2024年5月30日发(作者：夕觅夏)
中国现代医生2019年5月第57卷第13期
窑检验医学窑
1338例孕前育龄妇女MTHFRC677T、A1298C、
MTRRA66G基因突变结果分析
黄卫彤覃卫娟李筱瑜
530011南宁市妇幼保健院检验科袁广西南宁
[摘要]目的探讨孕前育龄妇女亚甲基四氢叶酸还原酶渊MTHFR冤C677T尧A1298C基因和甲硫氨酸合成酶还原酶
前检查的1338例育龄妇女为研究对象袁抽取静脉血袁提取全血中的DNA袁使用荧光定量PCR法进行检测MTH鄄
渊MTRR冤A66G基因检测在出生缺陷防控技术应用中的价值遥方法选择2015年1月耀2016年12月在我院做孕
FRC677T尧A1298C基因突变位点和MTRRA66G基因突变位点袁分析基因频率分布情况遥结果1338例孕前育
AA尧AC尧CC基因型频率分布分别为62.5%尧30.0%尧7.5%曰MTRR基因A66G位点AA尧AG尧GG基因型频率分布分
著差异渊字
2
=189.81尧663.24尧791.40尧99.09尧712.34袁P<0.05冤曰MTHFRA1298C位点基因型频率分布与佛山尧珠海尧郑
龄妇女的MTHFRC677T位点CC尧CT尧TT基因型频率分布分别为58.6%尧35.0%尧6.4%曰MTHFR基因A1298C位点
别为53.1%尧39.8%尧7.1%遥MTHFRC677T位点基因型频率分布与佛山尧郑州尧长春尧九江尧江苏研究结果比较袁有显
州尧长春尧九江尧江苏研究结果比较有显著差异渊字
2
=45.33尧20.21尧60.92尧103.24尧22.83尧84.56袁P<0.05冤曰MTRRA66G位
点基因型频率分布与郑州尧长春研究结果比较有显著差异渊字
2
=7.290尧6.432袁P<0.05冤袁而与佛山尧珠海尧九江尧江苏
A1298CCC尧MTRRA66GGG基因型频率分布大致一致袁但与国内其他地区比较MTHFRC677T尧A1298C和MTRR
研究结果比较无显著差异渊字
2
=3.500尧0.534尧0.537/3.351袁P>0.05冤遥结论南宁市孕前育龄妇女MTHFRC677TTT尧
A66G位点基因型频率分布有地域性差异遥因此袁孕前育龄妇女补充叶酸或叶酸缺乏者同时检测MTHFRC677T
位点尧A1298C位点及MTRRA66G位点突变袁能全面发现与叶酸代谢能力障碍的相关遗传风险袁可为指导孕前育
龄妇女预防和干预婴儿出生缺陷提供可靠依据袁在出生缺陷防控技术应用中有重要的价值遥
[关键词]孕前妇女曰亚甲基四氢叶酸还原酶曰甲硫氨酸合成酶还原酶曰基因突变曰出生缺陷
[中图分类号]R446.9[文献标识码]B[文章编号]1673-9701渊2019冤13-0111-04
AnalysisofmutationresultsofMTHFRC677T,A1298CandMTRRA66G
genesin1338pre-pregnancywomenofchildbearingage
HUANGWeitongQINWeijuanLIXiaoyu
DepartmentofClinicalLaboratory袁NanningMaternalandChildHealthHospital袁Nanning530011袁China
[Abstract]ObjectiveToinvestigatethevalueofmethylenetetrahydrofolatereductase渊MTHFR冤C677T,A1298Cgene
andmethioninesynthasereductase渊MTRR冤A66Ggenedetectionintheapplicationofbirthdefectspreventionandcon鄄
s1338womenofchildbearingagewhounderwent
venousbloodwasextracted,677T,A1298Cgenemutationsite
genefrequencydistributionswere
sThefrequencydistributionsofCC,CTandTTgenotypesofMTHFRC677Tlociin1338pre-preg鄄
nancywomenofchildbearingagewere58.6%,35.0%and6.4%,quenciesofAA,ACandCC
genotypesofMTHFRgeneA1298Cwere62.5%,30.0%,7.5%.ThefrequencydistributionsofAA,AG,andGGgeno鄄
MTHFRC677TlocusgenotypeinNanningweresignificantlydifferentfromthoseinFoshan,Zhengzhou,Changchun,Ji鄄
typesofARRsitesintheMTRRgenewere53.1%,39.8%,and7.1%,quencydistributionsof
ujiangandJiangsu渊字
2
=189.81,663.24,791.40,99.09,712.34,P<0.05冤.MTHFRA1298Clocusgenotypefrequencydistri鄄
butionsinNanningweresignificantlydifferentfromthoseinFoshan,Zhuhai,Zhengzhou,Changchun,Jiujiangand
nosignificantdifferencebetweenNanjingandFoshan,Zhuhai,JiujiangandJiangsu渊字
2
=3.500,0.534,0.537/3.351,P>
[基金项目]广西科学研究与技术开发计划项目渊桂科攻14
124004-1-16冤
CHINAMODERNDOCTORVol.57No.13May2019
111
pre-pregnancyexaminationsinour
Jiangsu渊字
2
=45.33,20.21,60.92,103.24,22.83,84.56,P<0.05冤.TherewasasignificantdifferenceinMTRRA66Glocus
genotypefrequencydistributionsbetweenNanjingandZhengzhou,Changchun渊字
2
=7.290,6.432,P<0.05冤,buttherewas
窑检验医学窑
中国现代医生2019年5月第57卷第13期
0.05冤.ConclusionThefrequencydistributionsofMTHFRC677TTT,A1298CCCandMTRRA66GGGgenotypesin
ore,thedetectionofMTHFRC677Tlocus,A1298ClocusandMTRRA66Glocusmutationinpre-preg鄄
pre-pregnancywomenofchildbearingageinNanningareroughlythesame,butthereareregionaldifferencesinthe
frequencydistributionsofMTHFRC677T,A1298CandMTRRA66GlociinNanningcomparedwithotherregionsin
nancywomenofchildbearingagesupplementedwithfolicacidorfolatedeficiencycanfullydiscoverthegeneticrisk
associatedwithfolatemetabolismdysfunction,andcanprovideareliablebasisforguidingpreventionandintervention
defectpreventionandcontroltechnology.
