2024年4月9日发(作者：剧逸致)
HPV DNA检测标准操作程序：
1.目的：规范临床分子生物实验室对临床标本的处理，正确使用宏石PCR仪进行
HPV-DNA扩增分析，以保证实验结果的准确性。
2. 适用范围：HPV-DNA的分型定性检测。
3. 试剂来源：凯普HPV23分型检测试剂盒。
4. 操作人：**
5. 本SOP变动程序：本标准操作程序的改动，可由任何一名使用本SOP的工作
人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
6. 程序细则：
6.1 试剂盒组成：
提取试剂盒：
细胞裂解液（1.6ml/管） 1管
细胞保存液（16ml/瓶） 1瓶
PCR试剂盒：
PCRmix1（560μl/管） 1管
PCRmix2（560μl/管） 1管
PCRmix3（560μl/管） 1管
PCRmix4（560μl/管） 1管
PCRmix5（560μl/管） 1管
PCRmix6（560μl/管） 1管
Taq酶（96μl/管） 1管
阳性对照（50μl/管） 1管
空白对照(250μl/管) 1管
6.2 标准操作：
6.2.1 试剂的准备
6.2.1 在6只1.5mlEP管上分别标注 PCR Masermix1-6。
6.2.2 取出6A个PCR管放在离心管架上，在管盖边缘上做好相应标识。
注：A=样本数+3（空白对照、阳性质控、阳性DNA对照），每一轮试验中均需加
入空白对照、阳性质控、阳性DNA对照，建议加样编号顺序如下：首先依次是
不同的样本编号，最后为阳性质控、阳性DNA对照、与空白对照管（蒸馏水）。
6.2.3 从冰箱中取出PCR试剂盒，将PCR Premix融化后，与Taq酶管一起放入离
心机中点动离心。
6.2.4 将试剂放入生物安全柜内，将已点动离心了的PCR premix管、Taq酶管插
在冰块上保持在低温条件下。
6.1.6 按照反应数计算所需的PCR各个组份的数量来准备PCR Mastermix（可参照
PCR MIX与酶混合比例如下表）。
6.2.7 在生物安全柜内，按已计算好的PCR premix用量，从冰中取出相应的PCR
premix管吸取准确量后加入对应的1.5ml离心管中，将PCR premix管放回冰块中。
6.2.8 垂直将枪头小心打入废液缸中，确保移液枪前臂没有碰到废液缸口。
6.2.9 从冰中取出Taq酶管，按计算好的用量（可参照PCR MIX与酶混合比例附
表），吸取准确量后分别加入对应的1.5ml离心管中。
6.2.10 盖紧1.5ml离心管盖，同时将PCR premix管及Taq酶管从超净台中取出放
回-20℃冰箱的原包装中，标注已使用数量。
6.2.11 将已加入PCR premix和Taq酶的1.5ml离心管在涡旋器上振荡5sec，放入
离心机点动离心。
6.2.12 在生物安全柜中，将6种PCR混合液分装入对应的0.2ml PCR扩增管中，
每管加入混合液18ul，加完后将所有PCR管盖盖上。
6.3 DNA提取
6.3.1将临床样本及阴性对照品置室温下解冻，把标本编号，取出相应数量的样
本管，对应编号。
6.3.2 将临床样本振荡混匀，伸入采集管底部吸取临床样本0.8ml 至管底，
2024年4月9日发(作者：剧逸致)
HPV DNA检测标准操作程序：
1.目的：规范临床分子生物实验室对临床标本的处理，正确使用宏石PCR仪进行
HPV-DNA扩增分析，以保证实验结果的准确性。
2. 适用范围：HPV-DNA的分型定性检测。
3. 试剂来源：凯普HPV23分型检测试剂盒。
4. 操作人：**
5. 本SOP变动程序：本标准操作程序的改动，可由任何一名使用本SOP的工作
人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
6. 程序细则：
6.1 试剂盒组成：
提取试剂盒：
细胞裂解液（1.6ml/管） 1管
细胞保存液（16ml/瓶） 1瓶
PCR试剂盒：
PCRmix1（560μl/管） 1管
PCRmix2（560μl/管） 1管
PCRmix3（560μl/管） 1管
PCRmix4（560μl/管） 1管
PCRmix5（560μl/管） 1管
PCRmix6（560μl/管） 1管
Taq酶（96μl/管） 1管
阳性对照（50μl/管） 1管
空白对照(250μl/管) 1管
6.2 标准操作：
6.2.1 试剂的准备
6.2.1 在6只1.5mlEP管上分别标注 PCR Masermix1-6。
6.2.2 取出6A个PCR管放在离心管架上，在管盖边缘上做好相应标识。
注：A=样本数+3（空白对照、阳性质控、阳性DNA对照），每一轮试验中均需加
入空白对照、阳性质控、阳性DNA对照，建议加样编号顺序如下：首先依次是
不同的样本编号，最后为阳性质控、阳性DNA对照、与空白对照管（蒸馏水）。
6.2.3 从冰箱中取出PCR试剂盒，将PCR Premix融化后，与Taq酶管一起放入离
心机中点动离心。
6.2.4 将试剂放入生物安全柜内，将已点动离心了的PCR premix管、Taq酶管插
在冰块上保持在低温条件下。
6.1.6 按照反应数计算所需的PCR各个组份的数量来准备PCR Mastermix（可参照
PCR MIX与酶混合比例如下表）。
6.2.7 在生物安全柜内，按已计算好的PCR premix用量，从冰中取出相应的PCR
premix管吸取准确量后加入对应的1.5ml离心管中，将PCR premix管放回冰块中。
6.2.8 垂直将枪头小心打入废液缸中，确保移液枪前臂没有碰到废液缸口。
6.2.9 从冰中取出Taq酶管，按计算好的用量（可参照PCR MIX与酶混合比例附
表），吸取准确量后分别加入对应的1.5ml离心管中。
6.2.10 盖紧1.5ml离心管盖，同时将PCR premix管及Taq酶管从超净台中取出放
回-20℃冰箱的原包装中，标注已使用数量。
6.2.11 将已加入PCR premix和Taq酶的1.5ml离心管在涡旋器上振荡5sec，放入
离心机点动离心。
6.2.12 在生物安全柜中，将6种PCR混合液分装入对应的0.2ml PCR扩增管中，
每管加入混合液18ul，加完后将所有PCR管盖盖上。
6.3 DNA提取
6.3.1将临床样本及阴性对照品置室温下解冻，把标本编号，取出相应数量的样
本管，对应编号。
6.3.2 将临床样本振荡混匀，伸入采集管底部吸取临床样本0.8ml 至管底，