2024年10月28日发(作者：旗芬)

．

实≈验研究　

ｉ　ｉ　ｉｉ　

白英诱导大肠癌ＨＴ２９细胞凋亡作用及其机制研究　

万春霞１赵凤达：万福生　杨香生　黄国栋　

（１．武警江西总队医院，江西南昌３３０００６；２．南昌大学第一附属医院，江西南昌３３０００６；　

３．南昌大学医学院，江西南昌３３０００６）　

摘要　目的：探讨白荚水提取液对人大肠癌ＨＴ２９细胞增殖的影响并探讨其诱导凋亡作用机制。方法：采用ＭＴｒ法　

检测白英水提取液对人大肠癌ＨｒＩ’２９细胞的增殖抑制作用，普通光学显微镜及电镜观察细胞形态学变化，Ａｎｎｅｘｉｎ—Ｖ／ＰＩ双　

染法流式细胞术分析细胞早期凋亡率的变化。结果：白英水提取液可显著抑制人大肠癌ＨＴ２９细胞增殖，且呈一定的剂　

量和时间依赖性：光镜下见细胞体积缩小，细胞增殖减慢；电镜下见细胞染色质明显浓缩，核聚集等典型的凋亡特征；流　

式细胞术证实细胞凋亡率明显升高。结论：白英水提取液对人大肠癌ＨＴ２９细胞的增殖具有明显的抑制作用，其机制与　

诱导细胞凋亡相关。　

关键词　白英　水提取液　大肠癌细胞

中图分类号Ｒ２８２．７１　文献标识码

细胞凋亡

Ａ　

体外实验　

文章编号　１６７２—３９７Ｘ（２０１１）１０—００８３—０３　

大肠癌是人类高发的恶性肿瘤，其发病率和死亡率逐年　养人大肠癌ＨｑＥ９细胞，细胞生长至对数增殖期。正常对照组　

不加任何药物．继续用含ｌ０％胎牛血清的ＤＭＥＭ培养液培　

上升，严重危害人类健康。大肠癌的治疗方法主要有外科手　

术治疗、化学治疗、放射治疗、中医药治疗和生物治疗等。近　

年来，大肠癌的治疗已取得了较大的进步，草酸铂、伊立替　

康、卡培他滨等新型细胞毒药物已经应用于临床【ｌｌ，但探求高　

效、低毒、经济的化疗药物仍是许多学者坚持不懈的追求目　

养。药物处理组更换含不同浓度的白英水提取液和羟基喜树　

碱的培养液，药物作用时间为２４～７２ｈ。　

１．５　Ｍ　Ｔ］ｒ实验取对数生长期的细胞，消化后重悬，以每孑Ｌ　

４ｘ１０　个细胞接种至无菌９６孔板内，继续培养２４ｈ。弃掉孔内　

原培养液。加入含不同浓度白英水提取液和羟基喜树碱的　

ＤＭＥＭ培养液２００１ｘＬ。每组药物浓度设４个平行复孔，同时　

标。中药白英（Ｓｏｌａｒｉｕｍ￣，ｎｕｍ　Ｔｈｕｎｂ）为常用抗癌中草药，　

临床常用于肺癌、食道癌、胃癌、肝癌、肠癌等多种癌症。本研　

究通过体外细胞培养．观察白英对大肠癌细胞的增殖影响，　

探讨其诱导凋亡的机制，旨在确认白英对消化道肿瘤的抗肿　

设置不含药物的空白对照孔，继续培养２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ，到终止　

培养前４ｈ，每孔加入Ｍ　Ｉｒｒ（５ｍｇ／ｍＬ）２０ｐ，Ｌ，继续培养４ｈ，弃去　

瘤作用效果。以及为其临床应用提供实验依据。　

１材料与方法　

培养液，每￣Ｌ　ＪＪＵ入ＤＭＳＯ　１５０ｔｘＬ，用震荡混合仪震荡１０ｍｉｎ，　

使甲瓒结晶充分溶解，酶联检测仪上检测４９０ｎｍ波长下每孔　

１．１　实验用品和试剂　人大肠癌ＨＴ２９细胞株由中科院上　

海细胞生物研究所细胞库提供。白英，江西江中中药饮片有　

的０Ｄ值。按公式计算细胞生长抑制率（ＩＲ）：抑制率（％）：（卜　

实验组ＯＤ值，正常对照组ＯＤ值）×１ｏ０％。实验重复３次，取　

其平均值。　

１．６　细胞形态学观察　采用普通光学显微镜观察细胞加药　

限公司．批号２０１００５１８，经南昌大学第一附属医院中药房徐　

晓华副主任药师鉴定为真品；羟基喜树碱，深圳万乐药业有　

限公司，批号Ｈ２００１０１５７；ＤＭＥＭ培养基，ＧＩＢＣＯ公司（美　

国）；胎牛血清，杭州四季清公司；四甲基偶氮唑蓝（ＭＴｒ）、二　

