2024年3月25日发(作者：须芷云)
２０１２年第３期
总第３７卷
ＣＨＩＮＡ ＣｏＮＤＩＭＥＮＴ
中国调味品
试验研究
苯甲酸钠和山梨酸钾的复配抑菌效果研究
胡春红，陈龙，李季平，程颖
（周口师范学院生命科学系，河南周口４６６００１）
摘要：采用液体培养法和比浊法研究苯甲酸钠和山梨酸钾的３种复合配伍（１：１；２：３；３：２）对大肠杆
菌和金黄色葡萄球菌的抑茵效果，运用ＳＰＳＳ１６．０统计软件对所测数据进行统计分析，从中筛选最佳抑
茼配伍及最佳抑菌浓度。结果表明，这两种防腐剂的３种复合配伍对两种茵的生长都有显著的抑制作
用，且随质量浓度增加抑茵作用逐渐增强。苯甲酸钠和山梨酸钾复合配比为３：２时，对大肠杆菌的抑
茵效果较好；复合配比为２：３时，对金黄色葡萄球菌的抑茵效果较好；３种复合配伍的最佳抑茵浓度均
为１．０ ｇ／Ｌ。
关键词：苯甲酸钠；山梨酸钾；抑茵机理
中图分类号：ＴＳ２０２．３ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１０００—９９７３（２０１２）０３－－００４６—０４
Ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａＩ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｏｍｂ ｉｎｅｄ Ｓｏｄｉｕｍ
ｂｅｎｚｏａｔｅ ａｎｄ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｏｒｂａｔｅ
ＨＵ Ｃｈｕｎ－ｈｏｎｇ，ＣＨＥＮ Ｌｏｎｇ，ＬＩ Ｊｉ－ｐｉｎｇ，ＣＨＥＮＧ Ｙｉｎｇ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｚｈｏｕｋｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｏｕｋｏｕ ４６６００１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ３ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ（１：１；２：３；３：２）ｏｆ ｔｈｅ Ｓｏ—
ｄｉｕｍ ｂｅｎｚｏａｔｅ ａｎｄ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｏｒｂａｔｅ ｏｎ Ｅ．ｃｏｌｉ ａｎｄ ５￡口 Ｚ０ｃ０ｃｃ ｓ ａｕｒｅｕｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｌｉｑｕｉｄ ｃｕｌｔｕｒｅ
ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｔｕｒｂｉｄｉｔｙ ｍｅｔｈｏｄ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ，ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｒａｔｉｏ ａｎｄ ｏｐｔｉｍｕｍ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ ｃｏｎ—
ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｓｏｆｔｗａｒｅ ＳＰＳＳ１ ６．０ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｐｅｒ．
Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ３ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｈａｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ Ｅ．ｃｏｌｉ
ａｎｄ ｓ￡ｎｐ＾ Ｚ０ｃ０ｃｃ ｓ ａｕｒｅｕｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｇｒａｄｕａｌｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｌｏｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓ．Ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓ ｈａｄ ｂｅｔｔｅｒ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ
Ｅ．ｃｏｌｉ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｒａｔｉｏ ｏｆ Ｓｏｄｉｕｍ ｂｅｎｚｏａｔｅ ａｎｄ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｏｒｂａｔｅ ｉｓ ３：２；Ｂｕｔ ｔｏ ｓｔａｐｈｙｌｏ－
