2024年3月30日发(作者：兰俏美)
siRNA-mate 转染试剂使用步骤及说明
产品介绍 与其它转染试剂比较，siRNA-mate 转染效率高、细胞存活率高、毒性小。
可广泛用 于瞬时和稳定转染，也可以应用于蛋白表达和基因功能的研究。 转染试剂保存
在 4℃，有效期 2 年。
重要提示 1. 细胞的状态：转染时贴壁细胞的密度以 30 - 50%为佳，而且转染时细胞
应处在生长旺 盛的对数生长期。细胞密度过高和细胞传代数过高会影响转染效果。 2.
siRNA 的质量：使用高纯度的 siRNA 也是转染成功的关键。在转染前需确定 siRNA 的
含量 和纯度，实验过程中需要使用DEPC 处理过的耗材和试剂，注意避免RNase 污染。
3. 血清的影响：在制备 siRNA-mate和siRNA 形成复合体过程中不能添加血清，建议用
OPTIMEM 或其他无血清培养基（如DMEM、RPMI-1640 等）稀释 siRNA 和转染试剂，
以达到 复合物形成的最佳效果。但是，在随后的转染过程中，血清的存在并不影响复合体
的 转染效果。 4. 转染试剂的用量：对于一定量的 siRNA 建议尝试按照推荐剂量的
siRNA-mate 转染试剂进 行优化，以确定最佳的转染效率。以 24 孔板为例，每 10pmol
siRNA 可使用0.5 μl，1 μl， 1.5 μl 和 2 μl 转染试剂作为初步实验条件。 操作流程（24
孔板） 以24孔板为例，若要检测基因沉默的效果，推荐最低 siRNA 终浓度 10 nM；若
要在显 微镜下从荧光强度看转染效率，因荧光信号被检测到需要一定的敏感度，推荐
siRNA 终浓 度50 nM。遵循以下操作方法可以高效地将 siRNA 转染贴壁和悬浮培养的
多种真核细胞。 但是对某些特殊的细胞系和培养条件，或特殊应用等，也许需要单独特别
优化。
A. 细胞铺板 贴壁细胞数量：在转染实验之前的 18 - 24 个小时，在每个孔的 500 μl
生长培养基中加入 1.5 - 3.5 × 104 个细胞（确保转染时细胞密度在 30 - 50%）。 悬浮
细胞数量：转染实验的当天，在 500 μl 生长培养基中加入 1 - 2 × 105 个细胞。注 意：
转染时应确保细胞没有过度生长或处于休止期。 B. 转染复合物的制备 1. 将 siRNA-
mate 转染试剂放置于室温中，使用前轻轻混匀。 2. 将 100 μl DMEM 或OPTI-MEM
（无血清和无抗生素）加入无菌EP 管中。 3. 在上述含有 DMEM 培养液的EP 管中加
入10 pmol (140 ng) 待转染的siRNA，并充分混匀。 随后在管子中加入 2 μl siRNA-
mate 转染试剂，快速涡旋 10 s 使其完全混匀。 4. 室温静置 10分钟，使siRNA 和转
染试剂形成转染复合物。静置时间不要超过 30 min。 C. 转染过程 1. 趁静置时，给 24
孔板换液，每孔换上 0.5 ml 预热的新鲜培养基。 2. 将 100 µl 转染混合物加入孔中，终
体系为 600 µl，siRNA 终浓度为 16.7 nM。加完后将板轻 晃摇匀。 3. 37℃静置培养细
胞，检测基因沉默水平可在24 - 72 h 内收样检测mRNA（qRT-PCR 实验等）， 或48 -
96 h 内检测蛋白（Western Blot 实验等）。
2024年3月30日发(作者：兰俏美)
siRNA-mate 转染试剂使用步骤及说明
产品介绍 与其它转染试剂比较，siRNA-mate 转染效率高、细胞存活率高、毒性小。
可广泛用 于瞬时和稳定转染，也可以应用于蛋白表达和基因功能的研究。 转染试剂保存
在 4℃，有效期 2 年。
重要提示 1. 细胞的状态：转染时贴壁细胞的密度以 30 - 50%为佳，而且转染时细胞
应处在生长旺 盛的对数生长期。细胞密度过高和细胞传代数过高会影响转染效果。 2.
siRNA 的质量：使用高纯度的 siRNA 也是转染成功的关键。在转染前需确定 siRNA 的
含量 和纯度，实验过程中需要使用DEPC 处理过的耗材和试剂，注意避免RNase 污染。
3. 血清的影响：在制备 siRNA-mate和siRNA 形成复合体过程中不能添加血清，建议用
OPTIMEM 或其他无血清培养基（如DMEM、RPMI-1640 等）稀释 siRNA 和转染试剂，
以达到 复合物形成的最佳效果。但是，在随后的转染过程中，血清的存在并不影响复合体
的 转染效果。 4. 转染试剂的用量：对于一定量的 siRNA 建议尝试按照推荐剂量的
siRNA-mate 转染试剂进 行优化，以确定最佳的转染效率。以 24 孔板为例，每 10pmol
siRNA 可使用0.5 μl，1 μl， 1.5 μl 和 2 μl 转染试剂作为初步实验条件。 操作流程（24
孔板） 以24孔板为例，若要检测基因沉默的效果，推荐最低 siRNA 终浓度 10 nM；若
要在显 微镜下从荧光强度看转染效率，因荧光信号被检测到需要一定的敏感度，推荐
siRNA 终浓 度50 nM。遵循以下操作方法可以高效地将 siRNA 转染贴壁和悬浮培养的
多种真核细胞。 但是对某些特殊的细胞系和培养条件，或特殊应用等，也许需要单独特别
优化。
A. 细胞铺板 贴壁细胞数量：在转染实验之前的 18 - 24 个小时，在每个孔的 500 μl
生长培养基中加入 1.5 - 3.5 × 104 个细胞（确保转染时细胞密度在 30 - 50%）。 悬浮
细胞数量：转染实验的当天，在 500 μl 生长培养基中加入 1 - 2 × 105 个细胞。注 意：
转染时应确保细胞没有过度生长或处于休止期。 B. 转染复合物的制备 1. 将 siRNA-
mate 转染试剂放置于室温中，使用前轻轻混匀。 2. 将 100 μl DMEM 或OPTI-MEM
（无血清和无抗生素）加入无菌EP 管中。 3. 在上述含有 DMEM 培养液的EP 管中加
入10 pmol (140 ng) 待转染的siRNA，并充分混匀。 随后在管子中加入 2 μl siRNA-
mate 转染试剂，快速涡旋 10 s 使其完全混匀。 4. 室温静置 10分钟，使siRNA 和转
染试剂形成转染复合物。静置时间不要超过 30 min。 C. 转染过程 1. 趁静置时，给 24
孔板换液，每孔换上 0.5 ml 预热的新鲜培养基。 2. 将 100 µl 转染混合物加入孔中，终
体系为 600 µl，siRNA 终浓度为 16.7 nM。加完后将板轻 晃摇匀。 3. 37℃静置培养细
胞，检测基因沉默水平可在24 - 72 h 内收样检测mRNA（qRT-PCR 实验等）， 或48 -
96 h 内检测蛋白（Western Blot 实验等）。