[Keywords]Pre-pregnancywomen曰Methylenetetrahydrofolatereductase曰Methioninesynthasereductase曰Genemuta鄄
mportantvalueintheapplicationofbirth
tion曰Birthdefect
氨酸合成酶还原酶
缘袁员园原亚甲基四氢叶酸还原酶
渊MTRR冤是叶酸-
渊酝栽匀云砸冤
甲硫氨酸
和甲硫
-同型
半胱氨酸代谢循环过程中的关键酶袁其酶活性水平与
人体内叶酸浓度
MTHFR
尧血浆同型半胱氨酸浓度密切相关
[1]
氨酸升高
与
袁高同型半胱氨酸会损伤血管内皮细胞
MTRR基因突变引起叶酸缺乏和同型半胱
袁
袁引
起血小板激活聚集袁破坏机体的凝血和纤溶系统
[2]
现血栓形成的倾向而导致流产袁而且同型半胱氨酸在
袁出
器官形成早期对胚胎神经系统具有毒性袁因此与神经
管缺陷相关遥有文献报道MTHFR基因突变率在怀有
唐氏综合征患儿的母亲明显升高袁特别是MTHFRA1298C
的CC基因型
[3]
与MTHFRC677T的TT基因型
[4]
是出
生缺陷的遗传高风险因素遥MTRR基因突变是造成叶
酸/甲基维生素缺乏症的主要病因袁也是同型半胱氨
酸尧叶酸代谢异常的主要原因之一袁MTRRA66G基因
型女性携带者未服用叶酸增补剂和低叶酸饮食的情
况下均会增加胎儿唇腭裂的风险袁若以上两种情况同
时存在袁则风险进一步增高
[5]
基因突变被认为是多种出生缺陷疾病的遗传高风险
遥因此袁目前MTRR尧MTHFR
因素袁可作为孕前育龄妇女叶酸代谢能力障碍筛查基
因袁但基因位点突变频率分布有地域性差别
[6]
采用荧光PCR法检测1338例南宁市孕前育龄妇女叶
遥本研究
酸代谢关键酶MTHFRC677T尧A1298C尧MTRRA66G基因
突变
A1298C尧MTRR
袁旨在了解南宁市孕前育龄妇女
A66G基因突变频率分布情况
MTHFR
袁
C677T尧
孕前育龄妇女预防和干预婴儿出生缺陷提供依据
为指导
遥
1对象与方法
1.1研究对象
选取于2015年1月~2016年12月期间到南宁
市妇幼保健院产科门诊进行孕前检查的1338例育龄
妇女袁年龄22~32岁袁平均渊27.1依4.9冤岁袁经知情同意
后
PCR
袁抽取静脉血
A66G
法进行
袁提取全血中的DNA袁采用荧光定量
基因突变检测
MTHFRC677T尧A1298C
袁结果与国内其他地区研究结果
基因突变及MTRR
112
CHINAMODERNDOCTORVol.57No.13May2019
比较袁分析基因突变频率分布和地域性差异情况遥
1.2材料与仪器
Lab-Aid820袁
仪器试剂院淤全自动核酸提取仪型号为厦门致善
光定量PCR扩增仪
配套提取试剂
袁试剂来源于深圳奥萨制药有限
曰于美国伯乐CFX96型荧
GATGATGAAATCG
公司遥盂引物:MTHFR
[G/A]CTCCCGCAGACACCTTCTC鄄
677T:5'-GAAAAGCTGCGT鄄
GACTTCAAAGACACTT
CTTCAA-3',MTHFRA1298C:
[G/T]CTTCACTGGTCAGCTC鄄
5'-AAGAACGAA鄄
CTCCCCCCA
TACATGGAT-3'遥
CATCGCAGAAGAAAT[A/G]TGTGAGCAAGCTGTGG
-3',MTRRA66G:5'-AGGCAAAGGC鄄
-
1.3方法
1.3.1
动核酸提取仪提取全血中的
DNA提取方法采集受检者静脉全血
DNA袁提取的
袁
DNA
利用全自
浓度
达到20ng/滋L袁纯度比值达1.8以上既可进行扩增袁使
用荧光定量
1.3.2
关MTHFR
荧光定量
PCR扩增方法进行检测遥
C677T尧A1298C袁MTRR
PCR技术分别检测分析叶酸代谢相
A66G基因突变位
点遥每个反应体系20滋L院10滋LPCR混合液袁0.25滋L
探针袁5.75滋L双蒸水袁4滋L样本提取的DNA遥扩增程
序如下院50毅C预变性2min袁95毅C预变性2min袁1个
循环曰95毅C变性15s袁60毅C延伸1min袁45个循环遥扩
增完成后袁通过软件合成扩增仪VIC和FAM两个通道
所形成的S型扩增曲线进行判断基因突变类型遥
1.4基因型频率分布分析
MTRR
将南宁市孕前育龄妇女
A66G基因突变频率分结果与国内佛山
MTHFRC677T尧A1298C尧
[7]
郑州
尧
A1298C
[9]
尧长春
分析个体基因突变频率分布和地域性差异情况
位点突变及
[10]
尧九江
[7]
尧
珠海
[8]
尧
MTRR
江苏
[11]
A66G
研究报道
突变频率分布比较
MTHFRC677T尧
遥
袁
1.5统计学方法
采用拟和优度字
