2024年5月24日发(作者：称福)
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福建中医药２００８年６月第３９卷第３期
５１
ｈＨＰＬＣ法测定苦参不同炮制品中苦参碱和氧化苦参碱的含量
游贵君．姜建伟
（三明市药品检验所，福建三明３６５０００）
摘 要： 目的ＨＰＬＣ法测定苦参不同炮制品中苦参碱和氧化苦参碱的含量。 方法ＨＰＬＣ条件：
Ｓｉｎｏｃｈｒｏｍ ＯＤＳ—Ｂｐ ５ ｔｘｍ，４．６ ｍｍＸ２５０ ａｒｉｎ；温度：４０￣（２；流动相：０，０５ ｍｏ］／Ｌ磷酸二氢钠一乙腈一高氯酸钠（４５０ ｍｌ：５０
ｍｌ：５ ｇ．磷酸调节ｐＨ４．４）；流速：１，０ ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长２０５ ｎｍ。 结果苦参不同炮制品中苦参碱、氧化苦参碱含量
及其比例存在明显差异，可为评价苦参不同炮制品的质量提供依据。 结论本方法简便准确，重现性好，能有效控
制该药材质量。
关键词：高效液相色谱法；苦参；苦参碱；氧化苦参碱
中图分类号：Ｒ２８４．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１Ｏ００—３３８Ｘ（２００８）０３一Ｏ０５１—０２
苦参为豆科植物苦参（Ｓｏｐｈｏｒａｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ Ａｉｔ．）的
酒炙品：取苦参生品１５０ ｇ．加酒１５ ｍｌ拌匀闷
干燥根．具有清热燥湿、祛风杀虫、利尿之功效，为
透．置于锅中．用文火炒至药材表面干，取出，５Ｏ℃
临床常用中药．其根中主要含有苦参碱和氧化苦参
干燥１ ｈ．粉碎，过３号筛，粉末备用。
碱…。本实验采用ＨＰＬＣ法同时测定苦参不同炮制 醋炙品：取苦参生品１５０ ｇ．加醋３Ｏ ｍｌ拌匀闷
品中苦参碱、氧化苦参碱含量，通过比较苦参不同 透．置于锅中．用文火炒至药材表面干，取出５Ｏ℃干
炮制品的质量．为合理评价苦参不同炮制品的质量
燥１ ｈ，粉碎，过３号筛，粉末备用。
提供依据。
炒炭品：取苦参生品１５０ ｇ．置于热锅中用武火
１仪器与材料
加热，不断翻动．炒至表面焦黑色，内部焦黄色，取
１．１ 仪器：Ａｇｉｌｅｎｔ １１００全自动高效液相色谱仪：ＵＶ
出，放凉，粉碎，过３号筛，粉末备用。
检测器；Ａｇｉｌｅｎｔ化学工作站；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＢＰ２１ １Ｄ电子
２方法与结果
天平；超声波清洗器（ＫＱ一３２００Ｅ）；３号筛（浙江上虞
２．１ 色谱条件：Ｓｉｎｏｃｈｒｏｍ ＯＤＳ—Ｂｐ ５ ｍ色谱柱
县第一筛具厂）：ＣＭ一１型中药粉碎机（广州壹洲医
（４．６ ｍｍ×２５０ ｍｍ），柱温：４Ｏ℃，流动相：Ｏ．０５ ｔｏｏｌ／Ｌ
疗器械五金制品有限公司）。 磷酸二氢钠一乙腈一高氯酸钠（４５０ ｍｌ：５０ ｍｌ：５ ｇ，
１．２材料：苦参饮片来自三明三真药业有限公司．
ｐＨ４．４）．流速：１ ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长：２０５ ｎｍ。
产地：陕西．批号：２００７１００１、２００７１００３、２００７１００５，
２．２样品液制备
并经本所中药室鉴定为豆科植物苦参（Ｓｏｐｈｏｒａ ２．２．１ 对照品溶液的制备：精密称取苦参碱对照品
ｆｌａｖｅｓｃｅｎ Ａｉｔ．）的干燥根：苦参碱、氧化苦参碱对照品
５．７０ ｍｇ、氧化苦参碱对照品７．８８ ｍｇ，分别加流动相
购自中国药品生物制品检定所；乙腈（色谱纯）；水为 溶解．制成每１ ｍｌ含苦参碱０．０５７ ｍｇ、氧化苦参碱
高纯水；中性氧化铝（１００￣２００目，上海五四化学试 ０．１５７６ ｍｇ的溶液，即得。
剂一厂）；其余试剂为分析纯。
２．２＿２供试品溶液的制备：取上述各粉末（过３号
