用0.1M NaOH滴定至pH8.2±0.1，记录所消耗的体积，经计算得到可滴定酸的含量。平行测定三次，取其平均值。
（用移液管吸取10mL样液与100ml锥形瓶中，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液滴定，至出现微红色30s内不退色，如接近终点时出现黄褐色，加入20ml热蒸馏水稀释，加入10滴酚酞指示剂，再继续滴定，使酚酞变色[19-21]
易于观察。记录所消耗的体积，经计算得到可滴定酸的含量。平行测定三次，取9其平均值。）
6．计算
结果以苹果酸记，（ml NaOH×0.1N/样品质量）×0.067×100
酸的换算系数[22]：苹果酸：0.067，乙酸：0.060，酒石酸：0.075，柠檬酸：0.064，一水合柠檬酸：0.070，乳酸：0.090，盐酸：0.036，磷酸：0.049
21 pH值-采用电子pH计法[23]
依照GB/T 10468-1989《水果和蔬菜产品pH值的测定方法——电子pH计》测定。
1.样品制备：果汁样品
2.仪器标准：操作程序按仪器说明书进行。先将样品处理液和标准缓冲溶液调至同一温度，并将仪器温度补偿旋钮调至该温度上。
3.样品测定：在玻璃或塑料容器中加入样品处理液，使其容量足够浸没电极，用pH测定装置测定样品处理液，并记录pH值，精确至0.02单位，同一制备样品至少进行两次测定。
对于同一操作者连续两次测定的结果之差不超过0.1单位，否则重新测定，重复三次测定的算术平均值作为测定结果。准确到小数点后第二位。
4.仪器校正：用雷磁pH计自带标准缓冲溶液进行标准pH校正（pH4.0,pH6.86），长时间未用需用3mol/L KCL溶液浸泡至读数稳定。
22 维生素C的测定—2, 6－二氯靛酚滴定法[24]
该方法不适用于深色样品。（含花青素、叶绿素等色素的水果会使滴定结果不易判断）
⑴ 原理
2, 6–二氯靛酚的颜色反应表现两种特性，一是取决于其氧化还原状态，氧化态为深蓝色；还原态变为无色；二是受其介质的酸度影响，在碱性溶液中呈深蓝色，在酸性介质中呈浅红色。用蓝色的碱性2, 6–二氯靛酚标准溶液，对含维生素C的酸性浸出液进行氧化还原滴定，2, 6–二氯靛酚被还原为无色，当到达滴定终点时，多余的2, 6–二氯靛酚在酸性介质中则表现为浅红色，由2, 6–二氯靛酚用量计算样品中还原型抗坏血酸的含量。
⑵ 试剂
① 2%（W/V）草酸溶液：称取20g草酸，用蒸馏水溶解定容至1000mL。
② 抗坏血酸标准溶液（1mg/mL）：称取100mg (准确至0.1mg)抗坏血酸，用2％（W/V）草酸溶液溶解定容至100mL。现用现配。
③ 2, 6–二氯靛酚（2, 6–二氯靛酚吲哚酚钠盐）溶液：称取碳酸氢钠52mg溶解在200mL热蒸馏水中，然后称取2, 6–二氯靛酚50mg溶解在上述碳酸氢钠溶液中。冷却后定容至250mL，过滤至棕色瓶内，保存在冰箱中。每次使用前，用标准抗坏血酸标定其滴定度。即，加入10mL2%（W/V）草酸溶液于50mL锥形瓶中，加入1mL抗坏血酸标准溶液，摇匀，用2, 6–二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同
时，另取11mL2%（W/V）草酸溶液作空白试验。滴定度按式（2–28）计算。
TCV„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„(2–28)
V1V2T—
滴定度，即每毫升2, 6–二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的量，mg/mL；
C—
抗坏血酸的浓度，mg/mL；
V—
吸取抗坏血酸标准溶液的体积，mL；
V1—
滴定抗坏血酸标准溶液所用2, 6–二氯靛酚溶液的体积，mL；
V2—
滴定空白所用2, 6–二氯靛酚溶液的体积，mL。
式中：
④高岭土：对维生素C无吸附作用。
⑶ 仪器设备
① 高速组织捣碎机：8000～12000r/min。
