2024年3月10日发(作者：蒋幻丝)
国际检验医学杂志２０１３年ｌ１月第３４卷第２２期Ｉｎｔ Ｊ ＬａｂＭｅｄ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１３，Ｖｏ１．３４，Ｎｏ．２２
・
２９９７ ・
・
临床检验研究论著・
新疆９９８例羊水细胞染色体非整倍性的荧光原位杂交分析
桂俊豪 ，刘鸿春 ，周 瑾 ，涂泽荣 ，伏建峰 ，余伍忠
（兰州军区乌鲁木齐总医院：１．全军临床检验诊断中心；２．妇产科，新疆乌鲁木齐８３００００）
摘 要：目的 探讨荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）技术用于产前诊断胎儿非整倍体的价值。方法 对９９８例未经培养的羊水细胞
进行ＦＩＳＨ检测，荧光显微镜下观察、判读杂交信号，以脐静脉细胞染色体核型分析结果作为对照。结果 在９９８例羊水细胞样
本中，累计检出２１一三体综合征８例，１８一三体综合征３例，Ｔｕｒｎｅｒ综合征１例，克氏综合征２例，１３－单体、２１一单体和１８一单体胎儿各
１例。ＦＩＳＨ结果与羊水细胞或脐静脉细胞染色体核型分析结果一致。结论
要意义。
ＦＩＳＨ技术对于染色体数目异常的临床诊断具有重
关键词：荧光原位杂交； 羊水细胞； 非整倍染色体
ＤｏＩ：１０．３９６９ ｉｓｓｎ．１６７３～４１３０．２０１３．２２．０２４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—４１３Ｏ（２０１３）２２－２９９７—０２
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｉｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ９９８ ａｍｎｉｏｔｉｃ ｆｌｕｉｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｉｎ Ｘｉ ｉａｎｇ
Ｇｕｉ Ｊｕｎｈａｏ ，Ｌｉｕ Ｈｏｎｇｃｈｕｎ ，Ｚｈｏｕ Ｊｉｎ ，Ｔｕ Ｚｅｒｏｎｇ ，Ｆｕ Ｊｉａｎｆｅｎｇ ，Ｙｕ Ｗｕｚｈｏｎｇ
（１．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ ＰＬＡ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ，
Ｕｒｕｍｑｉ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ ＰＬＡ，Ｌａｎｚｈｏｕ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｃｏｍｍａｎｄ，Ｕｒｕｍｑｉ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ ８３００００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｕｓｉｎｇ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（ＦＩＳＨ）ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ｐｒｅｎａｔａｌ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｉｎ ａｍｎｉｏｔｉｃ ｆｌｕｉｄ ｓａｍｐｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ９９８ ａｍｎｉｏｔｉｃ ｆｌｕｉｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ
ＦＩＳＨ．Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｉｇｎａｌｓ．Ａｓ ｅｏｎｔｒｏｌ，ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｖｅｉｎ ｂｌｏｏｄ ｅｅｌｌ ｏｒ ａｍｎｉ
ｏｔｉｃ ｃｅｌｌ ｗａｓ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｋａｒｙｏｔｙｐｉｎｇ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎ ｃｏｎｃｏｒｄａｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｋａｒｙｏｔｙｐｉｎｇ ａｎａｌｙｓｉｓ，８ ｃａ—
ｓｅｓ ｗｉｔｈ ｔｒｉｓｏｍｙ ２１，３ ｃａｓｅｓ ｗｉｔｈ ｔｒｉｓｏｍｙ １８，１ ｃａｓｅ ｗｉｔｈ ４５，ＸＯ，ａｎｄ ２ ｃａｓｅｓ ｗｉｔｈ ４７，ＸＸＹ ｗｅｒｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ＦＩＳＨ ｉｎ
ｔｈｅ ９９８ ａｍｎｉｏｔｉｃ ｆｌｕｉｄ ｓａｍｐｌｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＦＩＳＨ ｐｌａｙｓ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ａｃｃｕｒａｔｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｍｏｎ ｅｈｒｏｍｏｓｏｍ—
ａｌ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｉｅｓ ｏｆ ｆｅｔｕｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ； ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ；ｐｒｅｎａｔａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ
荧光原位杂交技术（ＦＩＳＨ）通过荧光标记的ＤＮＡ探针与
待检染色体上的互补序列进行杂交，根据杂交信号的有无及类
型诊断染色体病，是遗传病及染色体病诊断的重要辅助手
段 ｊ。本文应用ＦＩＳＨ技术对本地９９８例符合产前遗传学诊
断指征的孕妇实施羊水细胞ＦＩＳＨ检测，探讨ＦＩＳＨ技术用于
１．３．１ ＦＩＳＨ检测 ＦＩＳＨ步骤ＦＩｓＨ操作按照前文所述的
本室常规进行 ～］：（１）标本处理。取４～５ ｍＬ羊水，１ ５００ ｒ／
ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，弃上清，留细胞沉淀。加５ ｍＬ预温的胶原酶
