2024年8月26日发(作者：独水蕊)
南京中医药大学学报２０１０年７月第２６卷第４期
ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＮＡＮＪＩＮＧＴＣＭＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＶｏ１．２６Ｎｏ．４ Ｊｕｌｙ．２０１０
千金苇茎汤调控人肺小细胞癌Ｈ４４６中ｃａｓｐａｓｅ一３、
ＣＯＸ一２抗凋亡的研究
蒋凤荣 ，蒋Ｅｌ磊，张旭 （南京中医药大学基础医学院，江苏南京２１ＯＯ４６）
摘要：目的 研究千金苇茎汤对人肺小细胞癌Ｈ４４６凋亡的影响。方法 将千金苇茎汤通过化学分离法制得水提部位；
分为不同药物浓度，与Ｈ４４６共同培养，流式细胞仪细胞周期检测以及荧光显微镜检测凋亡结果；免疫组织化学检测
ｃａｓｐａｓｅ一３、ｃｏｘ－２蛋白的变化；ｒｅａ１ ｔｉｍｅ ＰＣＲ检测ｃａｓｐａｓｅ一３ ｍＲＮＡ、ｃｏｘ－２ ｍＲＮＡ的表达量。结果 不同浓度的千金苇
茎汤水提部位与Ｈ４４６培养后，细胞凋亡率明显升高以及ＰＣＮＡ、ｃａｓｐａｓｅ一３ ＲＮＡ水平和蛋白明显的改变（Ｐ％０．０５），并
有一定的浓度依赖性。结论 千金苇茎汤水提部位可以有效促进细胞凋亡，抑制肿瘤细胞转移。
关键词：千金苇茎汤；肺小细胞癌Ｈ４４６；ｅａｓｐａｓｅ一３；ｃｏｘ－２；凋亡
中图号：Ｒ２８５．５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１０００—５００５（２０１０）Ｏ４一Ｏ２７８一Ｏ２
千金苇茎汤源于唐・孙思邈《备急千金要
司）、碘化丙啶（ＰＩ）（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ），荧光显微镜
方》，其主要功效为清热化痰、宣肺利气、益气养 （ＯＬＹＰＵＳ，ＪＡＰＡＮ）引物由南京生物工程有限公
阴。此方常用治疗肺系疾病，主要集中于肺痈患 司合成。
者，对于肺癌治疗研究少有报道＿】］。因此，我们以
１．３ 实验方法
肺小细胞癌Ｈ４４６为研究对象，观察此方对其ＣＯＸ １．３．１细胞株的体外培养
一
２分子调控机制研究。
人肺癌细胞株（Ｈ４４６）和人脐静脉内皮细胞
１材料与方法 株（ＨＵＶＥＣ），用含１Ｏ％小牛血清的ＤＭＥＭ培
１．１药物和细胞
养液培养、传代。
千金苇茎汤由薏苡仁、苇茎、桃仁、冬瓜子等
１．３．２ Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光染色观察细胞凋亡
中药组成，生药由南京中医药大学门诊部提供，由
细胞数目为５×１０ 个／ｍＬ，接种于６孔板
方剂重点实验室分离提取水提有效部位。人肺细
中，加入千金苇茎汤及ＶＰ测试物，作用２４ ｈ，用
胞株（Ｈ４４６）、人脐静脉内皮细胞株（ＨＵＶＥＣ）购
ＰＢＳ或Ｈａｎｋ’Ｓ液洗涤细胞，固定液（甲醇：冰醋
于中国科学院上海生化与细胞生物学研究所。 酸３：１）４℃固定５ ｍｉｎ，Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色１０
１．２试剂与仪器
ｍｉｎ，用蒸馏水洗片后经封片剂封片，用带有荧光
ＤＭＥＭ培养基（ＧＩＢＣＯ，ＵＳＡ）（每Ｌ含１０ 素滤光片的荧光显微镜观察细胞。
小牛血清、Ｌ一谷氨酰胺０．３３ ｍｇ，青霉素１００ Ｕ、
１．３．３ ＰＩ染色法检测细胞周期
链霉素１００ Ｕ、ｐＨ ７．４）；胰蛋白酶（ＭＥＲＣＫ， 以０．２５ 胰酶消化、收集正常组、模型组、正
ＵＳＡ）；二甲基亚砜（ＤＭＳ０）（Ｍｅｒｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）；
丁醇ＩＩ组作用２４ ｈ后的贴壁细胞，以ＰＢＳ洗涤３
６孔细胞培养板（Ｃｏｓｔａｒ，Ｄｅｎｍａｒｋ）；细胞培养箱 遍，弃上清液，取１００￣Ｌ至上样管，加ＰＩ每管
（ＮＡＰＣ０，ＵＳＡ）；倒置相差显微镜（０ＬＹＭＰＵＳ，
２０ Ｌ，闭光反应３０ ｍｉｎ，用ＰＢＳ洗涤２次，弃上
ＪＡＰＡＮ）；无水乙醇（分析纯，上海振兴化学试剂 清，加ＰＢＳ ３００ ｕＬ后悬浮细胞，流式细胞仪
