2024年9月8日发(作者：闻子明)
第３ｌ卷
２０ｌＯ年
第５期
９月
中山大学学报（医学科学版）
ＪＯＵＲＮＡ１ ＯＦ ＳＵＮ ＹＡＴ—ＳＥＮ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＭＥＤＩＣＡＩ ＳＣＩＥＮＣＥＳ）
Ｖ｛）Ｉ．３ １ Ｎｏ．５
Ｓｅｐ．２０１０
ＯＡＳ．１基因ＳＮＰ ｒｓ２６６０与慢性ＨＢＶ感染者自发性
ＨＢｅＡｇ血清转换的关系
陈禄彪 ，揭育胜 ．许
（中山大学附属第三跃院
镇 ，徐启桓 ，彭晓谋 ，高志良
１．感染科，２．肝病学实验室．广东厂 州５１０６３０）
摘要：【目的】探讨寡聚腺苷酸合成酶基因一１（ＯＡＳ—１）位点￣２６６０的单核苷酸多态性（ＳＮＰ）与慢性乙型肝炎病毒
（ＨＢＶ）感染者自发性ＨＢｅＡｇ血清转换的关系。【方法】收集１２６例慢性ＨＢＶ感染者（ＨＢｅＡｇ阳性组５８例，ＨＢｅＡｔ）阳性组６８
例）手『ｉ无ＨＢＶ感染者（埘照组７２例）的外周ｍ，进行ＤＮＡ提取和扩增，再利用竞争分化聚合酶链反应（ＣＤ—ＰＣＲ）进行扩增，
并结合酶免疫法显包以检测陔ＳＮＰ的基 ．两组间基因型比例或等位基因频率采用× 检验和优势比（ＯＲ）汁算，【结果】
存ＨＢｅＡｇ阳性组ＳＮＰ ｒｓ２６６０基因型ＧＧ＋ＧＡ比例为２９．３％（１７／５８）、等位基 Ｇ频率为ｌ６．４％（１９／１ １６），而 ＩｔＢｅＡｔ 阳性
组分别为４７，ｌ％（３２／６８）和２８．７％（３９／１３６）．对照组分别为５２．７％（３８／７２）和１ ３０．６％（４４／１４４）；ＨＢｅＡｇ阳性组 ｊ ＩｔＢｅＡｂ 性
组或对照组之问的差异均存存统汁学意义（基冈型：Ｐ＝０．０４２和０．００７：等位基因：Ｐ＝０．０２１和０．００８），而ＨＢｅＡｂ阳性组与
对照组之问的差异无统计学意义（基 型：Ｐ＝０．４９９；等位基因：Ｐ＝０．７３１） 【结论】ＳＮＰ ｒｓ２６６０等位基 Ｇ【Ｊ『能仃助丁慢性
ＨＢ、 感染者发生自发性ＨＢｅＡｇ血清转换．其基 型检测对于干扰素治疗慢性ｌｉＢ＼＇感染者可能有一定的疗效预洲价值 ．
关键词：寡聚腺苷酸合成酶；单核苷酸多态性；乙型肝炎病毒；等位基因；基 型
中图分类号：Ｑ３９．Ｒ５１２．６＋２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２—３５５４（２０１０）０５—０６５７—４ ０
Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ＳＮＰ ｒｓ２６６０ ｏｆ ＯＡＳ－１ Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ＨＢｅＡｇ Ｓｅｒｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ
ｏｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｃｈｒｏｎｉｃ ＨＢＶ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ＣＨＥＮ Ｌｕ－ｂｉａｏ ，ＪＩＥ Ｙｕ—ｓｈｅｎｇ ，ＸＵ Ｚｈｅｎ ，ＸＵ Ｑｉ—ｈｕａｎ ，ＰＥＮＧ Ｘｉａｏ・ｌｎＯＵ ，ＧＡＯ Ｚｈｉ—ｌｉａｎｇ
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ，２．Ｈｅｐａｔｏｌｏ￣Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｔｈｅ Ｆｈｉｒｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，
Ｓｕｎ ｇａｔ—ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５ １ ０６３０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】 ｒｈｅ ａｉｍ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄ？，Ｗａｓ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｔｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｚ’ｐｈｉｓｍ
（ＳＮＩ ）ｒｓ２６６０ ｏｆ ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｇｅｎｅ一１（ＯＡＳ一１）ａｎｄ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ＨＢｅＡｇ ｓｅｒｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ
ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ（ＨＢＶ）ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．【Ｍｅｔｈｏｄｓ】Ｂｌｏｏｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ １ ２８ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｅｈｒｏｎｉｅ ｔｔＢＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ（５８
ＨＢｅＡｇ ｐｏｓｉｔｉｖｅ，６８ ＨＢｅＡｂ ｐｏｓｉｔｉｖｅ），ａｎｄ ７２ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｃａｓｅｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ＨＢＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ＤＮＡ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ａｎｄ
ＯＡＳ一１ ｇｅｎｅ ｗａｓ ａｍｐｌｉｉｆｅｄ． ＳＮＰ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｗａｓ ｐｅｆｒｏｒｍｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ （ＥＩＡ） ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｃｏｍｐｅｌｉｔｉｖｅｌｙ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｐｏｌｙｍｅ￣ ａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＣＤ—ＰＣＲ）．Ｏｄｄｓ ｒａｔｉｏ ａｎｄ ｃｈｉ—ｓｑｕａｒｅ ｔｅｓｔ ｗｅｒｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｉｎ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ．【Ｒｅｓｕｈｓ】ｌｎ
ＨＢｅＡｇ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ，ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ ｏｆ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ＧＧ ｐｌｕｓ ＧＡ ａｎｄ ａｌｌｅｌｅ Ｇ ｗｅｒｅ ２９．３％（１７／５８）ａｎｄ １６．４％（１９／１ １６）ｏｎ ＳＮＰ
ｒｓ２６６０，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ４７．１％（３２／６８）ａｎｄ ２８．７％（３９／１ ３６）ｉｎ ＨＢｅＡｂ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ，５２．７％（３８／７２）ａｎｄ ３０．６％
