2024年6月12日发(作者：弭寒雁)
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江苏金丝利药业有限公司
操作规程
题 目
编 号
制 定 人
制定日期
颁发部门 质检部
大肠杆菌宿主菌蛋白质残留量检验标准操作规程
QC-OS-026-06
审 核 人
审核日期
复 印 号
生效日期
批 准 人
批准日期
分发部门（岗位）：档案室、生产部、修订原因及目的：对配液及具体操作
质检部、理化检测2 进行细化完善。
标题：进一步加强注射用重组人白介素-2原液大肠杆菌宿主菌蛋白质残
留量的控制。
范围：注射用重组人白介素-2原液大肠杆菌宿主菌蛋白质残留量的检
测。
责任人：质检部经理、理化检测人员
正文：
一 制订依据：《中国药典》2010 年版三部。
简述：利用酶联免疫法测定大肠杆菌表达系统生产的重组制品中菌体蛋
白质残留量，具体如下：将兔抗大肠杆菌菌体蛋白抗体包被，结合菌体蛋白，
再和有辣根过氧化酶标记的兔抗大肠杆菌菌体蛋白抗体结合，加入底物，产
生的物质在492nm处测吸光度，与参考品的标准曲线对照，即可得原液中菌
体蛋白的含量。
二 规程：
1 仪器与用具
1.1 CS-9301PC型酶标仪 日本岛津制作所。
1.2 Multiskan FC酶标仪 美国Thermo Scientific
1.3 96孔细胞培养板。
1.4 37℃恒温培养箱。
1.5 BCD-180WD型冰箱 上菱冰箱厂。
1.6 移液枪 美国Thermo Scientific。
2 试药与试液
2.1 实验材料 所需化学试剂均应为分析纯。
2.2 包被液（pH9.6碳酸盐缓冲液） 称取碳酸钠0.32g，碳酸氢钠
编号：QC-OS-026-06 页号：2/4
江苏金丝利药业有限公司
操作规程
0.586g，置200ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度。4℃冷藏保存。
2.3 磷酸盐缓冲液(pH7.4) 称取氯化钠8g、氯化钾0.2g、磷酸氢二
钠1.44g（相当于Na
2
HPO
4
·12H
2
O 3.63g，Na
2
HPO
4
·12H
2
O中磷酸氢二钠
所占百分比为39.7%）、磷酸二氢钾0.24g，加水溶解稀释至500ml，121℃
灭菌15分钟。
2.4 洗涤液（pH7.4） 取聚山梨酯20 0.5ml，加磷酸盐缓冲液至500
ml，4℃冰箱保存。
2.5 稀释液（pH7.4） 称取牛血清白蛋白0.5g，加洗涤液溶解并稀
释至100 ml，4℃冰箱保存。
2.6 浓稀释液 称取牛血清白蛋白1.0g，加洗涤液溶解并稀释至100
ml，4℃冰箱保存。
2.7 底物缓冲液（pH5.0枸橼酸-磷酸盐缓冲液） 称取磷酸氢二钠
（Na
2
HPO
4
·12H
2
O）1.84g，枸橼酸0.51g，加水溶解并稀释至100ml，4℃
冰箱保存。
2.8 底物液 取邻苯二胺8mg，加30%过氧化氢30μl，溶于底物缓
冲液20ml中，临用时现配。
2.9 终止液 1mol/L硫酸溶液，取硫酸5.5ml，缓缓注入80ml水中，
冷却至室温，加水稀释至100ml，摇匀；硫酸的用量根据硫酸的实际含量
计算得出，计算公式如下：
硫酸用量=（摩尔浓度×配制体积×摩尔质量）/（含量×密度）。
2.10 兔抗大肠杆菌菌体蛋白抗体（DakoCytomation，Polyclonal
Rabbit Anti-Escherichia Coli，Code No./Code-Nr. B 0357，规格：9.9g/L）。
于2~8℃冰箱保存，有效期按标签规定执行。每次实验前取4μl，在刻度
试管中用包被液稀释至4ml（稀释1000倍），制成10μg/ml抗体。
2.11 辣根过氧化酶（HRP）标记的兔抗大肠杆菌菌体蛋白抗体
（ Antibody，HRP comjugate，Thermo scientific，Catalog Number：
PA 1-73030，规格：1ml）。于2~8℃冰箱保存，有效期为6个月，-20℃
保存，有效期更长。每次实验前取4μl，在刻度试管中用稀释液稀释至
4ml（稀释1000倍）。
2.12 标准品溶液的制备 标准品规格为204 μg/支，4℃保存，由中
国药品生物制品检定所提供。标准品用1ml纯化水溶解，再用稀释液定容
至10ml，分装至0.5 ml EP中，装量为0.15ml/管，4℃保存，有效期为一
周；-20℃保存，有效期为6个月。在配制记录中明确其配制批号，其格
