2024年3月20日发(作者：雀嘉珍)
C基因型牛副流感3型病毒的分离鉴定
冉旭华;张峣;曹思;卢元赫;张玲玲;刘阳阳;倪宏波;朱战波;闻晓波
【摘 要】为了对宁夏地区患有呼吸系统疾病的舍饲牛进行病原鉴定,试验主要利用
RT-PCR方法对样品进行牛副流感3型病毒(BPIV3)M基因序列扩增,将扩增产物连
接在pMD18-T载体后转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中进行亚克隆.通过氨苄
青霉素平板筛选,将鉴定为阳性的克隆菌进行核苷酸序列测定并利用分子生物学软
件与GenBank上参考序列进行同源性比对.测序结果表明,从样品中分离到了1株
BPIV3,并命名为NX49,其M基因全长为1 056 bp;进化分析表明,NX49隶属于
BPIV3 C基因型,其M基因与中国山东C型分离株SD0835具有较高同源性,核苷
酸同源性为99.4％;理化分析表明,该毒株对温度、酸及有机物均敏感,高温孵育下
Mg2+对该病毒无保护力;血凝试验表明,NX49对豚鼠红细胞凝集效价仅为1:4,且
仅在4℃孵育时出现凝集反应.本研究成功分离得到一株BPIV3 C型毒株,这将有助
于中国BPIV3分子进化规律及病毒流行特点的进一步研究.
【期刊名称】《中国畜牧兽医》
【年(卷),期】2016(043)005
【总页数】6页(P1368-1373)
【关键词】牛副流感3型病毒;C基因型;分离;鉴定;同源性比对
【作 者】冉旭华;张峣;曹思;卢元赫;张玲玲;刘阳阳;倪宏波;朱战波;闻晓波
【作者单位】黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室,大庆163319;黑龙江
八一农垦大学预防兽医学省重点实验室,大庆163319;黑龙江八一农垦大学预防兽
医学省重点实验室,大庆163319;黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室,大
庆163319;黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室,大庆163319;黑龙江八
一农垦大学预防兽医学省重点实验室,大庆163319;黑龙江八一农垦大学预防兽医
学省重点实验室,大庆163319;黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室,大庆
163319;黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室,大庆163319
【正文语种】中 文
【中图分类】S852.65
牛副流感3型病毒(bovine parainfluenza virus type 3，BPIV3)属于副黏病毒家
族呼吸道病毒属，为不分节段的单股负链RNA病毒。BPIV3最早分离于美国，随
着世界各国贸易的日益频繁，该病毒目前已广泛分布于美洲、亚洲及澳洲等地[1]。
在已过去的半个多世纪，BPIV3从最初的1个基因型发展为现在3个基因型，即
BPIV3a、BPIV3b及BPIV3c[2]。中国于2008年在黑龙江首次分离到BPIV3[3]，
此后在山东[4]及内蒙古[5]等地也先后有BPIV3的分离报道，国内分离株的基因型
为A型和C型。
血清学调查显示，中国BPIV3血清中和抗体阳性率较高[6]，这表明BPIV3在中国
流行比较广泛，而BPIV3是牛呼吸道综合征(bovine respiratory disease
complex，BRDC)的主要病原之一[7]，该病毒本身致病力并不强，但在其他继发