厂，批号：２００２１２００３６５），流式细胞仪（ＢＤ，ＵＳＡ）。 （ＦＡＣＳＣａ１ｉｂｕｒ，ＵＳＡ）测定细胞平均荧光强度。
Ｃａｓｅｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２（武汉博士德生物工程有限公
测定后以分析软件Ｃｅｌｌ Ｑｕｅｓｔ分析。
收稿日期：２０１０一Ｏ２—０９；修稿日期：２０１０一Ｏ３—１３
基金项目：国家科技部国际合作项目（２００６ＢＡＩ１１Ｂ０８）；江苏省高校自然科学基金（Ｏ７ＫＪＢ３６００８５）
作者简介：蒋凤荣（１９７５一），男，江苏泰州人，南京中医药大学讲师。＊通信作者：ｊｆｒ２５８＠１６３．ＣＯｒｎ
南京中医药大学学报２０１０年７月第２６卷第４期
ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＮＡＮＪＩＮＧＴＣＭＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＶｏ１．２６ Ｎｏ．４ Ｊｕｌｙ．２０１０
１．３．４免疫组化检测ｃａｓｐａｓｅ～３、ＣＯＸ一２
ＳＡＢＣ免疫组化法，以细胞核染成紫红色者
为阳性细胞，在低倍镜下选取染色最佳视野高倍
镜下计数，共计数６个高倍视野，计算阳性细胞。
１．３．５ Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ检测ｃａｓｅｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２
内参ｂｅｔａ—ａｃｔｉｎ、凋亡基因ｃａｓｅｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２
引物经Ｐｒｉｍｅｒ ５．０设计。ｂｅｔａ—ａｃｔｉｎ上游引物：
５’一ＧＴＧＧＧＧＣＧＣＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＡ一３’，下游引
物：５’一ＣＴＴＣＣＴＴＡＡＴＧＴＣＡＣＧＣＡＣＧＡＴＴＴＣ一
３ ，ＣＯＸ一２上游引物：５ 一ＴＧＡＡＡＣＣＣＡＣＴＣ—
ＣＡＡＡＣＡＣＡＧ一３ ，下游引物：５ 一ＴＣＡＴＣＡＧ—
ＧＣＡＣＡＧＧＡＧＧＡＡＧ一３ ；ｃａｓｅｐａｓｅ３上游引物：
５’一ＡＴＧＧＡＡＧＣＧＡＡＧＣＡＡＴＧＧＡＧＧＴＧ一３’，
下游引物：５’一ＣＴＧＴＡＣＣＡＧＡＣＣＧＡＧＡＴＧＴＣＡ
３。采用ＴＲＩＺｏＬ试剂盒提取总ＲＮＡ，紫外线
扫描定量。在微离心管内依次加入灭菌重蒸水
２Ｏ Ｌ、反应缓冲液４ Ｌ、ｄＮＴＰ混合物１ Ｌ、Ｏｌｉ—
ｇｏ（ＤＴ）１ Ｌ、总ＲＮＡＸ Ｌ、Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶１
Ｌ，反应体系２０ Ｉ ，ＰＣＲ仪制备ｃＤＮＡ。在八联
中依次加入灭菌重蒸水９ Ｌ、ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ １５
ｇＬ、引物１ Ｉ ｃＤＮＡ ５ Ｌ。以９２．５℃预变性４５
Ｓ；５０℃变性４５ Ｓ；７２．５℃退火、延生９０ Ｓ；在ＰＣＲ
仪上进行４０次循环。扩增过程及荧光信号检查、
数据的储存和分析由仪器软件自动完成。
１．３．６数据分析
运用ＳＰＳＳ １３．５统计软件，以均数±标准差
表示，采用单因素方差分析及ｔ检验。
２ 结果
２．１对Ｈ４４６的细胞凋亡的改变
结果提示经千金苇茎汤水提部位作用后
Ｈ４４６的凋亡率增高（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）（插页
Ⅲ图１、２），说明千金苇茎汤水提部位能促进细胞
凋亡，并呈一定的量效关系。
２．２对Ｈ４４６细胞的ｃａｓｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２影响
ｃａｓｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２阳性反应细胞核出现明显
的紫红色，每例随机观察１００个以上细胞，计算阳