甲基亚砜（ＤＭＳＯ），Ａｍｅｒｅｓｃｏ公司（美国）；ＡｎｎｅｘｉｎＶ—ＦＩＴＣ／ＰＩ　

前后的生长情况。电镜观察白英水提取液对ＨＴ２９细胞超微　

结构的影响。将对数生长期的细胞消化成单细胞悬液，稀释　

细胞浓度至１ｘｌ０５个／ｍＬ后分别以１０ｍＬ接种于７５ｍＬ的培　

养瓶中，待细胞贴壁后，加入含白英水提取液的ＤＭＥＭ培养　试剂盒．南京凯基公司。　

１．２主要仪器　酶标仪（北京普朗医疗器械有限公司），流式　

液，使白英水提取液终浓度达３．８３ｍｇ／ｍＬ，继续培养２４ｈ后，　

胰蛋白酶消化并收集各组细胞，常规制作电镜标本，制成超　

细胞仪（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ，美国ＢＤ公司）。　

１．３　白英水提取液的制备称取白英干品２０ｇ．用５００ｍＬ三　

蒸水浸泡４ｈ，加热沸腾６０ｍｉｎ．２００目网筛过滤弃药渣，滤液　

以１２０００ｘｇ速度离心２０ｍｉｎｘ２次，取上清液，浓缩至２０ｍＬ，　

薄切片，在透视电镜下观察细胞超微结构。　

１．７　流式细胞术检测细胞凋亡率　药物作用２４ｈ后收集各　

组细胞，包括培养基中悬浮的细胞。贴壁细胞用不含ＥＤＴＡ　

的胰酶消化约３ｍｉｎ，制备细胞悬液；用ＰＢＳ洗涤细胞２次，　

收集１×１０　个细胞；加入５００１ｘＬ的Ｂｉｎｄｉｎｇ　Ｂｕｆｆｅｒ悬浮细胞；　

加入５ｐ，Ｌ　Ａｎｎｅｘｉｎ　Ｖ—ＦＩＴＣ混匀后，再加入５１．ｔＬ　ＰＩ混匀：避　

调ｐＨ值为７．０～７．２，０．２２１ｘｍ过滤除菌，药液生药含量为　

１．Ｏｇ／ｍＬ。分装ｌｍＬ／瓶，一２０℃保存备用。　

Ｉ．４　实验分组、细胞培养和药物处理实验细胞随机分为正　

常对照组、白英提取液各剂量组（药液终浓度分别为１．２５、２．５、　

光、室温反应５～１５ｒａｉｎ；ｌｈ内，用流式细胞仪检测细胞凋亡的　

情况。每个样本检测ｌｘｌ０　个细胞，激发波长为４８８ｎｍ，发射　

５ｍｇ／ｍＬ）、阳性对照组（羟基喜树碱浓度为１０ｔｘｇ／ｍＬ）。体外培　

苏中医药　！璺竺竺堂苎　咽　

波长为５３０ｎｍ，计算细胞凋亡率。　

１．８统计学方法所有实验结果数据均用（　）表示。采用　

ＳＰＳＳ　１３．０统计软件对实验数据进行处理，分析方法采用方　

体皂苷类、甾体生物碱类、倍半萜类等化合物等均被证实具　

有抗肿瘤作用。朱海静等ｐＪ采用ＭｒＩＴｒ法、细胞生长曲线法、集　

落形成法三种方法证实白英水提取液对人卵巢癌Ａ２７８０细　

胞增殖有抑制效应。刘淑华等嘲发现白英甾体皂苷对人宫颈　

癌ＨｅＬａ细胞、人卵巢癌Ｈ０—８９１０细胞、小鼠原代腹水型肉　

瘤Ｓ１８０细胞均有较强的抑制作用。Ｒｅｎ　Ｙ等啷究白英中的　

倍半萜成分，发现其对人鼻咽癌ＨＯＮＥ一１、口腔上皮癌ＫＢ和　

大肠癌ＨｒＩ’２９细胞均有抑制增殖作用　进一步探讨白英抗肿　

差分析或ＬＳＤ—ｔ检验，以Ｐ＜０．０５为有统计学意义。　

２实验结果　

２．１　白英水提取液对ＨＴ２９细胞增殖的抑制作用　白英水　

提取液能明显抑制大肠癌ＨＴ２９细胞的增殖，且呈一定的剂量　

与时间依赖性．见表１。白英水提取液处理人大肠癌ＨｒＩ１２９细　

胞２４ｈ、４８ｈ和７２ｈ的Ｉｃ５０分别为３．８３、２＿２９和１．４２ｍｇ／ｍＬ。　

表１　各组人大肠癌Ｈｒｌ＂２９￣胞增殖抑制率比较（ｎ＝４，　）　

瘤的机制，发现涉及抑制肿瘤生长、诱导细胞凋亡、干扰细胞　

周期、免疫增强、抗氧化等多个方面　。　

本实验采用了多种检测细胞增殖活性及凋亡的方法，证　

明了白英水提取液可抑制大肠癌ＨＴ２９细胞增殖．诱导细胞　

凋亡，并表现出一定的量效和时效关系。ＭＴｒ实验细胞活力　

检测结果说明．白英水提取液组细胞活力显著降低．细胞损　