② 分析天平。
③ 滴定管：25mL、10mL。
④ 容量瓶：100mL。
⑤ 锥形瓶：100mL、50mL。
⑥ 吸管：10mL、5mL、2mL、1mL。
⑦ 烧杯：250mL、50mL。
⑧ 漏斗。
⑷ 操作步骤
① 样液制备
将榨出的果汁立即量取50ml与装有约30ml 2%（W/V）草酸溶液的烧杯中，用2%（W/V）草酸溶液将样品移入100mL容量瓶中，并定容至刻度，摇匀过滤。若滤液有色，可按每克样品加0.4g高岭土脱色后再过滤。
② 滴定
吸取20mL滤液放入100mL锥形瓶中，用已标定过的2, 6–二氯靛酚溶液滴定，直至溶液呈粉红色15s不褪色为止。同时以10ml蒸馏水加10ml 2%（W/V）草酸溶液做空白试验。平行测定三次（同时量取至锥形瓶后一一测定），取平均值。
⑸ 计算
按式（2–29）计算维生素C含量。
XVV0TA100m„„„„„„„„„„„„„„„„„(2–29)
式中：
X—
样品中维生素C的含量，mg/100g；
V—
滴定样液所用2, 6–二氯靛酚溶液的体积，mL；
V0—
滴定空白所用2, 6–二氯靛酚溶液的体积，mL；
T—
2, 6–二氯靛酚溶液的滴定度，mg/mL；
A—
稀释倍数；
m—
样品质量，g。
23 果胶的测定-间羟基联苯法（MHDP）
[25, 26]
（1）原理MHDP间羟基联苯法为发色试剂，MHDP/5FF为发色基团，研究了520nm下从开始到反应时的不同半乳糖醛酸浓度。
（2）试剂：
间羟基联苯溶液：0.15%间羟基联苯的0.5% NaOH溶液，用铝箔包裹避光保存。(避光在冰箱中保存，可保存一个月)
0.0125M四硼酸钠浓硫酸溶液：四硼酸钠俗称硼砂，Na2B4O7·10H2O，分子量378，四硼酸钠0.475g，加浓硫酸100ml溶解，超声波辅助溶解（注意安全）。
半乳糖醛酸标准储备液：无水半乳糖醛酸1.000g，用水溶解，加入5ml 1M NaOH，定容至1000ml，混匀，半乳糖醛酸质量浓度为1mg/ml。
（3）提取：
水溶性果胶的提取按照Robertson(1979)的方法进行：
20ml果汁分别放入的100ml烧杯中。加入20ml 75℃95%乙醇（用于高酯化果胶沉淀），混合物在85℃水浴中加热10min，用玻璃棒不时搅拌。转移到50ml离心管中（离心管中加入滤纸屑），室温下10000 r/min离心15min，轻轻倒出上清液，弃去上清液。倒入100ml烧杯中加入30ml 75℃63%乙醇，混合物在85℃水浴中加热10min，用玻璃棒不时搅拌。10000 r/min离心10min，轻轻倒出上清液，弃去上清液。
总果胶：沉淀物离心管加蒸馏水洗涤并转移至100ml容量瓶中，加入1M氢氧化钠 5ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，放置15min同时间歇地倒置若干次，过滤。滤液用于比色测定。
总可溶性果胶的提取方法[27]
（水溶性果胶：5ml的蒸馏水分散沉淀，继续加至35ml，漩涡混合多次，室温下10000 r/min 离心10min，将液体轻轻倒入100mL容量瓶，加入1N氢氧化钠（5ml），蒸馏水定容至刻度，在比色前至少放置15min（不时震荡）。
草酸铵溶性果胶：在离心管的残留物中加入5ml 0.75%草酸铵溶液使沉淀物溶解。继续加0.75%草酸铵溶液至35ml，漩涡混合，室温下10000 r/min离心10min，上清液轻轻倒入100ml容量瓶中，加入1N氢氧化钠（5ml），蒸馏水定容，在比色前至少放置15min（不时震荡）。
碱溶性果胶：把离心管内残渣全部注入100ml容量瓶中，加入1M NaOH 5ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。放置15min，间歇倒置若干次，过滤，滤液用于比色测定。）
提取物分别用比色法测定。
（每100ml带淡粉红色的提取物加入1ml 10%焦亚硫酸钠。）
（4）测定：
