2024年4月2日发(作者：出洁玉)

蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册

蛋白免疫印迹杂交

（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂

交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。WB是进行蛋白质分析最流行和

成熟的技术之一。本指南讨论Western Blot操作方法及常见问题分析，有助于成功完成WB。

A 蛋白样本提取制备

1 细胞或组织裂解

2 蛋白酶和磷酸酶抑制剂

3 蛋白定量

4 电泳上样样品的准备

B 电泳

1 PAGE胶的制备

2 蛋白分子量Marker

3 阳性对照

4 内参对照

5 上样与电泳

C 转膜与显色（Western Blot）

1 胶中蛋白的检测

2 蛋白转膜

3 膜上蛋白的检测：丽春红

4 膜的封闭

5 一抗的孵育

6 二抗的孵育

7 显色

D 常见问题分析与解决方案

附录1 WB实验试剂配制方法

附录2

SDS-

PAGE胶的配制

2024年4月2日发(作者：出洁玉)

蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册

蛋白免疫印迹杂交

（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂

交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。WB是进行蛋白质分析最流行和

成熟的技术之一。本指南讨论Western Blot操作方法及常见问题分析，有助于成功完成WB。

A 蛋白样本提取制备

1 细胞或组织裂解

2 蛋白酶和磷酸酶抑制剂

3 蛋白定量

4 电泳上样样品的准备

B 电泳

1 PAGE胶的制备

2 蛋白分子量Marker

3 阳性对照

4 内参对照

5 上样与电泳

C 转膜与显色（Western Blot）

1 胶中蛋白的检测

2 蛋白转膜

3 膜上蛋白的检测：丽春红

4 膜的封闭

5 一抗的孵育

6 二抗的孵育

7 显色

D 常见问题分析与解决方案

附录1 WB实验试剂配制方法

附录2

SDS-

PAGE胶的配制