伤现象显著。光镜下观察在加入白英水提取液后大肠癌细胞　

出现皱缩、脱壁、细胞漂浮．高浓度组有的出现细胞破碎现　

象，提示白英具有显著的抗肿瘤作用。电镜下可见胞浆浓缩．　

２．２光镜下细胞形态　正常对照组ＨＴ２９细胞生长旺盛．贴　

核固缩、边集等凋亡特征。流式细胞检测结果显示，白英处理　

组细胞凋亡数呈上升趋势，随着白英水提取液浓度的增加，　

壁良好．细胞轮廓清晰，为卵圆形、梭形或多角形，呈高折光　

率，胞体大．随时间延长变化不大。在加入白英水提取液和羟　

基喜树碱后，细胞增殖减慢，随着药物浓度增大和时间延长，　

细胞逐渐变小，折光率减弱，出现皱缩、脱壁、漂浮现象，细胞　

各组细胞凋亡率显著增加，说明白英水提取液对大肠癌细胞　

具有显著的促凋亡作用。　

综上所述，白英对大肠癌细胞的增殖具有明显的抑制作　

高浓度组有的细胞出现破碎现象，有明显的时间和浓度依赖　

关系。　

用，其机制与诱导细胞凋亡相关。本实验为大肠癌的中药新　

２．３　电镜下细胞形态　电镜下可见　

正常对照组细胞呈圆形或椭圆形，细　

胞膜有微绒毛和伪足样突起，核仁大　

且清楚，胞浆内线粒体、溶酶体和内质　

网丰富，见图１一Ａ。而白英水提取液组　

细胞体积缩小，细胞膜皱缩但完整，细　

胞核染色质凝聚、边集，有的凋亡小体　

融合成一个大的致密结核，胞浆内细　

胞器的结构消失，见图１－Ｂ、Ｃ。　

２．４　细胞凋亡率的比较　对照组　

Ａ正常对照组（ｘ４０００）　Ｂ白英水提取液组（ｘｌＳ０００）　Ｃ白英水提取液组（ｘ１５０００）　

图１　透射电镜下各纽人大肠癌ＨＴ２９细胞形态变化　

ＨＴ２９细胞凋亡率为（３４３蝴４０）％，白英　

水提取液各剂量组与羟基喜树碱组　

ＨｒＩ’２９细胞凋亡率分别为（９．１４￣１＿５９）％、　

（２１．５５±２．０３）％、（４０．１０±２．５３）％和　

（３９．６７￣２．８２）％．与正常对照组相比有　

＾Ｎ　…　

显著性差异（Ｐ＜０．０１），且呈明显的剂　

量效应关系。见图２。　

３讨论　

正常对照组　白英水提取液１．２５ｍｇ／ｍＬ组　白英水提取液２．５ｍｇ／ｍＬ组　

白英是我国常用的抗肿瘤中草药　

之一。具有清热利湿、解毒消肿的功　

效，也可用于治疗疟疾、黄疸、水肿、淋　

¨ｌｌ　

、　

Ｉｌ　０　ｌ

琳　

葭　，　

病、风湿性关节炎、白带等病证。近年　

来，对白英抗肿瘤作用的研究受到越　

来越广泛的关注。白英的化学成分复　

杂，先后从中分离出皂苷类、黄酮类、　

白英水提取液５ｍｇ／ｍＬ组　阳性对照组　

多酚类、有机酸类、倍半萜类、甾醇类、　

香豆素类、多糖类等化合物　。其中甾　

图２流式细胞仪检测细胞凋亡率　

（本文彩图刊登ｆｆ－ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｓｔｅｍ．ｃａ“电子图片”栏目）　

囝　！！璺　竺堂　塑　中压药　

蓊；　

七味三芎汤对实验性动脉粥样硬化大鼠血脂、ＳＯＤ、　

ＭＤＡ的影响　

李瀛均－陆健　范秀风　职利琴　王红　

（１．西安市中医医院，陕西西安７１０００１；２．陕西中医学院，陕西成阳７１２０４６）　

摘要　目的：观察七味三芎汤对动脉粥样硬化（ＡＳ）大鼠血脂及丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的影响，探　

讨其治疗ＡＳ的作用机制。方法：采用饲喂高脂饲料复制大鼠ＡＳ模型，以辛伐他汀为对照，观察七味三芎汤喂饲１Ｏ周后　

各组大鼠血脂、ＳＯＤ和ＭＤＡ水平。结果：七味三芎汤组和辛伐他汀组大鼠血浆中的ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ—Ｃ、ＭＤＡ水平均低于模　