20mL试管中加入0.5ml提取物，1.5ml蒸馏水，加入5ml四硼酸钠硫酸溶液，漩涡混合器混匀（混匀硫酸溶液）。立即放入冰水浴。放入80±0.5℃水浴持续6min，立即放入冰水浴至室温（为避免硫酸产热导致的过度反应）。加入0.1ml间羟基联苯溶液，漩涡混合，立即于525nm处测定吸光度。记录最大吸光值，然后在第二个样品中加入间羟基联苯溶液立即测定，避免同时测定！！！
管号
半乳糖醛酸标准液（mL）
0
0.1
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
样品
0.5
0.5
0.5
蒸馏水（mL）
2
1.9
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
蒸馏水（mL）
1.5
1.5
1.5
四硼酸钠硫酸溶液
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
5.0
四硼酸钠硫酸溶液
5.0
5.0
5.0
半乳糖醛酸间羟基联苯溶液 浓度
（μg/ml）
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
间羟基联苯溶液
0.1
0.1
0.1
0
10
20
40
60
80
100
光密度值
（OD525nm）
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
24 钾、钠、钙、镁的测定-原子发射光谱法/原子吸收法
参考
钾钠GB/T 5009.91-2003 食品中钾钠的测定钙GB/T 5009.92-2003食品中钙的测定[29][28]
[30]镁GB/T 5009.90-2003食品中钛、镁、锰的测定25 总酚样品前处理[21, 31]
[32]：1.果浆和果渣 ：-30度冷冻，72小时冻干，制粉，粉末在-30度的干燥器中冷冻保存，用于多酚分析用；用液氮冷冻，立即磨碎（为减少样品的不均匀性），湿粉在-30度冷冻保存，用于分析多酚。
2.果汁：150g果汁立即与150mg NaF混合（避免酚类物质被PPO氧化），-30度冷冻保存。（在此文献里也看到这样处理[33]）
样品制备：清汁：直接测定
浊汁：量取20ml果汁（5000r·min）离心15min，取上清液，加入90%乙醇15mL，摇匀后离心得到样液。
标准曲线制作：用10mL乙醇溶液溶解0.5g没食子酸，定容至100mL，得到5mg/ml标准液。分别移取1mL到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容得到50μg/ml标准使用液。按照测定方法测定，绘制标准曲线。
测定：0.5ml样品，加入1ml 10%（v/v）Folin-Ciocalteu显色剂，放置6min，加入2ml 20%碳酸钠溶液，定容至10mL，30℃放置60min（75℃10min），并于765nm波长下测定其吸光度。每个浓度做三次平行，取平均值。
计算：结果以μg GAE没食子酸/ml样品计算。
-1
管号
0
1
2
3
4
5
6
样品
1
2
3
4
5
6
没食子酸标准液（mL）
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
蒸馏水
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
FC显色剂（mL）
1
1
1
1
1
1
1
FC显色剂（mL）
1
1
1
1
1
1
20%碳酸钠
（mL）
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
没食子酸浓度
（mg/L）
0
1
2
3
4
5
6
光密度值
（OD765nm）
光密度值
（OD765nm）
样品溶液（ml） 蒸馏水
0.5
0.5
0.5
1
1
1
1.5
1.5
1.5
1
1
1
26 蛋白质-考马斯亮蓝染色法
（一）实验原理