2
检验检测各个位点的基因型分
布是否符合哈
HWE冤袁P>0.05
-
表明各基因型的分布符合
温平衡渊Hardy-Weinbergequilibrium袁
HWE平衡曰
中国现代医生2019年5月第57卷第13期
窑检验医学窑
频率分布分别为53.1%尧39.8%尧7.1%袁显示个体基因
突变频率分布结果大致一致遥MTHFRC677T位点基
因型频率分布与佛山尧郑州尧长春尧九江尧江苏研究结
果比较袁有显著差异渊字
2
=189.81尧663.24尧791.40尧99.09尧
有显著差异渊字
2
=45.33尧20.21尧60.92尧103.24尧22.83尧84.56袁
P<0.05冤曰MTRRA66G位点基因型频率分布与郑州尧
712.34袁P<0.05冤曰MTHFRA1298C位点基因型频率分
采用SPSS17.0软件对数据进行分析袁组间比较采用字
2
检验袁P约0.05为差异有统计学意义遥
2结果
2.1哈-温渊HWE冤平衡检测结果
本研究中袁经过匀宰耘平衡定律检验袁酝栽匀FRC677T
和MTRRA66G位点实际值与预计值吻合渊P跃0.05冤袁
说明群体遗传平衡,数据来自同一孟德尔群体袁具有
本区域群体代表性遥见表1遥
表1MTHFRC677T尧A1298C尧MTRRA66G基因位点HWE平衡
位点
检测结果
基因型实际值预计值
CC
CT
TT
784
468
836
401
101
711
532
95
86
775
487
803
467
713
527
97
68
77
字
2
P
布与佛山尧珠海尧郑州尧长春尧九江尧江苏研究结果比较
长春研究结果比较有显著差异渊字
2
=7.290尧6.432袁P<
MTHFRC677T尧MTHFRA1298C尧MTRRA66G位点基
因型频率分布有地域性差别遥见表2尧表3遥
3讨论
0.05冤袁而与佛山尧珠海尧九江尧江苏研究结果比较无显
著差异渊字
2
=3.500尧0.534尧0.537尧3.351袁P>0.05冤袁显示
MTHFRC677T
MTHFRA1298C
MTRRA66G
2.023
26.810
0.111
0.155
0.000
0.793
AA
AC
CC
AA
AG
GG
3.1MTHFRC677T尧A1298C和MTRRA66G基因
突变渊杂合子尧纯合子冤与叶酸代谢障碍相关系分析
1338例孕前妇女的MTHFR基因C677T位点尧
A1298C位点及MTRR基因A66G位点突变频率分布
结果显示袁MTHFRC677TTT尧A1298CCC和MTRR
A66GGG个体基因突变频率分布均无明显差异袁说
CC和MTRRA66GGG基因突变频率大致一致遥MTHFR
和MTRR是叶酸代谢循环过程中的关键酶
[12]
袁其酶活
性水平与人体内叶酸浓度密切相关袁有文献报道携带
MTHFR1298C渊AC或CC冤基因者的酶活性只有野生
型渊AA冤的78%
[5]
袁携带MTHFRC677TCT基因型的酶
活性只有野生型渊CC冤的65%袁而基因型TT个体酶活
MTHFRA1298C
AC
2.2MTHFRC677T尧MTHFRA1298C尧MTRRA66G
位点基因型频率分布与其他地区结果的比较
1338例孕前育龄妇女的MTHFRC677T位点CC
明本市孕前育龄妇女的MTHFRC677TTT尧A1298C
渊野生型冤尧CT渊杂合子冤尧TT渊纯合子冤基因型频率分布
点AA渊野生型冤尧AC渊杂合子冤尧CC渊纯合子冤基因型频
率分布分别为62.5%尧30.0%尧7.5%曰MTRR基因A66G
位点AA渊野生型冤尧AG渊杂合子冤尧GG渊纯合子冤基因型
MTHFRC677T
468渊35.0冤
CT
分别为58.6%尧35.0%尧6.4%曰MTHFR基因A1298C位
表2MTHFRC677T尧MTHFRA1298C位点的基因型频率与其他地区的比较[n渊%冤]
地区
本研究
佛山
[7]
珠海
[8]
n
1338
2138
1293
3405
1839
2021
833
784渊58.6冤
CC
郑州
[9]
长春
[10]
九江
[7]
1288渊60.2冤728渊34.1冤
351渊42.1冤251渊30.2冤231渊27.7冤
194渊15.0冤600渊46.4冤499渊38.6冤
765渊41.6冤835渊45.4冤239渊13.0冤
354渊17.5冤951渊47.1冤716渊35.4冤
122渊5.7冤
648渊19.1冤1676渊49.2冤1081渊31.7冤
86渊6.4冤
TT
字
2
189.81
663.24
791.40
712.34
99.09
1.296
P
0.000
0.523
0.000
0.000
0.000
0.000
