2024年3月10日发(作者：侨宏达)
pUCm-T载体
产品编号 产品名称 包装
D2006 pUCm-T载体 20次
产品简介：
¾
¾
pUCm-T载体(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片断的重组克隆。
很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经
线性化的载体，载体每条链的3’端带有一个突出的T。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT
配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片断的重组载体。
pUCm-T载体的图谱如下： ¾
¾ pUCm-T载体的多克隆位点的详细图谱如下：
M13/pUC Sequencing Primer(-20) EcoR I Sac I Kpn I T7 Transcription Start Nde I
T7 Promoter
5’-G TTG TAA AAC GAC GGC CAG TGA ATT CGA GCT CGG TAC CGT AAT ACG ACT CAC TAT AGG GCG ACA TAT GAT
3’-C AAC ATT TTG CTG CCG GTC ACT TAA GCT CGA GCC ATG GCA TTA TGC TGA GTG ATA TCC CGC TGT ATA CTA
A
PCRProducts
Cla I EcoR V Nco I Not I Pst I
A
Bgl II BamH I Xho I
CGA TGA TAT CCC ATG GGC GGC CGC CTG CAG ACC AGG TCT AGA CTG GAG ATC TGG ATC CCT CGA GTC
GCT ACT ATA GGG TAC CCG CCG GCG GAC GTC TGG TCC AG T TCT GAC CTC TAG ACC TAG GGA GCT CAG
Xba I Sal I Pst I Pae I Hind III
TAG AGT CGA CCT GCA GGC ATG CAA GCT TGG CGT AAT CAT GGT CAT AGC TGT TTC CTG -3’
ATC TCA GCT GGA CGT CCG TAC GTT CGA ACC GCA TTA GTA CCA GTA TCG ACA AAG GAC -5’
Lac Z M13/pUC Reverse Primer (-26)
¾ pUCm-T载体中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pUCm-T vector)包括：
AcaI, AccIII, AceII, Afa24RI, AgeI, AmaI, AosIII, ApaI, ApeI, AscI, Asp78I, AtuCI, AvaIII, AvrII, BaeI, BalI, Bbf7411I, BbsI, BclI,
Bco102II, BfrBI, BlpI, BmgI, BplI, Bpu10I, Bpu1268I, BsaAI, BsaFI, BsaKI, BsaMI, BscEI, BscJI, Bse59I, BseRI, BsgI, BsiWI, BsmFI,
BsmGI, Bsp120I, Bsp87I, BspGI, BspLU11III, BsrGI, BssHII, Bst1107I, Bst29I, Bst98I, BstEII, BstXI, Bsu36I, CfrAI, CspI, Csp45I,
DraIII, DrdII, EciAI, EciEI, Eco47III, Eco72I, EcoAI, EcoBI, EcoDI, EcoDXXI, EcoDR3, EcoEI, EcoNI, EcoR124I, EcoR124II,
EcoRD3, FinI, FseI, HpaI, MluI, Mlu1106I, Mlu113I, Msp20I, MunI, NaeI, NgoMI, NheI, NruI, NsiI, PacI, PauI, PfuI, PmeI, Ppu10I,
Ppu6I, PpuMI, PshAI, RleAI, SacII, SanDI, SfiI, SgfI, SgrAI, SmaI, SnaI, SnaBI, SpeI, SrfI, Sse8647I, StuI, StySQ, SwaI, Uba1220I,
Uba1221I, Uba1382I, UbaDI, Van91I, XmaI。
¾ pUCm-T载体中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pUCm-T vector once)包括：
497AacI, 2708AatII, 517AccI, 408Acc65I, 503AcrI, 515Acs1371I, 893AflIII, 2263AflIV, 503AhyAI, 1309AlwNI, 186ApaBI, 396ApoI,