性细胞数。结果显示，千金苇茎汤水提部位对
Ｈ４４６中的ｃａｓｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２均有影响，以高剂量
最为明显（Ｐ＜０．０１）（插页Ⅲ图３、４，表１）。
２．３对Ｈ４４６细胞的ｃａｓｐａｓｅ～３、ＣＯＸ一２ｍＲＮＡ影
响
Ｒｅａｈｉｍｅ ＰＣＲ结果显示，千金苇茎汤水提部
位对Ｈ４４６中的ｃａｓｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２ ｍＲＮＡ均有一
定的影响，以高剂量最为明显（Ｐ＜０．０１），提示千
金苇茎汤能调控ｃａｓｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２ ｍＲＮＡ的表
达，促进Ｈ４４６细胞的凋亡。
表１对Ｈ４４６ｃａｓｐａｓｅ一３、ｃｏｘ－２的影响（ ±Ｓ，Ｉｔ＝６ｌ
注：与对照组比较， Ｐ＜０．０５，一Ｐ＜０．０ｌ。
３讨论
研究表明环氧合酶（ｃｙｃＪｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ一２，ＣＯＸ一
２）基因转染的肿瘤细胞生长旺盛而凋亡受到明显
抑制，转染ＣＯＸ一２基因的肿瘤细胞对凋亡的抵抗
能力、转移能力及促血管内皮细胞迁移能力增强，
而且ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＭＭＰ一２等多种与肿瘤生长、
血管生成有关和转移的因子表达都明显增强ｌ２］。
ＣＯＸ一２可通过催化细胞产生的ＰＧＥ。使核内信号
转导通路中活化的ＭＡＰＫ蛋白水平增加４～５
倍，诱导肿瘤抑癌基因ＢＣＬ一２的表达，从而减少
ｃａｓｐａｓｅ一３的活化，抑制细胞凋亡＿３］。
实验结果显示，正常肿瘤细胞组中，细胞核
大，无核碎裂，反折光不明显，流式细胞仪无细胞
凋亡现象，细胞中ｃａｓｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２蛋白不明显。
加人中药复方千金苇茎汤水提部位进行干预后，
细胞核出现核碎裂，反折光明显增强；流式细胞仪
出现细胞凋亡，细胞中ＣＯＸ一２蛋白表达降低，
ｃａｓｐａｓｅ一３蛋白表达升高，提示千金苇茎汤通过某
些受体激活ＣＯＸ一２，启动有关信号分子的表达、入
核、转录有关的凋亡蛋白。具体成分和分子信号
机制有待于进一步深入研究。
参考文献：
［１］王丽英．千金苇茎汤治疗肺系疾病［Ｊ］．实用中医内科
杂志，】９９８，ｌ２（２）：４３—４４．
［－２］Ｃｈｅｎ ＷＳ，Ｗｅｉ ｓＪ，Ｉ ｉｕ ＪＭ，ｅｔ ａ１．Ｔｕｍｏｒ ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ
ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｏｆ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ
ｗｉｔｈ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ一２（ＣＯＸ一２） ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ
ｂｙ ａ ＣＯＸ一２ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｅｔｏｄｏｌａｃ［－Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，
２００１，９１（６）：８９４—８９９．
［３］Ｓｈｅｎｇ Ｈ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ Ｂｃｌ一２ ｅｘｐｒｅｓ—
ｓｉｏｎ ｂｙ ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ－］．
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９９８，５８（２）：３６２—３６６．