1217渊56.9冤795渊37.2冤
2511渊73.7冤818渊24.0冤
1202渊65.4冤569渊30.9冤
1492渊73.8冤489渊24.2冤
957渊74.0冤308渊23.8冤
427渊76.3冤125渊22.3冤
836渊62.5冤401渊30.0冤
AA
101渊7.5冤
126渊5.9冤
28渊2.2冤
76渊2.3冤
68渊3.7冤
40渊2.0冤
8渊1.4冤
CC
字
2
45.33
20.21
103.24
22.83
84.56
60.92
P
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
江苏
[11]
表3MTRRA66G位点的基因型频率与其他地区的比较[n渊%冤]
地区
本研究
佛山
[7]
珠海
[8]
郑州
长春
江苏
[9]
[10]
n
1338
2138
1293
3405
1839
2021
833
711渊53.1冤
1109渊51.9冤
1937渊56.9冤
1000渊54.4冤
1128渊55.8冤
742渊57.4冤
309渊55.2冤
AA
MTRRA66G
532渊39.8冤
224渊40.0冤
872渊40.8冤
1269渊37.3冤
708渊38.5冤
774渊38.3冤
485渊37.5冤
AG
95渊7.1冤
157渊7.3冤
199渊5.8冤
131渊7.1冤
119渊5.9冤
66渊5.1冤
27渊4.8冤
GG
字
2
3.500
7.290
P
0.174
0.767
0.026
0.765
0.187
0.04
0.534
6.432
0.537
3.351
九江
[7]
[11]
CHINAMODERNDOCTORVol.57No.13May2019
113
窑检验医学窑
性仅有30%
[13]
只有正常的30%袁
袁携带
携带
MTRR
MTRR
A66G
A66G
GG
AG
基因者的酶活性
基因者的酶活
性只有正常的65%
[11]
前育龄妇女体内存在叶酸代谢障碍和叶酸不足的风
遥依据文献报道提示本市部分孕
险袁叶酸缺乏会导致胚胎发育期的DNA和蛋白甲基
化不足导致胎儿发育畸形尧流产
[13-16]
女检测MTHFRC677T尧A1298C和MTRR
遥因此孕前育龄妇
A66G基因
位点突变袁可筛查出叶酸代谢能力障碍相关遗传基因
[6]
预防胎儿神经管缺陷等出生缺陷相关疾病的发生
袁为定期检测叶酸含量及合理补充叶酸提供依据袁
[17]
达到
3.2MTHFRC677T尧A1298C和MTRRA66G基因
遥
突检测的临床意义
研究结果显示南宁市育龄妇女MTHFRC677T
位点基因型频率分布与佛山尧郑州尧长春尧九江尧江苏
研究结果比较有显著差异曰MTHFRA1298C位点基因
型频率分布与佛山尧珠海尧郑州尧长春尧九江尧江苏研究
结果比较有显著差异曰MTRRA66G位点基因型频率
分布与郑州尧长春研究结果比较有显著差异袁而与佛
山
MTHFR
尧珠海尧九江
频率分布有地域性差别
C677T尧MTHFR
尧江苏研究结果比较无显著差异
袁与国内学者报道基本一致
A1298C尧MTRRA66G
遥
基因型
说明
[7-11]
因此
遥
C677T
袁孕前补充叶酸或叶酸缺乏者
不但能全面发现与叶酸代谢能力障碍的相关遗传疾
位点尧A1298C位点及MTRR
袁同时检测
A66G位点突变
MTHFR
袁
病的风险袁还可为个体化用量补服叶酸及疗效观察提
供更可靠依据
[18]
综上所述袁本研究通过对南宁市
袁达到预防出生缺陷的目的
1338
遥
例孕前育
龄妇女MTHFRC677T尧A1298C尧MTRRA66G基因突变
检测袁能全面发现孕前育龄妇女叶酸代谢能力障碍的
相关遗传疾病风险袁可为指导孕前育龄妇女预防和干
预婴儿出生缺陷提供可靠依据袁在出生缺陷防控技术
应用中有重要的价值遥
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neticdeterminants
JL袁Gu佴ant-Rodriguez
offolateand
RM袁Anello
vitaminB12
G袁et
metabo
鄄
-
syndrome?[J]
lism院AcommonpathwayinneuraltubedefectandDown
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MTHFR尧MTRR
袁等.建始地区汉族女性叶酸代谢通
单核苷酸多态性分布特
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渊收稿日期
袁2016袁24渊7冤院13-16.