细菌等外界因素的联合作用下，则可使患牛出现严重的呼吸道症状，甚至死亡，因
此该病毒对舍饲牛危害极大，严重威胁着中国养牛业的发展[8]。国内目前对
BPIV3的研究尚处于初级阶段，临床分离毒株较少且分布区域有限，这在很大程
度上限制了中国BPIV3流行病学、病毒基因多样性、遗传变异特点及进化规律的
研究。本研究首次在中国中西部地区分离得到BPIV3，并对其M结构蛋白进行了
序列扩增、测定及比较分析，为研究中国BPIV3分布及病毒进化奠定基础。
1.1 材料
1.1.1 病料样本 样本采集自宁夏回族自治区规模化养牛场患有呼吸系统疾病的
舍饲牛。
1.1.2 细胞和试剂 MDBK细胞由黑龙江八一农垦大学预防实验室保存；RPMI
Medium 1640 basic 购自Gibco公司，胎牛血清购自浙江天杭生物科技有限公司；
TRIzol购自Invitrogen公司；RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit购自
Thermo公司；2×GoTaq® Green Master Mix、Wizard® SV Gel and PCR
Clean-up System均购自Promega公司；pMD18-T载体购自TaKaRa公司；
DEPC水、琼脂糖均购自Sigma公司，其他试剂均为国产分析纯。
1.1.3 参考毒株 日本病毒株910N(GenBank登录号：D84095)；中国病毒株
NM09(GenBank登录号：JQ063064)；中国病毒株SD0835(GenBank登录号：
HQ530153)；美国病毒株TVMDL24(GenBank登录号：KJ647288)；美国病毒
株SF(GenBank登录号：AF178655)；美国病毒株Kansas(GenBank登录号：
AF178655)；澳大利亚病毒株Q5592(GenBank登录号：EU277658)；美国病毒
株TVMDL15(GenBank登录号：KJ647284)；美国病毒株TVMDL16(GenBank
登录号：KJ647285)；韩国病毒株12Q061(GenBank登录号：JX969001)；日本
病毒株HS9(GenBank登录号：LC000638)。
1.2 方法
1.2.1 病毒分离与纯化 将患牛鼻拭子置于1 mL PBS中充分搅拌混匀，经0.22
μm滤膜滤过并接种于单层MDBK细胞(含5%胎牛血清，1%青霉素、链霉素的
RPMI Medium 1640)。经3次传代，对产生CPE的样本进行病毒收集并进行6
孔板噬斑纯化试验，将挑取的独立噬斑进行扩大培养收集病毒液，-80 ℃保存备用。
1.2.2 引物设计与合成 参照BPIV3分离株910N、NM09及SD0835，利用
DNAStar生物分析软件查找M基因两侧保守序列并设计引物，引物序列为：M-F：
5′-GCTCTGCAAGAGTGAYGAAGA-AG-3′；M-R：5′-
GGTRATCTCTTTRATCCTAA-GTTTTTGAT-3′。引物由北京六合华大基因科技股
份有限公司合成。
1.2.3 RT-PCR 利用TRIzol法提取细胞培养上清中病毒总RNA，具体方法参照
说明书进行。反转录体系：总RNA 4.5 μL，Random Hexamer Primer 1 μL混
匀，65 ℃ 5 min并置于冰上迅速冷却；加入5×RV Buffer 4 μL，RiboLock
RNase Inhibitor 0.5 μL，dNTP(10 mmol/L) 2 μL，RevertAid RT 0.5 μL，
DEPC水7.5 μL。42 ℃ 2 h，70 ℃ 10 min终止反应。PCR反应体系20 μL：
