2024年4月7日发(作者：道寄松)

IF步骤：

一、铺96孔板：

1、首先将细胞用胰酶消化下来，离心去上清按照细胞实际的数量进行传代。

2、一般是传代到有15min培养基的培养皿内，混合均匀后根据需要细胞的量进行选

择。

3、进行细胞计数，一个96孔板里面的孔保证细胞个数在4000个左右即可。

二、实验条件：

1.细胞固定:4%多聚甲醛固定15min

2.洗涤PBS 3次*3min

3.细胞膜通透：0.2%Triton X-100覆盖细胞8min, 洗涤PBS 4次*3min

4.10%正常山羊血清37度封闭40min

5.孵育一抗（5% 正常山羊血清稀释）,4°过夜。（上清50ul直接孵育，抗体稀释至

0.02mg/ml（50ul），血清按1:100稀释）

6.洗涤PBS 3次*3min

7.二抗1:200（5% 正常山羊血清稀释）,37度孵育40分钟，注意避光。稀释二抗后

注意用0.22的滤器进行过滤。

（羊抗兔，鼠FITC 厂家 Jackson）

8.洗涤PBS 3次*3min,注意避光

染核：用pbs按1：100的比例稀释DAPI,覆盖细胞10min。注意避光

10.洗涤PBS 1次*3min。注意避光

11.加防荧光淬灭封片剂（荧光淬灭剂按照1：1稀释），加入25ul，尽快拍照，防止

荧光淬灭。

2024年4月7日发(作者：道寄松)

IF步骤：

一、铺96孔板：

1、首先将细胞用胰酶消化下来，离心去上清按照细胞实际的数量进行传代。

2、一般是传代到有15min培养基的培养皿内，混合均匀后根据需要细胞的量进行选

择。

3、进行细胞计数，一个96孔板里面的孔保证细胞个数在4000个左右即可。

二、实验条件：

1.细胞固定:4%多聚甲醛固定15min

2.洗涤PBS 3次*3min

3.细胞膜通透：0.2%Triton X-100覆盖细胞8min, 洗涤PBS 4次*3min

4.10%正常山羊血清37度封闭40min

5.孵育一抗（5% 正常山羊血清稀释）,4°过夜。（上清50ul直接孵育，抗体稀释至

0.02mg/ml（50ul），血清按1:100稀释）

6.洗涤PBS 3次*3min

7.二抗1:200（5% 正常山羊血清稀释）,37度孵育40分钟，注意避光。稀释二抗后

注意用0.22的滤器进行过滤。

（羊抗兔，鼠FITC 厂家 Jackson）

8.洗涤PBS 3次*3min,注意避光

染核：用pbs按1：100的比例稀释DAPI,覆盖细胞10min。注意避光

10.洗涤PBS 1次*3min。注意避光

11.加防荧光淬灭封片剂（荧光淬灭剂按照1：1稀释），加入25ul，尽快拍照，防止

荧光淬灭。