（４４／１４４）ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ＨＢｅＡｇ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＨＢｅＡｂ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ ｏｒ ｎｏｒｍａｌ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ（ｇｅｎｏｔｙｐｅ：Ｐ：０．０４２ ａｎｄ ０．００７；ａｌｌｅｌｅ：Ｐ＝０．０２ １ ａｎｄ Ｏ．００８）．Ｂｕｔ ｔｈｅ．ｖ ｗｅｒｅｎ’ｔ
ｂｅｔｗｅｅｎ ＨＢｅＡｔ）ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（ｇｅｎｏｔｙｐｅ：Ｐ＝Ｏ．４９９；ａｌｌｅｌｅ：尸＝０．７３ １）．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ａｌｌｅｌｅ Ｇ（ｍ
ＳＮＰ ｒｓ２６６０ ｏｆ ＯＡＳ一１ ｇｅｎｅ ｍａｙｂｅ ｂｅｎｅｆｉｔ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ＨＢＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｔｏ ａｃｈｉｅｖｅ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ＨＢｅＡｇ ｓｅｒｏｅｏｎｖｅｒｓｉｏｎ．
Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｏｎ ｔｈｉｓ ＳＮＰ ｍａｙ ｂｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｖａｌｕａｂｌｅ ｆｏｒ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｃｈｒｏｎｉｃ ＨＢＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ；ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ；ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ；ａｌｌｅｌｅ；ｇｅｎｏｔｙｐｅ
［Ｊ ＳＵＮ Ｙａｔ—ｓｅｎ Ｕｎｉｖ（Ｍｅｄ Ｓｃｉ），２０１０，３１（５）：６５７—６６０］
收稿日期：２０１０—０１一ｌ０
基金项目：广东肯科技计划项目（２００９Ｂ０３０８０１ １０６）
作者简介：陈禄彪，主治医师，医学博士，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｌｕｂｇｚ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏＩｒｎ； 通信作者：徐启桓，主任医师，硕士生导师，Ｅ－－ｍａｉｌ：ｘｑｈ０３０３＠
ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ．ｃｎ
６５８ 中山大学学报（医学科学版） 第３１卷
人寡聚腺苷酸合成酶（ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ，
ＯＡＳ）是一类由干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ，ＩＦＮ）诱导产生
的酶蛋白，由ＯＡＳ一１、ＯＡＳ一２和ＯＡＳ一３基因编码，
具有激活潜在性ＲＮＡ酶（１ａｔｅｎｔ Ｒｎａｓｅ，ＲＮａｓｅ Ｌ）
降解病毒ｍＲＮＡ、抑制病毒蛋白合成和促进病毒
感染细胞发生凋亡的作用．在先天性抗病毒免疫
中发挥重要的作用ｌ＿ 。已有研究发现ＯＡＳ一１基因
上存在的多个ＳＮＰ可能对丙型肝炎、ＳＡＲＳ等病毒
感染性疾病的转归产生影响Ｅ３－４￣，目前国内外关于
ＯＡＳ．１基因ＳＮＰ对慢性乙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ
ｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）感染影响的研究甚少，孔晓飞等［ ］
发现ＳＮＰ ｒｓ２６６０与ＨＢＶ自限性感染呈弱相关。
具体可能机制未能阐述。为此。本研究利用先前
建立的相对经济和简便的竞争分化聚合酶链反
应 ］（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ
ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＣＤ－ＰＣＲ）技术，对ＯＡＳ－１基因上ＳＮＰ ｒｓ２６６０
进行基因型检测，探讨它与慢性ＨＢＶ感染者自发
性ＨＢｅＡｇ血清转换的关系．了解检测该ＳＮＰ基因
型作为ＨＢｅＡｇ血清转换预测指标的可能性。
１材料与方法
１．１研究对象
收集２００６年５月至２００７年５月在我院感染
科就诊的慢性ＨＢＶ感染病例，根据入选前１个月
内在本院的乙肝两对半检查结果（ＡＸＳＹＭ）分成
ＨＢｅＡｇ阳性组和ＨＢｅＡｂ阳性组，两组间的年龄、
性别比例、谷丙转氨酶水平均具有可比性 入选标
准：年龄８～３０周岁。无接受ＩＦＮ、核苷（酸）类似
物等抗ＨＢＶ药物治疗历史，无明确合并ＨＣＶ、
ＨＤＶ、ＨＩＶ感染，ＨＢｅＡｂ阳性组者ＨＢＶ ＤＮＡ＜１
ｘ １０ 拷『ｊ！／ｍＬ（ＰＥ５７００荧光定量ＰＣＲ）和血清ＨＢＶ
前ｃ区Ｇ１８９６Ａ变异株阴性（方法参见文献『７］）。
另外收集７２名无ＨＢＶ感染者作为正常对照。采
静脉 ５ ｍＬ肝素抗凝保存于一２０℃冰箱待检。
Ｉ．２引物探针
ＯＡＳ一１基因ｃＤＮＡ的参考序列（ＧｅｎＢａｎｋ，Ａｃｃｅ．
Ｎｏ．ＮＣ
一
００００１２），引物和探针用Ｐｒｉｍｅｒ Ｐｒｅｍｉｅｒ软
件自行设计并由Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司合成（表１），用
Ｍｉｌｌｉ—Ｑ级ｄｄＨ Ｏ稀释成１０ ｎｍｏｌ／ｍＬ。
１．３试剂和设备
ＤＮＡ提取试剂盒购白美国Ｏｍｅｇａ公司，ＰＣＲ
试剂、Ｔ４ ＤＮＡ连接酶、Ｅ．Ｃｏｌｉ ＪＭ１０９感受态细胞和
表１ ＰＣＲ引物和ＤＮＡ杂交探针
Ｔａｂｌｅ １ Ｐｒｉｍｅｒｓ ｆｏｒ ＰＣＲ ａｎｄ ｐｒｏｂｅ ｆｏｒ ＤＮＡ
ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ
０ＡＳ１．Ｓ ＡＴＧＴＣＡＣＡＧＴＣ『ｒＣＴＡＣＣＧＴＡＡＡＴＧ
０ＡＳ１．Ａ ＡＧＡＧＡＡＴＡＧＧＴＧＧＡＡＴＧＡＡＧＴＧＡＧ
０ＡＳ１一ＣＬＳ ＣＣＡＣＧＣＧＴＡＴＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＣＣＧＴＡＡＡＴＧ
０ＡＳ１．ＣＬＡ ＴＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＧＡＧＡＡＴＡＧＧＴＧＧＡＡＴＧＡＡＧＴＧＡＧ
０ＡＳ１．１ ＣＧＧＣＧＴＣＣＡ１、ｃＡ ＧＡ＿ｆｌＡＧＧＡＴＡＧＡＧＧＧＣＡＴＡＧＡＡＧＧ
０ＡＳ１．Ｐ Ａｍｉｎ０１ｉｎｋｅｒＣ６．ＣＣ ｒＧＧＡＹＩ＂ＡＴＡＣＡＣＣＡＧＣＴＣＡＣ ｒＧＡＧＧＡＧＣｍ
０ＡＳ１．Ｇ ＤＩＧ．ＣＧＴＣＣＣＣＧＴＣＡＣＡ ＧＴＧＧＧＡＣＡＣＴＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＴＧ
０ＡＳ１．Ａ ＦＩＦＣ．ＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＡＴＣ ＧＴＧＧＧＡＣＡＣ Ｉ’Ｉ’ＧＡＴＣＣＡＧＡＧＴＡ
ＯＡＳ１．ＧＣ ＣＣＡＣＧＣＧＴＧＧＴＧＧＧＡＣＴＣＴｒＣＡＴＣＣＡＧＡＣＡＣＧＡ
０ＡＳ１．ＡＣ ＣＣＡＣＧＣＧＴＧＧ Ｉ℃ＧＧＡＣＴＣＴＩ℃ＡＴＣＣＡＧＡＧＡＡＧＡ
内切酶Ｎｏｔ Ｉ、Ｍｌｕ Ｉ均购自Ｔａｋａｒａ大连公司，质
粒载体ｐＣＩ—ｎｅｏ购自美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司．ＤＮＡ凝胶
纯化试剂盒购自德国ＱｉａＧｅｎ公司，辣根过氧化物
酶标记的地高辛抗体（ａｎｔｉ—ＤＩＣ）和异硫氰酸荧光素
抗体（ａｎｔｉ．ＦＩＦＣ）购自瑞士Ｒｏｃｈｅ公司。ＰＣＲ扩增采
用ＰＴＣ一２００热循环仪、ＤＮＡ测序采用ＡＢＩ ３７３０ＸＬ
测序仪，光密度测定采用Ｌａｂｓｙｓｔｅｍ ＭＫ３酶标仪。
１．４ ＤＮＡ提取和基础ＰＣＲ扩增
取抗凝血细胞１００ ＩＬＬ用ｄｄＨ Ｏ ２００ ｔｚＬ稀释，