Ｂ，３７℃水浴４０ ｍｉｎ，期间吹打４次以充分消化。１ ５００ ｒ／ｍｉｎ
离心１０ ｍｉｎ，弃上清，留细胞沉淀，加０．０７５ ｍｏｌ／Ｌ的ＫＣＩ低渗
胎儿染色体非整倍性诊断的价值。
１资料与方法
２０ ｍｉｎ。固定液预固定１次，再固定２次。调整悬浮细胞浓度
后滴片，置５６℃恒温箱老化３０ ｍｉｎ。（２）玻片预处理。于２×
ＳＳＣ（标准柠檬酸盐）溶液中漂洗２次后，置３７℃预温的胃蛋
自酶溶液中消化ｉ０ ｍｉｎ，再于２×ＳＳＣ溶液中漂洗两次，１ 甲
醛处理１０ ｍｉｎ。依次置于预冷的７０ 乙醇、８５ 乙醇、１００
乙醇中各３ ｍｉｎ进行梯度脱水，暗处自然干燥玻片。（３）样本
变性、杂交和洗脱。玻片在７Ｏ 甲酰胺一２×ＳＳＣ变性液中于
７８℃变性６ ｍｉｎ，依次置７Ｏ 、８５ 和１００ （一２０℃预冷）乙
醇中梯度脱水，自然干燥。避光条件下制备探针混合物（７“Ｌ
杂交缓冲液＋１ Ｌ去离子水＋２ Ｌ探针），置７８℃变性５
ａｉｒｎ。滴加探针混合物于玻片细胞区，盖上盖玻片、封片，水平
１．１ 一般资料２００９年１２月至２０１３年６月自本院优生优育
门诊纳入符合产前遗传学诊断的孕妇共计９９８例，平均孕周为
１９．０周（１７～２２ 周），平均年龄为３１．７岁（２６～４３岁）。ｊ 中
年龄在３５岁及以上的孕妇８６例，唐氏综合征血清学筛查高风
险者８７６例，曾育２１一三体儿孕妇４例；超声检查发现胎儿异常
２４例；羊水过少或减少８例。所有孕妇均签署染色体病产前
诊断知情同意书。
１．２ 主要试剂 荧光标记的多色ＤＮＡ探针组（ＧＬＰ ２ｌ／
ＧＬＰ一１３、ＣＳＰ一１８／ＣＳＰ—Ｘ／ＣＳＰ—Ｙ）购自北京金菩嘉医疗科技有
限公司，依次靶向２１号、１３号、１８号、ｘ和Ｙ染色体２ｌｑ２２、
１３ｑ１４、１８ｐｌ１．１—１８ｑｌ１．１、Ｘｐｌ１．１－Ｘｑｌ１．１和Ｙｐｌ１．１－Ｙｑｌ１．１
置湿盒内，４２。Ｃ保温箱过夜杂交。移去盖玻片，玻片置６７℃
预温的０．３ ＮＰ一４０／０．４×ＳＳＣ液处理２ ｍｉｎ，０．１ ＮＰ一４０／０．
的特定区域。其中针对２１号和１３号染色体的ＧＩ Ｐ一２１／ＧＬＰ一
１３探针为位点特异探针，分别用Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ（红色）和ＦＩＴＣ
（绿色）标记。针对１８号、ｘ和Ｙ染色体的ＣＳＰ－１８／ＣＳＦ ｘ／
４×ＳＳＣ液处理３０ ｓ，最后７Ｏ 乙醇浸泡３ ｒａｉｎ，暗处自然干
燥。于细胞区滴加ＤＡＰＩ １５ Ｌ复染，盖上盖玻片置暗处１Ｏ～
２０ ｒａｉｎ后待检。（４）信号判读。应用ＥＣＬＩＰＳＥ ８０ｉ型荧光显
微镜（Ｎｉｋｏｎ）观察各通道信号，ＶｉｄｅｏＴｅｓｔ ＦＩＳＨ ２．０软件分析
图像。每例样本随机计数至少５Ｏ个细胞，≥９ｏ 细胞正常提
示为正常样本，≥６Ｏ 细胞异常提示为异常样本，必要时扩大
通讯作者，Ｅ—ｍａｉｌ：ｙｕｗｚ２０１３＠１２６．ｃｏｒｎ。
ＣＳＰ Ｙ探针为染色体着丝粒特异性重复序列探针，分别用ＤＥ—
ＡＣ（蓝色）、ＦＩＴＣ和Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ标记。
１．３方法
作者简介：桂俊豪，男，主管技师，主要从事遗传病、染色体病的产前实验室诊断研究。
－
２９９８・ 国际检验医学杂志２０１３年ｌ１月第３４卷第２２期Ｉｍ ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１３，Ｖｄ．３４，Ｎｏ．２２
计数至１。（）个细胞。
１．３．２羊水细胞、脐静脉血细胞培养及染色体核型分析 羊
三体综合征３例、Ｔｕｒｎｅｒ综合征ｌ例、克氏综合征２例，１３一单
体、２１一单体和１８单体各１例，见图１（见《国际检验医学杂志》
网站主页“论文附件”），５种常见染色体非整倍性的总体检出
率为１．７ ，其中２１一三体综合征的检出率为０．８ 。本研究
中，凡是羊水细胞ＦＩｓＨ杂交信号异常者均同时行羊水细胞或
脐静脉细胞染色体核型分析。经核实，ＦＩＳＨ结果与羊水细胞
或脐静脉细胞染色体核型分析结果一致，二者符合率为
１Ｏ０ ，见表１。
水细胞、脐静脉血细胞培养及Ｇ带染色体制备按本室常规进
行，参照１ＳＣＮ ２００５标准进行核型分析。
２结 果
采用ＦＩＳＨ技术对羊水细胞中的目标染色体进行杂交，荧
光显微镜观察显示羊水细胞核内红、绿、蓝三色杂交信号明确。
在９９８例羊水细胞标本中，累计检出２１－三体综合征８例、１８一
表１ １７例ＦＩＳＨ杂交信号异常孕妇的临床特征及检测结果
３讨 论
确认１例无创基因检测高风险胎儿。
总之，本文基于唐氏筛查高危、超声信号异常等产前诊断
指针，采用ＦＩＳＨ技术对新疆９９８例羊水细胞５种染色体非整
倍性实施有效检测，及时避免了染色体非整倍性患儿出生，为
降低本地区新生儿出生缺陷率发挥了积极作用。
参考文献
［１］ Ｃａｉｎｅ Ａ，Ｍａｈｂｙ ＡＥ，Ｐａｒｋｉｎ ＣＡ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｎａｔａｌ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
Ｄｏｗｎ ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｂｙ ｒａｐｉｄ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｆｏｒ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ
１３，１８，ａｎｄ ２１ ｂｙ ＦＩＳＨ ｏｒ ＰＣＲ ｗｉｔｈｏｕｔ ａ ｆｕｌｌ ｋａｒｙｏｔｙｐｅ：ａ ｃｙｔｏ
大量研究表明，２１、１３、１８、Ｘ或Ｙ染色体非整倍性约占新
生活婴染色体病的８ｏ ～９５ 。国内外研究显示，染色体非
整倍性的发生源于配子形成过程中同源染色体不分离或姊妹
染色单体不分离或丢失，也可起源于受精卵早期卵裂过程中发
生染色体小分离或丢失…。
从检测技术上看，细胞培养及核型分析是准确检出染色体
非整倍性、发现常见染色体结构异常的金标准。然而，羊水细
胞培养及核型分析所需周期长，技术要求高，检测成功率很难
确保１（１（ｊ ‘。欧美发达国家已经将ＦＩＳＨ技术常规性应用于
产前诊断 。本研究引进多色ＦＩＳＨ技术，对本地区９９８例胎
ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｉｓｋ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔＥＪ］．Ｉ ａｎｅｅｔ，２００５，３６６（９４８０）：１２３ １２８．
儿成功实施了５种染色体非整倍体检测。结果表明，ＦＩＳＨ信
号明晰。结果判读直观，累计检出２１一ｉ体综合征８例、１８一三体
综合征３例、 ｌ＇ｕｒｎｅｒ综合征Ｉ例、克氏综合征２例，１３单体、
