2024年2月20日发(作者：枝展)
大肠杆菌噬菌检验操作SOP
编号： SOP-ZL007-00
版本号：01 修订号：00
页 码：15
机密等级： 秘密
起草人
审核人
批准人
起草日期
审核日期
批准日期
分发清单
颁发部门 质量管理部
研发部[ ]质量管理部[ ]
综合管理部[ ]生产管理部[ ]
市场销售部[ ]财务部[ ]
生效日期
1.
2.
目的
规定新生牛血清中大肠杆菌噬菌体的检测方法。
指导操作者按本程序进行新生牛血清中大肠杆菌噬菌体的检测操作。
适用范围
本程序包括大肠杆菌菌种培养、样品培养、点样、判定标准和增殖试验。
适用于新生牛血清中大肠杆菌噬菌体检定操作的全过程。
职责
质量管理部：负责本程序的起草。
质量管理部QC：负责本程序的操作。
总经理：负责本程序的批准。
定义 无
引用标准
《中华人民共和国药典》四部 2015版
材料及设备
供试品及参考品/标准品
供试品：新生牛血清。 记录批号。
参考品/标准品：大肠杆菌C3000菌种，记录批号。
化学药品及试剂
普通肉汤培养基， 1-2支/批血清，记录批号、数量及效期。
阳性血清，1-2ml,记录批号、效期。
阴性血清，1-2ml,记录批号、效期。
营养琼脂培养基平皿，1-2个/批，记录批号、数量及效期。
设备
3.
3.1．
3.2．
3.3.
4.
5.
6.
6.1
6.1.1
6.1.2
6.2
6.2.1
6.2.2
6.2.3
6.2.4
6.3
6.3.1
6.3.2
6.4
6.4.1
6.4.2
6.4.3
6.4.4
6.4.5
6.4.6
6.4.7
6.4.8
6.4.9
6.4.10
6.4.11
7.
8.
8.1
8.1.1
8.1.1.1
8.1.1.2
8.2
8.2.1
8.2.1.1
8.2.1.2
8.2.1.3
8.2.1.4
8.2.1.5
资料整理
生物安全柜。
振荡培养箱。
玻璃器皿及辅助用具/易耗品
灭菌效期内的尖毛细吸管1-2支
1ml吸管，4-6支/批供试品
有效期内的一次性使用无菌注射器，2支/批供试品
有效期内的一次性无菌滤器（0.45μm)，1个/批供试品
操作服，1件/人
无菌帽、无菌口罩和橡胶检查手套，1副/人
白金耳1个
酒精灯1个
砂片1片
点火枪一把或火机
效期内75%酒精棉（见《75%酒精棉配制程序》）
流程图
无
内容
准备
尖毛细吸管﹑1ml吸管、操作服经蒸汽高压灭菌，记录高压设备运行流水号
将试验所需物料放入物料缓冲间。
人员按无菌操作室的要求更衣进入操作室，参见《人员进出QC洁净区程序》 。
检测程序
大肠杆菌C3000菌种启封、传代。
大肠杆菌C3000菌液培养
将传代后的大肠杆菌C3000斜面菌种，肉汤培养基放入生物安全柜。
点燃酒精灯。
取一支接种环，放在酒精灯上灼烧月
待接种环冷却后伸入菌种试管内，取适量大肠杆菌C3000接种肉汤培养
资料整理
基。
8.2.1.6 熄灭酒精灯
8.2.1.7 将转种肉汤培养基的大肠杆菌C3000放于37℃振荡培养箱中振荡培养6
8.3.
8.3.1
8.3.2
8.3.3
8.3.4
8.3.5
8.3.6
8.4
8.4.1
8.4.2
8.4.2
8.4.3
8.4.4
8.4.5
8.4.6
小时。
样品培养
将振荡培养箱中振荡培养6小时后的肉汤培养的大肠杆菌C3000、供试品
以及阴性和阳性对照血清放入生物安全柜。
点燃酒精灯。
取下肉汤培养的大肠杆菌C3000试管塞子，酒精灯上消毒管口。
用1ml吸管吸取1ml培养好的菌液加入8ml肉汤培养基中，再分别加2ml
供试品以及阴性和阳性对照血清，混匀，塞好塞子。
熄灭酒精灯。
将加样后的培养基置37℃振荡培养箱培养18小时。
点样。
把肉汤培养的菌液和新鲜的肉汤培养基放入生物安全柜内。
点燃酒精灯。
用1ml吸管分两次吸取2ml菌液加入到新鲜肉汤培养基中，盖好塞子，置
37℃摇床培养2小时。
再把培养2小时后的菌液和营养琼脂培养基平皿放入生物安全柜内。
用一次性注射器取2ml培养好的菌液铺在营养琼脂培养基平皿表面，吸去
多余液体，盖上盖子，置37℃1－2小时后点样。
把供试品菌液和制备好的培养皿放入生物安全柜内。
将经18小时培养的供试品菌液用0.45µm无菌滤器过滤后点样于培养皿中
资料整理
8.4.7
8.4.8
8.4.9
8.5
8.5.1
8.5.2
8.5.3
8.5.4
8.5.5
8.6
8.6.1
8.6.2
9.