院2018-12-28冤
2024年5月30日发(作者：夕觅夏)
中国现代医生2019年5月第57卷第13期
窑检验医学窑
1338例孕前育龄妇女MTHFRC677T、A1298C、
MTRRA66G基因突变结果分析
黄卫彤覃卫娟李筱瑜
530011南宁市妇幼保健院检验科袁广西南宁
[摘要]目的探讨孕前育龄妇女亚甲基四氢叶酸还原酶渊MTHFR冤C677T尧A1298C基因和甲硫氨酸合成酶还原酶
前检查的1338例育龄妇女为研究对象袁抽取静脉血袁提取全血中的DNA袁使用荧光定量PCR法进行检测MTH鄄
渊MTRR冤A66G基因检测在出生缺陷防控技术应用中的价值遥方法选择2015年1月耀2016年12月在我院做孕
FRC677T尧A1298C基因突变位点和MTRRA66G基因突变位点袁分析基因频率分布情况遥结果1338例孕前育
AA尧AC尧CC基因型频率分布分别为62.5%尧30.0%尧7.5%曰MTRR基因A66G位点AA尧AG尧GG基因型频率分布分
著差异渊字
2
=189.81尧663.24尧791.40尧99.09尧712.34袁P<0.05冤曰MTHFRA1298C位点基因型频率分布与佛山尧珠海尧郑
龄妇女的MTHFRC677T位点CC尧CT尧TT基因型频率分布分别为58.6%尧35.0%尧6.4%曰MTHFR基因A1298C位点
别为53.1%尧39.8%尧7.1%遥MTHFRC677T位点基因型频率分布与佛山尧郑州尧长春尧九江尧江苏研究结果比较袁有显
州尧长春尧九江尧江苏研究结果比较有显著差异渊字
2
=45.33尧20.21尧60.92尧103.24尧22.83尧84.56袁P<0.05冤曰MTRRA66G位
点基因型频率分布与郑州尧长春研究结果比较有显著差异渊字
2
=7.290尧6.432袁P<0.05冤袁而与佛山尧珠海尧九江尧江苏
A1298CCC尧MTRRA66GGG基因型频率分布大致一致袁但与国内其他地区比较MTHFRC677T尧A1298C和MTRR
研究结果比较无显著差异渊字
2
=3.500尧0.534尧0.537/3.351袁P>0.05冤遥结论南宁市孕前育龄妇女MTHFRC677TTT尧
A66G位点基因型频率分布有地域性差异遥因此袁孕前育龄妇女补充叶酸或叶酸缺乏者同时检测MTHFRC677T
位点尧A1298C位点及MTRRA66G位点突变袁能全面发现与叶酸代谢能力障碍的相关遗传风险袁可为指导孕前育
龄妇女预防和干预婴儿出生缺陷提供可靠依据袁在出生缺陷防控技术应用中有重要的价值遥
[关键词]孕前妇女曰亚甲基四氢叶酸还原酶曰甲硫氨酸合成酶还原酶曰基因突变曰出生缺陷
[中图分类号]R446.9[文献标识码]B[文章编号]1673-9701渊2019冤13-0111-04
AnalysisofmutationresultsofMTHFRC677T,A1298CandMTRRA66G
genesin1338pre-pregnancywomenofchildbearingage
HUANGWeitongQINWeijuanLIXiaoyu
DepartmentofClinicalLaboratory袁NanningMaternalandChildHealthHospital袁Nanning530011袁China
[Abstract]ObjectiveToinvestigatethevalueofmethylenetetrahydrofolatereductase渊MTHFR冤C677T,A1298Cgene
andmethioninesynthasereductase渊MTRR冤A66Ggenedetectionintheapplicationofbirthdefectspreventionandcon鄄
s1338womenofchildbearingagewhounderwent
venousbloodwasextracted,677T,A1298Cgenemutationsite
genefrequencydistributionswere
sThefrequencydistributionsofCC,CTandTTgenotypesofMTHFRC677Tlociin1338pre-preg鄄
nancywomenofchildbearingagewere58.6%,35.0%and6.4%,quenciesofAA,ACandCC
genotypesofMTHFRgeneA1298Cwere62.5%,30.0%,7.5%.ThefrequencydistributionsofAA,AG,andGGgeno鄄
MTHFRC677TlocusgenotypeinNanningweresignificantlydifferentfromthoseinFoshan,Zhengzhou,Changchun,Ji鄄
typesofARRsitesintheMTRRgenewere53.1%,39.8%,and7.1%,quencydistributionsof
ujiangandJiangsu渊字
2
=189.81,663.24,791.40,99.09,712.34,P<0.05冤.MTHFRA1298Clocusgenotypefrequencydistri鄄
butionsinNanningweresignificantlydifferentfromthoseinFoshan,Zhuhai,Zhengzhou,Changchun,Jiujiangand
nosignificantdifferencebetweenNanjingandFoshan,Zhuhai,JiujiangandJiangsu渊字
2
=3.500,0.534,0.537/3.351,P>
[基金项目]广西科学研究与技术开发计划项目渊桂科攻14
124004-1-16冤
CHINAMODERNDOCTORVol.57No.13May2019
111
pre-pregnancyexaminationsinour
Jiangsu渊字
2
=45.33,20.21,60.92,103.24,22.83,84.56,P<0.05冤.TherewasasignificantdifferenceinMTRRA66Glocus
genotypefrequencydistributionsbetweenNanjingandZhengzhou,Changchun渊字
2
=7.290,6.432,P<0.05冤,buttherewas
窑检验医学窑
中国现代医生2019年5月第57卷第13期
0.05冤.ConclusionThefrequencydistributionsofMTHFRC677TTT,A1298CCCandMTRRA66GGGgenotypesin
ore,thedetectionofMTHFRC677Tlocus,A1298ClocusandMTRRA66Glocusmutationinpre-preg鄄
pre-pregnancywomenofchildbearingageinNanningareroughlythesame,butthereareregionaldifferencesinthe
frequencydistributionsofMTHFRC677T,A1298CandMTRRA66GlociinNanningcomparedwithotherregionsin
nancywomenofchildbearingagesupplementedwithfolicacidorfolatedeficiencycanfullydiscoverthegeneticrisk
associatedwithfolatemetabolismdysfunction,andcanprovideareliablebasisforguidingpreventionandintervention
defectpreventionandcontroltechnology.