［２］桂俊豪，刘鸿春，王瑞，等．多色荧光原位杂交用于胎儿常见非整
倍体的快速产前诊断［Ｊ］．现代检验医学杂志，２０１ｌ，２６（６）：７６—７９．
Ｅ３３刘鸿春，王瑞，黄国香，等．新疆地区荧光原位杂交产前诊断非整
倍体的应用价值［Ｊ］．中国优生与遗传杂志，２０１０，１８（１２）：４２ ４３．
Ｅ４］夏家辉．医学遗传学［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２００４：１６１－１６２．
Ｅｑ Ｗｅｉｓｅ Ａ，Ｌｉｅｈｒ Ｔ．Ｒａｐｉｄ ｐｒｅｎａｔａｌ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓ
ｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（ＦＩＳＨ）［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２００８，
４４４ １ ３９—４７．
２ｌ一单体和ｌ８单体胎儿各１例。经核实，ＦＩＳＨ检测结果与传
统核型分析符合率为１ ００ 。
本研究巾，唐氏综合征的检出率为０．８ ，位列染色体非
整倍性发生之首。随着孕妇外周血胎儿循环核酸测序、比较基
因组杂交等分子遗传学新技术的发展 ，唐氏综合征等染色
体病的产前诊断正朝着无创性、特异性和准确性更高的方向发
展，ＦＩＳＨ技术将成为产前筛查的有力工具。在本文中，成功
［６］魏平，李运星，曾兰，等．８９份羊水细胞的荧光原位杂交分析［ｊｌ＿．
中华医学遗传学杂志，２０ｌ３，３０（２）：２１４ ２ｌ６．
［７］Ｉ．ｅｃ｜ｅｒｅｑ Ｓ，Ｌｅｂｂａｒ Ａ，ＧｒａｎｇｅＧ，ｅｔ ａ１．Ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ（下转第３０００页）
・３０００・
国际检验医学杂志２０１３年１１月第３４卷第２２期ｌｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１３，Ｖｏ１．３４，Ｎｏ．２２
表２。
时，敏感性为８３．６ ，特异性为９Ｏ．８ ，与Ｃｉｄ等Ⅲ 报道的中
各组ＣＤ６４、ＷＢＣ、Ｎｅｕ 、ＣＲＰ检测结果比较 表１
性粒细胞ＣＤ６４表达用于诊断细菌感染的敏感性７９ ，特异性
９１ 一致。因此，以上数据显示，中性粒细胞ＣＤ６４能够较为
准确地显示感染的状态，特别在细菌性和非细菌性感染的鉴别
中有较高的特异性。
综上所述，中性粒细胞ＣＤ６４在感染性疾病的诊断和治疗
中具有重要作用，同时其敏感性和特异性也较ＷＢＣ、Ｎｅｕ 和
ＣＲＰ高。因此对感染的患者进行中性粒细胞ＣＤ６４检测，能够
正确判断和发现感染性疾病，以及在细菌性感染危重患者的预
表２ ＣＤ６４指数、ＣＲＰ、ＷＢＣ、Ｎｅｕ 的
敏感性和特异性比较
后和效果评价上具有重要的临床意义。
参考文献
［１］张晓微，赵丽，张羿，等．中性粒细胞ＣＤ６４检测对感染性疾病的
诊断价值分析厂Ｊ］．国际检验医学杂志，２０１２，３３（１ ９）：２３１５－２３１６．
Ｅ２］Ｔａｋａｉ Ｓ，Ｋａｓａｍａ Ｍ，Ｙａｍａｄａ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｈｕｍａｎ ｈｉｇｈ—ａｆｆｉｎｉｔｙ ＦｃｙＲ１
（ＣＤ６４）ｇｅｎｅ ｍａｐｐｅｄ ｔｏ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １ｑ２１．２－ｑ２１．３ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓ
ｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒ ｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ，１９９４，９３（１）：１３一ｌ５．
Ｅ３］李德红，居军．诊断感染性疾病的新指标：中性粒细胞ＣＤ６４ ＥＪ］．
检验医学，２０１２，２７（１）：６７—６９．
３讨 论
Ｅ４３ Ｏｋａｙａｍａ Ｙ，Ｋｉｒｓｈｅｎｂａｕｍ ＡＳ，Ｍｅｔｃａｌｆｅ ＤＤ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ ｆｕｎｃ
ｔｉｏｎａｌ ｈｉｇｈ—ａｆｆｉｎｉｔｙ ＩｇＧ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＦｃｙＲＩ，ｏｎ ｈｕｍａｎ ｍａｓｔ ｃｅｌｌｓ：ｕｐ
ＣＤ６４相对分子质量为７２ ０００，其编码定位于染色体
ｌｑ２１．２（１２ｌ＿３ｌ２，是ＩｇＧ Ｆｃ片段受体Ｉ（ＦｃＴＲ Ｉ），其能够识别
ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ＩＦＮ一 Ｊ］．ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０００，１ ６４（８）：４３３２—４３３９．
ｒ５］Ｐａｕｋｓｅｎｓ Ｋ，Ｆｊａｅｒｔｏｆｔ Ｇ，Ｄｏｕｈａｎ Ｈａｋａｎｓｓｏｎ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ
ａｎｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｕｎｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ ａｎｄ ｅｏｍｐｌｉｅａｔ
免疫球蛋白，对ＩｇＧ单体具有高亲和力，在介导体液免疫和细
胞免疫间起到桥梁作用，对感染性疾病具有早期诊断的价
值 】。正常情况下，ＣＤ６４主要分布于巨噬细胞、单核细胞及
树突状细胞等抗原递呈细胞（ＡＰＣ）表面，中性粒细胞表面
ＣＤ６４呈低水平表达，甚至几乎不表达，且表达无性别差异【 。
当患者患感染性疾病时，受炎症因子细菌细胞壁脂多糖、白细
胞介索】２、７一干扰素等刺激下，中性粒细胞表面ＣＤ６４表达在
４～６ ｈ内即可升高 。
ｅｄ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ￣Ｊ］．Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，
２００８．４０（４）：３２６—３３７．
［６］Ｅｌｇｈｅｔａｎｙ ＭＴ，Ｌａｃｏｍｂｅ Ｆ．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｉｃ
ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ａｇｅ，ｇｅｎｄｅｒ，ｐｒｅｇｎａｎｃｙ，ｒａｃｅ，