1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。
考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（lmax），由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。经研究认为，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。
（二）试剂与器材
1. 试剂：
（1）标准蛋白质溶液，用 g—球蛋白或牛血清清蛋白(BSA)，配制成1.0mg/ml和0.1mg/ml的标准蛋白质溶液。
（2）考马斯亮兰G—250染料试剂：称100mg考马斯亮兰G—250，溶于50ml 95%的乙醇后，再加入100ml 85%的磷酸，用水稀释至1升。
2. 器材：
（1）可见光分光光度计 （2）旋涡混合器
（三）操作方法
1. 标准方法
（1）取16支试管，1支作空白，3支留作未知样品，其余试管分为两组按表中顺序，分别加入样品、水和试剂，即用0.1mg/ml的标准蛋白质溶液给各试管分别加入：0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，然后用去离子水补充到1.0ml。最后各试管中分别加入5.0ml考马斯亮兰G—250试剂，每加完一管，立即在旋涡混合器上混合（注意不要太剧烈，以免产生大量气泡而难于消除）。定容至10ml，摇匀待测。未知样品的加样量见下表中的第8、9、10管。
考马斯亮兰法实验表
管号
标准蛋白质
(100μg/ml)
蒸馏水
考马斯亮蓝
G－250试剂
每管中的蛋白浓度
（μg/ml ）
光吸收值（A595）
（2）样品处理：清汁：直接测定
浊汁：滤纸过滤后直接测定
量取5ml果汁，加入0.2%NaOH 20ml(先加入约5ml溶解，在缓慢加入，边加边搅拌，)，搅拌10min，于25度
6000r/min离心10min，轻轻倒出上清液，重复一次，经滤纸过滤后定容至50ml容量瓶中。
（3）加完试剂5分钟后，即可开始用比色皿，在分光光度计上测定各样品在595nm处的光吸收值A595，空白对照为第1号试管。
（4）用标准蛋白质量（mg）为横座标，用吸光度值A595为纵座标，作图，即得到一条标准曲线。由此标准曲线，根据测出的未知样品的A595值，即可查出未知样品的蛋白质含量。
27 多酚氧化酶活性的测定
一、原理
多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，在有氧的条件下，能使一元酚和二元酚氧化产生醌。用分光光度法在420nm波长下测其吸光度，即可计算出多酚氧化酶的活力和比活性。反应式如下：
多酚氧化酶
邻苯二酚（儿茶酚）＋1∕2 O2 ——————→ 邻醌 ＋ H2O
二、材料、仪器及试剂
0 1 2 4 6 8 10
1
0
2
0.1
3
0.2
4
0.4
5
0.6
6
0.8
7
1.0
8
0.5
9
0.5
10
0.5
1.0
5.0
0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 3 3 3
5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
1. 材料：苹果等
2. 仪器：分光光度计；离心机；恒温水浴；匀浆机；试管；移液管
3. 试剂：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）；
0.2mol•L－1pH7.0磷酸缓冲液；
Triton X-100；
50mM 邻苯二酚（0.2M pH7.0磷酸缓冲液配置）；
三、实验步骤
1. 粗酶液的制备[19]
称取去皮苹果5g经液氮速冻后在研钵中迅速研磨，组织充分破碎后，加入0.1g PVPP不溶性聚乙烯吡咯烷酮,0.01g Triton X-100和8 ml 0.2 mol•L－1 pH 7.0磷酸缓冲液,磨成匀浆，放入冰水浴中保存，于10000r/min 4℃离心30min取上清液，经四层纱布过滤后，量取上清液体积，即为粗制酶液。
