2024年5月7日发(作者：瓮阑)
1.
革兰氏染色的机理和步骤
机理：G+、G-主要由其CW化学成分的差异而引起对乙醇的通透性，
抗脱色能力的差异。主要有肽聚糖的厚度和结构所决定。
G+的CW:肽聚糖层厚，脂质含量低。乙醇脱色时CW脱水，孔径减
少，透性降低，不易脱色，呈初染得蓝紫色。
G-的CW：肽聚糖层薄，脂质含量高。乙醇脱色时，类脂被乙醇溶解，
透性升高，细胞被复染显红色。
步骤：①涂片：在干净的载玻片上滴一滴水，用接种环挑取菌体均匀
涂布于水中。
②固定：将玻片靠近酒精灯火焰，蒸干水分，但不要烤焦。
③初染：用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。
④媒染: 以碘液媒染1min，水洗，吸干水分。(细胞内形成结
晶紫与碘的复合物，增强相互作用）
⑤脱色(关键步骤）：以95%的乙醇脱色30s，应适当振荡均匀，
是乙醇脱色完全。
⑥水洗，吸干。
⑦复染：??(第2张）复染30s，水洗吸干。
⑧干燥镜检。
2、用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。
芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差，以及
皮层的离子强度很高，这就使皮层产生了极高的渗透压去夺取芽孢核
心中水分，其结果造成皮层的充分膨胀和核心的高度失水，正是这种
失水的核心才赋予芽孢极强的耐热性。
3、引起微生物培养过程中PH变化的几种可能反应，并说明如何能
够维持微培PH稳定。
答：培养过程中，由于营养物质被分解利用，代谢产物的形成与积累，
会导致PH变化。
（第2张中的图）
还与培养基的C/N比有关，C/N高，经培养基后PH显著下降，C/N
低，经培养基后PH明显上升。
PH调节：①加入缓冲剂--------常用:一氢二氢磷酸盐，K
2
HPO
4
呈碱性
，
KH
2
PO
4
酸性，只在一定的PH范围内调节（6.4--7.2）
②大量产酸的菌株，加CaCO
3
调节，CaCO
3
难溶于水，不会使培养
液的PH过度增加，但可不断中和微生物产的酸。
③培养液中存在天然的缓冲系统，如AA，肽，Pr均属两性电解质，
也起缓冲的作用。
④过酸：治标------加NaOH、Na
2
CO
3
中和，治本-----加适量氮源：
NaNO3、Pr、NH3·H2O；增加通风量。
⑤过碱：治标-----H2SO4、HCl中和，治本----加适量碳源:G类，脂
类;减小通风量。
3、抗生素法和菌丝过滤法为何能浓缩营养缺陷型突变株？
抗生素法（青霉素法）：适用于细菌。原理：青霉素抑制肽聚糖链间
的交联，组织了合成完整的CW，野生型B处于正常生长繁殖，所以
对青霉素敏感，可被抑制或杀死；营缺B在基本培养基上休眠状态
2024年5月7日发(作者：瓮阑)
1.
革兰氏染色的机理和步骤
机理：G+、G-主要由其CW化学成分的差异而引起对乙醇的通透性，
抗脱色能力的差异。主要有肽聚糖的厚度和结构所决定。
G+的CW:肽聚糖层厚，脂质含量低。乙醇脱色时CW脱水，孔径减
少，透性降低，不易脱色，呈初染得蓝紫色。
G-的CW：肽聚糖层薄，脂质含量高。乙醇脱色时，类脂被乙醇溶解，
透性升高，细胞被复染显红色。
步骤：①涂片：在干净的载玻片上滴一滴水，用接种环挑取菌体均匀
涂布于水中。
②固定：将玻片靠近酒精灯火焰，蒸干水分，但不要烤焦。
③初染：用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。
④媒染: 以碘液媒染1min，水洗，吸干水分。(细胞内形成结
晶紫与碘的复合物，增强相互作用）
⑤脱色(关键步骤）：以95%的乙醇脱色30s，应适当振荡均匀，
是乙醇脱色完全。
⑥水洗，吸干。
⑦复染：??(第2张）复染30s，水洗吸干。
⑧干燥镜检。
2、用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。
芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差，以及
皮层的离子强度很高，这就使皮层产生了极高的渗透压去夺取芽孢核
心中水分，其结果造成皮层的充分膨胀和核心的高度失水，正是这种
失水的核心才赋予芽孢极强的耐热性。
3、引起微生物培养过程中PH变化的几种可能反应，并说明如何能
够维持微培PH稳定。
答：培养过程中，由于营养物质被分解利用，代谢产物的形成与积累，
会导致PH变化。
（第2张中的图）
还与培养基的C/N比有关，C/N高，经培养基后PH显著下降，C/N
低，经培养基后PH明显上升。
PH调节：①加入缓冲剂--------常用:一氢二氢磷酸盐，K
2
HPO
4
呈碱性
，
KH
2
PO
4
酸性，只在一定的PH范围内调节（6.4--7.2）
②大量产酸的菌株，加CaCO
3
调节，CaCO
3
难溶于水，不会使培养
液的PH过度增加，但可不断中和微生物产的酸。
③培养液中存在天然的缓冲系统，如AA，肽，Pr均属两性电解质，
也起缓冲的作用。
④过酸：治标------加NaOH、Na
2
CO
3
中和，治本-----加适量氮源：
NaNO3、Pr、NH3·H2O；增加通风量。
⑤过碱：治标-----H2SO4、HCl中和，治本----加适量碳源:G类，脂
类;减小通风量。
3、抗生素法和菌丝过滤法为何能浓缩营养缺陷型突变株？
抗生素法（青霉素法）：适用于细菌。原理：青霉素抑制肽聚糖链间
的交联，组织了合成完整的CW，野生型B处于正常生长繁殖，所以
对青霉素敏感，可被抑制或杀死；营缺B在基本培养基上休眠状态