[Keywords]Pre-pregnancywomen曰Methylenetetrahydrofolatereductase曰Methioninesynthasereductase曰Genemuta鄄
mportantvalueintheapplicationofbirth
tion曰Birthdefect
氨酸合成酶还原酶
缘袁员园原亚甲基四氢叶酸还原酶
渊MTRR冤是叶酸-
渊酝栽匀云砸冤
甲硫氨酸
和甲硫
-同型
半胱氨酸代谢循环过程中的关键酶袁其酶活性水平与
人体内叶酸浓度
MTHFR
尧血浆同型半胱氨酸浓度密切相关
[1]
氨酸升高
与
袁高同型半胱氨酸会损伤血管内皮细胞
MTRR基因突变引起叶酸缺乏和同型半胱
袁
袁引
起血小板激活聚集袁破坏机体的凝血和纤溶系统
[2]
现血栓形成的倾向而导致流产袁而且同型半胱氨酸在
袁出
器官形成早期对胚胎神经系统具有毒性袁因此与神经
管缺陷相关遥有文献报道MTHFR基因突变率在怀有
唐氏综合征患儿的母亲明显升高袁特别是MTHFRA1298C
的CC基因型
[3]
与MTHFRC677T的TT基因型
[4]
是出
生缺陷的遗传高风险因素遥MTRR基因突变是造成叶
酸/甲基维生素缺乏症的主要病因袁也是同型半胱氨
酸尧叶酸代谢异常的主要原因之一袁MTRRA66G基因
型女性携带者未服用叶酸增补剂和低叶酸饮食的情
况下均会增加胎儿唇腭裂的风险袁若以上两种情况同
时存在袁则风险进一步增高
[5]
基因突变被认为是多种出生缺陷疾病的遗传高风险
遥因此袁目前MTRR尧MTHFR
因素袁可作为孕前育龄妇女叶酸代谢能力障碍筛查基
因袁但基因位点突变频率分布有地域性差别
[6]
采用荧光PCR法检测1338例南宁市孕前育龄妇女叶
遥本研究
酸代谢关键酶MTHFRC677T尧A1298C尧MTRRA66G基因
突变
A1298C尧MTRR
袁旨在了解南宁市孕前育龄妇女
A66G基因突变频率分布情况
MTHFR
袁
C677T尧
孕前育龄妇女预防和干预婴儿出生缺陷提供依据
为指导
遥
1对象与方法
1.1研究对象
选取于2015年1月~2016年12月期间到南宁
市妇幼保健院产科门诊进行孕前检查的1338例育龄
妇女袁年龄22~32岁袁平均渊27.1依4.9冤岁袁经知情同意
后
PCR
袁抽取静脉血
A66G
法进行
袁提取全血中的DNA袁采用荧光定量
基因突变检测
MTHFRC677T尧A1298C
袁结果与国内其他地区研究结果
基因突变及MTRR
112
CHINAMODERNDOCTORVol.57No.13May2019
比较袁分析基因突变频率分布和地域性差异情况遥
1.2材料与仪器
Lab-Aid820袁
仪器试剂院淤全自动核酸提取仪型号为厦门致善
光定量PCR扩增仪
配套提取试剂
袁试剂来源于深圳奥萨制药有限
曰于美国伯乐CFX96型荧
GATGATGAAATCG
公司遥盂引物:MTHFR
[G/A]CTCCCGCAGACACCTTCTC鄄
677T:5'-GAAAAGCTGCGT鄄
GACTTCAAAGACACTT
CTTCAA-3',MTHFRA1298C:
[G/T]CTTCACTGGTCAGCTC鄄
5'-AAGAACGAA鄄
CTCCCCCCA
TACATGGAT-3'遥
CATCGCAGAAGAAAT[A/G]TGTGAGCAAGCTGTGG
-3',MTRRA66G:5'-AGGCAAAGGC鄄
-
1.3方法
1.3.1
动核酸提取仪提取全血中的
DNA提取方法采集受检者静脉全血
DNA袁提取的
袁
DNA
利用全自
浓度
达到20ng/滋L袁纯度比值达1.8以上既可进行扩增袁使
用荧光定量
1.3.2
关MTHFR
荧光定量
PCR扩增方法进行检测遥
C677T尧A1298C袁MTRR
PCR技术分别检测分析叶酸代谢相
A66G基因突变位
点遥每个反应体系20滋L院10滋LPCR混合液袁0.25滋L
探针袁5.75滋L双蒸水袁4滋L样本提取的DNA遥扩增程
序如下院50毅C预变性2min袁95毅C预变性2min袁1个
循环曰95毅C变性15s袁60毅C延伸1min袁45个循环遥扩
增完成后袁通过软件合成扩增仪VIC和FAM两个通道
所形成的S型扩增曲线进行判断基因突变类型遥
1.4基因型频率分布分析
MTRR
将南宁市孕前育龄妇女
A66G基因突变频率分结果与国内佛山
MTHFRC677T尧A1298C尧
[7]
郑州
尧
A1298C
[9]
尧长春
分析个体基因突变频率分布和地域性差异情况
位点突变及
[10]
尧九江
[7]
尧
珠海
[8]
尧
MTRR
江苏
[11]
A66G
研究报道
突变频率分布比较
MTHFRC677T尧
遥
袁
1.5统计学方法
采用拟和优度字
2
检验检测各个位点的基因型分