2. 活性酶的测定[34]
空白：3mL 50mM 邻苯二酚（0.2M pH7.0磷酸缓冲液配置）
样品：2.9mL 50mM 邻苯二酚（0.2M pH7.0磷酸缓冲液配置）+0.1ml粗酶液
迅速摇匀，倒入比色杯内，于420nm波长处以时间扫描方式，在1～2min内测定吸光度变化（A）值。
五、酶活性的计算
以每min内A420值变化0.001为1个酶活力单位，按下式计算多酚氧化酶的活力和比活性。
A 酶提取液总量（ml）
酶活力（0.001A•min1）＝———————×———————————
－ 0.001×反应时间 测定时酶液用量（ml）
A 酶提取液总量（ml）
酶的比活性(0.001A•g1Fw•min)＝—————————×——————————
－ 0.001×W×反应时间 测定时酶液用量（ml）
公式中：A —为反应时间内吸光度的变化值；W为样品鲜重（g）。
28 淀粉试验试剂：
冷碘液：加入等量0.1M 碘溶液与5%（m/v）碘化钾溶液用冷蒸馏水稀释至浓度126.9mg/L；冷蒸馏水：将蒸馏水放入冰水浴中30min；玉米淀粉；2M NaOH；2M HCl；0.1M pH4.6醋酸缓冲液；
标准曲线制作：
取0.1g玉米淀粉溶于50ml 2M NaOH中，加入等量50ml 2M HCL，加热使溶液澄清。滤纸过滤。用2M HCL或2M NaOH调节成pH4.6。0.1M pH4.6醋酸缓冲液定容至100ml容量瓶，标准储备液浓度为1mg/ml。
[35]
标准使用液用0.1M pH4.6醋酸缓冲液稀释待用。
样品处理：10ml果汁样品在1000g下离心20min，过滤至20ml试管，用蒸馏水定容至10ml，比色法测定可溶性淀粉含量。
沉淀用5ml 2M NaOH室温下溶解，转移至试管中，加等量2M HCL，沸水浴至淀粉糊化，过滤，调节pH至4.6，用0.1M pH4.6醋酸缓冲液定容，比色法测定不溶性淀粉含量。
测定：5ml经处理后的样品与2.5ml冷碘液混合，定容至10ml，室温下10min后于615nm测定吸光度。上清液中可溶性淀粉用蒸馏水稀释，比色法测定。沉淀同样用比色法测定。
管号
0
1
2
3
4
5
6
7
样品
1
2
3
29 抗氧化能力淀粉标准液（mL）
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
样品溶液（ml）
[16, 21]冷碘液（mL）
2.5
2.5
2.5
2.5
2.5
2.5
2.5
2.5
冷碘液（mL）
2.5
2.5
2.5
定容至10ml，放置10min
淀粉含量
（mg/ml）
0
0.01
0.02
0.03
0.04
0.05
0.06
0.07
光密度值
（OD615nm）
光密度值
（OD615nm）
30 粗纤维-重量法[36]选取6个代表性的果实，清洗去皮后将果实放入高速组织捣碎机内捣碎混匀，称取20g试样，移入500mL锥形瓶中，加入200mL煮沸的1.25%硫酸，加热使微沸，保持体积恒定维持30min。取下锥形瓶，立即用亚麻布过滤后，用沸水洗涤至洗液不呈酸性。再用200mL煮沸的1.25%氢氧化钠溶液，将亚麻布上存留液移入圆锥型瓶内加热煮沸30min后取下锥形瓶，立即用以亚麻布过滤。以沸水洗涤2～3次后，移入已干燥称量的G2垂融坩埚中抽滤，用热水洗涤后抽干将坩埚及内容物放入105℃烘箱中烘干后称量，重复操作直至恒重。
31 水分含量
采用德国Sartorius公司生产的LMA200PM-000EU微波快速水分测定仪进行测定。
开机预热30min，调用“Powder”三段式程序，设定参数为“70%—1 stage；50%—2 stage；30%—Auto end”，即第1阶段以70%的微波功率对样品进行干燥，第2阶段以50%的微波功率对样品进行干燥，第3阶段以30%的微波功率对样品进行干燥直至结束。