9.1.
9.2.
9.3.
9.4
9.5
10.
10.1.
11.
熄灭酒精灯。
将点样后的培养皿置37℃培养箱培养6小时后观察结果。
清场。参见《QC清场管理程序》，填写清场记录。
增殖试验（当供试品为阳性做此项）
将经过培养的阳性供试品菌液和新鲜肉汤培养基放入超净台内。
取下试管塞，酒精灯上消毒管口。
用1ml的吸管分两次吸取经过培养的阳性供试品的菌液2ml，加入到8ml
新鲜肉汤培养基中，置37℃振荡培养箱振荡培养2小时。
将振荡培养2小时的阳性供试品的菌液进行点样，点样培养参见8.4。
清场。参见《QC清场管理程序》，填写清场记录。
试验结果评估
在阴性、阳性对照都成立的前提下，培养皿中供试品处无噬菌斑为阴性，
有噬菌斑为阳性。
当供试品呈阳性时，进行增殖试验。增殖试验为阳性判供试品为阳性，增
殖试验为阴性判供试品为阴性。
注意事项
严格按照GMP要求规范操作，以防止检定结果不成立。
注意不得混淆不同名称和批号供试品
使用的计量器具应经过计量校验
出现超标结果，应在试验记录中如实记录。
出现OOS情况，应及时报告主管。参见《质量检验超出标准调查分析程
序》，完成OOS记录。
附录及派生记录
大肠杆菌噬菌体检测记录F-SOP-ZL020-01
相关文件
资料整理
11.1.
11.2.
11.3.
11.4.
11.5.
11.6.
11.7.
12.
修订号
1
《振荡培养箱使用与维护程序》
《菌毒种细胞株管理程序》
《75%酒精棉配制程序》
《人员进出洁净厂房程序》
《生物安全柜使用及维护程序》
《QC清场管理程序》
《质量检验超出标准调查分析程序》
修订记录
修改内容
引用标准修改为《中国药典》2015版四部
生效日期
2015年12月1日
2024年2月20日发(作者：枝展)
大肠杆菌噬菌检验操作SOP
编号： SOP-ZL007-00
版本号：01 修订号：00
页 码：15
机密等级： 秘密
起草人
审核人
批准人
起草日期
审核日期
批准日期
分发清单
颁发部门 质量管理部
研发部[ ]质量管理部[ ]
综合管理部[ ]生产管理部[ ]
市场销售部[ ]财务部[ ]
生效日期
1.
2.
目的
规定新生牛血清中大肠杆菌噬菌体的检测方法。
指导操作者按本程序进行新生牛血清中大肠杆菌噬菌体的检测操作。
适用范围
本程序包括大肠杆菌菌种培养、样品培养、点样、判定标准和增殖试验。
适用于新生牛血清中大肠杆菌噬菌体检定操作的全过程。
职责
质量管理部：负责本程序的起草。
质量管理部QC：负责本程序的操作。
总经理：负责本程序的批准。
定义 无
引用标准
《中华人民共和国药典》四部 2015版
材料及设备
供试品及参考品/标准品
供试品：新生牛血清。 记录批号。
参考品/标准品：大肠杆菌C3000菌种，记录批号。
化学药品及试剂
普通肉汤培养基， 1-2支/批血清，记录批号、数量及效期。
阳性血清，1-2ml,记录批号、效期。
阴性血清，1-2ml,记录批号、效期。
营养琼脂培养基平皿，1-2个/批，记录批号、数量及效期。
设备
3.
3.1．
3.2．
3.3.
4.
5.
6.
6.1
6.1.1
6.1.2
6.2
6.2.1
6.2.2
6.2.3
6.2.4
6.3
6.3.1
6.3.2
6.4
6.4.1
6.4.2
6.4.3
6.4.4
6.4.5
6.4.6
6.4.7
6.4.8
6.4.9
6.4.10
6.4.11
7.
8.