ＣＯＣＣＵＳ ａｕｒｅｕｓ，ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｒａｔｉｏ ｏｆ Ｓｏｄｉｕｍ ｂｅｎｚｏａｔｅ ａｎｄ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｏｒｂａｔｅ ｉｓ ２：３；Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ａｎ—
ｔｉｂａｃｔｅｒｉａ１ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ３ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓ ｗｅｒｅ ａｌｌ １．０ ｇ／Ｌ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｓｏｄｉｕｍ ｂｅｎｚｏａｔｅ；ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｏｒｂａｔｅ；ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａ１ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
苯甲酸钠和山梨酸钾因价格低廉，又具广谱的抑
菌效果，而成为食品、药品、化妆品，特别是食品行业的
首选防腐剂。苯甲酸钠的毒副作用较大，是山梨酸及
其钾盐的５倍，而抑菌效果仅是山梨酸的１／５～
１／１０／川，但山梨酸价格是苯甲酸钠的２～３倍。为此，
寻求这两种防腐剂的最佳抑菌配比及最佳抑菌浓度，
既可降低单一防腐剂过量使用的风险，又可降低商
业使用成本。有关防腐剂的复配抑菌研究偶见报
收稿Ｅｔ期：２０１１一１０—１３
基金项目：河南省教育厅自然科学基础研究计划项目（１２Ａ１８００２９）
作者简介：胡春红（１９７８一），女，河南周口人，硕士研究生，主要从事生物学教学与研究工作。
一
４６—
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试验研究
道 。 ］。本实验拟通过研究这两种防腐剂（苯甲酸钠
和山梨酸钾）的３种复合配伍（１：１；２：３；３：２）分别
在不同质量浓度下对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑
用量分别为３．０，１．０，０．５，０．３，０．２，０．０ ｇ／Ｌ（显然，本
实验的使用剂量远低于国家ＧＢ ２７６０—１９９６＜（食品添
加剂使用卫生标准》中规定的相关防腐剂的最大用量
标准）。然后，用移液器在上述三角瓶中分别添加制备
好的菌悬液０．１ ｍＬ。各个质量浓度做３个重复，用８
层纱布包裹各瓶口，置恒温振荡培养箱内３７℃下震荡
菌效果，旨在为相关行业应用提供一定的理论依据。
大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ，Ｅ．ｃｏｌｄ和金黄色葡
萄球菌（ｓ￡ｎｐ＾ Ｚ０∞ｃｃ ｓ ａｕｒｅｕｓ）分别是Ｇ一和Ｇ 的代
表菌，又是导致食品污染和人类感染的罪魁祸首。因
此，本实验选用这两种菌为供试菌种。
１ 材料和方法
１．１材料和仪器
苯甲酸钠和山梨酸钾 天津市北方天医化学试剂
厂；培养基牛肉膏蛋白胨液体培养基；大肠杆菌和金
黄色葡萄球菌周口师范学院生命科学系提供；分光
光度计；超净工作台；高压蒸汽灭菌锅；恒温振荡培养
箱等。
１．２方法
１．２．１母液的制备
分别精确称取苯甲酸钠和山梨酸钾各２．５ ｇ混
合，即复合配伍为１：１；称取苯甲酸钠２ ｇ，山梨酸钾
３ ｇ混合，即复合配伍为２：３；称取苯甲酸钠３ ｇ，山梨
酸钾２ ｇ混合，即复合配伍为３：２。上述３种配伍分
别用无菌水作为溶剂，制备质量浓度为３０，１０，５，３，２，
０ ｇ／Ｌ的母液备用。
１．２．２培养基的制备
参照相关资料，制备牛肉膏蛋白胨液体培养基，高
压蒸汽灭菌备用Ｌ４］。
１．２．３ 菌种活化及菌悬液的制备
将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别划线接种在牛
肉膏蛋白胨斜面培养基上，置３７℃恒温培养箱中培养
２４ ｈ；活化好后用２ ｍＬ，０．８５ ＮａＣ１溶液进行洗脱，
恒温振荡培养２ ｈ，即分别制得大肠杆菌和金黄色葡
萄球菌的菌悬液。
１．２．４接种培养
取９ ｍＬ液体培养基到５Ｏ ｍＬ的三角瓶中，并加
入１ ｍＬ上述质量浓度为３０ ｇ／Ｌ的复合配比１：１的
母液，并充分摇匀。同法分别添加防腐剂质量浓度为
１０，５，３，２，０ ｇ／Ｌ（对照组）的母液，即得防腐剂液体培
养基混合物。因此，复合配比１：１的防腐剂的实际
培养１８ ｈ。另取１．１ ｍＬ无菌水加入含９ ｍＬ液体培
养基的三角瓶中，用作调零。
同法分别制备苯甲酸钠和山梨酸钾复合配伍为
２：３和３：２的质量浓度为３．０，１．０，０．５，０．３，０．２，
０．０ ｇ／Ｌ的培养液，并同法进行接种培养。