2×GoTaq® Green Master Mix 10 μL，M-F、M-R各1 μL，ddH2O 8 μL。
PCR反应条件：95 ℃预变性3 min；95 ℃变性30 s，50 ℃退火30 s，72 ℃延
伸2 min，35个循环；72 ℃延伸10 min。1.2.4 扩增产物的亚克隆与测序 利
用Wizard® SV Gel and PCR Clean-up System对扩增产物进行回收，参照
pMD18-T载体说明书将回收产物与pMD18-T载体进行连接，转化至大肠杆菌
DH5α感受态细胞，提取重组质粒并用pMD18-T载体上的EcoRⅠ和HindⅢ酶
切位点进行双酶切鉴定，阳性质粒送北京六合华大基因科技股份有限公司测序。
1.2.5 序列分析 将测序结果与GenBank上已发表序列进行比对，并利用
DNAStar和Mega 6.0生物学分析软件对测序结果进行同源性比对及进化树构建。
1.2.6 病毒TCID50鉴定及理化特性分析 运用Reed-Muench法对传至第6代
病毒进行TCID50测定；温度敏感性及Mg2+保护力：对病毒液分别进行70 ℃ 1
h，60 ℃ 1 h，50 ℃ 1 h，50 ℃ 30 min，50 ℃ 30 min(含1 mol/L MgCl2)孵
育并通过TCID50对病毒效力进行鉴定，另设4 ℃ 1 h空白对照组；酸敏感性：
用HCl将病毒液pH调节至3.0并 37 ℃孵育 1 h，通过TCID50对病毒效力进行
鉴定，另设空白对照组；有机物敏感性：设乙醚4 ℃ 1 h、氯仿37 ℃ 10 min试
验组及37 ℃ 1 h对照组。
1.2.7 血凝性试验 制备豚鼠红细胞悬液对第6代病毒进行血凝性检测，准备3
块V型96孔板，每孔加入180 μL豚鼠红细胞悬液并在第一列每孔个加入20 μL
病毒液，将病毒液连续10倍稀释至第10列，11与12列为空白对照，接着将3
块板分别置于37、22及4 ℃孵育1 h并观察凝集情况。
2.1 噬斑纯化结果
将细胞培养上清在铺满MDBK细胞的6孔板上做10倍梯度稀释，可在10-4稀释
度孔中观察到独立噬斑并进行挑取(图1)。
2.2 M基因RT-PCR扩增及重组质粒鉴定结果
RT-PCR获得约1 369 bp条带，与预期相符。EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切可得到与
目的基因相同大小条带(图2)。
2.3 同源性比对及进化树构建
通过NCBI BLAST对测序获得的M基因序列与GenBank上参考序列进行同源性
比对，结果表明，NX49 M基因核苷酸及氨基酸同源性与BPIV3 C基因型同源性
较高，其中与中国C型分离株SD0835核苷酸同源性最高，为99.4%，另外同源
性最低的为中国A型分离株NM09，核苷酸同源性为82.8%；氨基酸同源性方面，
NX49与SD0835高度同源，为100%，此外，NX49与澳大利亚病毒株Q5592
氨基酸同源性最低，为96.0%(图3)。遗传进化分析表明，NX49与SD0835、
12Q061、HS9及TVMDL16同属于C基因型，且与SD0835分属于同一亚型(图
4)。
2.4 TCID50鉴定及理化特性分析
病毒TCID50约为108.0，对经预处理并进行理化分析的试验组持续观察6 d，每
天记录TCID50，结果表明，温度试验中除50 ℃孵育1 h试验组外，其他试验组
相比于对照组TCID50下降达两个对数以上；酸及有机物敏感试验中，试验组均相
对于对照组TCID50下降达两个对数以上；而Mg2+保护性试验中试验组与对照
组TCID50差异不明显，综上该分离毒株对温度、酸及有机物均敏感且Mg2+对
其不具有保护力(图5)。
2.5 血凝试验结果