443Apu16I, 533Asp52I, 527Asp5HI, 455AteI, 504AvaI, 498BamHI, 406BanII, 239BbeI, 234BbeAI, 534BbrI, 2291BcgI, 2325BcgI,
492Bco63I, 492BglII, 1852Bli49I, 1847BsaI, 756BsaXI, 497BsaBI, 117BsbI, 449BshLI, 462BsoDI, 401Bsp117I, 407BspJ106I,
893BspLU11I, 529BspMI, 455Bst224I, 1866Cfr10I, 515ChuII, 445ClaI, 456DsaI, 515DsaVI, 401Ecl137I, 1786EclHKI, 463Eco52I,
395Eco82I, 397EcoDR2, 404EcoICRI, 2443EcoKI, 2762EcoO109I, 396EcoRI, 452EcoRV, 541EcoprrI, 237EheI, 50Esp16I, 45Esp3I,
474FsuI, 518HincII, 534HindIII, 235KasI, 412KpnI, 236NarI, 456NcoI, 508Nli387/7I, 463NotI, 1801Pfl1108I, 2703Ppu1253I, 2765PssI,
406SacI, 516SalI, 777SapI, 2266ScaI, 506SciI, 476SexAI, 532SphI, 526Sse8387I, 2590SspI, 456StyI, 158StySJ, 2443StySPI, 2380SynII,
478Tth111I, 1490Tth111II, 2760Uba1326, 510XbaI, 484XcmI, 504XhoI, 2385XmnI。
¾
¾
¾
¾
¾
¾
pUCm-T载体是在pUC19载体的基础上改造而成，除多克隆位点外，其余序列同pUC19(GenBank Accession Number
M77789)。
少量自连的载体产生的克隆会由于编码了LacZ基因，在IPTG/X-Gal平板上呈现蓝色克隆。大部分重组的载体，由于插入
片断破坏了LacZ基因，因而在IPTG/X-Gal平板上呈现白色克隆。这样就可以通过蓝白斑非常容易地筛选出重组克隆。
对于重组的质粒可以使用载体多克隆位点上的两个PstI酶切位点进行PstI单酶切鉴定，也可以使用廉价且高效的EcoRI、
BamHI、XbaI、HindIII等内切酶进行双酶切鉴定。
构建完成的质粒可以通过质粒上的正反两个M13引物位点进行测序或通过T7 promoter上的T7引物位点进行测序。
构建完成的质粒可以利用T7 RNA polymerase promoter进行体外转录，用于探针标记等。
一个包装的本载体共可以进行20次连接反应。
包装清单：
产品编号 产品名称 包装
D2006 pUCm-T载体
20µl
—
说明书
1份
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
¾
¾
¾
1.
DNA聚合酶是否可以在PCR产物3’端加A需参考该DNA聚合酶的说明。对于PCR产物为平端的情况，不适合用于T载体的
连接反应。对于平端的PCR产物可以先进行在3’端加A的反应，再用T载体进行克隆。
进行PCR产物克隆时需自备连接、转化等相关试剂、试剂盒。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
PCR产物的纯化：
PCR产物可以通过PCR纯化试剂盒或凝胶回收试剂盒(例如碧云天生产的D0033 PCR纯化试剂盒或D0056 DNA凝胶回收试
剂盒)进行PCR产物纯化。对于PCR产物条带不是非常单一的情况，宜采用电泳后DNA凝胶回收的纯化方法，这样可以去
除PCR扩增出来的非特异性条带的干扰。
连接反应：
对于常规的DNA ligase连接反应，请参考下面的连接反应体系，或按DNA ligase的说明书进行操作。每个连接反应使用1
微升pUCm-T载体，约0.2pmol PCR产物，在20微升连接体系中16℃连接过夜。
Sterilized Water ?µl
T4 DNA Ligase Buffer (10X) 2µl
Purified PCR Product ??µl
pUCm-T Vector 1µl
T4 DNA Ligase (5-10U/µl) 1µl
总体积 20µl
对于一些快速连接试剂盒，请参考相应说明书进行连接反应。pUCm-T 载体的用量还是为1微升，PCR产物的推荐用量约
为0.2pmol。实际做连接反应时对PCR产物的使用量没有必要严格定量，根据PCR产物的亮度大致加入适当量的PCR产物
进行连接反应即可获得比较理想的连接效果。连接反应中使用的水尽量使用Milli-Q级纯水，或使用双蒸水或三蒸水。
转化和筛选阳性克隆：
按照常规方法进行转化和蓝白斑筛选。转化可以采用碧云天生产的D0302 超级感受态细菌制备试剂盒。蓝白斑筛选所需
的IPTG (ST098)和X-Gal (ST912)可以向碧云天购买。对于白斑可以进行酶切鉴定，通常酶切鉴定正确后可以进行测序鉴
定。
使用说明：
2.
3.
