2024年9月24日发(作者：瞿巧兰)
Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd
Tel: 400-968-6088
Http://
脂质过氧化物（LPO）含量检测试剂盒
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC5240
规格：50T/48S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称
提取液
试剂一
试剂二
试剂三
标准品
稀释液
溶液的配制：
1. 试剂二：临用前取1瓶试剂二加入14mL 蒸馏水，此试剂较难溶，可以 70℃加热并剧烈振荡以促进溶解，或
者通过超声处理以促进溶解。每次用前需检查是否有粉剂析出。用不完的试剂可在2-8℃中保存一个月。
2. 标准品：为1000nmol/mL的标准溶液。
产品说明：
脂质过氧化物（lipid hydroperoxide LPO）是不饱和脂肪酸链经自由基或活性氧作用后产生的过氧化物。病理
情况下，脂质过氧化反应增强可导致原本低含量的LPO升高。LPO含量升高会对细胞的结构和功能造成损伤，
LPO含量与机体免疫系统和衰老密切相关。
LPO在酸性条件下加热产生丙二醛（MDA），MDA与硫代巴比妥酸(Thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成棕
红色物质三甲川（3,5,5-三甲基恶唑-2,4-二酮），其最大吸收波长在 532nm，进行比色后可估测样本中LPO的含量。
LPO
H
+
Heating
MDA+ TBA
H
+
3,5,5-Trimethyloxazolidine-2,4-dione (532 nm)
Heating
规格
液体60mL×1瓶
液体20mL×1瓶
粉剂×2瓶
液体7mL×1瓶
液体1mL×1支
液体20mL×1瓶
保存条件
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者
增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、1mL玻璃比色皿、
冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：按照样本质量（g）：提取液体积（mL）为1:5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取
液）加入提取液，冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测。
BC5240 -- 第 1 页，共 3 页
2、细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（10
4
个）：提取液
体积（mL）为 500~1000:1 的比例（建议500万细菌或细胞加入 1mL 提取液）加入提取液，超声波破碎细菌或
细胞（冰浴，功率200W，超声 3s，间隔 7s，总时间3min），8000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测。
3、培养液或其他液体：直接检测。若溶液浑浊则离心后取上清进行测定。
二、测定步骤
1、可见分光光度计预热30min以上，调节波长至532和600nm，用蒸馏水调零。
2、标准溶液的制备：现标准液为1000nmol/mL的MDA标准溶液，将标准液用稀释液稀释至20、10、5、2.5、1.25、
0.625、0.3125、0.15625 nmol/mL备用，具体稀释可参考下表。
序号 稀释前浓度（nmol/mL）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
1000
40
20
10
5
2.5
1.25
0.625
0.3125
标准液体积（µL）
40
500
500
500
500
500
500
500
500
稀释液体积（µL）
960
500
500
500
500
500
500
500
500
稀释后浓度（nmol/mL）
40
20
10
5
2.5
1.25
0.625
0.3125
0.15625
备注：实验中每个标准管需400µL标准溶液。
3、在EP管中按下表步骤加样：
试剂名称
样本（μL）
蒸馏水（μL）
标准液（μL）
稀释液（μL）
试剂一（μL）
试剂二（μL）
试剂三（μL）
测定管
400
-
-
-
300
200
100
对照管
-
400
-
-
300
200
100
标准管
-
-
400
-
300
200
100
空白管
-
-
-
400
300
200
100
将混合液在 45℃（植物样本）或100℃（其他样本）水浴60min 后（标准管在两个温度水浴均可），置于
冰浴中冷却，8000g，常温，离心 10min。吸取 900μL 上清液于1mL玻璃比色皿中，测定各样本在 532nm和600nm
处的吸光度。分别计算 ΔA=（A532
测定
-A532
对照
）-（A600
测定
-A600
对照
），ΔA标准=（A532
标准
-A532
空白
）- (A600
标准
-A600
空白
）（标准曲线，空白管和对照管只需做 1-2 次）。
二、LPO含量的计算
1. 根据标准管的浓度（x，nmol/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA
（y，ΔA）代入公式计算样本浓度（x，nmol/mL）
2. 按样本蛋白质浓度计算
LPO含量（nmol/mg prot）=x×V样÷（Cpr×V样）= x÷Cpr
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3. 按样本质量计算
LPO含量（nmol/g 质量）=x×V样÷（W×V样÷V样总）= x÷W
4. 按细菌/细胞数量计算
LPO含量（nmol/10
4
