2024年2月24日发(作者：淡萦怀)

过氧化氢和超氧阴离子染色（DAB/NBT染色）

1. 取样，用打孔器选择叶片深绿，长势较好的叶片打孔，避免接触主次叶脉，叶片的中上部位最佳，取10个叶圆片于培养板内。

2. 暗中加入2ml DAB（NBT）/孔，盖盖，用锡箔纸包好（避光）28℃，6h（1h）。

3. 90%乙醇70 ℃沸水浴脱色。

4. 保存在50%甘油中。

5. 400倍放大观察H2O2（O2.-）的含量及位置。（BX61，奥林巴斯）

DAB溶液配置：

1 mg/mL 二甲基联苯胺DAB反应液中（pH 5.5，50 mM Tris-HCl）现配现用。

1.97gTris-HCl定容到250ml用HCl调至5.5+0.25gDAB

NBT溶液配置：

0.5 mg/mL氮蓝四磋NBT反应液中（pH 7.8，50 mM磷酸缓冲液）现配现用。

PPS缓冲液，A 91.5ml+B 8.5ml稀释到400ml+2gNBT

参考文章

2024年2月24日发(作者：淡萦怀)

过氧化氢和超氧阴离子染色（DAB/NBT染色）

1. 取样，用打孔器选择叶片深绿，长势较好的叶片打孔，避免接触主次叶脉，叶片的中上部位最佳，取10个叶圆片于培养板内。

2. 暗中加入2ml DAB（NBT）/孔，盖盖，用锡箔纸包好（避光）28℃，6h（1h）。

3. 90%乙醇70 ℃沸水浴脱色。

4. 保存在50%甘油中。

5. 400倍放大观察H2O2（O2.-）的含量及位置。（BX61，奥林巴斯）

DAB溶液配置：

1 mg/mL 二甲基联苯胺DAB反应液中（pH 5.5，50 mM Tris-HCl）现配现用。

1.97gTris-HCl定容到250ml用HCl调至5.5+0.25gDAB

NBT溶液配置：

0.5 mg/mL氮蓝四磋NBT反应液中（pH 7.8，50 mM磷酸缓冲液）现配现用。

PPS缓冲液，A 91.5ml+B 8.5ml稀释到400ml+2gNBT

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