型组，ＳＯＤ活性高于模型组。结论：七味三芎汤通过降低血脂，降低ＭＤＡ水平，提高ＳＯＤ活性，从而减少脂质过氧化，改　

善血管内皮功能．起到抗ＡＳ作用。　

关键词　动脉粥样硬化　七味三芎汤　血脂　丙二醛超氧化物歧化酶　实验研究　

中图分类号Ｒ５４３．５０５　文献标识码Ａ　文章编号　１６７２一－３９７Ｘ（２０１１）ｌ０一ｏ０８５—０２　

动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，ＡＳ）是以动脉非炎症性、　

退行性和增生性为特征的血管病变，是引起多种心脑血管疾　

芎、生地、白芍、当归、檀香、丹参按１：３：４：３：２：５：１０比例水煎浓　

缩而成；辛伐他汀，山东鑫齐药业有限公司，批号：２００９１００４。　

２实验方法　

病的病理生理基础，严重危害人类健康。本病的发病机制尚　

未完全阐明，目前认为是由多种因素作用于不同环节所致ｎ　。　

大量的实验研究表明。氧化应激（Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　Ｓｔｒｅｓｓ）在动脉粥　

样硬化的病理生理过程中起重要的作用，导致血管内皮细胞　

功能障碍及血管平滑肌细胞增生［２－３１，而高脂血症也是公认的　

动脉粥样硬化的主要危险因素。本课题通过观察七味三芎汤　

对动脉粥样硬化模型大鼠的血脂干预作用及对ＳＯＤ、ＭＤＡ　

２．１　造模动物购回后，适应性饲养１周，按体重编号，完全　

随机分组，正常组１１只，造模组３９只，均自由进食进水。正　

常组喂养普通饲料，其余喂养自配ＡＳ饲料（蛋黄粉１０％，猪　

油５％，猪胆盐０．５％，基础饲料８４．５％），喂养２１周。２１周后　

随机选取１只正常组大鼠，３只造模组大鼠，禁食１２ｈ眼眶静　

脉采血，检测血清低密度脂蛋白、甘油三酯及总胆固醇．处死　

后取胸主动脉浸泡福尔马林，做病理切片。　

２．２动物分组及给药、取样方法造模成功后．造模组大鼠　

的影响，来探讨其治疗ＡＳ的作用机制。　

１实验材料　

１．１　实验动物　健康雄性ＳＤ大鼠５０只，体重（２２３±３７）ｇ，　

动物合格证号：第四军医大学医动证字ＳＣＫ２００２－　－００５。　

取３０只按体重随机分为３组：模型组、辛伐他汀组、七味三　

芎汤组，每组ｌ０只。正常组１０只为空白对照组。空白对照组　

１．２主要药物与试剂　ＳＯＤ、ＭＤＡ　ＥＬＩＳＡ试剂盒（南京建成　

生物技术公司，批号：２００９１１ｏ４）；七昧三芎汤，由三七粉、川　

以普通饲料继续喂养１０周，模型组、七味三芎汤组、辛伐他　

汀组继续以高脂饲料喂养１Ｏ周。同时，七味三芎汤组灌胃　

药筛选和开发提供了一定的理论基础和实验依据．其具体作　

用机制还有待于进一步研究。　

４参考文献　

【１】秦光远，黄桂林，邵建强，等．大肠癌的治疗进展．医学综述，　

２００９，１５（１）：５８　

ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　ｂｕｌｌｅｔｉｎ，２００９，５７（４）：４０８　

［６］张秀娟，马悦．白英的药理作用研究进展．亚太传统医药，２００８，４　

（１）：５５　

［７Ｊ　Ｙａｎｇ　ＪＳ，Ｗｕ　ＣＣ，Ｋｕｏ　ＣＬ，ｅｔ　ａ１．　Ｓｏｌａｎｕｍ　ｌｙｒａｔｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔ　

ａｆｆｅｃｔｅｄ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｉｎ　ｎｏｉＴａａｌ　ａｎｄ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｍｕｒｉｎｅ　

［２】李瑞玲，赵艳玲，张敬华．白英化学成分研究现状．天中学刊，　

２００９，２４（２）：２３　

ａｎｉｍａｌ　ｉｎ　ｖｉｖｏ．Ｈｕｍａｎ＆ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｌ　ｔｏｘｉａｃｏｌｏｇｙ，２０１０，２９（５）：　

３５９　

【３］朱海静，王开平，王瑞．白英对Ａ２７８０人卵巢癌细胞增殖的抑制　

作用．西南国防医药，２００９，１９（５）：５０９　

第一作者：万春霞（１９８２一），医学硕士，住院医师，研究方向为　

中西医结合临床及中医肿瘤。　

［４】刘淑华，魏仙风，白美姣．白荚甾体皂苷对肿瘤细胞的体外增殖　

抑制作用．江西中医药，２０１０，４１（１）：７１　

通讯作者：赵风达．ｈｇｄｄｒ２３３０１１＠ｓｉｎａ．．ｃｏｒｎ　

收稿日期：２０１ｌ—ｏ４—２４　

编辑：昊　宁　

［５】　Ｒａｎ　Ｙ，Ｓｈｅｎ　Ｌ，Ｚｈａｎｇ　ＤＷ，ｅｔ　ａ１．Ｔｗｏ　Ｆｌｅｗ　ｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ　

ｆｒｏｍ　Ｓｏｌａｎｕｍ　ｌｙｒａｔｕｍ　ｗｉｔｈ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｃｈｅｍｉｃ：ｌａ＆　

中医药　竺　竺竺堂竺　塑固　

2024年10月28日发(作者：旗芬)