用Ｏｍｅｇａ试剂盒进行ＤＮＡ提取，ＤＮＡ提取终液为
５０ Ｌ，保存于一２０℃备用。对ＳＮＰ所在ＤＮＡ片断进
行基础ＰＣＲ扩增，５０ Ｌ反应体系组成：１０×ＰＣＲ
缓冲液（１００ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ—ＨＣ１，ｐＨ ８．３，５００ ｍｍｏｌ／Ｌ
ＫＣ１，１５ ｍｍｏｌ／Ｌ ＭｇＣ１２）５ Ｌ、２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰ
液４｝ｘＬ、ＤＮＡ提取液５ ｔｘＬ、ｄｄＨ２０ ３４ ｐ，Ｌ、引物
ＯＡＳ１一Ｓ和ＯＡＳ１一Ａ各１ Ｌ、ＴａｑＤＮＡ聚合酶１．５ Ｕ；
反应步骤：９４℃预热５ ｒａｉｎ、９４℃变性４０ Ｓ－，５２℃退
火４０ ｓ，７２℃延伸６０ ｓ、循环数３５个、最后延伸５ ｍｉｎ。
１．５制备ＣＤ．ＰＣＲ阳性对照质粒ＤＮＡ
随机取一例基因组ＤＮＡ为模板，上游引物分
别为ＯＡＳ１．ＧＣ或ＯＡＳ１一ＡＣ和下游引物ＯＡＳ１一
ＣＬＡ进行扩增，除引物外５０ Ｌ ＰＣＲ反应体系
组成和反应条件同基础ＰＣＲ扩增，扩增产物经
Ｎｏｔ Ｉ、Ｍｌｕ Ｉ双酶切后进行２％琼脂糖凝胶电泳，
用ＱｉａＧｅｎ ＤＮＡ纯化试剂盒提取ＤＮＡ并与质粒载
体ｐＣＩ—ｎｅｏ连接，再用Ｅ．Ｃｏｌｉ ＪＭ１０９感受态细胞进
行转化，挑取克隆菌落在ＬＢ培养基增菌，随后提
取质粒ＤＮＡ作为ＣＤ—ＰＣＲ检测两个ＳＮＰ不同等
位基因的阳性对照
第５期 陈禄彪。等．ＯＡＳ—Ｉ基因ＳＮＰ ｍ２６６０与慢性ＨＢＶ感染者自发性ＨＢｅＡｇ血清转换的关系 ６５９
１．６ ＣＤ．ＰＣＲ扩增
经优化得到２５ Ｌ反应体系：１０×ＰＣＲ缓冲
液（１００ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ．ＨＣＩ，ｐＨ ８．３，５００ ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＣＩ，
１５ ｍｍｏｌ／Ｌ ＭｇＣＩ２）２．５ Ｌ、２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰ溶液
０．１２５ ＩＬＬ、Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶２．０ Ｕ、基础ＰＣＲ产物
１．０ ＩｘＬ、下游公共引物ＯＡＳ１．１ ０．１０ 、上游混合
引物ＯＡＳＩ．Ｇ ０．３８ Ｉ．ＬＬ和ＯＡＳ１．Ａ ０．３０ Ｌ，最后加
Ａｅ Ｇｅ Ｓｌ Ｓ２ Ｓ３ Ｓ４ Ｓ５ Ｓ６
一●●■■一一曩ａｎｔｉ删Ｇ
■■■■●■誓■ａｎｉｔ 珲ｃ
ＡＡ ＧＧ ＧＡ ＧＡ ＧＡ ＧＡ ＧＧ ＡＡ Ｂ
ｄｄＨ２Ｏ至总反应体积２５ Ｌ；ＰＣＲ反应条件：９４℃
变性１ ｍｉｎ、５６ ｏＣ复性２ ｍｉｎ、７２ ｃｃ延伸２ ｍｉｎ、共
２个循环，然后９４℃变性３０ Ｓ、６８ ｏＣ复性３０ ｓ、７２
图１ 基础ＰＣＲ产物电泳和ＣＤ．ＰＣＲ产物酶反应显色结
果示意图
Ｆｉｇ．１ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ｂａｓａｌ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ
ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ＣＤ－ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｂｙ ＥＩＡ
Ａ：Ｍ ｗａｓ ＤＮＡ ｓｉｚｅ ｆｎａｋｅｒｓ．１ａｎｅ １—８ ｗｅｒｅ ＤＮＡ（４６８ ｈｐ）
ａｍｐｌｉｉｆｅｄ ｆｉ＇ｍｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ； Ｂ： ａｎｔｉ—ＤＩＧ ａｎｄ ａｎｔｉ—ＦＩＦＣ ｉｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｗｏ ｒｏｗｓ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ａｌｌｅｌｅ Ｇ ａｎｔｉ Ａ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
ＡＡ．ＧＧ（）ｒ ＧＡ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ｅａｃｈ ｃｏｌｕｍｎ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓａｍｅ
ｓａｍｐｌｅ．Ｃｏｌｕｎｍｓ ｏｆ Ａｃ＆Ｇｃ ｗｅｒｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｅｏｎｔｒｏｌｓ．Ｃｏｌｕｍｎｓ ｏｆ Ｓ Ｉ—
Ｓ６ ｗｅｒｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ．
。【＝延伸４０ Ｓ、最后７２℃延伸５ ｍｉｎ．共２０个循环。
１．７酶免疫显色
用１ Ｘ缓冲液（０．１ ｍｏｌ／Ｌ Ｎａ２ＣＯ３和Ｏ．１ ｍｏｌ／Ｌ
ＮａＨＣＯ３，体积比为３５：６５，５ ｍｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴＡ，ｐＨ
９．６）配制探针液ＯＡＳ１．Ｐ（Ｏ．０４ ＯＤ／ｍＬ），然后进行
包板。取每个ＣＤ—ＰＣＲ产物各ｌ０ Ｌ加上下对应
两孔，每孑Ｌ加入５０ Ｌ变性液室温下变性１０ ｍｉｎ，
随后各孔加入５０ Ｌ中和杂交液，６０ ｏ【＝水浴３０
ｍｉｎ后洗涤拍干。上孔加入辣根过氧化物酶标记的
ａｎｔｉ—ＤＩＣ酶标液（１：１ ５ｏｏ）５０ Ｌ以检测等位基因
Ｇ，下孑Ｌ加入辣根过氧化物酶标记ａｎｔｉ—ＦＩＴＣ酶标
液（１：２ ０００）５０ ｉｘＬ以检测等位基因Ａ。３７℃水浴
３０ ｍｉｎ后洗涤拍于。加入含有四甲基联苯胺的底
物缓冲液。１０ ｍｉｎ后显色并加入反应终止液，酶标
ＰＣＲ扩增产物进行测序．测序结果验证了ＣＤ—ＰＣＲ
结合酶显色方法对ＳＮＰ基因型检测的准确性。
２．３ ＣＤ．ＰＣＲ基因型检测结果
所用标本的基因型均成功检测（表２），基因型
ＧＧ和ＧＡ比例或等位基因Ｇ频率在ＨＢｅＡｇ阳性
组明显低于ＨＢｅＡｂ阳性组或正常对照组，而
ＨＢｅＡｂ阳性组和正常对照组之间差异无统计学意
义，提示等位基因Ｇ可能有利于宿主发生自发性
ＨＢｅＡｇ血清学转换（ＯＲ＝２．０５３，Ｐ＝０．０２１）；同
样地，基因型ＧＧ和ＧＡ可能有利于宿主发生自发
性ＨＢｅＡｇ血清学转换（ＯＲ＝２．１ １４，Ｐ＝０．０４２）。
仪进行／４值测定（波长４５０ ｎｍ），上下两孑Ｌ Ａ值比
（Ｒ）≥２．０判为基因型ＧＧ，Ｒ≤０．５判为基因型
ＡＡ，０．５＜Ｒ＜２．０判为基因型ＧＡ
Ｏ ０ 湖Ⅲ
Ｏ
１．８数据统计
Ａ
结果采用ＳＰＳＳ １３．０软件进行分析，两组间率
的比较采用ｘ 检验，并计算相应的优势比（ｏｄｄｓ
ｒａｔｉｏ，ＯＲ）和９５％置信区间（ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅ ｉｎｔｅｒｖａｌ，
ＣＩ）：Ｐ＜０．０５认为差异具有统计学意义。
３ 讨 论
ＩＦＮ是机体抵抗病毒感染的先天性免疫中重
要的细胞因子．ＯＡＳ．ＲＮａｓｅ Ｌ是ＩＦＮ抗病毒感染
的重要途径之一。ＳＮＰ ｒｓ２６６０位于ＯＡＳ．１基因的
３ 一ＵＴＲ区．对ＯＡＳ．１基因转录活性的影响及
２ 结 果
２．１ 基础ＰＣＲ扩增和酶反应显色结果
其机制尚不十分清楚。Ｈｅ等…的研究认为ＳＮＰ
ｒｓ２６６０等位基因Ｇ对ＳＡＲＳ有保护作用．机制并 取基础ＰＣＲ扩增的ＤＮＡ液５ Ｌ在２％琼脂
糖凝胶中进行电泳．结果显示符合目的片段４６８ ｂｐ
大小（图１Ａ）；取各样本ＣＤ．ＰＣＲ产物各１Ｏ Ｌ加
人上下对应两孑Ｌ．经酶免疫反应酶标仪判读ＳＮＰ
基因型．显色效果如图１Ｂ。
２．２ ＣＤ．ＰＣＲ产物测序结果
未阐明：孑Ｌ晓飞等 ｒ发现ＳＮＰ ｒｓ２６６０与ＨＢＶ自限
性感染呈弱相关。以上资料提示ＯＡＳ．１基因的
ＳＮＰ对ＨＢＶ感染的转归可能产生影响，其与
ＨＢｅＡｇ血清转换的关系也值得深入探讨。事实上，
本研究发现。在年龄小于３０岁的ＨＢＶ感染患者
中，ＳＮＰ ｒｓ２６６０等位基因Ｇ以及基因型ＧＧ和ＧＡ 各取２例基因型分别为ＧＧ、ＧＡ和ＡＡ的ＣＤ—
６６０ 中山大学学报（医学科学版） 第３１卷
（１）ＨＢｅＡｂ ｐｏｓｉｔｉｖｅ（ｎ＝６８）
（２）ＨＢｅＡｇ ｐｏｓｉｔｉｖｅ（ｎ＝５８）