选取6个具有代表性的果实，清洗去皮后将果实放入高速组织捣碎机内捣碎混匀，称取2g匀浆于玻璃纤维纸上，盖好仪器上盖，点击“Analysis”按钮进行测定。平均测定3次，取其平均值（白沙沙，2012）。
32 单酚
苹果中主要酚类物质的测定-高效液相色谱法
一、原理
苹果中的酚类物质经乙醇溶液超声提取， C18固相萃取小柱净化，高效液相色谱-紫外/二极管阵列检测器测定，以保留时间定性，外标法定量。
二、试剂
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
1. 没食子酸、原儿茶酸、新绿原酸、原花青素B1、儿茶素、绿原酸、原花青素B2、咖啡酸、表儿茶素、P-香豆酸、芦丁、阿魏酸、槲皮苷、根皮苷、槲皮素和根皮素对照品≥95%
2. 乙醇
3. 乙腈：色谱纯。
4. 甲酸：色谱纯。
5.乙醇溶液（8+2）：取80ml乙醇与20ml水混合。
6. 2%甲酸溶液：取甲酸2ml，用水溶解并稀释至100ml。
7. 2%甲酸乙腈溶液：取2%甲酸溶液95ml，加5ml乙腈混合均匀。
8. 有机相微孔滤膜：0.45μm。
9. C18固相萃取小柱：200mg，6mL。
10. 1000μg/ml多酚混合标准贮备液：精密称取多酚标准品5mg，于5ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1000 μg/ml的多酚混合标准贮备液。-20℃以下避光贮存，有效期6个月。
11. 200μg/ml多酚混合标准工作液：精密量取1000 μg/ml多酚混合标准贮备液1ml，于5ml棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配置成浓度为200μg/ml多酚混合标准工作液。-20℃以下避光贮存，有效期6个月。
三、仪器
1.液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。
2.分析天平，感量±0.0001 g、感量±0.01 g。
3.冷冻研磨仪
4.离心机：10000 r/min。
5.氮吹仪
6.漩涡混合器
7.旋转蒸发仪
8.超声波清洗器
9.固相萃取装置
10.圆底烧瓶：100ml
11.聚四氟乙烯离心管：50ml
四、试料制备与保存
1.试料制备
将苹果样品清洗干净后，用纱布擦干，取可食部分约500g，切碎，充分混匀，用液氮冷冻后，于冷冻研磨仪中研磨成粉末，混匀，装入洁净容器作为试料，密封备用。
2.试料保存
-20℃以下保存。
五、分析步骤
1.提取
称取5g试料（精确到0.01g）于50mL聚四氟乙烯离心管中，加入20 mL乙醇+水（8+2），混合，室温下超声15min，以10000r/min转速在4℃离心10min，上清液倒入50mL棕色容量瓶中，再使用20mL乙醇+水（8+2）重复提取1次，上清液均倒入50mL容量瓶中，定容至50mL，备用。
2. 浓缩
准确吸取10 mL样品提取液（7.1）于100mL圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪上35℃以下减压蒸发除去乙醇，约为3mL，待净化。
3.净化
将C18固相萃取小柱放在固相萃取仪上依次用5mL甲醇和5mL一级用水（4.1）活化，控制流速1ml/min，将7.2待净化液加入固相萃取小柱中，用5mL水清洗旋转蒸发瓶，加入固相萃取小柱中，3ml水淋洗，再5mL甲醇分2次清洗旋转蒸发瓶，加入到固相萃取小柱中，收集洗脱液，过0.45μm有机相微孔滤膜，供高效液相色谱测定。
4.标准曲线制备
精密量取200μg/ml多酚混合标准工作液适量，用2%甲酸乙腈溶液稀释，配制成浓度为0.5、1、5、10、20、50和100μg/ml的系列混合标准溶液，供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求回归方程和相关系数。