（编辑：李伟东）
2024年8月26日发(作者：独水蕊)
南京中医药大学学报２０１０年７月第２６卷第４期
ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＮＡＮＪＩＮＧＴＣＭＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＶｏ１．２６Ｎｏ．４ Ｊｕｌｙ．２０１０
千金苇茎汤调控人肺小细胞癌Ｈ４４６中ｃａｓｐａｓｅ一３、
ＣＯＸ一２抗凋亡的研究
蒋凤荣 ，蒋Ｅｌ磊，张旭 （南京中医药大学基础医学院，江苏南京２１ＯＯ４６）
摘要：目的 研究千金苇茎汤对人肺小细胞癌Ｈ４４６凋亡的影响。方法 将千金苇茎汤通过化学分离法制得水提部位；
分为不同药物浓度，与Ｈ４４６共同培养，流式细胞仪细胞周期检测以及荧光显微镜检测凋亡结果；免疫组织化学检测
ｃａｓｐａｓｅ一３、ｃｏｘ－２蛋白的变化；ｒｅａ１ ｔｉｍｅ ＰＣＲ检测ｃａｓｐａｓｅ一３ ｍＲＮＡ、ｃｏｘ－２ ｍＲＮＡ的表达量。结果 不同浓度的千金苇
茎汤水提部位与Ｈ４４６培养后，细胞凋亡率明显升高以及ＰＣＮＡ、ｃａｓｐａｓｅ一３ ＲＮＡ水平和蛋白明显的改变（Ｐ％０．０５），并
有一定的浓度依赖性。结论 千金苇茎汤水提部位可以有效促进细胞凋亡，抑制肿瘤细胞转移。
关键词：千金苇茎汤；肺小细胞癌Ｈ４４６；ｅａｓｐａｓｅ一３；ｃｏｘ－２；凋亡
中图号：Ｒ２８５．５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１０００—５００５（２０１０）Ｏ４一Ｏ２７８一Ｏ２
千金苇茎汤源于唐・孙思邈《备急千金要
司）、碘化丙啶（ＰＩ）（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ），荧光显微镜
方》，其主要功效为清热化痰、宣肺利气、益气养 （ＯＬＹＰＵＳ，ＪＡＰＡＮ）引物由南京生物工程有限公
阴。此方常用治疗肺系疾病，主要集中于肺痈患 司合成。
者，对于肺癌治疗研究少有报道＿】］。因此，我们以
１．３ 实验方法
肺小细胞癌Ｈ４４６为研究对象，观察此方对其ＣＯＸ １．３．１细胞株的体外培养
一
２分子调控机制研究。
人肺癌细胞株（Ｈ４４６）和人脐静脉内皮细胞
１材料与方法 株（ＨＵＶＥＣ），用含１Ｏ％小牛血清的ＤＭＥＭ培
１．１药物和细胞
养液培养、传代。
千金苇茎汤由薏苡仁、苇茎、桃仁、冬瓜子等
１．３．２ Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光染色观察细胞凋亡
中药组成，生药由南京中医药大学门诊部提供，由
细胞数目为５×１０ 个／ｍＬ，接种于６孔板
方剂重点实验室分离提取水提有效部位。人肺细
中，加入千金苇茎汤及ＶＰ测试物，作用２４ ｈ，用
胞株（Ｈ４４６）、人脐静脉内皮细胞株（ＨＵＶＥＣ）购
ＰＢＳ或Ｈａｎｋ’Ｓ液洗涤细胞，固定液（甲醇：冰醋
于中国科学院上海生化与细胞生物学研究所。 酸３：１）４℃固定５ ｍｉｎ，Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色１０
１．２试剂与仪器
ｍｉｎ，用蒸馏水洗片后经封片剂封片，用带有荧光
ＤＭＥＭ培养基（ＧＩＢＣＯ，ＵＳＡ）（每Ｌ含１０ 素滤光片的荧光显微镜观察细胞。
小牛血清、Ｌ一谷氨酰胺０．３３ ｍｇ，青霉素１００ Ｕ、
１．３．３ ＰＩ染色法检测细胞周期
链霉素１００ Ｕ、ｐＨ ７．４）；胰蛋白酶（ＭＥＲＣＫ， 以０．２５ 胰酶消化、收集正常组、模型组、正
ＵＳＡ）；二甲基亚砜（ＤＭＳ０）（Ｍｅｒｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）；
丁醇ＩＩ组作用２４ ｈ后的贴壁细胞，以ＰＢＳ洗涤３
６孔细胞培养板（Ｃｏｓｔａｒ，Ｄｅｎｍａｒｋ）；细胞培养箱 遍，弃上清液，取１００￣Ｌ至上样管，加ＰＩ每管
（ＮＡＰＣ０，ＵＳＡ）；倒置相差显微镜（０ＬＹＭＰＵＳ，
２０ Ｌ，闭光反应３０ ｍｉｎ，用ＰＢＳ洗涤２次，弃上
ＪＡＰＡＮ）；无水乙醇（分析纯，上海振兴化学试剂 清，加ＰＢＳ ３００ ｕＬ后悬浮细胞，流式细胞仪
