2024年5月18日发(作者：子车焱)
。
人肉眼对光源波长的颜色感觉
红色 770-622 nm
橙色 622~597 nm
黄色 597~577 nm
绿色 577~492 nm
蓝靛色 492～455nm
紫色 455～350nm
荧光类型 生产厂家 激发光（nm）
GFP蛋白 395-495
EGFP蛋白 487
DAPI 358-360
Alexa Fluor 488 Invitrogen 495
Alexa Fluor 594 Invitrogen 590
FITC 490-495
罗丹明 565
(Rhodamine)
TRITC 550
(Tetramethyl
Rhodamin
Isothiocyanate，四
甲基异硫氰酸罗丹
明,是罗丹明的一种
衍生物之一)
发射光（nm）
509
509
460-461
519
617
520-530
590
620
颜色
绿色
绿色
蓝色
绿色
红色
黄绿色
红色
橙红色
Rhodamine 570 590 橙红色
Red-X(RRX)
Texas Red(TR) 589-595 615 橙红色
常见显微镜滤光片的波长
在激发波长在Ex范围内才能被激发，只有发射光波长大于BA/EM才能被观察到，
背景光的波长只有大于DM才能被观察到。
红色滤光片G-2A
Ex 510-560
DM 575
BA 590
绿色滤光片B-2A
Ex 450-490
DM 505
BA 520
蓝色滤光片UV-2A
Ex 330-380
DM 400
BA 420
。
1
。
其它荧光染料介绍
【菁类染料-Cyanine dyes(Cy2, Cy3, Cy5)】
Cy2耦联基团激发波长为492nm，发光为波长510nm的绿色可见光。Cy2和FITC使用相同的
滤波片。由于Cy2比FITC在光下更稳定。要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片剂，因为
这种抗淬灭剂和Cy2反应，在染色片储存后会导致荧光微弱和扩散。Cy3和Cy5比其他的荧
光团探针要更亮，更稳定，背景更弱。Cy3耦联基团激发光的最大波长为550nm，最强发射
光为570nm。因为激发光和发射光波长很接近TRITC, 在荧光显微镜中，可使用和TRITC一
样的滤波片。
Cy3在氩光灯(514nm或528nm)下可以被激发出50％的光强，在氦氖灯(543nm)或者汞灯
(546nm)下则约75％。Cy3可以和荧光素一起作双标。Cy3还可以和Cy5一起在共聚焦显微
镜实验中作多标记。Cy5耦联基团的激发波长最大650nm，发光波长最大670nm。在氪氩灯
(647nm)下它们可被激发出98％的荧光，在氦氖灯下(633nm)为63％。Cy5可以和很多其他
的荧光基团一起用在多标记的实验中。由于它的最大发射波长在670nm，Cy5很难用裸眼观
察，而且不能用汞灯作理想的激发。通常观察Cy5时采用具有合适激发光和远红外检测器的
共聚焦显微镜。在水相封片剂中应当加入抗淬灭剂。使用传统的表面荧光显微镜时，不推荐
使用Cy5。
【藻红蛋白或藻胆色素蛋白-Phycoerythrin(PE)荧光标记二抗】
存在于被称为藻红的多聚微粒中，位于叶绿素的反应中心，在自然结构中，藻红蛋白吸收光
能，吸收后转化成能量，供其发育生长。当藻红蛋白被分离和纯化后，其蛋白质变得具有很
强的荧光，能吸收不同波长的光，发出亮红色的荧光，此时不再接受任何外来的光，也不能
转移光能。藻红蛋白PE的吸收波长范围较广，最大的吸收波长为566nm，最大的发射波长
为574nm。藻红蛋白作为荧光标记物具有以下优点：首先具有强的长波长激发和发射荧光，
可避免来自其他生物材料荧光的干扰；并且具有极高的发射量子产率；另外PE具有非常高
的水溶性而且与许多生物学或合成材料的多位点稳定交联。
【Aminomethylcoumarin Acetate (AMCA)】
耦联的AMCA吸收光波长最大为350nm，发荧光则为450nm。对于荧光显微镜来说，AMCA可
以用汞灯来激发，用紫外滤板来观察。由于AMCA的信号相对较弱，单标实验中不推荐使用
AMCA。AMCA和荧光素的荧光波长只有很小的重叠范围，而和发出长波长荧光的荧光基团没
有或者只有极少的重叠，因此它最常用于多标记实验中，比如免疫荧光显微镜和流式细胞仪。
由于人眼不能很好的检测蓝色荧光，在多标记的实验中，AMCA耦联的二抗应当被用于检测
大量的抗原。AMCA和荧光素一样很快淬灭，使用抗淬灭剂可以减轻。且由于肉眼不能很好
的检测AMCA所激发的蓝色荧光，因而AMCA耦联的二抗更适用于检测大量存在的抗原。如果
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2024年5月18日发(作者：子车焱)