血凝试验结果表明，分离毒株对豚鼠红细胞仅在4 ℃发生凝集作用且凝集效价约
为1∶4(表1)。
有研究表明，BPIV3血清阳性的牛在首次感染后可发生二次感染，但持续时间要
比首次感染时间短且仍可出现排毒现象[9]。因此，尽管中国目前饲养牛体内含有
较高的BPIV3血清阳性率，但这些牛仍存在潜在感染的可能性，因此，研究高效
且针对于中国目前流行毒株的BPIV3疫苗将是今后研究的发展方向之一。NX49
的发现不仅丰富了中国的病毒库组成，也为研究BPIV3在中国的分子流行病学及
进化规律起到积极作用。
对NX49的理化分析表明：该毒株对温度较为敏感，50 ℃孵育1 h病毒滴度显著
下降，60 ℃孵育1 h即可使病毒完全灭活；另外，该毒株对酸的敏感性也较强，
pH为3.0的条件下，37 ℃孵育1 h也可使病毒完全灭活；由于BPIV3为有囊膜
病毒，故该分离株对有机溶剂也具有较强的敏感性；50 ℃添加MgCl2孵育30
min与未添加对照组相比病毒滴度未获明显提升，试验结果表明，Mg2+对该病
毒无保护力。
M基因是BPIV3的保守基因也是分型基因[1]，保守的M蛋白在被BPIV3感染的
细胞中含量最高，它位于囊膜内侧，对于病毒的装配、出芽及子代病毒的释放具有
重要意义[10]。对M基因的进化分析表明，分离株NX49隶属于C基因型；核苷
酸及氨基酸分析表明，其与山东分离株SD0835具有较高同源性，但就血凝试验
而言，NX49与SD0835存在较大差异。因此与血凝性密切相关的HN基因分析
及全基因组测序将是接下来的研究重点。
人副流感病毒(HPIV)具有4个血清型，目前牛副流感病毒仅存在1个血清型，根
据该病毒与人副流感3型病毒HA-1株之间的血清学关系将其命名为BPIV3[11-
12]。截至目前，BPIV3已发现3种基因型，不同基因型之间基因组同源性为
80.9%～99.3%[2]。中国目前主要流行株基因型为A型与C型，各基因型临床分
离毒株相对较少且区域分布仅局限于中国东北部，但血清学调查表明中国目前
BPIV3已呈全国性流行。国内新建奶牛场多从澳大利亚、新西兰、乌拉圭等国进
口青年牛，虽经过海关和隔离场的双重检疫，但仍易带来一些传染病，其中就包括
BPIV3，澳大利亚和美国已经报道了B型BPIV3的流行，中国目前尚无B型
BPIV3的报道，因此，开展BPIV3的流行病学调查和监控，将为BRDC疾病的防
制及相关疫苗的研发奠定基础。
2024年3月20日发(作者：雀嘉珍)
C基因型牛副流感3型病毒的分离鉴定
冉旭华;张峣;曹思;卢元赫;张玲玲;刘阳阳;倪宏波;朱战波;闻晓波
【摘 要】为了对宁夏地区患有呼吸系统疾病的舍饲牛进行病原鉴定,试验主要利用
RT-PCR方法对样品进行牛副流感3型病毒(BPIV3)M基因序列扩增,将扩增产物连
接在pMD18-T载体后转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中进行亚克隆.通过氨苄
青霉素平板筛选,将鉴定为阳性的克隆菌进行核苷酸序列测定并利用分子生物学软
件与GenBank上参考序列进行同源性比对.测序结果表明,从样品中分离到了1株
BPIV3,并命名为NX49,其M基因全长为1 056 bp;进化分析表明,NX49隶属于
BPIV3 C基因型,其M基因与中国山东C型分离株SD0835具有较高同源性,核苷
酸同源性为99.4％;理化分析表明,该毒株对温度、酸及有机物均敏感,高温孵育下
Mg2+对该病毒无保护力;血凝试验表明,NX49对豚鼠红细胞凝集效价仅为1:4,且
仅在4℃孵育时出现凝集反应.本研究成功分离得到一株BPIV3 C型毒株,这将有助
于中国BPIV3分子进化规律及病毒流行特点的进一步研究.