cell）= x×V样÷（V样÷V样总×细胞数量（万个））= x÷细胞数量（万个）
5. 按照液体样本体积计算
LPO含量（nmol/mL）= x
V样：加入样本体积，0.4mL，V样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，
g。
注意事项：
1. 待测液如果有密集小气泡，建议静置20min左右等待气泡消失再测，以免影响测定结果，如果有少量气泡可
以通过低速离心或轻磕等方式来消除。
2. 待测液如果尚未澄清，可吸取上清液后再次离心。
3. 为防止水浴60min过程中水分散失，建议使用螺旋管或用封口膜给EP管缠口。
4. 如果用高温助溶试剂二，需要待其冷却至室温后再使用。
5. 如果测定吸光值过低或接近空白，适当延长反应时间或加大样本量后，重新测定。如果吸光值过大或超过检
测范围（A532＞1.5或者ΔA＞1.5时），建议将样本适当稀释后进行测定。注意同步修改计算公式。
实验实例：
1. 取120 μL羊血清，按照测定步骤操作，测得计算A532
测定
= 0.124，A532
对照
= 0.01，A600
测定
= 0.057，A600
对照
= 0.002，∆A=0.059，将∆A代入标曲公式y = 0.0598x + 0.0135，得出x=0.7609，按样本质量计算酶活得：
LPO含量（nmol/mL）=x =0.7609 nmol/mL。
2. 称取0.1024 g玉兰叶片，加入1mL提取液，冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测，之后按照
测定步骤操作， 测得计算A532
测定
= 0.232，A532
对照
= 0.01，A600
测定
= 0.035，A600
对照
= 0.002，∆A=0.189，
将∆A代入标曲公式y = 0.0598x + 0.0135，得出x=2.9348，按样本质量计算酶活得：
LPO含量（nmol/g 质量）= x÷W = 28.660 nmol/g 质量。
参考文献：
Hiroshi Ohkawa, Nobuko Ohishi, Kunio Yagi,Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid
reaction[J],Analytical Biochemistry,1979.
相关系列产品：
BC0200/BC0205 过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒
BC0090/BC0095 过氧化物酶（POD）活性检测试剂盒
BC0190/BC0195 多酚氧化酶（PPO）活性检测试剂盒
BC0210/BC0215 苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性检测试剂盒
BC5240 -- 第 3 页，共 3 页
2024年9月24日发(作者：瞿巧兰)
Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd
Tel: 400-968-6088
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脂质过氧化物（LPO）含量检测试剂盒
可见分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC5240
规格：50T/48S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称
提取液
试剂一
试剂二
试剂三
标准品
稀释液
溶液的配制：
1. 试剂二：临用前取1瓶试剂二加入14mL 蒸馏水，此试剂较难溶，可以 70℃加热并剧烈振荡以促进溶解，或
者通过超声处理以促进溶解。每次用前需检查是否有粉剂析出。用不完的试剂可在2-8℃中保存一个月。
2. 标准品：为1000nmol/mL的标准溶液。
产品说明：
脂质过氧化物（lipid hydroperoxide LPO）是不饱和脂肪酸链经自由基或活性氧作用后产生的过氧化物。病理
情况下，脂质过氧化反应增强可导致原本低含量的LPO升高。LPO含量升高会对细胞的结构和功能造成损伤，
LPO含量与机体免疫系统和衰老密切相关。
LPO在酸性条件下加热产生丙二醛（MDA），MDA与硫代巴比妥酸(Thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成棕
红色物质三甲川（3,5,5-三甲基恶唑-2,4-二酮），其最大吸收波长在 532nm，进行比色后可估测样本中LPO的含量。
LPO
H
+
Heating
MDA+ TBA
H
+
3,5,5-Trimethyloxazolidine-2,4-dione (532 nm)
Heating
规格
液体60mL×1瓶
液体20mL×1瓶
粉剂×2瓶
液体7mL×1瓶
液体1mL×1支
液体20mL×1瓶
保存条件
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
2-8℃保存
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者
增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、1mL玻璃比色皿、
冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：按照样本质量（g）：提取液体积（mL）为1:5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取
液）加入提取液，冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测。
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2、细菌或细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（10