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人肉眼对光源波长的颜色感觉
红色 770-622 nm
橙色 622~597 nm
黄色 597~577 nm
绿色 577~492 nm
蓝靛色 492～455nm
紫色 455～350nm
荧光类型 生产厂家 激发光（nm）
GFP蛋白 395-495
EGFP蛋白 487
DAPI 358-360
Alexa Fluor 488 Invitrogen 495
Alexa Fluor 594 Invitrogen 590
FITC 490-495
罗丹明 565
(Rhodamine)
TRITC 550
(Tetramethyl
Rhodamin
Isothiocyanate，四
甲基异硫氰酸罗丹
明,是罗丹明的一种
衍生物之一)
发射光（nm）
509
509
460-461
519
617
520-530
590
620
颜色
绿色
绿色
蓝色
绿色
红色
黄绿色
红色
橙红色
Rhodamine 570 590 橙红色
Red-X(RRX)
Texas Red(TR) 589-595 615 橙红色
常见显微镜滤光片的波长
在激发波长在Ex范围内才能被激发，只有发射光波长大于BA/EM才能被观察到，
背景光的波长只有大于DM才能被观察到。
红色滤光片G-2A
Ex 510-560
DM 575
BA 590
绿色滤光片B-2A
Ex 450-490
DM 505
BA 520
蓝色滤光片UV-2A
Ex 330-380
DM 400
BA 420
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其它荧光染料介绍
【菁类染料-Cyanine dyes(Cy2, Cy3, Cy5)】
Cy2耦联基团激发波长为492nm，发光为波长510nm的绿色可见光。Cy2和FITC使用相同的
滤波片。由于Cy2比FITC在光下更稳定。要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片剂，因为
这种抗淬灭剂和Cy2反应，在染色片储存后会导致荧光微弱和扩散。Cy3和Cy5比其他的荧
光团探针要更亮，更稳定，背景更弱。Cy3耦联基团激发光的最大波长为550nm，最强发射
光为570nm。因为激发光和发射光波长很接近TRITC, 在荧光显微镜中，可使用和TRITC一
样的滤波片。
Cy3在氩光灯(514nm或528nm)下可以被激发出50％的光强，在氦氖灯(543nm)或者汞灯
(546nm)下则约75％。Cy3可以和荧光素一起作双标。Cy3还可以和Cy5一起在共聚焦显微
镜实验中作多标记。Cy5耦联基团的激发波长最大650nm，发光波长最大670nm。在氪氩灯
(647nm)下它们可被激发出98％的荧光，在氦氖灯下(633nm)为63％。Cy5可以和很多其他
的荧光基团一起用在多标记的实验中。由于它的最大发射波长在670nm，Cy5很难用裸眼观
察，而且不能用汞灯作理想的激发。通常观察Cy5时采用具有合适激发光和远红外检测器的
共聚焦显微镜。在水相封片剂中应当加入抗淬灭剂。使用传统的表面荧光显微镜时，不推荐
使用Cy5。
【藻红蛋白或藻胆色素蛋白-Phycoerythrin(PE)荧光标记二抗】
存在于被称为藻红的多聚微粒中，位于叶绿素的反应中心，在自然结构中，藻红蛋白吸收光
能，吸收后转化成能量，供其发育生长。当藻红蛋白被分离和纯化后，其蛋白质变得具有很
强的荧光，能吸收不同波长的光，发出亮红色的荧光，此时不再接受任何外来的光，也不能
转移光能。藻红蛋白PE的吸收波长范围较广，最大的吸收波长为566nm，最大的发射波长
为574nm。藻红蛋白作为荧光标记物具有以下优点：首先具有强的长波长激发和发射荧光，
可避免来自其他生物材料荧光的干扰；并且具有极高的发射量子产率；另外PE具有非常高
的水溶性而且与许多生物学或合成材料的多位点稳定交联。
【Aminomethylcoumarin Acetate (AMCA)】
耦联的AMCA吸收光波长最大为350nm，发荧光则为450nm。对于荧光显微镜来说，AMCA可
以用汞灯来激发，用紫外滤板来观察。由于AMCA的信号相对较弱，单标实验中不推荐使用
AMCA。AMCA和荧光素的荧光波长只有很小的重叠范围，而和发出长波长荧光的荧光基团没
有或者只有极少的重叠，因此它最常用于多标记实验中，比如免疫荧光显微镜和流式细胞仪。
由于人眼不能很好的检测蓝色荧光，在多标记的实验中，AMCA耦联的二抗应当被用于检测
大量的抗原。AMCA和荧光素一样很快淬灭，使用抗淬灭剂可以减轻。且由于肉眼不能很好
的检测AMCA所激发的蓝色荧光，因而AMCA耦联的二抗更适用于检测大量存在的抗原。如果
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