【期刊名称】《中国畜牧兽医》
【年(卷),期】2016(043)005
【总页数】6页(P1368-1373)
【关键词】牛副流感3型病毒;C基因型;分离;鉴定;同源性比对
【作 者】冉旭华;张峣;曹思;卢元赫;张玲玲;刘阳阳;倪宏波;朱战波;闻晓波
【作者单位】黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室,大庆163319;黑龙江
八一农垦大学预防兽医学省重点实验室,大庆163319;黑龙江八一农垦大学预防兽
医学省重点实验室,大庆163319;黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室,大
庆163319;黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室,大庆163319;黑龙江八
一农垦大学预防兽医学省重点实验室,大庆163319;黑龙江八一农垦大学预防兽医
学省重点实验室,大庆163319;黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室,大庆
163319;黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室,大庆163319
【正文语种】中 文
【中图分类】S852.65
牛副流感3型病毒(bovine parainfluenza virus type 3，BPIV3)属于副黏病毒家
族呼吸道病毒属，为不分节段的单股负链RNA病毒。BPIV3最早分离于美国，随
着世界各国贸易的日益频繁，该病毒目前已广泛分布于美洲、亚洲及澳洲等地[1]。
在已过去的半个多世纪，BPIV3从最初的1个基因型发展为现在3个基因型，即
BPIV3a、BPIV3b及BPIV3c[2]。中国于2008年在黑龙江首次分离到BPIV3[3]，
此后在山东[4]及内蒙古[5]等地也先后有BPIV3的分离报道，国内分离株的基因型
为A型和C型。
血清学调查显示，中国BPIV3血清中和抗体阳性率较高[6]，这表明BPIV3在中国
流行比较广泛，而BPIV3是牛呼吸道综合征(bovine respiratory disease
complex，BRDC)的主要病原之一[7]，该病毒本身致病力并不强，但在其他继发
细菌等外界因素的联合作用下，则可使患牛出现严重的呼吸道症状，甚至死亡，因
此该病毒对舍饲牛危害极大，严重威胁着中国养牛业的发展[8]。国内目前对
BPIV3的研究尚处于初级阶段，临床分离毒株较少且分布区域有限，这在很大程
度上限制了中国BPIV3流行病学、病毒基因多样性、遗传变异特点及进化规律的
研究。本研究首次在中国中西部地区分离得到BPIV3，并对其M结构蛋白进行了
序列扩增、测定及比较分析，为研究中国BPIV3分布及病毒进化奠定基础。
1.1 材料
1.1.1 病料样本 样本采集自宁夏回族自治区规模化养牛场患有呼吸系统疾病的
舍饲牛。
1.1.2 细胞和试剂 MDBK细胞由黑龙江八一农垦大学预防实验室保存；RPMI
Medium 1640 basic 购自Gibco公司，胎牛血清购自浙江天杭生物科技有限公司；
TRIzol购自Invitrogen公司；RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit购自
Thermo公司；2×GoTaq® Green Master Mix、Wizard® SV Gel and PCR
Clean-up System均购自Promega公司；pMD18-T载体购自TaKaRa公司；
DEPC水、琼脂糖均购自Sigma公司，其他试剂均为国产分析纯。
1.1.3 参考毒株 日本病毒株910N(GenBank登录号：D84095)；中国病毒株
NM09(GenBank登录号：JQ063064)；中国病毒株SD0835(GenBank登录号：
HQ530153)；美国病毒株TVMDL24(GenBank登录号：KJ647288)；美国病毒