１．３苦参炮制品制备（均过５Ｏ目筛）生品：取净 筛）约Ｏ．３ ｇ，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液
苦参饮片，粉碎，过３号筛，粉末备用。
Ｏ．３ ｍ１．精密加入三氯甲烷２Ｏ ｍ１．密塞，称定重量，超
烘制品：取净苦参饮片１５０ ｇ．置烘箱内，１２０４－
声处理（功率２５０ Ｗ、频率３３ ｋＨｚ）３０ ｍｉｎ；放冷，再称
５ｑＣ烘制１０ ｍｉｎ．成品具有香气。取出放凉．粉碎．过
定重量，用三氯甲烷萃取，补足减失的重量，摇匀，滤
３号筛，粉末备用。 过。精密量取续滤液５ ｍ１．通过中性氧化铝柱（１ｏ０～
炒黄品：取苦参生品１５０ ｇ．置热锅中用文火炒至 ２００目，５ ｇ，内径ｌ ｃｍ），依次以三氯甲烷、三氯甲烷、
比原色加深时，取出放凉，粉碎，过３号筛，粉末备用。
甲醇（７：３）各１Ｏ ｍｌ洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，
麸炒品：取苦参生品１５０ ｇ．麸皮适量．将麸皮撒 残渣加无水乙醇适量使溶解．并转移至１Ｏ ｍｌ量瓶
在热锅中。用中火加热至冒烟时。加入苦参生品。迅 中．加无水乙醇稀释至刻度．摇匀．即得。
速翻动，炒至药材表面色变深时。取出。筛去麸皮。放 ２．２｜３空白对照液的制备：不加苦参药材粉末．以
凉．粉碎。过３号筛．粉末备用（每１００ ｇ苦参用麦麸
苦参样品溶液提取并制备．即得。
ｌＯ ｇ）。
２．３测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶
收稿日期：２００８—０４—２５
液１Ｏ ｌ，注入液相色谱仪，测定，即得。见图１～图４。
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５２ 福建中医药 第３９卷
～一
—蔓 简 茄
上
一
ｎｌ０ ５＝Ｏ Ｉｏｌｏ １３，０
Ｂ
妇
２．４＿２精密度试验：精密吸取对照品溶液１Ｏ ｌ，连
续测定６次，记录峰面积并计算ＲＳＤ值。苦参碱峰
面积ＲＳＤ＝１．２３％．氧化苦参碱峰面积ＲＳＤ＝
１．３４％，表明精密度良好。
２＿４＿３重复性试验：取同一批样品６份．按样品提
取法提取、测定，结果苦参碱、氧化苦参碱总和的平
均含量为２．７０％，ＲＳＤ为０．９２％，表明分析方法重复
性良好。
图１ 苦参碱对照品
图２氧化苦参碱对照品
Ｃ
¨ｊ ＩＯ ”∞ｍ
２．４．４稳定性试验：取新制备的供试品溶液．在上
图３供试品 图４空白对照液
２．４方法学考察
２＿４＿１ 线性关系考察：分别精密吸取对照品溶液１、
５、８、１Ｏ、１２、ｌ５、２Ｏ ｌ，注入液相色谱仪，以峰面积为
纵坐标，以样品进样量为横坐标．绘制标准曲线并计
算回归方程．得到苦参碱的回归方程为Ｙ＝１．０３５＋
４３３１．７６Ｘ，ｒ＝０．９９９７，线性范围０．０５７ １．１４ Ｉｘｇ／ｌｘｌ。
氧化苦参碱的回归方程为Ｙ一９．７５８＋４７０８７３Ｘ，ｒ＝
０．９９９８，线性范围０．１５７６￣３．１５２ ｇ／ ｌ。
述同一色谱条件下，于０、２…４ ６ ８、１０ ｈ分别进样测
定、计算。苦参碱的峰面积ＲＳＤ为１．０３％，氧化苦参
碱的峰面积ＲＳＤ为１．２３％，表明供试品溶液在１０ ｈ
内稳定。
２．４．５加样回收试验：采用加样回收法，取已知含
量的供试品，分别加入对照品适量，按上述色谱条件
测定，计算回收率。结果表明，方法的回收率良好，见
表１。
表１ 苦参碱回收率试验结果（ｎ＝６ Ｊ
２．５样品测定：对苦参的不同炮制品按上述供试品 少于１．２％ｆ２］。从上述试验测定结果可见，所选苦参药
材的不同炮制品中，除了苦参炭品外，其余炮制品的
溶液和色谱条件进行测定和计算，结果见表２。
表２苦参的不同炮制品中苦参碱、氧化苦参碱含量测定结果
样品 苦参碱含量（％）氧化苦参碱含量（％）总含量（％）
苦参碱、氧化苦参碱总含量均符合药典标准。但是苦