4
个）：提取液
体积（mL）为 500~1000:1 的比例（建议500万细菌或细胞加入 1mL 提取液）加入提取液，超声波破碎细菌或
细胞（冰浴，功率200W，超声 3s，间隔 7s，总时间3min），8000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测。
3、培养液或其他液体：直接检测。若溶液浑浊则离心后取上清进行测定。
二、测定步骤
1、可见分光光度计预热30min以上，调节波长至532和600nm，用蒸馏水调零。
2、标准溶液的制备：现标准液为1000nmol/mL的MDA标准溶液，将标准液用稀释液稀释至20、10、5、2.5、1.25、
0.625、0.3125、0.15625 nmol/mL备用，具体稀释可参考下表。
序号 稀释前浓度（nmol/mL）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
1000
40
20
10
5
2.5
1.25
0.625
0.3125
标准液体积（µL）
40
500
500
500
500
500
500
500
500
稀释液体积（µL）
960
500
500
500
500
500
500
500
500
稀释后浓度（nmol/mL）
40
20
10
5
2.5
1.25
0.625
0.3125
0.15625
备注：实验中每个标准管需400µL标准溶液。
3、在EP管中按下表步骤加样：
试剂名称
样本（μL）
蒸馏水（μL）
标准液（μL）
稀释液（μL）
试剂一（μL）
试剂二（μL）
试剂三（μL）
测定管
400
-
-
-
300
200
100
对照管
-
400
-
-
300
200
100
标准管
-
-
400
-
300
200
100
空白管
-
-
-
400
300
200
100
将混合液在 45℃（植物样本）或100℃（其他样本）水浴60min 后（标准管在两个温度水浴均可），置于
冰浴中冷却，8000g，常温，离心 10min。吸取 900μL 上清液于1mL玻璃比色皿中，测定各样本在 532nm和600nm
处的吸光度。分别计算 ΔA=（A532
测定
-A532
对照
）-（A600
测定
-A600
对照
），ΔA标准=（A532
标准
-A532
空白
）- (A600
标准
-A600
空白
）（标准曲线，空白管和对照管只需做 1-2 次）。
二、LPO含量的计算
1. 根据标准管的浓度（x，nmol/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA
（y，ΔA）代入公式计算样本浓度（x，nmol/mL）
2. 按样本蛋白质浓度计算
LPO含量（nmol/mg prot）=x×V样÷（Cpr×V样）= x÷Cpr
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3. 按样本质量计算
LPO含量（nmol/g 质量）=x×V样÷（W×V样÷V样总）= x÷W
4. 按细菌/细胞数量计算
LPO含量（nmol/10
4
cell）= x×V样÷（V样÷V样总×细胞数量（万个））= x÷细胞数量（万个）
5. 按照液体样本体积计算
LPO含量（nmol/mL）= x
V样：加入样本体积，0.4mL，V样总：提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，
g。
注意事项：
1. 待测液如果有密集小气泡，建议静置20min左右等待气泡消失再测，以免影响测定结果，如果有少量气泡可
以通过低速离心或轻磕等方式来消除。
2. 待测液如果尚未澄清，可吸取上清液后再次离心。
3. 为防止水浴60min过程中水分散失，建议使用螺旋管或用封口膜给EP管缠口。
4. 如果用高温助溶试剂二，需要待其冷却至室温后再使用。
5. 如果测定吸光值过低或接近空白，适当延长反应时间或加大样本量后，重新测定。如果吸光值过大或超过检
测范围（A532＞1.5或者ΔA＞1.5时），建议将样本适当稀释后进行测定。注意同步修改计算公式。
实验实例：
1. 取120 μL羊血清，按照测定步骤操作，测得计算A532
测定
= 0.124，A532
对照
= 0.01，A600
测定
= 0.057，A600
对照
= 0.002，∆A=0.059，将∆A代入标曲公式y = 0.0598x + 0.0135，得出x=0.7609，按样本质量计算酶活得：
LPO含量（nmol/mL）=x =0.7609 nmol/mL。
2. 称取0.1024 g玉兰叶片，加入1mL提取液，冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清置冰上待测，之后按照
测定步骤操作， 测得计算A532
测定
= 0.232，A532
对照
= 0.01，A600
测定
= 0.035，A600
对照
= 0.002，∆A=0.189，
将∆A代入标曲公式y = 0.0598x + 0.0135，得出x=2.9348，按样本质量计算酶活得：
LPO含量（nmol/g 质量）= x÷W = 28.660 nmol/g 质量。
参考文献：
Hiroshi Ohkawa, Nobuko Ohishi, Kunio Yagi,Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid
reaction[J],Analytical Biochemistry,1979.
相关系列产品：
BC0200/BC0205 过氧化氢酶（CAT）活性检测试剂盒
BC0090/BC0095 过氧化物酶（POD）活性检测试剂盒
BC0190/BC0195 多酚氧化酶（PPO）活性检测试剂盒
BC0210/BC0215 苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性检测试剂盒
BC5240 -- 第 3 页，共 3 页