（３）Ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ（ｎ：７２）
（１）：（２）
ＯＲ（９５％Ｃ１） （１）：（３）
（２）：（３）
１）Ｐ＜０．ｏ５
７（１０．３）＋２５（３６．８）
２（３．４）＋１５（２５．９）
６（８．３）＋３２（４４．４）
２．１１４（１．０２４～４．４９０）
３６（５２．９）
４ｌ（７Ｏ．７）
３９（２８，７）
１９（１６．４）
９７（７１．３）
９７（８３．６）
１００（６９．４）
０．４８７（０．２６３～Ｏ，９０２、
３４（４７．２）
０．４６６（０．２２３—０．９７７１
１．２５７（０．６４７～２．４４２）
２．６９６（１．２９８～５．５９７）
４（３０．６）
２．０５３（１．１０８—３．８０２） ）
Ｏ．７９５（０．４０９—１．５４５１
Ｏ－３７ｌ ｆ０．１７９—０．７７０）
０．９１４（０．５４７—１．５２７）
０．４５（０．２４３～０．８１６１ ）
１．０９４（０．６５５—１，８２９）
２．２４６（１．２２５～４．１ １９）
均有利于慢性ＨＢＶ感染者发生自发性ＨＢｅＡｇ血
清转换。本研究的观察对象为小于３０岁的ＨＢＶ
感染患者．主要考虑到年龄小的患者在肝炎充分
１ ２ ｊ Ｄｉａｚ—Ｇｕｅｒｒａ Ｍ，Ｒｉｖａｓ Ｃ，Ｅｓｔｅｂａｎ Ｍ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
ＩＦＮ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｅｎｚｙｍｅ ＲＮａｓｅ Ｌ ｃａｕｓｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ
ａｎｉｍａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１９９７，２３６（２）：３５４—３６３．
［３］Ｋｎａｐｐ Ｓ，Ｙｅｅ ＬＪ，Ｆｒｏｄｓｈａｍ ＡＪ，ｅｔ ａ１．Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ
ｉｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｕｔｃｏｍｅ ｏｆ
ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ：ｒｏｌｅｓ ｏｆ ＭｘＡ，ＯＡＳ一１ ａｎｄ
活动前就出现自发性ＨＢｅＡｇ血清转换可能更能
体现个体遗传素质的优越性，这也可能是本研究
观察到ＯＡＳ １基因ＳＮＰ ｒ８２６６０与自发性ＨＢｅＡｇ
血清转换较强相关性的原因。
我们先前在ＯＡＳ一１基因ＳＮＰ ｒｓ１０７７４６７１上
ＰＫＲ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ Ｉｍｍｕｎ，２００３，４（６）：４１１－４１９．
［４］Ｈｅ Ｊ，Ｆｅｎｇ Ｄ，ｄｅ Ｖｌａｓ ＳＪ，ｅｔ １．Ａｓａｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＡＲＳ
ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｗｉｔｈ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｏｆ
有与此相似的发现【８］，该ＳＮＰ位于ＯＡＳ．１外显子
ＯＡＳ１ ａｎｄ ＭｘＡ ｇｅｎｅｓ：ａ ｃａｓｅ—ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．ＢＭＣ
Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，２００６，６：１０６．
Ｅ下游，其等位基因决定了ｍＲＮＡ的剪接，当等位
基因为Ｇ时表达相应产物为ｐ４６，而为Ａ时表达
产物为ｐ４８和／或ｐ５２［ ｍ］。产物ｐ４６具有更高的
酶催化活性，从而导致２ ．５ ＯＡ合成增多【８＇－ｏ］。可
能更有效地抑制病毒复制和病毒蛋白的合成。而
ＳＮＰ ｒｓ２６６０位于ｒｓ１０７７４６７１的下游．虽然本实验
并没有对所有样本进行ＤＮＡ测序验证。但已有一
［５］孔晓飞，张欣欣，杨之寿，等．２＇－５ 寡聚腺苷酸合成酶
１基因多态性与乙型肝炎病毒易感性和抗病毒疗效
的相关性［Ｊ］．中华肝脏病杂志，２００７，１５（１０）：７７９－７８０．
［６］Ｐｅｎｇ ＸＭ，Ｃｈｅｎ ＸＪ，Ｌｉ ＪＧ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｖｅｌ ａｓｓａｙ ｏｆ
ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｌｙ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ
ｆｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｐｏｉｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．
Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００３，９（８）：１７４３—１７４６．
些研究发现这两个ＳＮＰ存在不平衡连锁关系 ，
这可能是ＳＮＰ ｒｓ２６６０对ＨＢｅＡｇ血清转换产生影
响的真正原因
［７］黄绍萍，王冯滨．慢性乙型重型肝炎患者Ｃ区变异株
检测及对预后的影响［Ｊ］．实用肝脏病杂志，２００６，９
（６）：３２８—３２９．
目前，ＩＦＮ仍然是抗ＨＢＶ治疗的重要药物之
一
［８］陈禄彪，彭晓谋，曹红，等．ＯＡＳ一１基因ＳＮＰ
．
在抗ＨＢＶ治疗过程中出现ＨＢＶ ＤＮＡ载量下
ｒｓ１０７７４６７１与慢性ＨＢＶ感染者自发性ＨＢｅＡｇ血清
降伴随ＨＢｅＡｇ血清转换往往是取得良好应答的
重要评价指标。而在本研究的结果提示，不同个体
的ＯＡＳ １基因ＳＮＰ ｒｓ２６６０等位基因可能与自发
性ＨＢｅＡｇ血清转换存在关系，因此该ＳＮＰ基因型
转换的关系［Ｊ］．中华实验和临床病毒学杂志，２００９，
２３（１）：３５－３７．
［９］Ｂｏｎｎｅｖｉｅ—Ｎｉｅｌｓｅｎ Ｖ，Ｆｉｅｌｄ ＬＬ，Ｌｕ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｖａｒｉａｔｉｏｎ
ｉｎ ａｎｔｉｖｉｒｌａ ２’，５ 一ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ（２ ５ ＡＳ）
ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｓ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｂｙ ａ ｓｉｎｇｌｅ—ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｔ ａ ｓｐｌｉｃｅ—ａｃｃｅｐｔｏｒ ｓｉｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ＯＡＳ１
检测可作为自发性ＨＢｅＡｇ血清转换或ＩＦＮ抗
ＨＢＶ治疗疗效的预测指标。
参考文献：
［１］Ｊｕｓｔｅｓｅｎ Ｊ，Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｒ，Ｋｊｅｌｄｇａａｒｄ ＮＯ．Ｇｅｎｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ２ 一５ 一ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ
ｇｅｎｅ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ，２００５，７６（４）：６２３—６３３．
［１０］Ｆｉｅｌｄ ＬＬ，Ｂｏｎｎｅｖｉｅ—Ｎｉｅｌｓｅｎ Ｖ，Ｐｏｃｉｏｔ Ｆ，ｅｔ ａ１．ＯＡＳ１
ｓｐｌｉｃｅ ｓｉｔｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｅｎｚｙｍｅ
ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｔｙｐｅ １ ｄｉａｂｅｔｅｓ［Ｊ］．
Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００５，５４（５）：１５８８—１５９１．
（编辑孙慧兰）
ｆａｍｉｌｙ［Ｊ］．Ｃｅｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ，２０００，５７（１１）：１５９３—１６１２．
2024年9月8日发(作者：闻子明)
第３ｌ卷
２０ｌＯ年
第５期
９月
中山大学学报（医学科学版）
ＪＯＵＲＮＡ１ ＯＦ ＳＵＮ ＹＡＴ—ＳＥＮ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＭＥＤＩＣＡＩ ＳＣＩＥＮＣＥＳ）
Ｖ｛）Ｉ．３ １ Ｎｏ．５
Ｓｅｐ．２０１０
ＯＡＳ．１基因ＳＮＰ ｒｓ２６６０与慢性ＨＢＶ感染者自发性
ＨＢｅＡｇ血清转换的关系
陈禄彪 ，揭育胜 ．许
（中山大学附属第三跃院
镇 ，徐启桓 ，彭晓谋 ，高志良
１．感染科，２．肝病学实验室．广东厂 州５１０６３０）
摘要：【目的】探讨寡聚腺苷酸合成酶基因一１（ＯＡＳ—１）位点￣２６６０的单核苷酸多态性（ＳＮＰ）与慢性乙型肝炎病毒
（ＨＢＶ）感染者自发性ＨＢｅＡｇ血清转换的关系。【方法】收集１２６例慢性ＨＢＶ感染者（ＨＢｅＡｇ阳性组５８例，ＨＢｅＡｔ）阳性组６８
例）手『ｉ无ＨＢＶ感染者（埘照组７２例）的外周ｍ，进行ＤＮＡ提取和扩增，再利用竞争分化聚合酶链反应（ＣＤ—ＰＣＲ）进行扩增，
并结合酶免疫法显包以检测陔ＳＮＰ的基 ．两组间基因型比例或等位基因频率采用× 检验和优势比（ＯＲ）汁算，【结果】
存ＨＢｅＡｇ阳性组ＳＮＰ ｒｓ２６６０基因型ＧＧ＋ＧＡ比例为２９．３％（１７／５８）、等位基 Ｇ频率为ｌ６．４％（１９／１ １６），而 ＩｔＢｅＡｔ 阳性
组分别为４７，ｌ％（３２／６８）和２８．７％（３９／１３６）．对照组分别为５２．７％（３８／７２）和１ ３０．６％（４４／１４４）；ＨＢｅＡｇ阳性组 ｊ ＩｔＢｅＡｂ 性
组或对照组之问的差异均存存统汁学意义（基冈型：Ｐ＝０．０４２和０．００７：等位基因：Ｐ＝０．０２１和０．００８），而ＨＢｅＡｂ阳性组与
对照组之问的差异无统计学意义（基 型：Ｐ＝０．４９９；等位基因：Ｐ＝０．７３１） 【结论】ＳＮＰ ｒｓ２６６０等位基 Ｇ【Ｊ『能仃助丁慢性
ＨＢ、 感染者发生自发性ＨＢｅＡｇ血清转换．其基 型检测对于干扰素治疗慢性ｌｉＢ＼＇感染者可能有一定的疗效预洲价值 ．
关键词：寡聚腺苷酸合成酶；单核苷酸多态性；乙型肝炎病毒；等位基因；基 型
中图分类号：Ｑ３９．Ｒ５１２．６＋２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２—３５５４（２０１０）０５—０６５７—４ ０
Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ＳＮＰ ｒｓ２６６０ ｏｆ ＯＡＳ－１ Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ＨＢｅＡｇ Ｓｅｒｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ
ｏｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｃｈｒｏｎｉｃ ＨＢＶ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ＣＨＥＮ Ｌｕ－ｂｉａｏ ，ＪＩＥ Ｙｕ—ｓｈｅｎｇ ，ＸＵ Ｚｈｅｎ ，ＸＵ Ｑｉ—ｈｕａｎ ，ＰＥＮＧ Ｘｉａｏ・ｌｎＯＵ ，ＧＡＯ Ｚｈｉ—ｌｉａｎｇ
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ，２．Ｈｅｐａｔｏｌｏ￣Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｔｈｅ Ｆｈｉｒｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，
Ｓｕｎ ｇａｔ—ｓｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５ １ ０６３０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】 ｒｈｅ ａｉｍ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄ？，Ｗａｓ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｔｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｚ’ｐｈｉｓｍ
（ＳＮＩ ）ｒｓ２６６０ ｏｆ ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ ｇｅｎｅ一１（ＯＡＳ一１）ａｎｄ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ＨＢｅＡｇ ｓｅｒｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ
ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ（ＨＢＶ）ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．【Ｍｅｔｈｏｄｓ】Ｂｌｏｏｄ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ １ ２８ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｅｈｒｏｎｉｅ ｔｔＢＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ（５８
ＨＢｅＡｇ ｐｏｓｉｔｉｖｅ，６８ ＨＢｅＡｂ ｐｏｓｉｔｉｖｅ），ａｎｄ ７２ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｃａｓｅｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ＨＢＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ＤＮＡ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ａｎｄ
ＯＡＳ一１ ｇｅｎｅ ｗａｓ ａｍｐｌｉｉｆｅｄ． ＳＮＰ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｗａｓ ｐｅｆｒｏｒｍｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ （ＥＩＡ） ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｃｏｍｐｅｌｉｔｉｖｅｌｙ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｐｏｌｙｍｅ￣ ａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＣＤ—ＰＣＲ）．Ｏｄｄｓ ｒａｔｉｏ ａｎｄ ｃｈｉ—ｓｑｕａｒｅ ｔｅｓｔ ｗｅｒｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｉｎ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ．【Ｒｅｓｕｈｓ】ｌｎ
ＨＢｅＡｇ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ，ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ ｏｆ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ＧＧ ｐｌｕｓ ＧＡ ａｎｄ ａｌｌｅｌｅ Ｇ ｗｅｒｅ ２９．３％（１７／５８）ａｎｄ １６．４％（１９／１ １６）ｏｎ ＳＮＰ
ｒｓ２６６０，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ４７．１％（３２／６８）ａｎｄ ２８．７％（３９／１ ３６）ｉｎ ＨＢｅＡｂ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ，５２．７％（３８／７２）ａｎｄ ３０．６％