１．２．５测量０Ｄ值及统计分析
培养好后，从各个三角瓶中取出１ ｍＬ培养液，用
无菌水将培养液稀释１Ｏ倍后，用分光光度计于
５５０ ｎｍ波长处测定吸光值，每个样品测３次。将实验
所得数据输入计算机，用ＳＰＳＳ１６．０统计软件进行统
计分析。
２ 结果
对上述实验所得大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的
ＯＤ值进行单因素方差分析，结果见表１。
表１单因素方差分析结果
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ Ｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ
注：Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ≤Ｏ．０１ ｌｅｖｅｌ。
由表１可知，苯甲酸钠和山梨酸钾的３种复合配
伍在实验中各质量浓度下对两种菌生长的影响都具有
统计学意义。
实验前和实验后分别对培养液的ｐＨ值进行检
测，结果见表２。
由表２可知，随质量浓度增加，两种菌培养液的
ｐＨ值逐渐降低，呈酸性。
计算各组实验数据求平均值，以复合防腐剂溶液
一
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的质量浓度为横坐标，平均ＯＤ值为纵坐标作图，见图
１，图２。
表２培养液的ｐＨ值
Ｔａｂｌｅ ２ Ｔｈｅ ｐＨ ｏｆ ｍｅｄｉｕｍ
铺糟 甜萄 撵
质量浓度为０．２ ｇ／Ｌ时对大肠杆菌和金黄色葡萄菌的生
长都已经呈现较明显的抑制作用；当质量浓度为１．０ ｇ／Ｌ
和３．０ ｇ／Ｌ时，两种菌的生长几乎完全受到抑制。整体
上，３种复合配伍对大肠杆菌的生长都呈现明显的抑制作
菌种苯 山 质量浓度（ｇ几）
前后前后前后 她骺一前后前后前后一
用，并且抑菌作用都随质量浓度增加而逐渐增强，其中以
０．０ ０．２ ０．３ ０．５ １．０ ３．０
１；１
大肠杆菌 ２：３
３：２
ｐＨ
５ ５
４
５
图１ ３种复合防腐剂对大肠杆菌生长的影响
Ｆｉｇ．１ Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ３ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄ
ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｅ．ｃｏｌｉ
图２ ３种复合防腐剂对金黄色葡萄球菌生长的影响
Ｆｉｇ．２ Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ３ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｏｎ
ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ
由图１和图２可知，与对照组相比，３种复合配比在
一
４８一
复合配比为３：２（苯甲酸钠：山梨酸钾）时对大肠杆菌的
抑菌效果较好；复合配比为２：３（苯甲酸钠；山梨酸钾）
时对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好。
３ 讨论
６
实验结果表明，３种复合配伍在本实验中所设定
５
的质量浓度梯度内对两种菌的生长都呈现明显的抑制
作用，并且抑制作用都随质量浓度增加而逐渐增强。
由图１和图２可知，３种复合防腐剂溶液的质量浓度
为０．２ ｇ／Ｌ时，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生长的影
响已呈现明显的抑制作用，当质量浓度为１．０ ｇ／Ｌ时
两种菌的生长已经几乎完全受到抑制。这与本实验组
以前的有关苯甲酸钠单一抑菌实验结果相吻合 ］。
３：２（苯甲酸钠：山梨酸钾）的复合配比对大肠杆
菌的抑菌作用较其他两种配比好；２：３（苯甲酸钠：山
梨酸钾）的复合配比对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较
其他两种配比好。这与该实验组同时研究的这两种防
腐剂的单一抑菌结果一致：苯甲酸钠对大肠杆菌的抑
菌效果要好于对金黄色葡萄球菌，而山梨酸钾的抑茵
效果则反之。因此，随着复合配比中苯甲酸钠比例加
大，复合配比３：２（苯甲酸钠：山梨酸钾）对大肠杆菌
的抑菌作用就突显出来，反之随着复合配比中山梨酸
钾比例加大，复合配比２：３（苯甲酸钠：山梨酸钾）对
金黄色葡萄球菌的抑菌作用就越发显著。需要说明的
是，本研究组发现，在相同质量浓度下复合防腐剂对这
两种菌的抑菌效果要比单独使用更为有效。这与相关
研究结果一致。
另外，含大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的３种复合
防腐剂培养液在实验前ｐＨ值均处于偏中性，而实验
后随着防腐剂质量浓度的升高，ｐＨ值逐渐降低，并呈
现酸性，这与抑菌效果随质量浓度增高而增强是一致