．

实≈验研究　

ｉ　ｉ　ｉｉ　

白英诱导大肠癌ＨＴ２９细胞凋亡作用及其机制研究　

万春霞１赵凤达：万福生　杨香生　黄国栋　

（１．武警江西总队医院，江西南昌３３０００６；２．南昌大学第一附属医院，江西南昌３３０００６；　

３．南昌大学医学院，江西南昌３３０００６）　

摘要　目的：探讨白荚水提取液对人大肠癌ＨＴ２９细胞增殖的影响并探讨其诱导凋亡作用机制。方法：采用ＭＴｒ法　

检测白英水提取液对人大肠癌ＨｒＩ’２９细胞的增殖抑制作用，普通光学显微镜及电镜观察细胞形态学变化，Ａｎｎｅｘｉｎ—Ｖ／ＰＩ双　

染法流式细胞术分析细胞早期凋亡率的变化。结果：白英水提取液可显著抑制人大肠癌ＨＴ２９细胞增殖，且呈一定的剂　

量和时间依赖性：光镜下见细胞体积缩小，细胞增殖减慢；电镜下见细胞染色质明显浓缩，核聚集等典型的凋亡特征；流　

式细胞术证实细胞凋亡率明显升高。结论：白英水提取液对人大肠癌ＨＴ２９细胞的增殖具有明显的抑制作用，其机制与　

诱导细胞凋亡相关。　

关键词　白英　水提取液　大肠癌细胞

中图分类号Ｒ２８２．７１　文献标识码

细胞凋亡

Ａ　

体外实验　

文章编号　１６７２—３９７Ｘ（２０１１）１０—００８３—０３　

大肠癌是人类高发的恶性肿瘤，其发病率和死亡率逐年　养人大肠癌ＨｑＥ９细胞，细胞生长至对数增殖期。正常对照组　

不加任何药物．继续用含ｌ０％胎牛血清的ＤＭＥＭ培养液培　

上升，严重危害人类健康。大肠癌的治疗方法主要有外科手　

术治疗、化学治疗、放射治疗、中医药治疗和生物治疗等。近　

年来，大肠癌的治疗已取得了较大的进步，草酸铂、伊立替　

康、卡培他滨等新型细胞毒药物已经应用于临床【ｌｌ，但探求高　

效、低毒、经济的化疗药物仍是许多学者坚持不懈的追求目　

养。药物处理组更换含不同浓度的白英水提取液和羟基喜树　

碱的培养液，药物作用时间为２４～７２ｈ。　

１．５　Ｍ　Ｔ］ｒ实验取对数生长期的细胞，消化后重悬，以每孑Ｌ　

４ｘ１０　个细胞接种至无菌９６孔板内，继续培养２４ｈ。弃掉孔内　

原培养液。加入含不同浓度白英水提取液和羟基喜树碱的　

ＤＭＥＭ培养液２００１ｘＬ。每组药物浓度设４个平行复孔，同时　

标。中药白英（Ｓｏｌａｒｉｕｍ￣，ｎｕｍ　Ｔｈｕｎｂ）为常用抗癌中草药，　

临床常用于肺癌、食道癌、胃癌、肝癌、肠癌等多种癌症。本研　

究通过体外细胞培养．观察白英对大肠癌细胞的增殖影响，　

探讨其诱导凋亡的机制，旨在确认白英对消化道肿瘤的抗肿　

设置不含药物的空白对照孔，继续培养２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ，到终止　

培养前４ｈ，每孔加入Ｍ　Ｉｒｒ（５ｍｇ／ｍＬ）２０ｐ，Ｌ，继续培养４ｈ，弃去　

瘤作用效果。以及为其临床应用提供实验依据。　

１材料与方法　

培养液，每￣Ｌ　ＪＪＵ入ＤＭＳＯ　１５０ｔｘＬ，用震荡混合仪震荡１０ｍｉｎ，　

使甲瓒结晶充分溶解，酶联检测仪上检测４９０ｎｍ波长下每孔　

１．１　实验用品和试剂　人大肠癌ＨＴ２９细胞株由中科院上　

海细胞生物研究所细胞库提供。白英，江西江中中药饮片有　

的０Ｄ值。按公式计算细胞生长抑制率（ＩＲ）：抑制率（％）：（卜　

实验组ＯＤ值，正常对照组ＯＤ值）×１ｏ０％。实验重复３次，取　

其平均值。　

１．６　细胞形态学观察　采用普通光学显微镜观察细胞加药　

限公司．批号２０１００５１８，经南昌大学第一附属医院中药房徐　

晓华副主任药师鉴定为真品；羟基喜树碱，深圳万乐药业有　

限公司，批号Ｈ２００１０１５７；ＤＭＥＭ培养基，ＧＩＢＣＯ公司（美　

