2024年7月9日发(作者:诺高)
A.1粗多糖的测定
A.1.1原理
样品溶液中粗多糖经80%乙醇沉淀,粗多糖在硫酸作用下,先分解成单糖,并迅速脱水
成糖醛衍生物,与苯酚反应生成橙黄色溶液,在490nm成有特征吸收,与标准曲线比较计算
含量。
A.1.2试剂和对照品
除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T 6682中的蒸馏水。
A.1.2.1硫酸(H
2
SO
4
),
ρ=1.84g/ml
A.1.2.2无水乙醇(C
2
H
6
O)
A.1.2.3苯酚(C
6
H
6
O)
A.1.2.4葡萄糖(C
6
H
12
O
6
),使用前于105℃恒温烘干至恒重。
A.1.2.5 5%苯酚溶液:称取苯酚5g,于100ml烧杯中,加适量水溶解,定溶于100ml容量瓶
中,现配现用。
A.1.2.6 100mg/L标准葡萄糖溶液:准确称量0.1000g葡萄糖(A.1.2.4)于100ml烧杯中,
加水溶解,定容至1000ml容量瓶中,摇匀,至4℃冰箱密塞贮存。
A.1.3仪器设备及装置
A.1.3.1可见光分光光度计
A.1.3.2分析天平,感量0.001g
A.1.3.3离心机
A.1.4试样制备
精密量取本品软胶囊内容物10.00g,加10倍量的水,在100℃水浴中煮沸1h,重复3次.
提取液过滤,浓缩至1:1(g/ml),加入3倍量无水乙醇,震荡摇匀,静止片刻使沉淀出
现,在离心机中以4000r/min离心10min,小心弃去上清液,沉淀用热水溶解转移至100ml容
量瓶中,离心管用水洗涤2~3次,洗涤液一并转移至容量瓶中,定容摇匀。取上述溶液5ml
至10ml容量瓶中,加水定容,摇匀作为样品测定液。
A.1.5操作步骤
A.1.5.1标准曲线
分别吸取0、0.2ml、0.4ml、0.6ml、1.0ml的标准葡萄糖溶液(A1.2.6)置20ml具塞试
管中,用蒸馏水补至1.0ml,向试液中加入1.0ml苯酚溶液(A1.2.5),然后快速加入5.0ml
硫酸(于液面垂直加入,勿接触试管壁,以便与反应液充分混合),静置10min,使用涡旋
振荡器使反应液充分混合,然后将试管放置于30℃水浴中反应20min,在490nm处测定吸光
度,以葡萄糖质量浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,制定标准曲线。
A.1.5.2测定
精密量取样品测定液1.00ml于20ml具塞试管中,按(A1.5.1)步骤操作测定吸光度,
同时作空白试验,在标准曲线上读出测定液浓度。
计算
样品中多糖含量w,单位以mg/100ml表示,按以下公式计算:
w
式中:
MF100
V
1
M——从标准曲线上读出测定值,单位为mg;
F——样品溶液稀释倍数;
V1——样品体积,单位为ml;
说明:本品粗多糖检测方法参照NY/T 1676-2008《食用菌中粗多糖含量的测定》。
2024年7月9日发(作者:诺高)
A.1粗多糖的测定
A.1.1原理
样品溶液中粗多糖经80%乙醇沉淀,粗多糖在硫酸作用下,先分解成单糖,并迅速脱水
成糖醛衍生物,与苯酚反应生成橙黄色溶液,在490nm成有特征吸收,与标准曲线比较计算
含量。
A.1.2试剂和对照品
除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和符合GB/T 6682中的蒸馏水。
A.1.2.1硫酸(H
2
SO
4
),
ρ=1.84g/ml
A.1.2.2无水乙醇(C
2
H
6
O)
A.1.2.3苯酚(C
6
H
6
O)
A.1.2.4葡萄糖(C
6
H
12
O
6
),使用前于105℃恒温烘干至恒重。
A.1.2.5 5%苯酚溶液:称取苯酚5g,于100ml烧杯中,加适量水溶解,定溶于100ml容量瓶
中,现配现用。
A.1.2.6 100mg/L标准葡萄糖溶液:准确称量0.1000g葡萄糖(A.1.2.4)于100ml烧杯中,
加水溶解,定容至1000ml容量瓶中,摇匀,至4℃冰箱密塞贮存。
A.1.3仪器设备及装置
A.1.3.1可见光分光光度计
A.1.3.2分析天平,感量0.001g
A.1.3.3离心机
A.1.4试样制备
精密量取本品软胶囊内容物10.00g,加10倍量的水,在100℃水浴中煮沸1h,重复3次.
提取液过滤,浓缩至1:1(g/ml),加入3倍量无水乙醇,震荡摇匀,静止片刻使沉淀出
现,在离心机中以4000r/min离心10min,小心弃去上清液,沉淀用热水溶解转移至100ml容
量瓶中,离心管用水洗涤2~3次,洗涤液一并转移至容量瓶中,定容摇匀。取上述溶液5ml
至10ml容量瓶中,加水定容,摇匀作为样品测定液。
A.1.5操作步骤
A.1.5.1标准曲线
分别吸取0、0.2ml、0.4ml、0.6ml、1.0ml的标准葡萄糖溶液(A1.2.6)置20ml具塞试
管中,用蒸馏水补至1.0ml,向试液中加入1.0ml苯酚溶液(A1.2.5),然后快速加入5.0ml
硫酸(于液面垂直加入,勿接触试管壁,以便与反应液充分混合),静置10min,使用涡旋
振荡器使反应液充分混合,然后将试管放置于30℃水浴中反应20min,在490nm处测定吸光
度,以葡萄糖质量浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,制定标准曲线。
A.1.5.2测定
精密量取样品测定液1.00ml于20ml具塞试管中,按(A1.5.1)步骤操作测定吸光度,
同时作空白试验,在标准曲线上读出测定液浓度。
计算
样品中多糖含量w,单位以mg/100ml表示,按以下公式计算:
w
式中:
MF100
V
1
M——从标准曲线上读出测定值,单位为mg;
F——样品溶液稀释倍数;
V1——样品体积,单位为ml;
说明:本品粗多糖检测方法参照NY/T 1676-2008《食用菌中粗多糖含量的测定》。