8.1
8.1.1
8.1.1.1
8.1.1.2
8.2
8.2.1
8.2.1.1
8.2.1.2
8.2.1.3
8.2.1.4
8.2.1.5
资料整理
生物安全柜。
振荡培养箱。
玻璃器皿及辅助用具/易耗品
灭菌效期内的尖毛细吸管1-2支
1ml吸管，4-6支/批供试品
有效期内的一次性使用无菌注射器，2支/批供试品
有效期内的一次性无菌滤器（0.45μm)，1个/批供试品
操作服，1件/人
无菌帽、无菌口罩和橡胶检查手套，1副/人
白金耳1个
酒精灯1个
砂片1片
点火枪一把或火机
效期内75%酒精棉（见《75%酒精棉配制程序》）
流程图
无
内容
准备
尖毛细吸管﹑1ml吸管、操作服经蒸汽高压灭菌，记录高压设备运行流水号
将试验所需物料放入物料缓冲间。
人员按无菌操作室的要求更衣进入操作室，参见《人员进出QC洁净区程序》 。
检测程序
大肠杆菌C3000菌种启封、传代。
大肠杆菌C3000菌液培养
将传代后的大肠杆菌C3000斜面菌种，肉汤培养基放入生物安全柜。
点燃酒精灯。
取一支接种环，放在酒精灯上灼烧月
待接种环冷却后伸入菌种试管内，取适量大肠杆菌C3000接种肉汤培养
资料整理
基。
8.2.1.6 熄灭酒精灯
8.2.1.7 将转种肉汤培养基的大肠杆菌C3000放于37℃振荡培养箱中振荡培养6
8.3.
8.3.1
8.3.2
8.3.3
8.3.4
8.3.5
8.3.6
8.4
8.4.1
8.4.2
8.4.2
8.4.3
8.4.4
8.4.5
8.4.6
小时。
样品培养
将振荡培养箱中振荡培养6小时后的肉汤培养的大肠杆菌C3000、供试品
以及阴性和阳性对照血清放入生物安全柜。
点燃酒精灯。
取下肉汤培养的大肠杆菌C3000试管塞子，酒精灯上消毒管口。
用1ml吸管吸取1ml培养好的菌液加入8ml肉汤培养基中，再分别加2ml
供试品以及阴性和阳性对照血清，混匀，塞好塞子。
熄灭酒精灯。
将加样后的培养基置37℃振荡培养箱培养18小时。
点样。
把肉汤培养的菌液和新鲜的肉汤培养基放入生物安全柜内。
点燃酒精灯。
用1ml吸管分两次吸取2ml菌液加入到新鲜肉汤培养基中，盖好塞子，置
37℃摇床培养2小时。
再把培养2小时后的菌液和营养琼脂培养基平皿放入生物安全柜内。
用一次性注射器取2ml培养好的菌液铺在营养琼脂培养基平皿表面，吸去
多余液体，盖上盖子，置37℃1－2小时后点样。
把供试品菌液和制备好的培养皿放入生物安全柜内。
将经18小时培养的供试品菌液用0.45µm无菌滤器过滤后点样于培养皿中
资料整理
8.4.7
8.4.8
8.4.9
8.5
8.5.1
8.5.2
8.5.3
8.5.4
8.5.5
8.6
8.6.1
8.6.2
9.
9.1.
9.2.
9.3.
9.4
9.5
10.
10.1.
11.
熄灭酒精灯。
将点样后的培养皿置37℃培养箱培养6小时后观察结果。
清场。参见《QC清场管理程序》，填写清场记录。
增殖试验（当供试品为阳性做此项）
将经过培养的阳性供试品菌液和新鲜肉汤培养基放入超净台内。
取下试管塞，酒精灯上消毒管口。
用1ml的吸管分两次吸取经过培养的阳性供试品的菌液2ml，加入到8ml
新鲜肉汤培养基中，置37℃振荡培养箱振荡培养2小时。
将振荡培养2小时的阳性供试品的菌液进行点样，点样培养参见8.4。
清场。参见《QC清场管理程序》，填写清场记录。
试验结果评估
在阴性、阳性对照都成立的前提下，培养皿中供试品处无噬菌斑为阴性，
有噬菌斑为阳性。
当供试品呈阳性时，进行增殖试验。增殖试验为阳性判供试品为阳性，增
殖试验为阴性判供试品为阴性。
注意事项
严格按照GMP要求规范操作，以防止检定结果不成立。
注意不得混淆不同名称和批号供试品
使用的计量器具应经过计量校验
出现超标结果，应在试验记录中如实记录。
出现OOS情况，应及时报告主管。参见《质量检验超出标准调查分析程
序》，完成OOS记录。
附录及派生记录
大肠杆菌噬菌体检测记录F-SOP-ZL020-01
相关文件
资料整理
11.1.
11.2.
11.3.
11.4.
11.5.
11.6.
11.7.
12.
修订号
1
《振荡培养箱使用与维护程序》
《菌毒种细胞株管理程序》
《75%酒精棉配制程序》
《人员进出洁净厂房程序》
《生物安全柜使用及维护程序》
《QC清场管理程序》
《质量检验超出标准调查分析程序》
修订记录
修改内容
引用标准修改为《中国药典》2015版四部
生效日期
2015年12月1日