ａｎｄ ｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ，２００４，７５（２）：１５７ １６２．
［７］Ｈｏｆｆｍａｎｎ ＪＪ．Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ＣＩ）６４：ａ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ａｎｄ ｓｅｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ Ｉ ａｂ Ｍｅｄ，２００９，４７（８）：９０３—９１６．
［８］（）ｋａｙａｍａ Ｙ，Ｋｉｒｓｈｅｎｂａｕｍ ＡＳ，Ｍｅｔｃａｌｆｅ ＤＤ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｈｉｇｈ—ａｆｆｉｎｉｔｙ ＩｇＧ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｆｃ ｇａｍｍａ ＲＩ，ｏｎ ｈｕｍａｎ
随着流式细胞仪的普及和应用，外周血中性粒细胞ＣＤ６４
的表达 临床诊断和治疗细菌性感染中越来越多的得到应用。
近些 求， 内很多学者也开始展开对中性粒细胞ＣＤ６４进行
了相关研究。许文芳 等报道ＣＤ６４指数可作为诊断细菌感
染的敏感指标，是重症细菌性感染的诊断、判断病情的可靠指
标。Ｌｉｖａｄｉｔｉ等 研究发现，中性粒细胞ＣＤ６４的表达与细菌
感染的严重程度和预后具有密切相关，可依据中性粒细胞
ｍａｓｔ ｃｅｌｌｓ：ｕｐ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ＩＦＮ ｇａｍｍａ￣Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ。２０００，１６４
（８）：４３３２—４３３９．
［９］许文芳．ＣＤ６４、ＣＲＰ在重症细菌感染中的诊断价值［Ｊ］．检验医
学，２Ｏ１１，２６（２）：１２７ １２９．
［１Ｏ］Ｌｉｖａｄｉｔｉ Ｏ，Ｋｏｔａｎｉｄｏｕ Ａ，Ｐｓａｒｒａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ＣＤ６４ ｅｘｐｒｅｓ—
ｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ＩＬ ８：ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｅａｒｌｙ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｓｅｖｅｒｉｔｙ ａｎｄ ｏｕｔ
ＣＤ６４感染指数将病程划分为脓毒症、重症脓毒症和脓毒性休
克，同时还发现其 患者病死率呈正相关。
本研究通过对不同病原体感染情况分组分析发现，细菌感
ｃｏｍｅ ｉｎ ｓｅｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，２００６，３６（５／６）：２８３ ２９０．
［１ １］Ｃｉｄ Ｊ，Ａｇｕｉｎａｃｏ Ｒ，Ｓｄｎｃｈｅｚ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ＣＤ６４ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ａｓ ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ ｍｅｔａ—ａ
染组（Ａ＋Ｂ组）与非细菌感染组（Ｃ组）的ＣＤ６４指数比较，细
菌感染组ＣＤ６４指数明显高于非细菌感染组，Ｐ＜Ｏ．０５，组问具
ｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ，２０１０，６０（５）：３ｌ３－３１９．
（收稿日期：２０１３ ０５ １ ５）
有显著性差肄；细菌感染组的ＣＤ６４指数与ＷＢＣ、Ｎｅｕ 以及
ＣＲＰ比较 正相关，Ｐ均小于０．０５。且（ Ｉ）６４指数临界值取１
（上接第２９９８页）
ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｕｓｉｎｇ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｎａｔａｌ
［９］Ｌａｐｉｅｒｒｅ ＪＭ，Ｃａｃｈｅｕｘ Ｖ，Ｃｏｌｌｏｔ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｅｏｍｐａｒａ
ｌｉｖｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｋａｒｙｏｔｙｐｅ ａｎｄ ｃｌａｓｓｉ
ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｃｏｍＨｌｏｎ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｐｒｅｎａｔ Ｄｉａｇｎ，２００８，２８（４）：
３１ ３ ３１８．
ｃａｌ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｐｒｅｎａｔａｌ ａｎｄ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｄｉ
ａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｕｎｂａｌａｎｃｅｄ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｇｅｎｅｔ
ｌ９９８，４ｌ（３）：１３３一ｌ４Ｏ．
１ ８］ ｈｉｕ ＲＷ．Ｃｈａｎ Ｋ（、，Ｇａｏ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅ ｐｒｅｎａｔａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ
ｏｆ ｆｅｔａｌ ｃｈｒｏｎａｏｓｏｎｌａｌ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｂｙ ｍａｓｓｉｖｅｌｙ ｐａｒａｌｌｅｌ ｇｅｎｏｍｉｃ ｓｅ —
ｑｕｅｎｃｉｎｇ ｏｆ ＤＮＡ ｉｎ ｎｌａｔｅｒｎａｌ ｐｌａｓｍａ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ
Ａ，２００８，１ Ｏ５（５１）：２Ｏ４５８ ２０４６３．
（收稿日期；２０１３－０５ ２２）
2024年3月10日发(作者：蒋幻丝)