2024年3月10日发(作者：侨宏达)
pUCm-T载体
产品编号 产品名称 包装
D2006 pUCm-T载体 20次
产品简介：
¾
¾
pUCm-T载体(pUCm-T Vector)是用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。可以通过蓝白斑筛选有插入片断的重组克隆。
很多DNA聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。pUCm-T载体是一种已经
线性化的载体，载体每条链的3’端带有一个突出的T。这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT
配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片断的重组载体。
pUCm-T载体的图谱如下： ¾
¾ pUCm-T载体的多克隆位点的详细图谱如下：
M13/pUC Sequencing Primer(-20) EcoR I Sac I Kpn I T7 Transcription Start Nde I
T7 Promoter
5’-G TTG TAA AAC GAC GGC CAG TGA ATT CGA GCT CGG TAC CGT AAT ACG ACT CAC TAT AGG GCG ACA TAT GAT
3’-C AAC ATT TTG CTG CCG GTC ACT TAA GCT CGA GCC ATG GCA TTA TGC TGA GTG ATA TCC CGC TGT ATA CTA
A
PCRProducts
Cla I EcoR V Nco I Not I Pst I
A
Bgl II BamH I Xho I
CGA TGA TAT CCC ATG GGC GGC CGC CTG CAG ACC AGG TCT AGA CTG GAG ATC TGG ATC CCT CGA GTC
GCT ACT ATA GGG TAC CCG CCG GCG GAC GTC TGG TCC AG T TCT GAC CTC TAG ACC TAG GGA GCT CAG
Xba I Sal I Pst I Pae I Hind III
TAG AGT CGA CCT GCA GGC ATG CAA GCT TGG CGT AAT CAT GGT CAT AGC TGT TTC CTG -3’
ATC TCA GCT GGA CGT CCG TAC GTT CGA ACC GCA TTA GTA CCA GTA TCG ACA AAG GAC -5’
Lac Z M13/pUC Reverse Primer (-26)
¾ pUCm-T载体中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pUCm-T vector)包括：
AcaI, AccIII, AceII, Afa24RI, AgeI, AmaI, AosIII, ApaI, ApeI, AscI, Asp78I, AtuCI, AvaIII, AvrII, BaeI, BalI, Bbf7411I, BbsI, BclI,
Bco102II, BfrBI, BlpI, BmgI, BplI, Bpu10I, Bpu1268I, BsaAI, BsaFI, BsaKI, BsaMI, BscEI, BscJI, Bse59I, BseRI, BsgI, BsiWI, BsmFI,
BsmGI, Bsp120I, Bsp87I, BspGI, BspLU11III, BsrGI, BssHII, Bst1107I, Bst29I, Bst98I, BstEII, BstXI, Bsu36I, CfrAI, CspI, Csp45I,
DraIII, DrdII, EciAI, EciEI, Eco47III, Eco72I, EcoAI, EcoBI, EcoDI, EcoDXXI, EcoDR3, EcoEI, EcoNI, EcoR124I, EcoR124II,
EcoRD3, FinI, FseI, HpaI, MluI, Mlu1106I, Mlu113I, Msp20I, MunI, NaeI, NgoMI, NheI, NruI, NsiI, PacI, PauI, PfuI, PmeI, Ppu10I,
Ppu6I, PpuMI, PshAI, RleAI, SacII, SanDI, SfiI, SgfI, SgrAI, SmaI, SnaI, SnaBI, SpeI, SrfI, Sse8647I, StuI, StySQ, SwaI, Uba1220I,
Uba1221I, Uba1382I, UbaDI, Van91I, XmaI。
¾ pUCm-T载体中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pUCm-T vector once)包括：
497AacI, 2708AatII, 517AccI, 408Acc65I, 503AcrI, 515Acs1371I, 893AflIII, 2263AflIV, 503AhyAI, 1309AlwNI, 186ApaBI, 396ApoI,
