2024年4月6日发(作者：梁熙阳)
Salmonella LAMP检测试剂盒（Version2，Jan. 2007） 广州华峰生物科技有限公司
沙门氏菌 LAMP检测试剂盒使用说明书
Loop-mediated Isothermal Amplification Method
（使用前请详细阅读本说明书）
前言
本试剂盒采用LAMP方法结合荧光染料显色的体外扩增和检测技术，适用于食品或环境中沙门氏菌快速检测。
试剂盒组成
组成成份（20 test/kit）
DNA提取液
反应液Sal
稳定液
Bst酶
阳性对照DNA Sal
阴性对照
显色液
规 格
1.6mL×1管
440μL×1管
600μL×1管
10μL×1管
50μL×1管
50μL×1管
40μL×1管
储存方法及有效期
本试剂盒储存于-20℃下有效期为一年（请在有效期内使用）。
实验前准备
培养基（前增菌用）
金属浴或者水浴锅
高速离心机
碎冰
移液器吸嘴
0.2mL PCR反应管
工作服及一次性手套
移液器（0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL） 1.5ml无菌离心管
样品采集及存放
1. 采集
本试剂盒适用于增菌液或可疑菌落样本。样品制备、增菌培养和分离按照GB/T 4789.4标准方法进行。
2. 存放
待测样品在2-8℃保存不应超过24小时；-20℃长期保存，应避免反复冻融。
使用方法
1. 样品处理
增菌液模板DNA的制备，对于标准方法培养的增菌液：
a)
b)
直接取该增菌液1mL加到1.5mL无菌离心管中，10000r/min离心2min，尽量吸弃上清；
加入80μL DNA提取液，混匀后沸水浴10min，置冰上10min；
c) 10000 r/min离心2min，上清即为核酸模板；取上清置-20℃可长期保存备用。
可疑菌落模板DNA的制备：
对于标准方法分离到的可疑菌落，可直接挑取可疑菌落，加入80μL样品预处理液，再按照上述步骤b)制备模板DNA
以待检测。
2. 核酸扩增
a)
b)
试剂盒内反应液Sal使用前建议室温融化振荡混匀后，2000r/min离心10sec；其余室温融化后，2000r/min离心
10sec即可。
设所需LAMP反应管数为n（n=样品数+1管阳性对照+1管阴性对照），每个PCR反应管中体系如下表：
试剂
用量
反应液Sal Bst酶
22μL 0.5μL
第1页
Salmonella LAMP检测试剂盒（Version2，Jan. 2007） 广州华峰生物科技有限公司
c)
d)
e)
计算好各试剂的用量，加入一洁净的1.5mL离心管中，混合均匀，2000r/min离心10sec，向设定的n个PCR
反应管中分别加入22.5μL上述混合液，在上述每个反应管中再分别加入30μL稳定液。移至样品处理区加样；
向上述n个PCR反应管内按顺序分别加入阴性对照、待检模板和阳性对照各2.5μL，盖紧管盖并做好标记，
移至反应区；
置65℃恒温反应60min。
3. 结果检测
取出PCR反应管，冷却至室温，2000r/min离心10sec，分别加入2μL显色液，轻轻混匀，即可观察；建议在黑色
背景下观察。
4. 结果判断
在阴性对照反应管液体为橙色，阳性对照反应管液体呈绿色的条件下：
a)
b)
待检样品反应管液体呈绿色，该样品结果为沙门氏菌阳性；
待检样品反应管液体呈橙色则可报告沙门氏菌检验结果为阴性；
若阴阳性对照反应管结果与上述情况不符，则本次检测结果无效，应重新检测。
产品特点
1. 该试剂盒能够检测出沙门氏菌，对于非沙门氏菌显示阴性结果。
2. 该试剂盒检测的灵敏度为15cfu/test。
注意事项
1. 严格执行行业行政主管部门颁布的有关基因扩增检验实验室的管理规范。
2. 本试剂盒仅用于体外检测，使用前请仔细阅读试剂盒说明书全文。
3. 实验请严格分区操作：
第一区： 试剂准备区 ——
第二区： 标本制备区 ——
第三区： 反应和分析区 ——
准备所需试剂
待测样品及对照样品处理
扩增及结果分析
4. 反应温度应在60～65℃范围内，请确保仪器的真实温度。建议使用经校正的仪器。
5. 各区物品均为专用，不得交叉使用，避免污染。
6. 试剂盒内各试剂使用前，充分融化后稍离心；避免反复冻融。
7. 在-20℃保存得样品DNA提取产物，应在加样前置室温融化，作短暂离心后使用。
8. 实验过程中请穿工作服, 带一次性手套, 建议使用带滤心的一次性吸嘴。
9. 加样、分装时应尽量避免产生气泡，反应前注意检查各反应管是否盖紧，以免泄露污染仪器。
10. 结果观察时应小心谨慎，避免振荡过于剧烈，反应产物外逸，建议在通风厨或生物安全柜中操作。
11. 反应管冷却至室温后观察结果可有效避免反应产物外逸，建议取出后置室温冷却。
12. 试剂盒内的阳性对照应视为具有污染性物质，应注意避免污染其他样品和反应试剂，导致错误检验结果。
13. 分析完毕后反应管密封在专用的容器内，丢弃于指定地点；实验过程中废弃物和一次性耗材需经过灭菌后丢弃。
14.