（４４／１４４）ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ＨＢｅＡｇ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＨＢｅＡｂ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ ｏｒ ｎｏｒｍａｌ
ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ（ｇｅｎｏｔｙｐｅ：Ｐ：０．０４２ ａｎｄ ０．００７；ａｌｌｅｌｅ：Ｐ＝０．０２ １ ａｎｄ Ｏ．００８）．Ｂｕｔ ｔｈｅ．ｖ ｗｅｒｅｎ’ｔ
ｂｅｔｗｅｅｎ ＨＢｅＡｔ）ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（ｇｅｎｏｔｙｐｅ：Ｐ＝Ｏ．４９９；ａｌｌｅｌｅ：尸＝０．７３ １）．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ａｌｌｅｌｅ Ｇ（ｍ
ＳＮＰ ｒｓ２６６０ ｏｆ ＯＡＳ一１ ｇｅｎｅ ｍａｙｂｅ ｂｅｎｅｆｉｔ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ＨＢＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｔｏ ａｃｈｉｅｖｅ ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ＨＢｅＡｇ ｓｅｒｏｅｏｎｖｅｒｓｉｏｎ．
Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｏｎ ｔｈｉｓ ＳＮＰ ｍａｙ ｂｅ ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｖａｌｕａｂｌｅ ｆｏｒ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｃｈｒｏｎｉｃ ＨＢＶ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ；ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ；ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ；ａｌｌｅｌｅ；ｇｅｎｏｔｙｐｅ
［Ｊ ＳＵＮ Ｙａｔ—ｓｅｎ Ｕｎｉｖ（Ｍｅｄ Ｓｃｉ），２０１０，３１（５）：６５７—６６０］
收稿日期：２０１０—０１一ｌ０
基金项目：广东肯科技计划项目（２００９Ｂ０３０８０１ １０６）
作者简介：陈禄彪，主治医师，医学博士，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｌｕｂｇｚ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏＩｒｎ； 通信作者：徐启桓，主任医师，硕士生导师，Ｅ－－ｍａｉｌ：ｘｑｈ０３０３＠
ｙａｈｏｏ．ｃｏｒｎ．ｃｎ
６５８ 中山大学学报（医学科学版） 第３１卷
人寡聚腺苷酸合成酶（ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ，
ＯＡＳ）是一类由干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ，ＩＦＮ）诱导产生
的酶蛋白，由ＯＡＳ一１、ＯＡＳ一２和ＯＡＳ一３基因编码，
具有激活潜在性ＲＮＡ酶（１ａｔｅｎｔ Ｒｎａｓｅ，ＲＮａｓｅ Ｌ）
降解病毒ｍＲＮＡ、抑制病毒蛋白合成和促进病毒
感染细胞发生凋亡的作用．在先天性抗病毒免疫
中发挥重要的作用ｌ＿ 。已有研究发现ＯＡＳ一１基因
上存在的多个ＳＮＰ可能对丙型肝炎、ＳＡＲＳ等病毒
感染性疾病的转归产生影响Ｅ３－４￣，目前国内外关于
ＯＡＳ．１基因ＳＮＰ对慢性乙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ
ｖｉｒｕｓ，ＨＢＶ）感染影响的研究甚少，孔晓飞等［ ］
发现ＳＮＰ ｒｓ２６６０与ＨＢＶ自限性感染呈弱相关。
具体可能机制未能阐述。为此。本研究利用先前
建立的相对经济和简便的竞争分化聚合酶链反
应 ］（ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ
ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＣＤ－ＰＣＲ）技术，对ＯＡＳ－１基因上ＳＮＰ ｒｓ２６６０
进行基因型检测，探讨它与慢性ＨＢＶ感染者自发
性ＨＢｅＡｇ血清转换的关系．了解检测该ＳＮＰ基因
型作为ＨＢｅＡｇ血清转换预测指标的可能性。
１材料与方法
１．１研究对象
收集２００６年５月至２００７年５月在我院感染
科就诊的慢性ＨＢＶ感染病例，根据入选前１个月
内在本院的乙肝两对半检查结果（ＡＸＳＹＭ）分成
ＨＢｅＡｇ阳性组和ＨＢｅＡｂ阳性组，两组间的年龄、
性别比例、谷丙转氨酶水平均具有可比性 入选标
准：年龄８～３０周岁。无接受ＩＦＮ、核苷（酸）类似
物等抗ＨＢＶ药物治疗历史，无明确合并ＨＣＶ、
ＨＤＶ、ＨＩＶ感染，ＨＢｅＡｂ阳性组者ＨＢＶ ＤＮＡ＜１
ｘ １０ 拷『ｊ！／ｍＬ（ＰＥ５７００荧光定量ＰＣＲ）和血清ＨＢＶ
前ｃ区Ｇ１８９６Ａ变异株阴性（方法参见文献『７］）。
另外收集７２名无ＨＢＶ感染者作为正常对照。采
静脉 ５ ｍＬ肝素抗凝保存于一２０℃冰箱待检。
Ｉ．２引物探针
ＯＡＳ一１基因ｃＤＮＡ的参考序列（ＧｅｎＢａｎｋ，Ａｃｃｅ．
Ｎｏ．ＮＣ
一
００００１２），引物和探针用Ｐｒｉｍｅｒ Ｐｒｅｍｉｅｒ软
件自行设计并由Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司合成（表１），用
Ｍｉｌｌｉ—Ｑ级ｄｄＨ Ｏ稀释成１０ ｎｍｏｌ／ｍＬ。
１．３试剂和设备
ＤＮＡ提取试剂盒购白美国Ｏｍｅｇａ公司，ＰＣＲ
试剂、Ｔ４ ＤＮＡ连接酶、Ｅ．Ｃｏｌｉ ＪＭ１０９感受态细胞和
表１ ＰＣＲ引物和ＤＮＡ杂交探针
Ｔａｂｌｅ １ Ｐｒｉｍｅｒｓ ｆｏｒ ＰＣＲ ａｎｄ ｐｒｏｂｅ ｆｏｒ ＤＮＡ
ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ
０ＡＳ１．Ｓ ＡＴＧＴＣＡＣＡＧＴＣ『ｒＣＴＡＣＣＧＴＡＡＡＴＧ
０ＡＳ１．Ａ ＡＧＡＧＡＡＴＡＧＧＴＧＧＡＡＴＧＡＡＧＴＧＡＧ
０ＡＳ１一ＣＬＳ ＣＣＡＣＧＣＧＴＡＴＧＴＣＡＣＡＧＴＧＴＣＴＡＣＣＧＴＡＡＡＴＧ
０ＡＳ１．ＣＬＡ ＴＣＧＣＧＧＣＣＧＣＡＧＡＧＡＡＴＡＧＧＴＧＧＡＡＴＧＡＡＧＴＧＡＧ
０ＡＳ１．１ ＣＧＧＣＧＴＣＣＡ１、ｃＡ ＧＡ＿ｆｌＡＧＧＡＴＡＧＡＧＧＧＣＡＴＡＧＡＡＧＧ
０ＡＳ１．Ｐ Ａｍｉｎ０１ｉｎｋｅｒＣ６．ＣＣ ｒＧＧＡＹＩ＂ＡＴＡＣＡＣＣＡＧＣＴＣＡＣ ｒＧＡＧＧＡＧＣｍ
０ＡＳ１．Ｇ ＤＩＧ．ＣＧＴＣＣＣＣＧＴＣＡＣＡ ＧＴＧＧＧＡＣＡＣＴＴＧＡＴＣＣＡＧＡＧＴＧ
０ＡＳ１．Ａ ＦＩＦＣ．ＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＡＴＣ ＧＴＧＧＧＡＣＡＣ Ｉ’Ｉ’ＧＡＴＣＣＡＧＡＧＴＡ
ＯＡＳ１．ＧＣ ＣＣＡＣＧＣＧＴＧＧＴＧＧＧＡＣＴＣＴｒＣＡＴＣＣＡＧＡＣＡＣＧＡ
０ＡＳ１．ＡＣ ＣＣＡＣＧＣＧＴＧＧ Ｉ℃ＧＧＡＣＴＣＴＩ℃ＡＴＣＣＡＧＡＧＡＡＧＡ
内切酶Ｎｏｔ Ｉ、Ｍｌｕ Ｉ均购自Ｔａｋａｒａ大连公司，质
粒载体ｐＣＩ—ｎｅｏ购自美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司．ＤＮＡ凝胶
纯化试剂盒购自德国ＱｉａＧｅｎ公司，辣根过氧化物
酶标记的地高辛抗体（ａｎｔｉ—ＤＩＣ）和异硫氰酸荧光素
抗体（ａｎｔｉ．ＦＩＦＣ）购自瑞士Ｒｏｃｈｅ公司。ＰＣＲ扩增采
用ＰＴＣ一２００热循环仪、ＤＮＡ测序采用ＡＢＩ ３７３０ＸＬ
测序仪，光密度测定采用Ｌａｂｓｙｓｔｅｍ ＭＫ３酶标仪。
１．４ ＤＮＡ提取和基础ＰＣＲ扩增
取抗凝血细胞１００ ＩＬＬ用ｄｄＨ Ｏ ２００ ｔｚＬ稀释，
用Ｏｍｅｇａ试剂盒进行ＤＮＡ提取，ＤＮＡ提取终液为
５０ Ｌ，保存于一２０℃备用。对ＳＮＰ所在ＤＮＡ片断进
行基础ＰＣＲ扩增，５０ Ｌ反应体系组成：１０×ＰＣＲ