国）；胎牛血清，杭州四季清公司；四甲基偶氮唑蓝（ＭＴｒ）、二　

甲基亚砜（ＤＭＳＯ），Ａｍｅｒｅｓｃｏ公司（美国）；ＡｎｎｅｘｉｎＶ—ＦＩＴＣ／ＰＩ　

前后的生长情况。电镜观察白英水提取液对ＨＴ２９细胞超微　

结构的影响。将对数生长期的细胞消化成单细胞悬液，稀释　

细胞浓度至１ｘｌ０５个／ｍＬ后分别以１０ｍＬ接种于７５ｍＬ的培　

养瓶中，待细胞贴壁后，加入含白英水提取液的ＤＭＥＭ培养　试剂盒．南京凯基公司。　

１．２主要仪器　酶标仪（北京普朗医疗器械有限公司），流式　

液，使白英水提取液终浓度达３．８３ｍｇ／ｍＬ，继续培养２４ｈ后，　

胰蛋白酶消化并收集各组细胞，常规制作电镜标本，制成超　

细胞仪（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ，美国ＢＤ公司）。　

１．３　白英水提取液的制备称取白英干品２０ｇ．用５００ｍＬ三　

蒸水浸泡４ｈ，加热沸腾６０ｍｉｎ．２００目网筛过滤弃药渣，滤液　

以１２０００ｘｇ速度离心２０ｍｉｎｘ２次，取上清液，浓缩至２０ｍＬ，　

薄切片，在透视电镜下观察细胞超微结构。　

１．７　流式细胞术检测细胞凋亡率　药物作用２４ｈ后收集各　

组细胞，包括培养基中悬浮的细胞。贴壁细胞用不含ＥＤＴＡ　

的胰酶消化约３ｍｉｎ，制备细胞悬液；用ＰＢＳ洗涤细胞２次，　

收集１×１０　个细胞；加入５００１ｘＬ的Ｂｉｎｄｉｎｇ　Ｂｕｆｆｅｒ悬浮细胞；　

加入５ｐ，Ｌ　Ａｎｎｅｘｉｎ　Ｖ—ＦＩＴＣ混匀后，再加入５１．ｔＬ　ＰＩ混匀：避　

调ｐＨ值为７．０～７．２，０．２２１ｘｍ过滤除菌，药液生药含量为　

１．Ｏｇ／ｍＬ。分装ｌｍＬ／瓶，一２０℃保存备用。　

Ｉ．４　实验分组、细胞培养和药物处理实验细胞随机分为正　

常对照组、白英提取液各剂量组（药液终浓度分别为１．２５、２．５、　

光、室温反应５～１５ｒａｉｎ；ｌｈ内，用流式细胞仪检测细胞凋亡的　

情况。每个样本检测ｌｘｌ０　个细胞，激发波长为４８８ｎｍ，发射　

５ｍｇ／ｍＬ）、阳性对照组（羟基喜树碱浓度为１０ｔｘｇ／ｍＬ）。体外培　

苏中医药　！璺竺竺堂苎　咽　

波长为５３０ｎｍ，计算细胞凋亡率。　

１．８统计学方法所有实验结果数据均用（　）表示。采用　

ＳＰＳＳ　１３．０统计软件对实验数据进行处理，分析方法采用方　

体皂苷类、甾体生物碱类、倍半萜类等化合物等均被证实具　

有抗肿瘤作用。朱海静等ｐＪ采用ＭｒＩＴｒ法、细胞生长曲线法、集　

落形成法三种方法证实白英水提取液对人卵巢癌Ａ２７８０细　

胞增殖有抑制效应。刘淑华等嘲发现白英甾体皂苷对人宫颈　

癌ＨｅＬａ细胞、人卵巢癌Ｈ０—８９１０细胞、小鼠原代腹水型肉　

瘤Ｓ１８０细胞均有较强的抑制作用。Ｒｅｎ　Ｙ等啷究白英中的　

倍半萜成分，发现其对人鼻咽癌ＨＯＮＥ一１、口腔上皮癌ＫＢ和　

大肠癌ＨｒＩ’２９细胞均有抑制增殖作用　进一步探讨白英抗肿　

差分析或ＬＳＤ—ｔ检验，以Ｐ＜０．０５为有统计学意义。　

２实验结果　

２．１　白英水提取液对ＨＴ２９细胞增殖的抑制作用　白英水　

提取液能明显抑制大肠癌ＨＴ２９细胞的增殖，且呈一定的剂量　

与时间依赖性．见表１。白英水提取液处理人大肠癌ＨｒＩ１２９细　

胞２４ｈ、４８ｈ和７２ｈ的Ｉｃ５０分别为３．８３、２＿２９和１．４２ｍｇ／ｍＬ。　

表１　各组人大肠癌Ｈｒｌ＂２９￣胞增殖抑制率比较（ｎ＝４，　）　

瘤的机制，发现涉及抑制肿瘤生长、诱导细胞凋亡、干扰细胞　

周期、免疫增强、抗氧化等多个方面　。　

本实验采用了多种检测细胞增殖活性及凋亡的方法，证　

明了白英水提取液可抑制大肠癌ＨＴ２９细胞增殖．诱导细胞　