株SF(GenBank登录号：AF178655)；美国病毒株Kansas(GenBank登录号：
AF178655)；澳大利亚病毒株Q5592(GenBank登录号：EU277658)；美国病毒
株TVMDL15(GenBank登录号：KJ647284)；美国病毒株TVMDL16(GenBank
登录号：KJ647285)；韩国病毒株12Q061(GenBank登录号：JX969001)；日本
病毒株HS9(GenBank登录号：LC000638)。
1.2 方法
1.2.1 病毒分离与纯化 将患牛鼻拭子置于1 mL PBS中充分搅拌混匀，经0.22
μm滤膜滤过并接种于单层MDBK细胞(含5%胎牛血清，1%青霉素、链霉素的
RPMI Medium 1640)。经3次传代，对产生CPE的样本进行病毒收集并进行6
孔板噬斑纯化试验，将挑取的独立噬斑进行扩大培养收集病毒液，-80 ℃保存备用。
1.2.2 引物设计与合成 参照BPIV3分离株910N、NM09及SD0835，利用
DNAStar生物分析软件查找M基因两侧保守序列并设计引物，引物序列为：M-F：
5′-GCTCTGCAAGAGTGAYGAAGA-AG-3′；M-R：5′-
GGTRATCTCTTTRATCCTAA-GTTTTTGAT-3′。引物由北京六合华大基因科技股
份有限公司合成。
1.2.3 RT-PCR 利用TRIzol法提取细胞培养上清中病毒总RNA，具体方法参照
说明书进行。反转录体系：总RNA 4.5 μL，Random Hexamer Primer 1 μL混
匀，65 ℃ 5 min并置于冰上迅速冷却；加入5×RV Buffer 4 μL，RiboLock
RNase Inhibitor 0.5 μL，dNTP(10 mmol/L) 2 μL，RevertAid RT 0.5 μL，
DEPC水7.5 μL。42 ℃ 2 h，70 ℃ 10 min终止反应。PCR反应体系20 μL：
2×GoTaq® Green Master Mix 10 μL，M-F、M-R各1 μL，ddH2O 8 μL。
PCR反应条件：95 ℃预变性3 min；95 ℃变性30 s，50 ℃退火30 s，72 ℃延
伸2 min，35个循环；72 ℃延伸10 min。1.2.4 扩增产物的亚克隆与测序 利
用Wizard® SV Gel and PCR Clean-up System对扩增产物进行回收，参照
pMD18-T载体说明书将回收产物与pMD18-T载体进行连接，转化至大肠杆菌
DH5α感受态细胞，提取重组质粒并用pMD18-T载体上的EcoRⅠ和HindⅢ酶
切位点进行双酶切鉴定，阳性质粒送北京六合华大基因科技股份有限公司测序。
1.2.5 序列分析 将测序结果与GenBank上已发表序列进行比对，并利用
DNAStar和Mega 6.0生物学分析软件对测序结果进行同源性比对及进化树构建。
1.2.6 病毒TCID50鉴定及理化特性分析 运用Reed-Muench法对传至第6代
病毒进行TCID50测定；温度敏感性及Mg2+保护力：对病毒液分别进行70 ℃ 1
h，60 ℃ 1 h，50 ℃ 1 h，50 ℃ 30 min，50 ℃ 30 min(含1 mol/L MgCl2)孵
育并通过TCID50对病毒效力进行鉴定，另设4 ℃ 1 h空白对照组；酸敏感性：
用HCl将病毒液pH调节至3.0并 37 ℃孵育 1 h，通过TCID50对病毒效力进行
鉴定，另设空白对照组；有机物敏感性：设乙醚4 ℃ 1 h、氯仿37 ℃ 10 min试
验组及37 ℃ 1 h对照组。
1.2.7 血凝性试验 制备豚鼠红细胞悬液对第6代病毒进行血凝性检测，准备3
块V型96孔板，每孔加入180 μL豚鼠红细胞悬液并在第一列每孔个加入20 μL
病毒液，将病毒液连续10倍稀释至第10列，11与12列为空白对照，接着将3
块板分别置于37、22及4 ℃孵育1 h并观察凝集情况。
2.1 噬斑纯化结果
将细胞培养上清在铺满MDBK细胞的6孔板上做10倍梯度稀释，可在10-4稀释