的。这可能是随着苯甲酸钠和山梨酸钾的质量浓度增
大，抑菌效果愈明显，防腐剂干预了细胞正常地代谢，
破坏了细菌细胞壁的结构，改变了细胞膜的通透性，使
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得细胞内代谢的酸性物质进入到了培养液中［６ ］，从
而降低了培养液的ｐＨ值。相关资料表明：苯甲酸钠
和山梨酸钾在酸性条件下具有较强的抑菌作用 ｎ］。
据此，随着培养时间延长培养液的ｐＨ值可能会进一
［Ｊ］．中国调味品，２０１０，３５（１１）：４３—４５．
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防腐应用研究［Ｊ］．中国食品添加剂，２０１０（２）：１９７－２００．
［３］张宗舟，薛林贵，陈志梅．不同防腐剂复配的抑菌效果研究
［Ｊ］．中国酿造，２０１０（１１）；２６—２８．
步降低，抑菌效果也可能会有所变化，那么这些防腐剂
的抑菌效果随时间延长将呈现怎样的变化趋势，有待
进一步研究。
［４］沈萍，范秀荣，李广武．微生物实验（第３版）［Ｍ］．北京：高
等教育出版社，１９９８：２１４．
［５］胡春红，葛红莲，李季平．苯甲酸钠对大肠杆菌和金黄色葡
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４ 结论
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［６］李涛。高伟．利用正交法研究三种防腐剂对细菌的抑菌效应
口］．陕西师范大学学报（自然科学版），２００７，３５：２７．
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生长都具有明显的抑制作用，并且随着质量浓度的升
高，抑菌效果逐渐增强。３种复合配比中，当苯甲酸钠
和山梨酸钾复合配比为３：２时，对大肠杆菌的抑菌效
果较好；当苯甲酸钠和山梨酸钾复合配比为２：３时，
对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好。考虑到防腐剂可
能在人体的叠加毒性，结合本实验结果，３种复合配伍
防腐剂对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最佳抑菌浓度
均为１．０ ｇ／Ｌ。
参考文献：
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（上接第３１页）
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一
［４４］Ｙｏｓｓａ Ｎ，Ｐａｔｅｌ Ｊ，Ｍｉｌｌｅｒ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ
４９—
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菌和金黄色葡萄球菌的抑茵效果，运用ＳＰＳＳ１６．０统计软件对所测数据进行统计分析，从中筛选最佳抑
茼配伍及最佳抑菌浓度。结果表明，这两种防腐剂的３种复合配伍对两种茵的生长都有显著的抑制作
用，且随质量浓度增加抑茵作用逐渐增强。苯甲酸钠和山梨酸钾复合配比为３：２时，对大肠杆菌的抑
茵效果较好；复合配比为２：３时，对金黄色葡萄球菌的抑茵效果较好；３种复合配伍的最佳抑茵浓度均
为１．０ ｇ／Ｌ。
关键词：苯甲酸钠；山梨酸钾；抑茵机理
中图分类号：ＴＳ２０２．３ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１０００—９９７３（２０１２）０３－－００４６—０４
Ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａＩ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｏｍｂ ｉｎｅｄ Ｓｏｄｉｕｍ
ｂｅｎｚｏａｔｅ ａｎｄ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｏｒｂａｔｅ
ＨＵ Ｃｈｕｎ－ｈｏｎｇ，ＣＨＥＮ Ｌｏｎｇ，ＬＩ Ｊｉ－ｐｉｎｇ，ＣＨＥＮＧ Ｙｉｎｇ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｚｈｏｕｋｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｏｕｋｏｕ ４６６００１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ３ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ（１：１；２：３；３：２）ｏｆ ｔｈｅ Ｓｏ—