缓冲液（１００ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ—ＨＣ１，ｐＨ ８．３，５００ ｍｍｏｌ／Ｌ
ＫＣ１，１５ ｍｍｏｌ／Ｌ ＭｇＣ１２）５ Ｌ、２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰ
液４｝ｘＬ、ＤＮＡ提取液５ ｔｘＬ、ｄｄＨ２０ ３４ ｐ，Ｌ、引物
ＯＡＳ１一Ｓ和ＯＡＳ１一Ａ各１ Ｌ、ＴａｑＤＮＡ聚合酶１．５ Ｕ；
反应步骤：９４℃预热５ ｒａｉｎ、９４℃变性４０ Ｓ－，５２℃退
火４０ ｓ，７２℃延伸６０ ｓ、循环数３５个、最后延伸５ ｍｉｎ。
１．５制备ＣＤ．ＰＣＲ阳性对照质粒ＤＮＡ
随机取一例基因组ＤＮＡ为模板，上游引物分
别为ＯＡＳ１．ＧＣ或ＯＡＳ１一ＡＣ和下游引物ＯＡＳ１一
ＣＬＡ进行扩增，除引物外５０ Ｌ ＰＣＲ反应体系
组成和反应条件同基础ＰＣＲ扩增，扩增产物经
Ｎｏｔ Ｉ、Ｍｌｕ Ｉ双酶切后进行２％琼脂糖凝胶电泳，
用ＱｉａＧｅｎ ＤＮＡ纯化试剂盒提取ＤＮＡ并与质粒载
体ｐＣＩ—ｎｅｏ连接，再用Ｅ．Ｃｏｌｉ ＪＭ１０９感受态细胞进
行转化，挑取克隆菌落在ＬＢ培养基增菌，随后提
取质粒ＤＮＡ作为ＣＤ—ＰＣＲ检测两个ＳＮＰ不同等
位基因的阳性对照
第５期 陈禄彪。等．ＯＡＳ—Ｉ基因ＳＮＰ ｍ２６６０与慢性ＨＢＶ感染者自发性ＨＢｅＡｇ血清转换的关系 ６５９
１．６ ＣＤ．ＰＣＲ扩增
经优化得到２５ Ｌ反应体系：１０×ＰＣＲ缓冲
液（１００ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ．ＨＣＩ，ｐＨ ８．３，５００ ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＣＩ，
１５ ｍｍｏｌ／Ｌ ＭｇＣＩ２）２．５ Ｌ、２．５ ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰ溶液
０．１２５ ＩＬＬ、Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶２．０ Ｕ、基础ＰＣＲ产物
１．０ ＩｘＬ、下游公共引物ＯＡＳ１．１ ０．１０ 、上游混合
引物ＯＡＳＩ．Ｇ ０．３８ Ｉ．ＬＬ和ＯＡＳ１．Ａ ０．３０ Ｌ，最后加
Ａｅ Ｇｅ Ｓｌ Ｓ２ Ｓ３ Ｓ４ Ｓ５ Ｓ６
一●●■■一一曩ａｎｔｉ删Ｇ
■■■■●■誓■ａｎｉｔ 珲ｃ
ＡＡ ＧＧ ＧＡ ＧＡ ＧＡ ＧＡ ＧＧ ＡＡ Ｂ
ｄｄＨ２Ｏ至总反应体积２５ Ｌ；ＰＣＲ反应条件：９４℃
变性１ ｍｉｎ、５６ ｏＣ复性２ ｍｉｎ、７２ ｃｃ延伸２ ｍｉｎ、共
２个循环，然后９４℃变性３０ Ｓ、６８ ｏＣ复性３０ ｓ、７２
图１ 基础ＰＣＲ产物电泳和ＣＤ．ＰＣＲ产物酶反应显色结
果示意图
Ｆｉｇ．１ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ｂａｓａｌ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ
ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ＣＤ－ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｂｙ ＥＩＡ
Ａ：Ｍ ｗａｓ ＤＮＡ ｓｉｚｅ ｆｎａｋｅｒｓ．１ａｎｅ １—８ ｗｅｒｅ ＤＮＡ（４６８ ｈｐ）
ａｍｐｌｉｉｆｅｄ ｆｉ＇ｍｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ； Ｂ： ａｎｔｉ—ＤＩＧ ａｎｄ ａｎｔｉ—ＦＩＦＣ ｉｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｗｏ ｒｏｗｓ ｗａｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ａｌｌｅｌｅ Ｇ ａｎｔｉ Ａ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
ＡＡ．ＧＧ（）ｒ ＧＡ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ｅａｃｈ ｃｏｌｕｍｎ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓａｍｅ
ｓａｍｐｌｅ．Ｃｏｌｕｎｍｓ ｏｆ Ａｃ＆Ｇｃ ｗｅｒｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｅｏｎｔｒｏｌｓ．Ｃｏｌｕｍｎｓ ｏｆ Ｓ Ｉ—
Ｓ６ ｗｅｒｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ．
。【＝延伸４０ Ｓ、最后７２℃延伸５ ｍｉｎ．共２０个循环。
１．７酶免疫显色
用１ Ｘ缓冲液（０．１ ｍｏｌ／Ｌ Ｎａ２ＣＯ３和Ｏ．１ ｍｏｌ／Ｌ
ＮａＨＣＯ３，体积比为３５：６５，５ ｍｍｏｌ／Ｌ ＥＤＴＡ，ｐＨ
９．６）配制探针液ＯＡＳ１．Ｐ（Ｏ．０４ ＯＤ／ｍＬ），然后进行
包板。取每个ＣＤ—ＰＣＲ产物各ｌ０ Ｌ加上下对应
两孔，每孑Ｌ加入５０ Ｌ变性液室温下变性１０ ｍｉｎ，
随后各孔加入５０ Ｌ中和杂交液，６０ ｏ【＝水浴３０
ｍｉｎ后洗涤拍干。上孔加入辣根过氧化物酶标记的
ａｎｔｉ—ＤＩＣ酶标液（１：１ ５ｏｏ）５０ Ｌ以检测等位基因
Ｇ，下孑Ｌ加入辣根过氧化物酶标记ａｎｔｉ—ＦＩＴＣ酶标
液（１：２ ０００）５０ ｉｘＬ以检测等位基因Ａ。３７℃水浴
３０ ｍｉｎ后洗涤拍于。加入含有四甲基联苯胺的底
物缓冲液。１０ ｍｉｎ后显色并加入反应终止液，酶标
ＰＣＲ扩增产物进行测序．测序结果验证了ＣＤ—ＰＣＲ
结合酶显色方法对ＳＮＰ基因型检测的准确性。
２．３ ＣＤ．ＰＣＲ基因型检测结果
所用标本的基因型均成功检测（表２），基因型
ＧＧ和ＧＡ比例或等位基因Ｇ频率在ＨＢｅＡｇ阳性
组明显低于ＨＢｅＡｂ阳性组或正常对照组，而
ＨＢｅＡｂ阳性组和正常对照组之间差异无统计学意
义，提示等位基因Ｇ可能有利于宿主发生自发性
ＨＢｅＡｇ血清学转换（ＯＲ＝２．０５３，Ｐ＝０．０２１）；同
样地，基因型ＧＧ和ＧＡ可能有利于宿主发生自发
性ＨＢｅＡｇ血清学转换（ＯＲ＝２．１ １４，Ｐ＝０．０４２）。
仪进行／４值测定（波长４５０ ｎｍ），上下两孑Ｌ Ａ值比
（Ｒ）≥２．０判为基因型ＧＧ，Ｒ≤０．５判为基因型
ＡＡ，０．５＜Ｒ＜２．０判为基因型ＧＡ
Ｏ ０ 湖Ⅲ
Ｏ
１．８数据统计
Ａ
结果采用ＳＰＳＳ １３．０软件进行分析，两组间率
的比较采用ｘ 检验，并计算相应的优势比（ｏｄｄｓ
ｒａｔｉｏ，ＯＲ）和９５％置信区间（ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅ ｉｎｔｅｒｖａｌ，
ＣＩ）：Ｐ＜０．０５认为差异具有统计学意义。
３ 讨 论
ＩＦＮ是机体抵抗病毒感染的先天性免疫中重
要的细胞因子．ＯＡＳ．ＲＮａｓｅ Ｌ是ＩＦＮ抗病毒感染
的重要途径之一。ＳＮＰ ｒｓ２６６０位于ＯＡＳ．１基因的
３ 一ＵＴＲ区．对ＯＡＳ．１基因转录活性的影响及
２ 结 果
２．１ 基础ＰＣＲ扩增和酶反应显色结果
其机制尚不十分清楚。Ｈｅ等…的研究认为ＳＮＰ
ｒｓ２６６０等位基因Ｇ对ＳＡＲＳ有保护作用．机制并 取基础ＰＣＲ扩增的ＤＮＡ液５ Ｌ在２％琼脂
糖凝胶中进行电泳．结果显示符合目的片段４６８ ｂｐ
大小（图１Ａ）；取各样本ＣＤ．ＰＣＲ产物各１Ｏ Ｌ加
人上下对应两孑Ｌ．经酶免疫反应酶标仪判读ＳＮＰ
基因型．显色效果如图１Ｂ。
２．２ ＣＤ．ＰＣＲ产物测序结果
未阐明：孑Ｌ晓飞等 ｒ发现ＳＮＰ ｒｓ２６６０与ＨＢＶ自限
性感染呈弱相关。以上资料提示ＯＡＳ．１基因的
ＳＮＰ对ＨＢＶ感染的转归可能产生影响，其与
ＨＢｅＡｇ血清转换的关系也值得深入探讨。事实上，
本研究发现。在年龄小于３０岁的ＨＢＶ感染患者
中，ＳＮＰ ｒｓ２６６０等位基因Ｇ以及基因型ＧＧ和ＧＡ 各取２例基因型分别为ＧＧ、ＧＡ和ＡＡ的ＣＤ—
６６０ 中山大学学报（医学科学版） 第３１卷
（１）ＨＢｅＡｂ ｐｏｓｉｔｉｖｅ（ｎ＝６８）
（２）ＨＢｅＡｇ ｐｏｓｉｔｉｖｅ（ｎ＝５８）
（３）Ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ（ｎ：７２）
（１）：（２）
ＯＲ（９５％Ｃ１） （１）：（３）
（２）：（３）
１）Ｐ＜０．ｏ５
