2024年5月20日发(作者：展宛畅)

WORD格式整理版

现代分子生物学实验手册

工具酶

基因工程：在人工可以控制条件下，将基因剪切或重新组合，再导入另一

生物体内，使这些基因在其中表达并遗传下去的一门技术。 核心：对基因

进行人工切割、连接和重新组合，构建重组DNA。

工具酶：在基因工程的重组DNA过程中，所需要用到的酶的统称。

一、限制性内切酶（restriction endonuclease）

主要功能：对外源性的双链DNA进行切割、水解，不允许外源性DNA存在于

细菌自身细胞内。 （这种酶能对在自身细胞内存在的DNA种类给予限制——限

制性内切酶）

限制-修饰系统：合成限制性内切酶的细胞，其自身的DNA不受酶的切割，

这是因为细菌细胞还会合成一种修饰酶，可以对自身DNA进行修饰，即改变DNA

原来具有的可以被限制性内切酶识别的核酸顺序结构，从而不被限制性内切酶识

别及切割、水解。 保护自身遗传物质稳定的机制。

限制性内切酶：从原核生物中发现的，约600种，可识别108种不同的特定

DNA顺序。以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键，产生DNA片段的5’端为P，

3’端为- OH。

命名：获得该酶的细菌属名的第一个字母（大写）+该菌种名的前两个字母(小

写)+株系的字母（小写）或数字+罗马数字（同一株菌种不同内切酶的编号）

例：

细菌属名 细菌种名 菌株名称 限制酶名称

学习参考好帮手

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Arthrobacter

Escherichia

Bacillus

luteus

coli

amyloliquefacie

ns

RY

13

H

Alu

I

Eco

R

I

Ham

H

I

Haemophilus influenzae Rd

Hin

d

III

（一）三种常用内切酶

1.

I

型限制性内切酶

同时兼有切割DNA的功能和修饰酶的修饰功能。

在酶的识别位点上，若DNA两条链菌没有发生甲基化，则行使内切酶的功

能，对DNA进行切割，同时转变成ATP酶。若DNA双链中有一条链已发生甲基化，

则此类酶显示修饰酶的作用，对另一条DNA进行甲基化修饰，然后在行切割功能。

（实际上，有内切酶、修饰酶、ATP酶及解旋酶四种功能）

I

型限制性内切酶在DNA链上的识别位点和切割位点不一致，也不固定。

没有时间应用价值。

【DNA甲基化：DNA化学修饰的一种形式，能在不改变DNA序列的前提下，改变

遗传表现（外遗传机制）。 多发生于CpG二核苷序列上（在甲基转移酶的催

化下，DNA的CG两个核苷酸中的胞嘧啶被选择性添加甲基，形成5-甲基胞嘧啶）。

甲基化位点可随DNA的复制而遗传（DNA复制后，甲基化酶可将新和成的未甲基

化的位点进行甲基化）。 DNA 甲基化可引起基因组中相应区域染色质结构变

化，使DNA 失去限制性内切酶的切割位点，以及DNA 酶的敏感位点，使染色质

高度螺旋化，凝缩成团，失去转录活性。】

2.

III

型限制性内切酶

学习参考好帮手

2024年5月20日发(作者：展宛畅)

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现代分子生物学实验手册

工具酶

基因工程：在人工可以控制条件下，将基因剪切或重新组合，再导入另一

生物体内，使这些基因在其中表达并遗传下去的一门技术。 核心：对基因

进行人工切割、连接和重新组合，构建重组DNA。

工具酶：在基因工程的重组DNA过程中，所需要用到的酶的统称。

一、限制性内切酶（restriction endonuclease）

主要功能：对外源性的双链DNA进行切割、水解，不允许外源性DNA存在于

细菌自身细胞内。 （这种酶能对在自身细胞内存在的DNA种类给予限制——限

制性内切酶）

限制-修饰系统：合成限制性内切酶的细胞，其自身的DNA不受酶的切割，

这是因为细菌细胞还会合成一种修饰酶，可以对自身DNA进行修饰，即改变DNA

原来具有的可以被限制性内切酶识别的核酸顺序结构，从而不被限制性内切酶识

别及切割、水解。 保护自身遗传物质稳定的机制。

限制性内切酶：从原核生物中发现的，约600种，可识别108种不同的特定

DNA顺序。以内切方式水解核酸链中的磷酸二酯键，产生DNA片段的5’端为P，

3’端为- OH。

命名：获得该酶的细菌属名的第一个字母（大写）+该菌种名的前两个字母(小

写)+株系的字母（小写）或数字+罗马数字（同一株菌种不同内切酶的编号）

例：

细菌属名 细菌种名 菌株名称 限制酶名称

学习参考好帮手

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Arthrobacter

Escherichia

Bacillus

luteus

coli

amyloliquefacie

ns

RY

13

H

Alu

I

Eco

R

I

Ham

H

I

Haemophilus influenzae Rd

Hin

d

III

（一）三种常用内切酶

1.

I

型限制性内切酶

同时兼有切割DNA的功能和修饰酶的修饰功能。

在酶的识别位点上，若DNA两条链菌没有发生甲基化，则行使内切酶的功

能，对DNA进行切割，同时转变成ATP酶。若DNA双链中有一条链已发生甲基化，

则此类酶显示修饰酶的作用，对另一条DNA进行甲基化修饰，然后在行切割功能。

（实际上，有内切酶、修饰酶、ATP酶及解旋酶四种功能）

I

型限制性内切酶在DNA链上的识别位点和切割位点不一致，也不固定。

没有时间应用价值。

【DNA甲基化：DNA化学修饰的一种形式，能在不改变DNA序列的前提下，改变

遗传表现（外遗传机制）。 多发生于CpG二核苷序列上（在甲基转移酶的催

化下，DNA的CG两个核苷酸中的胞嘧啶被选择性添加甲基，形成5-甲基胞嘧啶）。

甲基化位点可随DNA的复制而遗传（DNA复制后，甲基化酶可将新和成的未甲基

化的位点进行甲基化）。 DNA 甲基化可引起基因组中相应区域染色质结构变

化，使DNA 失去限制性内切酶的切割位点，以及DNA 酶的敏感位点，使染色质

高度螺旋化，凝缩成团，失去转录活性。】

2.

III

型限制性内切酶

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