443Apu16I, 533Asp52I, 527Asp5HI, 455AteI, 504AvaI, 498BamHI, 406BanII, 239BbeI, 234BbeAI, 534BbrI, 2291BcgI, 2325BcgI,
492Bco63I, 492BglII, 1852Bli49I, 1847BsaI, 756BsaXI, 497BsaBI, 117BsbI, 449BshLI, 462BsoDI, 401Bsp117I, 407BspJ106I,
893BspLU11I, 529BspMI, 455Bst224I, 1866Cfr10I, 515ChuII, 445ClaI, 456DsaI, 515DsaVI, 401Ecl137I, 1786EclHKI, 463Eco52I,
395Eco82I, 397EcoDR2, 404EcoICRI, 2443EcoKI, 2762EcoO109I, 396EcoRI, 452EcoRV, 541EcoprrI, 237EheI, 50Esp16I, 45Esp3I,
474FsuI, 518HincII, 534HindIII, 235KasI, 412KpnI, 236NarI, 456NcoI, 508Nli387/7I, 463NotI, 1801Pfl1108I, 2703Ppu1253I, 2765PssI,
406SacI, 516SalI, 777SapI, 2266ScaI, 506SciI, 476SexAI, 532SphI, 526Sse8387I, 2590SspI, 456StyI, 158StySJ, 2443StySPI, 2380SynII,
478Tth111I, 1490Tth111II, 2760Uba1326, 510XbaI, 484XcmI, 504XhoI, 2385XmnI。
¾
¾
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pUCm-T载体是在pUC19载体的基础上改造而成，除多克隆位点外，其余序列同pUC19(GenBank Accession Number
M77789)。
少量自连的载体产生的克隆会由于编码了LacZ基因，在IPTG/X-Gal平板上呈现蓝色克隆。大部分重组的载体，由于插入
片断破坏了LacZ基因，因而在IPTG/X-Gal平板上呈现白色克隆。这样就可以通过蓝白斑非常容易地筛选出重组克隆。
对于重组的质粒可以使用载体多克隆位点上的两个PstI酶切位点进行PstI单酶切鉴定，也可以使用廉价且高效的EcoRI、
BamHI、XbaI、HindIII等内切酶进行双酶切鉴定。
构建完成的质粒可以通过质粒上的正反两个M13引物位点进行测序或通过T7 promoter上的T7引物位点进行测序。
构建完成的质粒可以利用T7 RNA polymerase promoter进行体外转录，用于探针标记等。
一个包装的本载体共可以进行20次连接反应。
包装清单：
产品编号 产品名称 包装
D2006 pUCm-T载体
20µl
—
说明书
1份
保存条件：
-20℃保存。
注意事项：
¾
¾
¾
1.
DNA聚合酶是否可以在PCR产物3’端加A需参考该DNA聚合酶的说明。对于PCR产物为平端的情况，不适合用于T载体的
连接反应。对于平端的PCR产物可以先进行在3’端加A的反应，再用T载体进行克隆。
进行PCR产物克隆时需自备连接、转化等相关试剂、试剂盒。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
PCR产物的纯化：
PCR产物可以通过PCR纯化试剂盒或凝胶回收试剂盒(例如碧云天生产的D0033 PCR纯化试剂盒或D0056 DNA凝胶回收试
剂盒)进行PCR产物纯化。对于PCR产物条带不是非常单一的情况，宜采用电泳后DNA凝胶回收的纯化方法，这样可以去
除PCR扩增出来的非特异性条带的干扰。
连接反应：
对于常规的DNA ligase连接反应，请参考下面的连接反应体系，或按DNA ligase的说明书进行操作。每个连接反应使用1
微升pUCm-T载体，约0.2pmol PCR产物，在20微升连接体系中16℃连接过夜。
Sterilized Water ?µl
T4 DNA Ligase Buffer (10X) 2µl
Purified PCR Product ??µl
pUCm-T Vector 1µl
T4 DNA Ligase (5-10U/µl) 1µl
总体积 20µl
对于一些快速连接试剂盒，请参考相应说明书进行连接反应。pUCm-T 载体的用量还是为1微升，PCR产物的推荐用量约
为0.2pmol。实际做连接反应时对PCR产物的使用量没有必要严格定量，根据PCR产物的亮度大致加入适当量的PCR产物
进行连接反应即可获得比较理想的连接效果。连接反应中使用的水尽量使用Milli-Q级纯水，或使用双蒸水或三蒸水。
转化和筛选阳性克隆：
按照常规方法进行转化和蓝白斑筛选。转化可以采用碧云天生产的D0302 超级感受态细菌制备试剂盒。蓝白斑筛选所需
的IPTG (ST098)和X-Gal (ST912)可以向碧云天购买。对于白斑可以进行酶切鉴定，通常酶切鉴定正确后可以进行测序鉴
定。
使用说明：
2.
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