凋亡，并表现出一定的量效和时效关系。ＭＴｒ实验细胞活力　

检测结果说明．白英水提取液组细胞活力显著降低．细胞损　

伤现象显著。光镜下观察在加入白英水提取液后大肠癌细胞　

出现皱缩、脱壁、细胞漂浮．高浓度组有的出现细胞破碎现　

象，提示白英具有显著的抗肿瘤作用。电镜下可见胞浆浓缩．　

２．２光镜下细胞形态　正常对照组ＨＴ２９细胞生长旺盛．贴　

核固缩、边集等凋亡特征。流式细胞检测结果显示，白英处理　

组细胞凋亡数呈上升趋势，随着白英水提取液浓度的增加，　

壁良好．细胞轮廓清晰，为卵圆形、梭形或多角形，呈高折光　

率，胞体大．随时间延长变化不大。在加入白英水提取液和羟　

基喜树碱后，细胞增殖减慢，随着药物浓度增大和时间延长，　

细胞逐渐变小，折光率减弱，出现皱缩、脱壁、漂浮现象，细胞　

各组细胞凋亡率显著增加，说明白英水提取液对大肠癌细胞　

具有显著的促凋亡作用。　

综上所述，白英对大肠癌细胞的增殖具有明显的抑制作　

高浓度组有的细胞出现破碎现象，有明显的时间和浓度依赖　

关系。　

用，其机制与诱导细胞凋亡相关。本实验为大肠癌的中药新　

２．３　电镜下细胞形态　电镜下可见　

正常对照组细胞呈圆形或椭圆形，细　

胞膜有微绒毛和伪足样突起，核仁大　

且清楚，胞浆内线粒体、溶酶体和内质　

网丰富，见图１一Ａ。而白英水提取液组　

细胞体积缩小，细胞膜皱缩但完整，细　

胞核染色质凝聚、边集，有的凋亡小体　

融合成一个大的致密结核，胞浆内细　

胞器的结构消失，见图１－Ｂ、Ｃ。　

２．４　细胞凋亡率的比较　对照组　

Ａ正常对照组（ｘ４０００）　Ｂ白英水提取液组（ｘｌＳ０００）　Ｃ白英水提取液组（ｘ１５０００）　

图１　透射电镜下各纽人大肠癌ＨＴ２９细胞形态变化　

ＨＴ２９细胞凋亡率为（３４３蝴４０）％，白英　

水提取液各剂量组与羟基喜树碱组　

ＨｒＩ’２９细胞凋亡率分别为（９．１４￣１＿５９）％、　

（２１．５５±２．０３）％、（４０．１０±２．５３）％和　

（３９．６７￣２．８２）％．与正常对照组相比有　

＾Ｎ　…　

显著性差异（Ｐ＜０．０１），且呈明显的剂　

量效应关系。见图２。　

３讨论　

正常对照组　白英水提取液１．２５ｍｇ／ｍＬ组　白英水提取液２．５ｍｇ／ｍＬ组　

白英是我国常用的抗肿瘤中草药　

之一。具有清热利湿、解毒消肿的功　

效，也可用于治疗疟疾、黄疸、水肿、淋　

¨ｌｌ　

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葭　，　

病、风湿性关节炎、白带等病证。近年　

来，对白英抗肿瘤作用的研究受到越　

来越广泛的关注。白英的化学成分复　

杂，先后从中分离出皂苷类、黄酮类、　

白英水提取液５ｍｇ／ｍＬ组　阳性对照组　

多酚类、有机酸类、倍半萜类、甾醇类、　

香豆素类、多糖类等化合物　。其中甾　

图２流式细胞仪检测细胞凋亡率　

（本文彩图刊登ｆｆ－ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｊｓｔｅｍ．ｃａ“电子图片”栏目）　

囝　！！璺　竺堂　塑　中压药　

蓊；　

七味三芎汤对实验性动脉粥样硬化大鼠血脂、ＳＯＤ、　

ＭＤＡ的影响　

李瀛均－陆健　范秀风　职利琴　王红　

（１．西安市中医医院，陕西西安７１０００１；２．陕西中医学院，陕西成阳７１２０４６）　

摘要　目的：观察七味三芎汤对动脉粥样硬化（ＡＳ）大鼠血脂及丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的影响，探　