７（１０．３）＋２５（３６．８）
２（３．４）＋１５（２５．９）
６（８．３）＋３２（４４．４）
２．１１４（１．０２４～４．４９０）
３６（５２．９）
４ｌ（７Ｏ．７）
３９（２８，７）
１９（１６．４）
９７（７１．３）
９７（８３．６）
１００（６９．４）
０．４８７（０．２６３～Ｏ，９０２、
３４（４７．２）
０．４６６（０．２２３—０．９７７１
１．２５７（０．６４７～２．４４２）
２．６９６（１．２９８～５．５９７）
４（３０．６）
２．０５３（１．１０８—３．８０２） ）
Ｏ．７９５（０．４０９—１．５４５１
Ｏ－３７ｌ ｆ０．１７９—０．７７０）
０．９１４（０．５４７—１．５２７）
０．４５（０．２４３～０．８１６１ ）
１．０９４（０．６５５—１，８２９）
２．２４６（１．２２５～４．１ １９）
均有利于慢性ＨＢＶ感染者发生自发性ＨＢｅＡｇ血
清转换。本研究的观察对象为小于３０岁的ＨＢＶ
感染患者．主要考虑到年龄小的患者在肝炎充分
１ ２ ｊ Ｄｉａｚ—Ｇｕｅｒｒａ Ｍ，Ｒｉｖａｓ Ｃ，Ｅｓｔｅｂａｎ Ｍ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
ＩＦＮ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｅｎｚｙｍｅ ＲＮａｓｅ Ｌ ｃａｕｓｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ
ａｎｉｍａｌ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１９９７，２３６（２）：３５４—３６３．
［３］Ｋｎａｐｐ Ｓ，Ｙｅｅ ＬＪ，Ｆｒｏｄｓｈａｍ ＡＪ，ｅｔ ａ１．Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ
ｉｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｏｕｔｃｏｍｅ ｏｆ
ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ：ｒｏｌｅｓ ｏｆ ＭｘＡ，ＯＡＳ一１ ａｎｄ
活动前就出现自发性ＨＢｅＡｇ血清转换可能更能
体现个体遗传素质的优越性，这也可能是本研究
观察到ＯＡＳ １基因ＳＮＰ ｒ８２６６０与自发性ＨＢｅＡｇ
血清转换较强相关性的原因。
我们先前在ＯＡＳ一１基因ＳＮＰ ｒｓ１０７７４６７１上
ＰＫＲ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ Ｉｍｍｕｎ，２００３，４（６）：４１１－４１９．
［４］Ｈｅ Ｊ，Ｆｅｎｇ Ｄ，ｄｅ Ｖｌａｓ ＳＪ，ｅｔ １．Ａｓａｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＡＲＳ
ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｗｉｔｈ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｏｆ
有与此相似的发现【８］，该ＳＮＰ位于ＯＡＳ．１外显子
ＯＡＳ１ ａｎｄ ＭｘＡ ｇｅｎｅｓ：ａ ｃａｓｅ—ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．ＢＭＣ
Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，２００６，６：１０６．
Ｅ下游，其等位基因决定了ｍＲＮＡ的剪接，当等位
基因为Ｇ时表达相应产物为ｐ４６，而为Ａ时表达
产物为ｐ４８和／或ｐ５２［ ｍ］。产物ｐ４６具有更高的
酶催化活性，从而导致２ ．５ ＯＡ合成增多【８＇－ｏ］。可
能更有效地抑制病毒复制和病毒蛋白的合成。而
ＳＮＰ ｒｓ２６６０位于ｒｓ１０７７４６７１的下游．虽然本实验
并没有对所有样本进行ＤＮＡ测序验证。但已有一
［５］孔晓飞，张欣欣，杨之寿，等．２＇－５ 寡聚腺苷酸合成酶
１基因多态性与乙型肝炎病毒易感性和抗病毒疗效
的相关性［Ｊ］．中华肝脏病杂志，２００７，１５（１０）：７７９－７８０．
［６］Ｐｅｎｇ ＸＭ，Ｃｈｅｎ ＸＪ，Ｌｉ ＪＧ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｖｅｌ ａｓｓａｙ ｏｆ
ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅｌｙ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ
ｆｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｐｏｉｎｔ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．
Ｗｏｒｌｄ Ｊ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００３，９（８）：１７４３—１７４６．
些研究发现这两个ＳＮＰ存在不平衡连锁关系 ，
这可能是ＳＮＰ ｒｓ２６６０对ＨＢｅＡｇ血清转换产生影
响的真正原因
［７］黄绍萍，王冯滨．慢性乙型重型肝炎患者Ｃ区变异株
检测及对预后的影响［Ｊ］．实用肝脏病杂志，２００６，９
（６）：３２８—３２９．
目前，ＩＦＮ仍然是抗ＨＢＶ治疗的重要药物之
一
［８］陈禄彪，彭晓谋，曹红，等．ＯＡＳ一１基因ＳＮＰ
．
在抗ＨＢＶ治疗过程中出现ＨＢＶ ＤＮＡ载量下
ｒｓ１０７７４６７１与慢性ＨＢＶ感染者自发性ＨＢｅＡｇ血清
降伴随ＨＢｅＡｇ血清转换往往是取得良好应答的
重要评价指标。而在本研究的结果提示，不同个体
的ＯＡＳ １基因ＳＮＰ ｒｓ２６６０等位基因可能与自发
性ＨＢｅＡｇ血清转换存在关系，因此该ＳＮＰ基因型
转换的关系［Ｊ］．中华实验和临床病毒学杂志，２００９，
２３（１）：３５－３７．
［９］Ｂｏｎｎｅｖｉｅ—Ｎｉｅｌｓｅｎ Ｖ，Ｆｉｅｌｄ ＬＬ，Ｌｕ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｖａｒｉａｔｉｏｎ
ｉｎ ａｎｔｉｖｉｒｌａ ２’，５ 一ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ（２ ５ ＡＳ）
ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｓ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｂｙ ａ ｓｉｎｇｌｅ—ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｔ ａ ｓｐｌｉｃｅ—ａｃｃｅｐｔｏｒ ｓｉｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ＯＡＳ１
检测可作为自发性ＨＢｅＡｇ血清转换或ＩＦＮ抗
ＨＢＶ治疗疗效的预测指标。
参考文献：
［１］Ｊｕｓｔｅｓｅｎ Ｊ，Ｈａｒｔｍａｎｎ Ｒ，Ｋｊｅｌｄｇａａｒｄ ＮＯ．Ｇｅｎｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ２ 一５ 一ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ
ｇｅｎｅ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ，２００５，７６（４）：６２３—６３３．
［１０］Ｆｉｅｌｄ ＬＬ，Ｂｏｎｎｅｖｉｅ—Ｎｉｅｌｓｅｎ Ｖ，Ｐｏｃｉｏｔ Ｆ，ｅｔ ａ１．ＯＡＳ１
ｓｐｌｉｃｅ ｓｉｔｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ａｎｔｉｖｉｒａｌ ｅｎｚｙｍｅ
ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｔｙｐｅ １ ｄｉａｂｅｔｅｓ［Ｊ］．
Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００５，５４（５）：１５８８—１５９１．
（编辑孙慧兰）
ｆａｍｉｌｙ［Ｊ］．Ｃｅｌ Ｍｏｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ，２０００，５７（１１）：１５９３—１６１２．