度孔中观察到独立噬斑并进行挑取(图1)。
2.2 M基因RT-PCR扩增及重组质粒鉴定结果
RT-PCR获得约1 369 bp条带，与预期相符。EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切可得到与
目的基因相同大小条带(图2)。
2.3 同源性比对及进化树构建
通过NCBI BLAST对测序获得的M基因序列与GenBank上参考序列进行同源性
比对，结果表明，NX49 M基因核苷酸及氨基酸同源性与BPIV3 C基因型同源性
较高，其中与中国C型分离株SD0835核苷酸同源性最高，为99.4%，另外同源
性最低的为中国A型分离株NM09，核苷酸同源性为82.8%；氨基酸同源性方面，
NX49与SD0835高度同源，为100%，此外，NX49与澳大利亚病毒株Q5592
氨基酸同源性最低，为96.0%(图3)。遗传进化分析表明，NX49与SD0835、
12Q061、HS9及TVMDL16同属于C基因型，且与SD0835分属于同一亚型(图
4)。
2.4 TCID50鉴定及理化特性分析
病毒TCID50约为108.0，对经预处理并进行理化分析的试验组持续观察6 d，每
天记录TCID50，结果表明，温度试验中除50 ℃孵育1 h试验组外，其他试验组
相比于对照组TCID50下降达两个对数以上；酸及有机物敏感试验中，试验组均相
对于对照组TCID50下降达两个对数以上；而Mg2+保护性试验中试验组与对照
组TCID50差异不明显，综上该分离毒株对温度、酸及有机物均敏感且Mg2+对
其不具有保护力(图5)。
2.5 血凝试验结果
血凝试验结果表明，分离毒株对豚鼠红细胞仅在4 ℃发生凝集作用且凝集效价约
为1∶4(表1)。
有研究表明，BPIV3血清阳性的牛在首次感染后可发生二次感染，但持续时间要
比首次感染时间短且仍可出现排毒现象[9]。因此，尽管中国目前饲养牛体内含有
较高的BPIV3血清阳性率，但这些牛仍存在潜在感染的可能性，因此，研究高效
且针对于中国目前流行毒株的BPIV3疫苗将是今后研究的发展方向之一。NX49
的发现不仅丰富了中国的病毒库组成，也为研究BPIV3在中国的分子流行病学及
进化规律起到积极作用。
对NX49的理化分析表明：该毒株对温度较为敏感，50 ℃孵育1 h病毒滴度显著
下降，60 ℃孵育1 h即可使病毒完全灭活；另外，该毒株对酸的敏感性也较强，
pH为3.0的条件下，37 ℃孵育1 h也可使病毒完全灭活；由于BPIV3为有囊膜
病毒，故该分离株对有机溶剂也具有较强的敏感性；50 ℃添加MgCl2孵育30
min与未添加对照组相比病毒滴度未获明显提升，试验结果表明，Mg2+对该病
毒无保护力。
M基因是BPIV3的保守基因也是分型基因[1]，保守的M蛋白在被BPIV3感染的
细胞中含量最高，它位于囊膜内侧，对于病毒的装配、出芽及子代病毒的释放具有
重要意义[10]。对M基因的进化分析表明，分离株NX49隶属于C基因型；核苷
酸及氨基酸分析表明，其与山东分离株SD0835具有较高同源性，但就血凝试验
而言，NX49与SD0835存在较大差异。因此与血凝性密切相关的HN基因分析
及全基因组测序将是接下来的研究重点。
人副流感病毒(HPIV)具有4个血清型，目前牛副流感病毒仅存在1个血清型，根
据该病毒与人副流感3型病毒HA-1株之间的血清学关系将其命名为BPIV3[11-
12]。截至目前，BPIV3已发现3种基因型，不同基因型之间基因组同源性为
80.9%～99.3%[2]。中国目前主要流行株基因型为A型与C型，各基因型临床分
离毒株相对较少且区域分布仅局限于中国东北部，但血清学调查表明中国目前
BPIV3已呈全国性流行。国内新建奶牛场多从澳大利亚、新西兰、乌拉圭等国进
口青年牛，虽经过海关和隔离场的双重检疫，但仍易带来一些传染病，其中就包括
BPIV3，澳大利亚和美国已经报道了B型BPIV3的流行，中国目前尚无B型
BPIV3的报道，因此，开展BPIV3的流行病学调查和监控，将为BRDC疾病的防
制及相关疫苗的研发奠定基础。