讨其治疗ＡＳ的作用机制。方法：采用饲喂高脂饲料复制大鼠ＡＳ模型，以辛伐他汀为对照，观察七味三芎汤喂饲１Ｏ周后　

各组大鼠血脂、ＳＯＤ和ＭＤＡ水平。结果：七味三芎汤组和辛伐他汀组大鼠血浆中的ＴＣ、ＴＧ、ＬＤＬ—Ｃ、ＭＤＡ水平均低于模　

型组，ＳＯＤ活性高于模型组。结论：七味三芎汤通过降低血脂，降低ＭＤＡ水平，提高ＳＯＤ活性，从而减少脂质过氧化，改　

善血管内皮功能．起到抗ＡＳ作用。　

关键词　动脉粥样硬化　七味三芎汤　血脂　丙二醛超氧化物歧化酶　实验研究　

中图分类号Ｒ５４３．５０５　文献标识码Ａ　文章编号　１６７２一－３９７Ｘ（２０１１）ｌ０一ｏ０８５—０２　

动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，ＡＳ）是以动脉非炎症性、　

退行性和增生性为特征的血管病变，是引起多种心脑血管疾　

芎、生地、白芍、当归、檀香、丹参按１：３：４：３：２：５：１０比例水煎浓　

缩而成；辛伐他汀，山东鑫齐药业有限公司，批号：２００９１００４。　

２实验方法　

病的病理生理基础，严重危害人类健康。本病的发病机制尚　

未完全阐明，目前认为是由多种因素作用于不同环节所致ｎ　。　

大量的实验研究表明。氧化应激（Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　Ｓｔｒｅｓｓ）在动脉粥　

样硬化的病理生理过程中起重要的作用，导致血管内皮细胞　

功能障碍及血管平滑肌细胞增生［２－３１，而高脂血症也是公认的　

动脉粥样硬化的主要危险因素。本课题通过观察七味三芎汤　

对动脉粥样硬化模型大鼠的血脂干预作用及对ＳＯＤ、ＭＤＡ　

２．１　造模动物购回后，适应性饲养１周，按体重编号，完全　

随机分组，正常组１１只，造模组３９只，均自由进食进水。正　

常组喂养普通饲料，其余喂养自配ＡＳ饲料（蛋黄粉１０％，猪　

油５％，猪胆盐０．５％，基础饲料８４．５％），喂养２１周。２１周后　

随机选取１只正常组大鼠，３只造模组大鼠，禁食１２ｈ眼眶静　

脉采血，检测血清低密度脂蛋白、甘油三酯及总胆固醇．处死　

后取胸主动脉浸泡福尔马林，做病理切片。　

２．２动物分组及给药、取样方法造模成功后．造模组大鼠　

的影响，来探讨其治疗ＡＳ的作用机制。　

１实验材料　

１．１　实验动物　健康雄性ＳＤ大鼠５０只，体重（２２３±３７）ｇ，　

动物合格证号：第四军医大学医动证字ＳＣＫ２００２－　－００５。　

取３０只按体重随机分为３组：模型组、辛伐他汀组、七味三　

芎汤组，每组ｌ０只。正常组１０只为空白对照组。空白对照组　

１．２主要药物与试剂　ＳＯＤ、ＭＤＡ　ＥＬＩＳＡ试剂盒（南京建成　

生物技术公司，批号：２００９１１ｏ４）；七昧三芎汤，由三七粉、川　

以普通饲料继续喂养１０周，模型组、七味三芎汤组、辛伐他　

汀组继续以高脂饲料喂养１Ｏ周。同时，七味三芎汤组灌胃　

药筛选和开发提供了一定的理论基础和实验依据．其具体作　

用机制还有待于进一步研究。　

４参考文献　

【１】秦光远，黄桂林，邵建强，等．大肠癌的治疗进展．医学综述，　

２００９，１５（１）：５８　

ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　ｂｕｌｌｅｔｉｎ，２００９，５７（４）：４０８　

［６］张秀娟，马悦．白英的药理作用研究进展．亚太传统医药，２００８，４　

（１）：５５　

［７Ｊ　Ｙａｎｇ　ＪＳ，Ｗｕ　ＣＣ，Ｋｕｏ　ＣＬ，ｅｔ　ａ１．　Ｓｏｌａｎｕｍ　ｌｙｒａｔｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔ　

ａｆｆｅｃｔｅｄ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｉｎ　ｎｏｉＴａａｌ　ａｎｄ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｍｕｒｉｎｅ　

［２】李瑞玲，赵艳玲，张敬华．白英化学成分研究现状．天中学刊，　

２００９，２４（２）：２３　

ａｎｉｍａｌ　ｉｎ　ｖｉｖｏ．Ｈｕｍａｎ＆ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｌ　ｔｏｘｉａｃｏｌｏｇｙ，２０１０，２９（５）：　

３５９　

【３］朱海静，王开平，王瑞．白英对Ａ２７８０人卵巢癌细胞增殖的抑制　

作用．西南国防医药，２００９，１９（５）：５０９　

第一作者：万春霞（１９８２一），医学硕士，住院医师，研究方向为　

中西医结合临床及中医肿瘤。　

［４】刘淑华，魏仙风，白美姣．白荚甾体皂苷对肿瘤细胞的体外增殖　

抑制作用．江西中医药，２０１０，４１（１）：７１　

通讯作者：赵风达．ｈｇｄｄｒ２３３０１１＠ｓｉｎａ．．ｃｏｒｎ　

收稿日期：２０１ｌ—ｏ４—２４　

编辑：昊　宁　

［５】　Ｒａｎ　Ｙ，Ｓｈｅｎ　Ｌ，Ｚｈａｎｇ　ＤＷ，ｅｔ　ａ１．Ｔｗｏ　Ｆｌｅｗ　ｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ　

ｆｒｏｍ　Ｓｏｌａｎｕｍ　ｌｙｒａｔｕｍ　ｗｉｔｈ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｃｈｅｍｉｃ：ｌａ＆　

中医药　竺　竺竺堂竺　塑固