厂，批号：２００２１２００３６５），流式细胞仪（ＢＤ，ＵＳＡ）。 （ＦＡＣＳＣａ１ｉｂｕｒ，ＵＳＡ）测定细胞平均荧光强度。
Ｃａｓｅｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２（武汉博士德生物工程有限公
测定后以分析软件Ｃｅｌｌ Ｑｕｅｓｔ分析。
收稿日期：２０１０一Ｏ２—０９；修稿日期：２０１０一Ｏ３—１３
基金项目：国家科技部国际合作项目（２００６ＢＡＩ１１Ｂ０８）；江苏省高校自然科学基金（Ｏ７ＫＪＢ３６００８５）
作者简介：蒋凤荣（１９７５一），男，江苏泰州人，南京中医药大学讲师。＊通信作者：ｊｆｒ２５８＠１６３．ＣＯｒｎ
南京中医药大学学报２０１０年７月第２６卷第４期
ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＮＡＮＪＩＮＧＴＣＭＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＶｏ１．２６ Ｎｏ．４ Ｊｕｌｙ．２０１０
１．３．４免疫组化检测ｃａｓｐａｓｅ～３、ＣＯＸ一２
ＳＡＢＣ免疫组化法，以细胞核染成紫红色者
为阳性细胞，在低倍镜下选取染色最佳视野高倍
镜下计数，共计数６个高倍视野，计算阳性细胞。
１．３．５ Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ检测ｃａｓｅｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２
内参ｂｅｔａ—ａｃｔｉｎ、凋亡基因ｃａｓｅｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２
引物经Ｐｒｉｍｅｒ ５．０设计。ｂｅｔａ—ａｃｔｉｎ上游引物：
５’一ＧＴＧＧＧＧＣＧＣＣＣＣＡＧＧＣＡＣＣＡ一３’，下游引
物：５’一ＣＴＴＣＣＴＴＡＡＴＧＴＣＡＣＧＣＡＣＧＡＴＴＴＣ一
３ ，ＣＯＸ一２上游引物：５ 一ＴＧＡＡＡＣＣＣＡＣＴＣ—
ＣＡＡＡＣＡＣＡＧ一３ ，下游引物：５ 一ＴＣＡＴＣＡＧ—
ＧＣＡＣＡＧＧＡＧＧＡＡＧ一３ ；ｃａｓｅｐａｓｅ３上游引物：
５’一ＡＴＧＧＡＡＧＣＧＡＡＧＣＡＡＴＧＧＡＧＧＴＧ一３’，
下游引物：５’一ＣＴＧＴＡＣＣＡＧＡＣＣＧＡＧＡＴＧＴＣＡ
３。采用ＴＲＩＺｏＬ试剂盒提取总ＲＮＡ，紫外线
扫描定量。在微离心管内依次加入灭菌重蒸水
２Ｏ Ｌ、反应缓冲液４ Ｌ、ｄＮＴＰ混合物１ Ｌ、Ｏｌｉ—
ｇｏ（ＤＴ）１ Ｌ、总ＲＮＡＸ Ｌ、Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶１
Ｌ，反应体系２０ Ｉ ，ＰＣＲ仪制备ｃＤＮＡ。在八联
中依次加入灭菌重蒸水９ Ｌ、ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ １５
ｇＬ、引物１ Ｉ ｃＤＮＡ ５ Ｌ。以９２．５℃预变性４５
Ｓ；５０℃变性４５ Ｓ；７２．５℃退火、延生９０ Ｓ；在ＰＣＲ
仪上进行４０次循环。扩增过程及荧光信号检查、
数据的储存和分析由仪器软件自动完成。
１．３．６数据分析
运用ＳＰＳＳ １３．５统计软件，以均数±标准差
表示，采用单因素方差分析及ｔ检验。
２ 结果
２．１对Ｈ４４６的细胞凋亡的改变
结果提示经千金苇茎汤水提部位作用后
Ｈ４４６的凋亡率增高（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）（插页
Ⅲ图１、２），说明千金苇茎汤水提部位能促进细胞
凋亡，并呈一定的量效关系。
２．２对Ｈ４４６细胞的ｃａｓｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２影响
ｃａｓｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２阳性反应细胞核出现明显
的紫红色，每例随机观察１００个以上细胞，计算阳
性细胞数。结果显示，千金苇茎汤水提部位对