布是否符合哈
HWE冤袁P>0.05
-
表明各基因型的分布符合
温平衡渊Hardy-Weinbergequilibrium袁
HWE平衡曰
中国现代医生2019年5月第57卷第13期
窑检验医学窑
频率分布分别为53.1%尧39.8%尧7.1%袁显示个体基因
突变频率分布结果大致一致遥MTHFRC677T位点基
因型频率分布与佛山尧郑州尧长春尧九江尧江苏研究结
果比较袁有显著差异渊字
2
=189.81尧663.24尧791.40尧99.09尧
有显著差异渊字
2
=45.33尧20.21尧60.92尧103.24尧22.83尧84.56袁
P<0.05冤曰MTRRA66G位点基因型频率分布与郑州尧
712.34袁P<0.05冤曰MTHFRA1298C位点基因型频率分
采用SPSS17.0软件对数据进行分析袁组间比较采用字
2
检验袁P约0.05为差异有统计学意义遥
2结果
2.1哈-温渊HWE冤平衡检测结果
本研究中袁经过匀宰耘平衡定律检验袁酝栽匀FRC677T
和MTRRA66G位点实际值与预计值吻合渊P跃0.05冤袁
说明群体遗传平衡,数据来自同一孟德尔群体袁具有
本区域群体代表性遥见表1遥
表1MTHFRC677T尧A1298C尧MTRRA66G基因位点HWE平衡
位点
检测结果
基因型实际值预计值
CC
CT
TT
784
468
836
401
101
711
532
95
86
775
487
803
467
713
527
97
68
77
字
2
P
布与佛山尧珠海尧郑州尧长春尧九江尧江苏研究结果比较
长春研究结果比较有显著差异渊字
2
=7.290尧6.432袁P<
MTHFRC677T尧MTHFRA1298C尧MTRRA66G位点基
因型频率分布有地域性差别遥见表2尧表3遥
3讨论
0.05冤袁而与佛山尧珠海尧九江尧江苏研究结果比较无显
著差异渊字
2
=3.500尧0.534尧0.537尧3.351袁P>0.05冤袁显示
MTHFRC677T
MTHFRA1298C
MTRRA66G
2.023
26.810
0.111
0.155
0.000
0.793
AA
AC
CC
AA
AG
GG
3.1MTHFRC677T尧A1298C和MTRRA66G基因
突变渊杂合子尧纯合子冤与叶酸代谢障碍相关系分析
1338例孕前妇女的MTHFR基因C677T位点尧
A1298C位点及MTRR基因A66G位点突变频率分布
结果显示袁MTHFRC677TTT尧A1298CCC和MTRR
A66GGG个体基因突变频率分布均无明显差异袁说
CC和MTRRA66GGG基因突变频率大致一致遥MTHFR
和MTRR是叶酸代谢循环过程中的关键酶
[12]
袁其酶活
性水平与人体内叶酸浓度密切相关袁有文献报道携带
MTHFR1298C渊AC或CC冤基因者的酶活性只有野生
型渊AA冤的78%
[5]
袁携带MTHFRC677TCT基因型的酶
活性只有野生型渊CC冤的65%袁而基因型TT个体酶活
MTHFRA1298C
AC
2.2MTHFRC677T尧MTHFRA1298C尧MTRRA66G
位点基因型频率分布与其他地区结果的比较
1338例孕前育龄妇女的MTHFRC677T位点CC
明本市孕前育龄妇女的MTHFRC677TTT尧A1298C
渊野生型冤尧CT渊杂合子冤尧TT渊纯合子冤基因型频率分布
点AA渊野生型冤尧AC渊杂合子冤尧CC渊纯合子冤基因型频
率分布分别为62.5%尧30.0%尧7.5%曰MTRR基因A66G
位点AA渊野生型冤尧AG渊杂合子冤尧GG渊纯合子冤基因型
MTHFRC677T
468渊35.0冤
CT
分别为58.6%尧35.0%尧6.4%曰MTHFR基因A1298C位
表2MTHFRC677T尧MTHFRA1298C位点的基因型频率与其他地区的比较[n渊%冤]
地区
本研究
佛山
[7]
珠海
[8]
n
1338
2138
1293
3405
1839
2021
833
784渊58.6冤
CC
郑州
[9]
长春
[10]
九江
[7]
1288渊60.2冤728渊34.1冤
351渊42.1冤251渊30.2冤231渊27.7冤
194渊15.0冤600渊46.4冤499渊38.6冤
765渊41.6冤835渊45.4冤239渊13.0冤
354渊17.5冤951渊47.1冤716渊35.4冤
122渊5.7冤
648渊19.1冤1676渊49.2冤1081渊31.7冤
86渊6.4冤
TT
字
2
189.81
663.24
791.40
712.34
99.09
1.296
P
0.000
0.523
0.000
0.000
0.000
0.000
1217渊56.9冤795渊37.2冤
2511渊73.7冤818渊24.0冤