国际检验医学杂志２０１３年ｌ１月第３４卷第２２期Ｉｎｔ Ｊ ＬａｂＭｅｄ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１３，Ｖｏ１．３４，Ｎｏ．２２
・
２９９７ ・
・
临床检验研究论著・
新疆９９８例羊水细胞染色体非整倍性的荧光原位杂交分析
桂俊豪 ，刘鸿春 ，周 瑾 ，涂泽荣 ，伏建峰 ，余伍忠
（兰州军区乌鲁木齐总医院：１．全军临床检验诊断中心；２．妇产科，新疆乌鲁木齐８３００００）
摘 要：目的 探讨荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）技术用于产前诊断胎儿非整倍体的价值。方法 对９９８例未经培养的羊水细胞
进行ＦＩＳＨ检测，荧光显微镜下观察、判读杂交信号，以脐静脉细胞染色体核型分析结果作为对照。结果 在９９８例羊水细胞样
本中，累计检出２１一三体综合征８例，１８一三体综合征３例，Ｔｕｒｎｅｒ综合征１例，克氏综合征２例，１３－单体、２１一单体和１８一单体胎儿各
１例。ＦＩＳＨ结果与羊水细胞或脐静脉细胞染色体核型分析结果一致。结论
要意义。
ＦＩＳＨ技术对于染色体数目异常的临床诊断具有重
关键词：荧光原位杂交； 羊水细胞； 非整倍染色体
ＤｏＩ：１０．３９６９ ｉｓｓｎ．１６７３～４１３０．２０１３．２２．０２４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—４１３Ｏ（２０１３）２２－２９９７—０２
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｉｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ９９８ ａｍｎｉｏｔｉｃ ｆｌｕｉｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｉｎ Ｘｉ ｉａｎｇ
Ｇｕｉ Ｊｕｎｈａｏ ，Ｌｉｕ Ｈｏｎｇｃｈｕｎ ，Ｚｈｏｕ Ｊｉｎ ，Ｔｕ Ｚｅｒｏｎｇ ，Ｆｕ Ｊｉａｎｆｅｎｇ ，Ｙｕ Ｗｕｚｈｏｎｇ
（１．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ ＰＬＡ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ，
Ｕｒｕｍｑｉ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ ＰＬＡ，Ｌａｎｚｈｏｕ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｃｏｍｍａｎｄ，Ｕｒｕｍｑｉ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ ８３００００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｕｓｉｎｇ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（ＦＩＳＨ）ｆｏｒ ｒａｐｉｄ ｐｒｅｎａｔａｌ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｉｎ ａｍｎｉｏｔｉｃ ｆｌｕｉｄ ｓａｍｐｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ９９８ ａｍｎｉｏｔｉｃ ｆｌｕｉｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ
ＦＩＳＨ．Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｓｉｇｎａｌｓ．Ａｓ ｅｏｎｔｒｏｌ，ｕｍｂｉｌｉｃａｌ ｖｅｉｎ ｂｌｏｏｄ ｅｅｌｌ ｏｒ ａｍｎｉ
ｏｔｉｃ ｃｅｌｌ ｗａｓ ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ ｔｏ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｋａｒｙｏｔｙｐｉｎｇ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎ ｃｏｎｃｏｒｄａｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｋａｒｙｏｔｙｐｉｎｇ ａｎａｌｙｓｉｓ，８ ｃａ—
ｓｅｓ ｗｉｔｈ ｔｒｉｓｏｍｙ ２１，３ ｃａｓｅｓ ｗｉｔｈ ｔｒｉｓｏｍｙ １８，１ ｃａｓｅ ｗｉｔｈ ４５，ＸＯ，ａｎｄ ２ ｃａｓｅｓ ｗｉｔｈ ４７，ＸＸＹ ｗｅｒｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ＦＩＳＨ ｉｎ
ｔｈｅ ９９８ ａｍｎｉｏｔｉｃ ｆｌｕｉｄ ｓａｍｐｌｅｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＦＩＳＨ ｐｌａｙｓ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ａｃｃｕｒａｔｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｍｏｎ ｅｈｒｏｍｏｓｏｍ—
ａｌ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｉｅｓ ｏｆ ｆｅｔｕｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ； ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ；ｐｒｅｎａｔａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ
荧光原位杂交技术（ＦＩＳＨ）通过荧光标记的ＤＮＡ探针与
待检染色体上的互补序列进行杂交，根据杂交信号的有无及类
型诊断染色体病，是遗传病及染色体病诊断的重要辅助手
段 ｊ。本文应用ＦＩＳＨ技术对本地９９８例符合产前遗传学诊
断指征的孕妇实施羊水细胞ＦＩＳＨ检测，探讨ＦＩＳＨ技术用于
１．３．１ ＦＩＳＨ检测 ＦＩＳＨ步骤ＦＩｓＨ操作按照前文所述的
本室常规进行 ～］：（１）标本处理。取４～５ ｍＬ羊水，１ ５００ ｒ／
ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，弃上清，留细胞沉淀。加５ ｍＬ预温的胶原酶
Ｂ，３７℃水浴４０ ｍｉｎ，期间吹打４次以充分消化。１ ５００ ｒ／ｍｉｎ
离心１０ ｍｉｎ，弃上清，留细胞沉淀，加０．０７５ ｍｏｌ／Ｌ的ＫＣＩ低渗
胎儿染色体非整倍性诊断的价值。
１资料与方法