Ｈ４４６中的ｃａｓｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２均有影响，以高剂量
最为明显（Ｐ＜０．０１）（插页Ⅲ图３、４，表１）。
２．３对Ｈ４４６细胞的ｃａｓｐａｓｅ～３、ＣＯＸ一２ｍＲＮＡ影
响
Ｒｅａｈｉｍｅ ＰＣＲ结果显示，千金苇茎汤水提部
位对Ｈ４４６中的ｃａｓｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２ ｍＲＮＡ均有一
定的影响，以高剂量最为明显（Ｐ＜０．０１），提示千
金苇茎汤能调控ｃａｓｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２ ｍＲＮＡ的表
达，促进Ｈ４４６细胞的凋亡。
表１对Ｈ４４６ｃａｓｐａｓｅ一３、ｃｏｘ－２的影响（ ±Ｓ，Ｉｔ＝６ｌ
注：与对照组比较， Ｐ＜０．０５，一Ｐ＜０．０ｌ。
３讨论
研究表明环氧合酶（ｃｙｃＪｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ一２，ＣＯＸ一
２）基因转染的肿瘤细胞生长旺盛而凋亡受到明显
抑制，转染ＣＯＸ一２基因的肿瘤细胞对凋亡的抵抗
能力、转移能力及促血管内皮细胞迁移能力增强，
而且ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ、ＭＭＰ一２等多种与肿瘤生长、
血管生成有关和转移的因子表达都明显增强ｌ２］。
ＣＯＸ一２可通过催化细胞产生的ＰＧＥ。使核内信号
转导通路中活化的ＭＡＰＫ蛋白水平增加４～５
倍，诱导肿瘤抑癌基因ＢＣＬ一２的表达，从而减少
ｃａｓｐａｓｅ一３的活化，抑制细胞凋亡＿３］。
实验结果显示，正常肿瘤细胞组中，细胞核
大，无核碎裂，反折光不明显，流式细胞仪无细胞
凋亡现象，细胞中ｃａｓｐａｓｅ一３、ＣＯＸ一２蛋白不明显。
加人中药复方千金苇茎汤水提部位进行干预后，
细胞核出现核碎裂，反折光明显增强；流式细胞仪
出现细胞凋亡，细胞中ＣＯＸ一２蛋白表达降低，
ｃａｓｐａｓｅ一３蛋白表达升高，提示千金苇茎汤通过某
些受体激活ＣＯＸ一２，启动有关信号分子的表达、入
核、转录有关的凋亡蛋白。具体成分和分子信号
机制有待于进一步深入研究。
参考文献：
［１］王丽英．千金苇茎汤治疗肺系疾病［Ｊ］．实用中医内科
杂志，】９９８，ｌ２（２）：４３—４４．
［－２］Ｃｈｅｎ ＷＳ，Ｗｅｉ ｓＪ，Ｉ ｉｕ ＪＭ，ｅｔ ａ１．Ｔｕｍｏｒ ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ
ａｎｄ ｌｉｖｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｏｆ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ
ｗｉｔｈ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ一２（ＣＯＸ一２） ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ
ｂｙ ａ ＣＯＸ一２ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｅｔｏｄｏｌａｃ［－Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，
２００１，９１（６）：８９４—８９９．
［３］Ｓｈｅｎｇ Ｈ．Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ Ｂｃｌ一２ ｅｘｐｒｅｓ—
ｓｉｏｎ ｂｙ ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ２ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ－］．
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，１９９８，５８（２）：３６２—３６６．
（编辑：李伟东）