ｄｉｕｍ ｂｅｎｚｏａｔｅ ａｎｄ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｏｒｂａｔｅ ｏｎ Ｅ．ｃｏｌｉ ａｎｄ ５￡口 Ｚ０ｃ０ｃｃ ｓ ａｕｒｅｕｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｌｉｑｕｉｄ ｃｕｌｔｕｒｅ
ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｔｕｒｂｉｄｉｔｙ ｍｅｔｈｏｄ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ，ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｒａｔｉｏ ａｎｄ ｏｐｔｉｍｕｍ ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃ ｃｏｎ—
ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｓｏｆｔｗａｒｅ ＳＰＳＳ１ ６．０ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｐｅｒ．
Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ３ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｈａｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ Ｅ．ｃｏｌｉ
ａｎｄ ｓ￡ｎｐ＾ Ｚ０ｃ０ｃｃ ｓ ａｕｒｅｕｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｇｒａｄｕａｌｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｌｏｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓ．Ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓ ｈａｄ ｂｅｔｔｅｒ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ
Ｅ．ｃｏｌｉ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｒａｔｉｏ ｏｆ Ｓｏｄｉｕｍ ｂｅｎｚｏａｔｅ ａｎｄ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｏｒｂａｔｅ ｉｓ ３：２；Ｂｕｔ ｔｏ ｓｔａｐｈｙｌｏ－
ＣＯＣＣＵＳ ａｕｒｅｕｓ，ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｒａｔｉｏ ｏｆ Ｓｏｄｉｕｍ ｂｅｎｚｏａｔｅ ａｎｄ ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｏｒｂａｔｅ ｉｓ ２：３；Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ａｎ—
ｔｉｂａｃｔｅｒｉａ１ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ３ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓ ｗｅｒｅ ａｌｌ １．０ ｇ／Ｌ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｓｏｄｉｕｍ ｂｅｎｚｏａｔｅ；ｐｏｔａｓｓｉｕｍ ｓｏｒｂａｔｅ；ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａ１ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ
苯甲酸钠和山梨酸钾因价格低廉，又具广谱的抑
菌效果，而成为食品、药品、化妆品，特别是食品行业的
首选防腐剂。苯甲酸钠的毒副作用较大，是山梨酸及
其钾盐的５倍，而抑菌效果仅是山梨酸的１／５～
１／１０／川，但山梨酸价格是苯甲酸钠的２～３倍。为此，
寻求这两种防腐剂的最佳抑菌配比及最佳抑菌浓度，
既可降低单一防腐剂过量使用的风险，又可降低商
业使用成本。有关防腐剂的复配抑菌研究偶见报
收稿Ｅｔ期：２０１１一１０—１３
基金项目：河南省教育厅自然科学基础研究计划项目（１２Ａ１８００２９）
作者简介：胡春红（１９７８一），女，河南周口人，硕士研究生，主要从事生物学教学与研究工作。
一
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总第３７卷
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试验研究
道 。 ］。本实验拟通过研究这两种防腐剂（苯甲酸钠
和山梨酸钾）的３种复合配伍（１：１；２：３；３：２）分别