２０ ｍｉｎ。固定液预固定１次，再固定２次。调整悬浮细胞浓度
后滴片，置５６℃恒温箱老化３０ ｍｉｎ。（２）玻片预处理。于２×
ＳＳＣ（标准柠檬酸盐）溶液中漂洗２次后，置３７℃预温的胃蛋
自酶溶液中消化ｉ０ ｍｉｎ，再于２×ＳＳＣ溶液中漂洗两次，１ 甲
醛处理１０ ｍｉｎ。依次置于预冷的７０ 乙醇、８５ 乙醇、１００
乙醇中各３ ｍｉｎ进行梯度脱水，暗处自然干燥玻片。（３）样本
变性、杂交和洗脱。玻片在７Ｏ 甲酰胺一２×ＳＳＣ变性液中于
７８℃变性６ ｍｉｎ，依次置７Ｏ 、８５ 和１００ （一２０℃预冷）乙
醇中梯度脱水，自然干燥。避光条件下制备探针混合物（７“Ｌ
杂交缓冲液＋１ Ｌ去离子水＋２ Ｌ探针），置７８℃变性５
ａｉｒｎ。滴加探针混合物于玻片细胞区，盖上盖玻片、封片，水平
１．１ 一般资料２００９年１２月至２０１３年６月自本院优生优育
门诊纳入符合产前遗传学诊断的孕妇共计９９８例，平均孕周为
１９．０周（１７～２２ 周），平均年龄为３１．７岁（２６～４３岁）。ｊ 中
年龄在３５岁及以上的孕妇８６例，唐氏综合征血清学筛查高风
险者８７６例，曾育２１一三体儿孕妇４例；超声检查发现胎儿异常
２４例；羊水过少或减少８例。所有孕妇均签署染色体病产前
诊断知情同意书。
１．２ 主要试剂 荧光标记的多色ＤＮＡ探针组（ＧＬＰ ２ｌ／
ＧＬＰ一１３、ＣＳＰ一１８／ＣＳＰ—Ｘ／ＣＳＰ—Ｙ）购自北京金菩嘉医疗科技有
限公司，依次靶向２１号、１３号、１８号、ｘ和Ｙ染色体２ｌｑ２２、
１３ｑ１４、１８ｐｌ１．１—１８ｑｌ１．１、Ｘｐｌ１．１－Ｘｑｌ１．１和Ｙｐｌ１．１－Ｙｑｌ１．１
置湿盒内，４２。Ｃ保温箱过夜杂交。移去盖玻片，玻片置６７℃
预温的０．３ ＮＰ一４０／０．４×ＳＳＣ液处理２ ｍｉｎ，０．１ ＮＰ一４０／０．
的特定区域。其中针对２１号和１３号染色体的ＧＩ Ｐ一２１／ＧＬＰ一
１３探针为位点特异探针，分别用Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ（红色）和ＦＩＴＣ
（绿色）标记。针对１８号、ｘ和Ｙ染色体的ＣＳＰ－１８／ＣＳＦ ｘ／
４×ＳＳＣ液处理３０ ｓ，最后７Ｏ 乙醇浸泡３ ｒａｉｎ，暗处自然干
燥。于细胞区滴加ＤＡＰＩ １５ Ｌ复染，盖上盖玻片置暗处１Ｏ～
２０ ｒａｉｎ后待检。（４）信号判读。应用ＥＣＬＩＰＳＥ ８０ｉ型荧光显
微镜（Ｎｉｋｏｎ）观察各通道信号，ＶｉｄｅｏＴｅｓｔ ＦＩＳＨ ２．０软件分析
图像。每例样本随机计数至少５Ｏ个细胞，≥９ｏ 细胞正常提
示为正常样本，≥６Ｏ 细胞异常提示为异常样本，必要时扩大
通讯作者，Ｅ—ｍａｉｌ：ｙｕｗｚ２０１３＠１２６．ｃｏｒｎ。
ＣＳＰ Ｙ探针为染色体着丝粒特异性重复序列探针，分别用ＤＥ—
ＡＣ（蓝色）、ＦＩＴＣ和Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ标记。
１．３方法
作者简介：桂俊豪，男，主管技师，主要从事遗传病、染色体病的产前实验室诊断研究。
－
２９９８・ 国际检验医学杂志２０１３年ｌ１月第３４卷第２２期Ｉｍ ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１３，Ｖｄ．３４，Ｎｏ．２２
计数至１。（）个细胞。
１．３．２羊水细胞、脐静脉血细胞培养及染色体核型分析 羊
三体综合征３例、Ｔｕｒｎｅｒ综合征ｌ例、克氏综合征２例，１３一单
体、２１一单体和１８单体各１例，见图１（见《国际检验医学杂志》
网站主页“论文附件”），５种常见染色体非整倍性的总体检出
率为１．７ ，其中２１一三体综合征的检出率为０．８ 。本研究
中，凡是羊水细胞ＦＩｓＨ杂交信号异常者均同时行羊水细胞或
脐静脉细胞染色体核型分析。经核实，ＦＩＳＨ结果与羊水细胞
或脐静脉细胞染色体核型分析结果一致，二者符合率为
１Ｏ０ ，见表１。
水细胞、脐静脉血细胞培养及Ｇ带染色体制备按本室常规进
行，参照１ＳＣＮ ２００５标准进行核型分析。
２结 果
采用ＦＩＳＨ技术对羊水细胞中的目标染色体进行杂交，荧
光显微镜观察显示羊水细胞核内红、绿、蓝三色杂交信号明确。
在９９８例羊水细胞标本中，累计检出２１－三体综合征８例、１８一
表１ １７例ＦＩＳＨ杂交信号异常孕妇的临床特征及检测结果
３讨 论
确认１例无创基因检测高风险胎儿。
总之，本文基于唐氏筛查高危、超声信号异常等产前诊断
指针，采用ＦＩＳＨ技术对新疆９９８例羊水细胞５种染色体非整
倍性实施有效检测，及时避免了染色体非整倍性患儿出生，为
降低本地区新生儿出生缺陷率发挥了积极作用。
参考文献
［１］ Ｃａｉｎｅ Ａ，Ｍａｈｂｙ ＡＥ，Ｐａｒｋｉｎ ＣＡ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｎａｔａｌ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
Ｄｏｗｎ ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｂｙ ｒａｐｉｄ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｆｏｒ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｓ
１３，１８，ａｎｄ ２１ ｂｙ ＦＩＳＨ ｏｒ ＰＣＲ ｗｉｔｈｏｕｔ ａ ｆｕｌｌ ｋａｒｙｏｔｙｐｅ：ａ ｃｙｔｏ
大量研究表明，２１、１３、１８、Ｘ或Ｙ染色体非整倍性约占新
生活婴染色体病的８ｏ ～９５ 。国内外研究显示，染色体非
整倍性的发生源于配子形成过程中同源染色体不分离或姊妹
染色单体不分离或丢失，也可起源于受精卵早期卵裂过程中发
生染色体小分离或丢失…。
从检测技术上看，细胞培养及核型分析是准确检出染色体
非整倍性、发现常见染色体结构异常的金标准。然而，羊水细
胞培养及核型分析所需周期长，技术要求高，检测成功率很难
确保１（１（ｊ ‘。欧美发达国家已经将ＦＩＳＨ技术常规性应用于
产前诊断 。本研究引进多色ＦＩＳＨ技术，对本地区９９８例胎
ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｉｓｋ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔＥＪ］．Ｉ ａｎｅｅｔ，２００５，３６６（９４８０）：１２３ １２８．
儿成功实施了５种染色体非整倍体检测。结果表明，ＦＩＳＨ信
号明晰。结果判读直观，累计检出２１一ｉ体综合征８例、１８一三体
综合征３例、 ｌ＇ｕｒｎｅｒ综合征Ｉ例、克氏综合征２例，１３单体、
［２］桂俊豪，刘鸿春，王瑞，等．多色荧光原位杂交用于胎儿常见非整
倍体的快速产前诊断［Ｊ］．现代检验医学杂志，２０１ｌ，２６（６）：７６—７９．