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江苏金丝利药业有限公司
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编 号
制 定 人
制定日期
颁发部门 质检部
大肠杆菌宿主菌蛋白质残留量检验标准操作规程
QC-OS-026-06
审 核 人
审核日期
复 印 号
生效日期
批 准 人
批准日期
分发部门（岗位）：档案室、生产部、修订原因及目的：对配液及具体操作
质检部、理化检测2 进行细化完善。
标题：进一步加强注射用重组人白介素-2原液大肠杆菌宿主菌蛋白质残
留量的控制。
范围：注射用重组人白介素-2原液大肠杆菌宿主菌蛋白质残留量的检
测。
责任人：质检部经理、理化检测人员
正文：
一 制订依据：《中国药典》2010 年版三部。
简述：利用酶联免疫法测定大肠杆菌表达系统生产的重组制品中菌体蛋
白质残留量，具体如下：将兔抗大肠杆菌菌体蛋白抗体包被，结合菌体蛋白，
再和有辣根过氧化酶标记的兔抗大肠杆菌菌体蛋白抗体结合，加入底物，产
生的物质在492nm处测吸光度，与参考品的标准曲线对照，即可得原液中菌
体蛋白的含量。
二 规程：
1 仪器与用具
1.1 CS-9301PC型酶标仪 日本岛津制作所。
1.2 Multiskan FC酶标仪 美国Thermo Scientific
1.3 96孔细胞培养板。
1.4 37℃恒温培养箱。
1.5 BCD-180WD型冰箱 上菱冰箱厂。
1.6 移液枪 美国Thermo Scientific。
2 试药与试液
2.1 实验材料 所需化学试剂均应为分析纯。
2.2 包被液（pH9.6碳酸盐缓冲液） 称取碳酸钠0.32g，碳酸氢钠
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0.586g，置200ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度。4℃冷藏保存。
2.3 磷酸盐缓冲液(pH7.4) 称取氯化钠8g、氯化钾0.2g、磷酸氢二
钠1.44g（相当于Na
2
HPO
4
·12H
2
O 3.63g，Na
2
HPO
4
·12H
2
O中磷酸氢二钠
所占百分比为39.7%）、磷酸二氢钾0.24g，加水溶解稀释至500ml，121℃
灭菌15分钟。
2.4 洗涤液（pH7.4） 取聚山梨酯20 0.5ml，加磷酸盐缓冲液至500
ml，4℃冰箱保存。
2.5 稀释液（pH7.4） 称取牛血清白蛋白0.5g，加洗涤液溶解并稀
释至100 ml，4℃冰箱保存。
2.6 浓稀释液 称取牛血清白蛋白1.0g，加洗涤液溶解并稀释至100
ml，4℃冰箱保存。
2.7 底物缓冲液（pH5.0枸橼酸-磷酸盐缓冲液） 称取磷酸氢二钠
（Na
2
HPO
4
·12H
2
O）1.84g，枸橼酸0.51g，加水溶解并稀释至100ml，4℃
冰箱保存。
2.8 底物液 取邻苯二胺8mg，加30%过氧化氢30μl，溶于底物缓
冲液20ml中，临用时现配。
2.9 终止液 1mol/L硫酸溶液，取硫酸5.5ml，缓缓注入80ml水中，
冷却至室温，加水稀释至100ml，摇匀；硫酸的用量根据硫酸的实际含量
计算得出，计算公式如下：
硫酸用量=（摩尔浓度×配制体积×摩尔质量）/（含量×密度）。
2.10 兔抗大肠杆菌菌体蛋白抗体（DakoCytomation，Polyclonal
Rabbit Anti-Escherichia Coli，Code No./Code-Nr. B 0357，规格：9.9g/L）。
于2~8℃冰箱保存，有效期按标签规定执行。每次实验前取4μl，在刻度
试管中用包被液稀释至4ml（稀释1000倍），制成10μg/ml抗体。
2.11 辣根过氧化酶（HRP）标记的兔抗大肠杆菌菌体蛋白抗体
（ Antibody，HRP comjugate，Thermo scientific，Catalog Number：
PA 1-73030，规格：1ml）。于2~8℃冰箱保存，有效期为6个月，-20℃
保存，有效期更长。每次实验前取4μl，在刻度试管中用稀释液稀释至
4ml（稀释1000倍）。
2.12 标准品溶液的制备 标准品规格为204 μg/支，4℃保存，由中
国药品生物制品检定所提供。标准品用1ml纯化水溶解，再用稀释液定容
至10ml，分装至0.5 ml EP中，装量为0.15ml/管，4℃保存，有效期为一
周；-20℃保存，有效期为6个月。在配制记录中明确其配制批号，其格