在不同质量浓度下对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑
用量分别为３．０，１．０，０．５，０．３，０．２，０．０ ｇ／Ｌ（显然，本
实验的使用剂量远低于国家ＧＢ ２７６０—１９９６＜（食品添
加剂使用卫生标准》中规定的相关防腐剂的最大用量
标准）。然后，用移液器在上述三角瓶中分别添加制备
好的菌悬液０．１ ｍＬ。各个质量浓度做３个重复，用８
层纱布包裹各瓶口，置恒温振荡培养箱内３７℃下震荡
菌效果，旨在为相关行业应用提供一定的理论依据。
大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ，Ｅ．ｃｏｌｄ和金黄色葡
萄球菌（ｓ￡ｎｐ＾ Ｚ０∞ｃｃ ｓ ａｕｒｅｕｓ）分别是Ｇ一和Ｇ 的代
表菌，又是导致食品污染和人类感染的罪魁祸首。因
此，本实验选用这两种菌为供试菌种。
１ 材料和方法
１．１材料和仪器
苯甲酸钠和山梨酸钾 天津市北方天医化学试剂
厂；培养基牛肉膏蛋白胨液体培养基；大肠杆菌和金
黄色葡萄球菌周口师范学院生命科学系提供；分光
光度计；超净工作台；高压蒸汽灭菌锅；恒温振荡培养
箱等。
１．２方法
１．２．１母液的制备
分别精确称取苯甲酸钠和山梨酸钾各２．５ ｇ混
合，即复合配伍为１：１；称取苯甲酸钠２ ｇ，山梨酸钾
３ ｇ混合，即复合配伍为２：３；称取苯甲酸钠３ ｇ，山梨
酸钾２ ｇ混合，即复合配伍为３：２。上述３种配伍分
别用无菌水作为溶剂，制备质量浓度为３０，１０，５，３，２，
０ ｇ／Ｌ的母液备用。
１．２．２培养基的制备
参照相关资料，制备牛肉膏蛋白胨液体培养基，高
压蒸汽灭菌备用Ｌ４］。
１．２．３ 菌种活化及菌悬液的制备
将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别划线接种在牛
肉膏蛋白胨斜面培养基上，置３７℃恒温培养箱中培养
２４ ｈ；活化好后用２ ｍＬ，０．８５ ＮａＣ１溶液进行洗脱，
恒温振荡培养２ ｈ，即分别制得大肠杆菌和金黄色葡
萄球菌的菌悬液。
１．２．４接种培养
取９ ｍＬ液体培养基到５Ｏ ｍＬ的三角瓶中，并加
入１ ｍＬ上述质量浓度为３０ ｇ／Ｌ的复合配比１：１的
母液，并充分摇匀。同法分别添加防腐剂质量浓度为
１０，５，３，２，０ ｇ／Ｌ（对照组）的母液，即得防腐剂液体培
养基混合物。因此，复合配比１：１的防腐剂的实际
培养１８ ｈ。另取１．１ ｍＬ无菌水加入含９ ｍＬ液体培
养基的三角瓶中，用作调零。
同法分别制备苯甲酸钠和山梨酸钾复合配伍为
２：３和３：２的质量浓度为３．０，１．０，０．５，０．３，０．２，
０．０ ｇ／Ｌ的培养液，并同法进行接种培养。
１．２．５测量０Ｄ值及统计分析
培养好后，从各个三角瓶中取出１ ｍＬ培养液，用
无菌水将培养液稀释１Ｏ倍后，用分光光度计于
５５０ ｎｍ波长处测定吸光值，每个样品测３次。将实验
所得数据输入计算机，用ＳＰＳＳ１６．０统计软件进行统
计分析。
２ 结果
对上述实验所得大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的
ＯＤ值进行单因素方差分析，结果见表１。
表１单因素方差分析结果
Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ Ｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ
注：Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ Ｐ≤Ｏ．０１ ｌｅｖｅｌ。
由表１可知，苯甲酸钠和山梨酸钾的３种复合配
伍在实验中各质量浓度下对两种菌生长的影响都具有
统计学意义。
实验前和实验后分别对培养液的ｐＨ值进行检
测，结果见表２。
由表２可知，随质量浓度增加，两种菌培养液的
ｐＨ值逐渐降低，呈酸性。
计算各组实验数据求平均值，以复合防腐剂溶液
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试验研究
的质量浓度为横坐标，平均ＯＤ值为纵坐标作图，见图
１，图２。
表２培养液的ｐＨ值
Ｔａｂｌｅ ２ Ｔｈｅ ｐＨ ｏｆ ｍｅｄｉｕｍ
铺糟 甜萄 撵
质量浓度为０．２ ｇ／Ｌ时对大肠杆菌和金黄色葡萄菌的生
长都已经呈现较明显的抑制作用；当质量浓度为１．０ ｇ／Ｌ
和３．０ ｇ／Ｌ时，两种菌的生长几乎完全受到抑制。整体
上，３种复合配伍对大肠杆菌的生长都呈现明显的抑制作
菌种苯 山 质量浓度（ｇ几）
前后前后前后 她骺一前后前后前后一
用，并且抑菌作用都随质量浓度增加而逐渐增强，其中以
０．０ ０．２ ０．３ ０．５ １．０ ３．０
１；１
大肠杆菌 ２：３
３：２
ｐＨ
５ ５
４
５
图１ ３种复合防腐剂对大肠杆菌生长的影响
Ｆｉｇ．１ Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ３ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄ
ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｅ．ｃｏｌｉ
图２ ３种复合防腐剂对金黄色葡萄球菌生长的影响
Ｆｉｇ．２ Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ３ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｏｎ
ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ
由图１和图２可知，与对照组相比，３种复合配比在
一
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复合配比为３：２（苯甲酸钠：山梨酸钾）时对大肠杆菌的
抑菌效果较好；复合配比为２：３（苯甲酸钠；山梨酸钾）
时对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好。
３ 讨论
６
实验结果表明，３种复合配伍在本实验中所设定
５
的质量浓度梯度内对两种菌的生长都呈现明显的抑制
作用，并且抑制作用都随质量浓度增加而逐渐增强。
由图１和图２可知，３种复合防腐剂溶液的质量浓度
为０．２ ｇ／Ｌ时，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌生长的影
响已呈现明显的抑制作用，当质量浓度为１．０ ｇ／Ｌ时
两种菌的生长已经几乎完全受到抑制。这与本实验组
以前的有关苯甲酸钠单一抑菌实验结果相吻合 ］。
３：２（苯甲酸钠：山梨酸钾）的复合配比对大肠杆
菌的抑菌作用较其他两种配比好；２：３（苯甲酸钠：山
梨酸钾）的复合配比对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较
其他两种配比好。这与该实验组同时研究的这两种防
腐剂的单一抑菌结果一致：苯甲酸钠对大肠杆菌的抑
菌效果要好于对金黄色葡萄球菌，而山梨酸钾的抑茵
效果则反之。因此，随着复合配比中苯甲酸钠比例加
大，复合配比３：２（苯甲酸钠：山梨酸钾）对大肠杆菌
的抑菌作用就突显出来，反之随着复合配比中山梨酸
钾比例加大，复合配比２：３（苯甲酸钠：山梨酸钾）对
金黄色葡萄球菌的抑菌作用就越发显著。需要说明的
是，本研究组发现，在相同质量浓度下复合防腐剂对这
两种菌的抑菌效果要比单独使用更为有效。这与相关
研究结果一致。
另外，含大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的３种复合
防腐剂培养液在实验前ｐＨ值均处于偏中性，而实验
后随着防腐剂质量浓度的升高，ｐＨ值逐渐降低，并呈
现酸性，这与抑菌效果随质量浓度增高而增强是一致
的。这可能是随着苯甲酸钠和山梨酸钾的质量浓度增
大，抑菌效果愈明显，防腐剂干预了细胞正常地代谢，
破坏了细菌细胞壁的结构，改变了细胞膜的通透性，使
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得细胞内代谢的酸性物质进入到了培养液中［６ ］，从
而降低了培养液的ｐＨ值。相关资料表明：苯甲酸钠
和山梨酸钾在酸性条件下具有较强的抑菌作用 ｎ］。
据此，随着培养时间延长培养液的ｐＨ值可能会进一
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［Ｊ］．中国酿造，２０１０（１１）；２６—２８．
步降低，抑菌效果也可能会有所变化，那么这些防腐剂
的抑菌效果随时间延长将呈现怎样的变化趋势，有待
进一步研究。
［４］沈萍，范秀荣，李广武．微生物实验（第３版）［Ｍ］．北京：高
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４ 结论
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生长都具有明显的抑制作用，并且随着质量浓度的升
高，抑菌效果逐渐增强。３种复合配比中，当苯甲酸钠
和山梨酸钾复合配比为３：２时，对大肠杆菌的抑菌效
果较好；当苯甲酸钠和山梨酸钾复合配比为２：３时，
对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好。考虑到防腐剂可
能在人体的叠加毒性，结合本实验结果，３种复合配伍
防腐剂对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最佳抑菌浓度
均为１．０ ｇ／Ｌ。
参考文献：
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Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｅｙｔｏｇｅｎｅｓ ｉｎ ｍｉｎｃｅｄ ｂｅｅｆ ｄｕｒｉｎｇ ｒｅｆｒｉｇｅｒａｔｄ ｓｔｏｒ－ ｅ
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４９—