工作台及各物品定期用1％次氯酸钠、75％酒精或紫外灯处理。
技术咨询
广州华峰生物科技有限公司
广州市科学城揽月路80号科技创新基地C401-C411
电话：************
传真：************
邮编：510663
E-mail:********************
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沙门氏菌 LAMP检测试剂盒使用说明书
Loop-mediated Isothermal Amplification Method
（使用前请详细阅读本说明书）
前言
本试剂盒采用LAMP方法结合荧光染料显色的体外扩增和检测技术，适用于食品或环境中沙门氏菌快速检测。
试剂盒组成
组成成份（20 test/kit）
DNA提取液
反应液Sal
稳定液
Bst酶
阳性对照DNA Sal
阴性对照
显色液
规 格
1.6mL×1管
440μL×1管
600μL×1管
10μL×1管
50μL×1管
50μL×1管
40μL×1管
储存方法及有效期
本试剂盒储存于-20℃下有效期为一年（请在有效期内使用）。
实验前准备
培养基（前增菌用）
金属浴或者水浴锅
高速离心机
碎冰
移液器吸嘴
0.2mL PCR反应管
工作服及一次性手套
移液器（0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL） 1.5ml无菌离心管
样品采集及存放
1. 采集
本试剂盒适用于增菌液或可疑菌落样本。样品制备、增菌培养和分离按照GB/T 4789.4标准方法进行。
2. 存放
待测样品在2-8℃保存不应超过24小时；-20℃长期保存，应避免反复冻融。
使用方法
1. 样品处理
增菌液模板DNA的制备，对于标准方法培养的增菌液：
a)
b)
直接取该增菌液1mL加到1.5mL无菌离心管中，10000r/min离心2min，尽量吸弃上清；
加入80μL DNA提取液，混匀后沸水浴10min，置冰上10min；
c) 10000 r/min离心2min，上清即为核酸模板；取上清置-20℃可长期保存备用。
可疑菌落模板DNA的制备：
对于标准方法分离到的可疑菌落，可直接挑取可疑菌落，加入80μL样品预处理液，再按照上述步骤b)制备模板DNA
以待检测。
2. 核酸扩增
a)
b)
试剂盒内反应液Sal使用前建议室温融化振荡混匀后，2000r/min离心10sec；其余室温融化后，2000r/min离心
10sec即可。
设所需LAMP反应管数为n（n=样品数+1管阳性对照+1管阴性对照），每个PCR反应管中体系如下表：
试剂
用量
反应液Sal Bst酶
22μL 0.5μL
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Salmonella LAMP检测试剂盒（Version2，Jan. 2007） 广州华峰生物科技有限公司
c)
d)
e)
计算好各试剂的用量，加入一洁净的1.5mL离心管中，混合均匀，2000r/min离心10sec，向设定的n个PCR
反应管中分别加入22.5μL上述混合液，在上述每个反应管中再分别加入30μL稳定液。移至样品处理区加样；
向上述n个PCR反应管内按顺序分别加入阴性对照、待检模板和阳性对照各2.5μL，盖紧管盖并做好标记，
移至反应区；
置65℃恒温反应60min。
3. 结果检测
取出PCR反应管，冷却至室温，2000r/min离心10sec，分别加入2μL显色液，轻轻混匀，即可观察；建议在黑色
背景下观察。
4. 结果判断
在阴性对照反应管液体为橙色，阳性对照反应管液体呈绿色的条件下：
a)
b)
待检样品反应管液体呈绿色，该样品结果为沙门氏菌阳性；
待检样品反应管液体呈橙色则可报告沙门氏菌检验结果为阴性；
若阴阳性对照反应管结果与上述情况不符，则本次检测结果无效，应重新检测。
产品特点
1. 该试剂盒能够检测出沙门氏菌，对于非沙门氏菌显示阴性结果。
2. 该试剂盒检测的灵敏度为15cfu/test。
注意事项
1. 严格执行行业行政主管部门颁布的有关基因扩增检验实验室的管理规范。
2. 本试剂盒仅用于体外检测，使用前请仔细阅读试剂盒说明书全文。
3. 实验请严格分区操作：
第一区： 试剂准备区 ——
第二区： 标本制备区 ——
第三区： 反应和分析区 ——
准备所需试剂
待测样品及对照样品处理
扩增及结果分析
4. 反应温度应在60～65℃范围内，请确保仪器的真实温度。建议使用经校正的仪器。
5. 各区物品均为专用，不得交叉使用，避免污染。
6. 试剂盒内各试剂使用前，充分融化后稍离心；避免反复冻融。
7. 在-20℃保存得样品DNA提取产物，应在加样前置室温融化，作短暂离心后使用。
8. 实验过程中请穿工作服, 带一次性手套, 建议使用带滤心的一次性吸嘴。
9. 加样、分装时应尽量避免产生气泡，反应前注意检查各反应管是否盖紧，以免泄露污染仪器。
10. 结果观察时应小心谨慎，避免振荡过于剧烈，反应产物外逸，建议在通风厨或生物安全柜中操作。
11. 反应管冷却至室温后观察结果可有效避免反应产物外逸，建议取出后置室温冷却。
12. 试剂盒内的阳性对照应视为具有污染性物质，应注意避免污染其他样品和反应试剂，导致错误检验结果。
13. 分析完毕后反应管密封在专用的容器内，丢弃于指定地点；实验过程中废弃物和一次性耗材需经过灭菌后丢弃。
14.
工作台及各物品定期用1％次氯酸钠、75％酒精或紫外灯处理。
技术咨询
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