Ｅ３３刘鸿春，王瑞，黄国香，等．新疆地区荧光原位杂交产前诊断非整
倍体的应用价值［Ｊ］．中国优生与遗传杂志，２０１０，１８（１２）：４２ ４３．
Ｅ４］夏家辉．医学遗传学［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，２００４：１６１－１６２．
Ｅｑ Ｗｅｉｓｅ Ａ，Ｌｉｅｈｒ Ｔ．Ｒａｐｉｄ ｐｒｅｎａｔａｌ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓ
ｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ（ＦＩＳＨ）［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２００８，
４４４ １ ３９—４７．
２ｌ一单体和ｌ８单体胎儿各１例。经核实，ＦＩＳＨ检测结果与传
统核型分析符合率为１ ００ 。
本研究巾，唐氏综合征的检出率为０．８ ，位列染色体非
整倍性发生之首。随着孕妇外周血胎儿循环核酸测序、比较基
因组杂交等分子遗传学新技术的发展 ，唐氏综合征等染色
体病的产前诊断正朝着无创性、特异性和准确性更高的方向发
展，ＦＩＳＨ技术将成为产前筛查的有力工具。在本文中，成功
［６］魏平，李运星，曾兰，等．８９份羊水细胞的荧光原位杂交分析［ｊｌ＿．
中华医学遗传学杂志，２０ｌ３，３０（２）：２１４ ２ｌ６．
［７］Ｉ．ｅｃ｜ｅｒｅｑ Ｓ，Ｌｅｂｂａｒ Ａ，ＧｒａｎｇｅＧ，ｅｔ ａ１．Ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ（下转第３０００页）
・３０００・
国际检验医学杂志２０１３年１１月第３４卷第２２期ｌｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１３，Ｖｏ１．３４，Ｎｏ．２２
表２。
时，敏感性为８３．６ ，特异性为９Ｏ．８ ，与Ｃｉｄ等Ⅲ 报道的中
各组ＣＤ６４、ＷＢＣ、Ｎｅｕ 、ＣＲＰ检测结果比较 表１
性粒细胞ＣＤ６４表达用于诊断细菌感染的敏感性７９ ，特异性
９１ 一致。因此，以上数据显示，中性粒细胞ＣＤ６４能够较为
准确地显示感染的状态，特别在细菌性和非细菌性感染的鉴别
中有较高的特异性。
综上所述，中性粒细胞ＣＤ６４在感染性疾病的诊断和治疗
中具有重要作用，同时其敏感性和特异性也较ＷＢＣ、Ｎｅｕ 和
ＣＲＰ高。因此对感染的患者进行中性粒细胞ＣＤ６４检测，能够
正确判断和发现感染性疾病，以及在细菌性感染危重患者的预
表２ ＣＤ６４指数、ＣＲＰ、ＷＢＣ、Ｎｅｕ 的
敏感性和特异性比较
后和效果评价上具有重要的临床意义。
参考文献
［１］张晓微，赵丽，张羿，等．中性粒细胞ＣＤ６４检测对感染性疾病的
诊断价值分析厂Ｊ］．国际检验医学杂志，２０１２，３３（１ ９）：２３１５－２３１６．
Ｅ２］Ｔａｋａｉ Ｓ，Ｋａｓａｍａ Ｍ，Ｙａｍａｄａ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｈｕｍａｎ ｈｉｇｈ—ａｆｆｉｎｉｔｙ ＦｃｙＲ１
（ＣＤ６４）ｇｅｎｅ ｍａｐｐｅｄ ｔｏ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ １ｑ２１．２－ｑ２１．３ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓ
ｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒ ｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ，１９９４，９３（１）：１３一ｌ５．
Ｅ３］李德红，居军．诊断感染性疾病的新指标：中性粒细胞ＣＤ６４ ＥＪ］．
检验医学，２０１２，２７（１）：６７—６９．
３讨 论
Ｅ４３ Ｏｋａｙａｍａ Ｙ，Ｋｉｒｓｈｅｎｂａｕｍ ＡＳ，Ｍｅｔｃａｌｆｅ ＤＤ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ ｆｕｎｃ
ｔｉｏｎａｌ ｈｉｇｈ—ａｆｆｉｎｉｔｙ ＩｇＧ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＦｃｙＲＩ，ｏｎ ｈｕｍａｎ ｍａｓｔ ｃｅｌｌｓ：ｕｐ
ＣＤ６４相对分子质量为７２ ０００，其编码定位于染色体
ｌｑ２１．２（１２ｌ＿３ｌ２，是ＩｇＧ Ｆｃ片段受体Ｉ（ＦｃＴＲ Ｉ），其能够识别
ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ＩＦＮ一 Ｊ］．ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０００，１ ６４（８）：４３３２—４３３９．
ｒ５］Ｐａｕｋｓｅｎｓ Ｋ，Ｆｊａｅｒｔｏｆｔ Ｇ，Ｄｏｕｈａｎ Ｈａｋａｎｓｓｏｎ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ
ａｎｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｕｎｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ ａｎｄ ｅｏｍｐｌｉｅａｔ
免疫球蛋白，对ＩｇＧ单体具有高亲和力，在介导体液免疫和细
胞免疫间起到桥梁作用，对感染性疾病具有早期诊断的价
值 】。正常情况下，ＣＤ６４主要分布于巨噬细胞、单核细胞及
树突状细胞等抗原递呈细胞（ＡＰＣ）表面，中性粒细胞表面
ＣＤ６４呈低水平表达，甚至几乎不表达，且表达无性别差异【 。
当患者患感染性疾病时，受炎症因子细菌细胞壁脂多糖、白细
胞介索】２、７一干扰素等刺激下，中性粒细胞表面ＣＤ６４表达在
４～６ ｈ内即可升高 。
ｅｄ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ａ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ￣Ｊ］．Ｓｃａｎｄ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，
２００８．４０（４）：３２６—３３７．
［６］Ｅｌｇｈｅｔａｎｙ ＭＴ，Ｌａｃｏｍｂｅ Ｆ．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｉｃ
ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ａｇｅ，ｇｅｎｄｅｒ，ｐｒｅｇｎａｎｃｙ，ｒａｃｅ，