5.测定
5.1 液相色谱参考条件
色谱柱：C18色谱柱，5μm，4.6mm×250mm，或相当者；
流动相：2%甲酸，乙腈，梯度洗脱程序见表1；
检测波长：280nm，320nm，360nm；
柱温：40℃；
流速：0.8mL/min；
进样量：10μL。
流动相梯度洗脱程序见表1。
表1 流动相梯度洗脱程序
时间
min
2%甲酸
%
100%乙腈
%
0
30
45
50
51
60
5.2 高效液相色谱测定
95
75
60
60
95
95
5
25
40
40
5
5
取试料溶液和相应的标准工作液进样测定，多点校准，以色谱峰保留时间定性，以色谱峰峰面积定量。在上述色谱条件下，标准工作液和试料溶液的高效液相色谱图见附录A。
6. 结果计算
苹果中被测酚类物质以质量分数计，单位以毫克每千克（mg/kg）表示，按式⑴计算。
X式中：
V0V2 …………………………………………………………………… ⑴
mV11000X—试料中被测酚类物质的含量，单位以毫克每千克(mg/kg)；
—试料中相应的酚类物质质量浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
V0—试料提取液定容体积，单位为毫升(mL)；
V1—试料体积，单位为毫升(mL)；
V2—溶解样品试料体积，单位为毫升(mL)；
m—试料质量，单位为克(g) ；
1000—mg转化为g时的转化系数。
计算结果保留三位有效数字。
序号
1
2
3
4
5
6
中文名
没食子酸
原儿茶酸
新绿原酸
原花青素B1
儿茶素
绿原酸
CAS号
149-91-7
99-50-3
906-33-2
20315-25-7
154-23-4
327-97-9
纯度，%
定量波长，nm
280
280
320
280
280
320
7
8
9
10
11
12
13
原花青素B2
咖啡酸
表儿茶素
p-香豆酸
芦丁
阿魏酸
槲皮苷
29106-49-8
331-39-5
490-46-0
501-98-4
153-18-4
537-98-4
522-12-3
280
320
280
320
360
320
360
280
360
280
（槲皮素-鼠李糖苷）
14
15
16
33 芳香成分（王轩，2011）
样品处理：在每个产地随机选取5个具有代表性的果实，果实放入高速组织捣碎机内捣碎混匀，取1g匀浆放入样品瓶中，将固相微萃取的萃取头在气相色谱的进样口老化，老化温度为250℃，载气体积流量为0.8mL/min，分流比50 : 1，老化时间2h。将盖好样品盖的样品瓶置于60℃水浴锅中，固相微萃取头通过瓶盖进入到样品瓶中，切忌将伸出的纤维头接触到样品，吸附40min后抽出纤维头同时将萃取头拔出，再使萃取头插进气相色谱仪并推出纤维头，在250℃下解析1min，将纤维头抽出并取出萃取头，收集数据。
色谱条件：弹性石英毛细管柱PEG20M，柱长30m，内径0.25mm，液膜厚度0.25tam，载气He，不分流，恒压35kPa，进样口温度250℃，接口温度250℃，起始柱温35℃，保持2min，以5℃/min升温至60℃，再以8℃/min升温至140℃，最后以12℃/min升温至230℃，保持8min。
质谱条件：离子源温度200℃，电离方式EI，电子能量70eV，扫描质量范围为33～450u。
定性分析：取固相微萃取的香气成分，用气相色谱-质谱计算机联用仪进行分析鉴定。通过G1701BA化学工作站数据处理系统，检索NIST98谱图库，并分别与八峰索引及EPA/NIH质谱图集的标准谱图进行对照，复合，再结合有关文献进行人工谱图解析，确定香气里的各个化学成分。
定量分析：通过G1701BA化学工作站数据处理系统，按峰面积归一化法进行定量分析，分别求得各化学成分在苹果的香气成分中的相对百分含量。
根皮苷
槲皮素
根皮素
7061-54-3
6151-25-3
60-82-2
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