1202渊65.4冤569渊30.9冤
1492渊73.8冤489渊24.2冤
957渊74.0冤308渊23.8冤
427渊76.3冤125渊22.3冤
836渊62.5冤401渊30.0冤
AA
101渊7.5冤
126渊5.9冤
28渊2.2冤
76渊2.3冤
68渊3.7冤
40渊2.0冤
8渊1.4冤
CC
字
2
45.33
20.21
103.24
22.83
84.56
60.92
P
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
江苏
[11]
表3MTRRA66G位点的基因型频率与其他地区的比较[n渊%冤]
地区
本研究
佛山
[7]
珠海
[8]
郑州
长春
江苏
[9]
[10]
n
1338
2138
1293
3405
1839
2021
833
711渊53.1冤
1109渊51.9冤
1937渊56.9冤
1000渊54.4冤
1128渊55.8冤
742渊57.4冤
309渊55.2冤
AA
MTRRA66G
532渊39.8冤
224渊40.0冤
872渊40.8冤
1269渊37.3冤
708渊38.5冤
774渊38.3冤
485渊37.5冤
AG
95渊7.1冤
157渊7.3冤
199渊5.8冤
131渊7.1冤
119渊5.9冤
66渊5.1冤
27渊4.8冤
GG
字
2
3.500
7.290
P
0.174
0.767
0.026
0.765
0.187
0.04
0.534
6.432
0.537
3.351
九江
[7]
[11]
CHINAMODERNDOCTORVol.57No.13May2019
113
窑检验医学窑
性仅有30%
[13]
只有正常的30%袁
袁携带
携带
MTRR
MTRR
A66G
A66G
GG
AG
基因者的酶活性
基因者的酶活
性只有正常的65%
[11]
前育龄妇女体内存在叶酸代谢障碍和叶酸不足的风
遥依据文献报道提示本市部分孕
险袁叶酸缺乏会导致胚胎发育期的DNA和蛋白甲基
化不足导致胎儿发育畸形尧流产
[13-16]
女检测MTHFRC677T尧A1298C和MTRR
遥因此孕前育龄妇
A66G基因
位点突变袁可筛查出叶酸代谢能力障碍相关遗传基因
[6]
预防胎儿神经管缺陷等出生缺陷相关疾病的发生
袁为定期检测叶酸含量及合理补充叶酸提供依据袁
[17]
达到
3.2MTHFRC677T尧A1298C和MTRRA66G基因
遥
突检测的临床意义
研究结果显示南宁市育龄妇女MTHFRC677T
位点基因型频率分布与佛山尧郑州尧长春尧九江尧江苏
研究结果比较有显著差异曰MTHFRA1298C位点基因
型频率分布与佛山尧珠海尧郑州尧长春尧九江尧江苏研究
结果比较有显著差异曰MTRRA66G位点基因型频率
分布与郑州尧长春研究结果比较有显著差异袁而与佛
山
MTHFR
尧珠海尧九江
频率分布有地域性差别
C677T尧MTHFR
尧江苏研究结果比较无显著差异
袁与国内学者报道基本一致
A1298C尧MTRRA66G
遥
基因型
说明
[7-11]
因此
遥
C677T
袁孕前补充叶酸或叶酸缺乏者
不但能全面发现与叶酸代谢能力障碍的相关遗传疾
位点尧A1298C位点及MTRR
袁同时检测
A66G位点突变
MTHFR
袁
病的风险袁还可为个体化用量补服叶酸及疗效观察提
供更可靠依据
[18]
综上所述袁本研究通过对南宁市
袁达到预防出生缺陷的目的
1338
遥
例孕前育
龄妇女MTHFRC677T尧A1298C尧MTRRA66G基因突变
检测袁能全面发现孕前育龄妇女叶酸代谢能力障碍的
相关遗传疾病风险袁可为指导孕前育龄妇女预防和干
预婴儿出生缺陷提供可靠依据袁在出生缺陷防控技术
应用中有重要的价值遥
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[2]Chan
attenuates
SH袁Hung
dothelial
mitigating
oxidative
hyperhomocysteinemin
CH袁ShihJY袁se
injurybyregulating
-inducced
intervention
SIRT1
aorticen鄄
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Biol袁2018袁14院116-125.
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生杂志
袁黄娟娟
袁2018袁9渊3冤院43-45.
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