ａｎｄ ｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．Ｊ Ｌｅｕｋｏｃ Ｂｉｏｌ，２００４，７５（２）：１５７ １６２．
［７］Ｈｏｆｆｍａｎｎ ＪＪ．Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ＣＩ）６４：ａ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ａｎｄ ｓｅｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ Ｉ ａｂ Ｍｅｄ，２００９，４７（８）：９０３—９１６．
［８］（）ｋａｙａｍａ Ｙ，Ｋｉｒｓｈｅｎｂａｕｍ ＡＳ，Ｍｅｔｃａｌｆｅ ＤＤ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｈｉｇｈ—ａｆｆｉｎｉｔｙ ＩｇＧ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｆｃ ｇａｍｍａ ＲＩ，ｏｎ ｈｕｍａｎ
随着流式细胞仪的普及和应用，外周血中性粒细胞ＣＤ６４
的表达 临床诊断和治疗细菌性感染中越来越多的得到应用。
近些 求， 内很多学者也开始展开对中性粒细胞ＣＤ６４进行
了相关研究。许文芳 等报道ＣＤ６４指数可作为诊断细菌感
染的敏感指标，是重症细菌性感染的诊断、判断病情的可靠指
标。Ｌｉｖａｄｉｔｉ等 研究发现，中性粒细胞ＣＤ６４的表达与细菌
感染的严重程度和预后具有密切相关，可依据中性粒细胞
ｍａｓｔ ｃｅｌｌｓ：ｕｐ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ＩＦＮ ｇａｍｍａ￣Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ。２０００，１６４
（８）：４３３２—４３３９．
［９］许文芳．ＣＤ６４、ＣＲＰ在重症细菌感染中的诊断价值［Ｊ］．检验医
学，２Ｏ１１，２６（２）：１２７ １２９．
［１Ｏ］Ｌｉｖａｄｉｔｉ Ｏ，Ｋｏｔａｎｉｄｏｕ Ａ，Ｐｓａｒｒａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ＣＤ６４ ｅｘｐｒｅｓ—
ｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ＩＬ ８：ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｅａｒｌｙ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｓｅｖｅｒｉｔｙ ａｎｄ ｏｕｔ
ＣＤ６４感染指数将病程划分为脓毒症、重症脓毒症和脓毒性休
克，同时还发现其 患者病死率呈正相关。
本研究通过对不同病原体感染情况分组分析发现，细菌感
ｃｏｍｅ ｉｎ ｓｅｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，２００６，３６（５／６）：２８３ ２９０．
［１ １］Ｃｉｄ Ｊ，Ａｇｕｉｎａｃｏ Ｒ，Ｓｄｎｃｈｅｚ Ｒ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ＣＤ６４ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ａｓ ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ：ａ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｒｅｖｉｅｗ ａｎｄ ｍｅｔａ—ａ
染组（Ａ＋Ｂ组）与非细菌感染组（Ｃ组）的ＣＤ６４指数比较，细
菌感染组ＣＤ６４指数明显高于非细菌感染组，Ｐ＜Ｏ．０５，组问具
ｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ，２０１０，６０（５）：３ｌ３－３１９．
（收稿日期：２０１３ ０５ １ ５）
有显著性差肄；细菌感染组的ＣＤ６４指数与ＷＢＣ、Ｎｅｕ 以及
ＣＲＰ比较 正相关，Ｐ均小于０．０５。且（ Ｉ）６４指数临界值取１
（上接第２９９８页）
ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｕｓｉｎｇ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｎａｔａｌ
［９］Ｌａｐｉｅｒｒｅ ＪＭ，Ｃａｃｈｅｕｘ Ｖ，Ｃｏｌｌｏｔ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｅｏｍｐａｒａ
ｌｉｖｅ ｇｅｎｏｍｉｃ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ ｋａｒｙｏｔｙｐｅ ａｎｄ ｃｌａｓｓｉ
ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｃｏｍＨｌｏｎ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｉｅｓ［Ｊ］．Ｐｒｅｎａｔ Ｄｉａｇｎ，２００８，２８（４）：
３１ ３ ３１８．
ｃａｌ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎ ｓｉｔｕ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｐｒｅｎａｔａｌ ａｎｄ ｐｏｓｔｎａｔａｌ ｄｉ
ａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｕｎｂａｌａｎｃｅｄ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｇｅｎｅｔ
ｌ９９８，４ｌ（３）：１３３一ｌ４Ｏ．
１ ８］ ｈｉｕ ＲＷ．Ｃｈａｎ Ｋ（、，Ｇａｏ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅ ｐｒｅｎａｔａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ
ｏｆ ｆｅｔａｌ ｃｈｒｏｎａｏｓｏｎｌａｌ ａｎｅｕｐｌｏｉｄｙ ｂｙ ｍａｓｓｉｖｅｌｙ ｐａｒａｌｌｅｌ ｇｅｎｏｍｉｃ ｓｅ —
ｑｕｅｎｃｉｎｇ ｏｆ ＤＮＡ ｉｎ ｎｌａｔｅｒｎａｌ ｐｌａｓｍａ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ
Ａ，２００８，１ Ｏ５（５１）：２Ｏ４５８ ２０４６３．
（收稿日期；２０１３－０５ ２２）