2024年4月11日发(作者：盖健柏)
DNS法测定发酵液中葡萄糖浓度
一、 实验原理
在碱性条件下，葡萄糖与DNS（3，5-二硝基水杨酸）试剂反应，葡萄糖被氧化成糖
酸及其他产物，DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，葡萄糖
的量与棕红色物质颜色的深浅相关，利用分光光度计，在550nm波长下测定吸光度值，
查标准曲线并计算便可求出样品中葡萄糖的含量。
二、 材料与试剂
1．仪器：50ml容量瓶，1000ml容量瓶，500ml烧杯，小烧杯，试管（带刻度25ml更
好）10根，棕色瓶
2.试剂：
1）葡萄糖
2）2mol/LNaOH溶液
3）酒石酸钾钠（C
4
H
4
O
6
KNa﹒4H
2
O，Mr=282.22）
4）结晶酚（C
6
H
5
OH,Mr=94.11）
5）无水亚硫酸钠（Na
2
SO
4
,Mr=126.04）
6）蒸馏水
7）DNS
8）DNS试剂配制：准确称取DNS 6.3g于500ml烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，加入
2mol/LNaOH溶液 262ml，再加到 500ml含有酒石酸钾钠185g的热水溶液中，再加结
晶酚 5g和无水亚硫酸钠 5g，搅拌溶解，冷却后移入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至，
充分混匀。贮于棕色瓶中，室温放置一周后使用。
9）葡萄糖标准溶液配制：取适量葡萄糖装入称量瓶，再85°C烘箱烘至恒重，放入干
燥器冷却。精确称取干燥后的葡萄糖 0.5g加蒸馏水溶解，至50ml容量瓶定容，制成
10g/L的葡萄糖溶液。分别取蒸馏水稀释成葡萄糖标准液，浓度为
0.2g/L,0.4g/L,0.6g/L,0.8g/L,1.0g/L,1.2g/L,1.4g/L,1.6g/L,1.8g/L,2.0g/L。
三、 实验步骤
1. 标准曲线制作
分别取标准液1.0ml于25ml刻度试管中，按下表加入试剂，沸水中显色5min。用
冷水冷却到室温后，加水至25ml，摇匀，再550nm处用分光光度计测定上述各溶
液的A
550
值。以葡萄糖浓度为纵坐标，A
550
值为横坐标，作出标准曲线并回归出标
准方程。
试管号
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
葡萄糖标准液浓度/(g/L)
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6
1.8
2.0
加量/ml
0.0
1.0
DNS试剂/ml
3.0
2. 发酵液中还原糖的测定
1） 发酵液过滤或离心得到上清液。
2） 用蒸馏水将上清液稀释到0.2—2.0g/L。
3） 取稀释后的发酵滤液1.0ml于25ml刻度试管中，加入DNS试剂3.0ml，沸水中显色
5min。
4） 冷却到室温后，加蒸馏水定容到25ml，摇匀，在分光光度计波长550nm处测定溶
液的A
550
值。
四、 数据记录
1． 制作标准曲线，计算标准曲线方程，y=ax+b,y为葡萄糖浓度（g/L），x为该浓度下A
550
值。
2． 记录发酵稀释滤液的A
550
值。
3． 计算发酵液中还原糖浓度：将测得发酵稀释滤液的A
550
值代入标准曲线方程，算得浓度，
再乘以稀释倍数，即为发酵液中还原糖浓度。
2024年4月11日发(作者：盖健柏)
DNS法测定发酵液中葡萄糖浓度
一、 实验原理
在碱性条件下，葡萄糖与DNS（3，5-二硝基水杨酸）试剂反应，葡萄糖被氧化成糖
酸及其他产物，DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，葡萄糖
的量与棕红色物质颜色的深浅相关，利用分光光度计，在550nm波长下测定吸光度值，
查标准曲线并计算便可求出样品中葡萄糖的含量。
二、 材料与试剂
1．仪器：50ml容量瓶，1000ml容量瓶，500ml烧杯，小烧杯，试管（带刻度25ml更
好）10根，棕色瓶
2.试剂：
1）葡萄糖
2）2mol/LNaOH溶液
3）酒石酸钾钠（C
4
H
4
O
6
KNa﹒4H
2
O，Mr=282.22）
4）结晶酚（C
6
H
5
OH,Mr=94.11）
5）无水亚硫酸钠（Na
2
SO
4
,Mr=126.04）
6）蒸馏水
7）DNS
8）DNS试剂配制：准确称取DNS 6.3g于500ml烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，加入
2mol/LNaOH溶液 262ml，再加到 500ml含有酒石酸钾钠185g的热水溶液中，再加结
晶酚 5g和无水亚硫酸钠 5g，搅拌溶解，冷却后移入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至，
充分混匀。贮于棕色瓶中，室温放置一周后使用。
9）葡萄糖标准溶液配制：取适量葡萄糖装入称量瓶，再85°C烘箱烘至恒重，放入干
燥器冷却。精确称取干燥后的葡萄糖 0.5g加蒸馏水溶解，至50ml容量瓶定容，制成
10g/L的葡萄糖溶液。分别取蒸馏水稀释成葡萄糖标准液，浓度为
0.2g/L,0.4g/L,0.6g/L,0.8g/L,1.0g/L,1.2g/L,1.4g/L,1.6g/L,1.8g/L,2.0g/L。
三、 实验步骤
1. 标准曲线制作
分别取标准液1.0ml于25ml刻度试管中，按下表加入试剂，沸水中显色5min。用
冷水冷却到室温后，加水至25ml，摇匀，再550nm处用分光光度计测定上述各溶
液的A
550
值。以葡萄糖浓度为纵坐标，A
550
值为横坐标，作出标准曲线并回归出标
准方程。
试管号
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
葡萄糖标准液浓度/(g/L)
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6
1.8
2.0
加量/ml
0.0
1.0
DNS试剂/ml
3.0
2. 发酵液中还原糖的测定
1） 发酵液过滤或离心得到上清液。
2） 用蒸馏水将上清液稀释到0.2—2.0g/L。
3） 取稀释后的发酵滤液1.0ml于25ml刻度试管中，加入DNS试剂3.0ml，沸水中显色
5min。
4） 冷却到室温后，加蒸馏水定容到25ml，摇匀，在分光光度计波长550nm处测定溶
液的A
550
值。
四、 数据记录
1． 制作标准曲线，计算标准曲线方程，y=ax+b,y为葡萄糖浓度（g/L），x为该浓度下A
550
值。
2． 记录发酵稀释滤液的A
550
值。
3． 计算发酵液中还原糖浓度：将测得发酵稀释滤液的A
550
值代入标准曲线方程，算得浓度，
再乘以稀释倍数，即为发酵液中还原糖浓度。