参不同炮制品中有效成分含量差异显著，结果表明：
苦参不同炮制品中苦参碱含量大小为：炒炭品＞炒
黄品＞酒制品＞醋制品＞麸炒品＞烘制品＞生品；
氧化苦参碱含量大小为：生品＞烘制品＞酒制品＞
麸炒品＞炒黄品＞醋制品＞炒炭品。
３．４本次试验还对氨水的用量（０．１、０．２、０．３、０．５ ｍ１）、
超声的时间（２０、３０、５０ ｍｉｎ）、洗脱液的用量（１Ｏ、２Ｏ、
３０ ｍ１）做了对比，结果表明：用０．３ ｍｌ的氨水，超声３Ｏ
３讨论
ｍｉｎ．洗脱液１Ｏ ｍｌ可以得到很好的效果。
３．１ 测定波长的选择：通过对苦参碱和氧化苦参碱
对照品最大吸收波长的统计，确定该波长作为测定
波长．空白对照表明没有溶剂等的干扰。
３．２流动相的选择：采用高氯酸钠作为离子对试
３．５上述实验结果还发现．传统的炮制方法使苦参
碱含量都高于生品，而氧化苦参碱含量以生品为高。
这种比例上的反差对药效有何影响，有待进一步研
究。该研究结果不仅为评价苦参不同炮制品的质量
提供了依据，而且为进一步了解苦参不同炮制品中
剂．可以将这对结构相似的弱碱性化合物完全分离
开．经实验摸索．选用０．０５ ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠一乙腈
高氯酸钠（４５０ ｍｌ：５０ ｍｌ：５ ｇ）溶液为流动相分离效
一
有效成分含量的差异奠定了一定的实验基础。
参考文献：
［１］ 南京中医药大学．中药大辞典（上册）［Ｍ］．２版．上海：上海科
学技术出版社．２００６：１７５６．
［２］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［Ｍ］．北京：化
学Ｔ业 版社．２００５：１４Ｉ．
果较好。
３．３ 《中国药典）２００５年版一部苦参项下规定按干
燥品计算，原药材含苦参碱、氧化苦参碱的总量不得
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福建中医药２００８年６月第３９卷第３期
５１
ｈＨＰＬＣ法测定苦参不同炮制品中苦参碱和氧化苦参碱的含量
游贵君．姜建伟
（三明市药品检验所，福建三明３６５０００）
摘 要： 目的ＨＰＬＣ法测定苦参不同炮制品中苦参碱和氧化苦参碱的含量。 方法ＨＰＬＣ条件：
Ｓｉｎｏｃｈｒｏｍ ＯＤＳ—Ｂｐ ５ ｔｘｍ，４．６ ｍｍＸ２５０ ａｒｉｎ；温度：４０￣（２；流动相：０，０５ ｍｏ］／Ｌ磷酸二氢钠一乙腈一高氯酸钠（４５０ ｍｌ：５０
ｍｌ：５ ｇ．磷酸调节ｐＨ４．４）；流速：１，０ ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长２０５ ｎｍ。 结果苦参不同炮制品中苦参碱、氧化苦参碱含量
及其比例存在明显差异，可为评价苦参不同炮制品的质量提供依据。 结论本方法简便准确，重现性好，能有效控
制该药材质量。
关键词：高效液相色谱法；苦参；苦参碱；氧化苦参碱
中图分类号：Ｒ２８４．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１Ｏ００—３３８Ｘ（２００８）０３一Ｏ０５１—０２
苦参为豆科植物苦参（Ｓｏｐｈｏｒａｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ Ａｉｔ．）的
酒炙品：取苦参生品１５０ ｇ．加酒１５ ｍｌ拌匀闷
干燥根．具有清热燥湿、祛风杀虫、利尿之功效，为
透．置于锅中．用文火炒至药材表面干，取出，５Ｏ℃
临床常用中药．其根中主要含有苦参碱和氧化苦参
干燥１ ｈ．粉碎，过３号筛，粉末备用。
碱…。本实验采用ＨＰＬＣ法同时测定苦参不同炮制 醋炙品：取苦参生品１５０ ｇ．加醋３Ｏ ｍｌ拌匀闷
品中苦参碱、氧化苦参碱含量，通过比较苦参不同 透．置于锅中．用文火炒至药材表面干，取出５Ｏ℃干
炮制品的质量．为合理评价苦参不同炮制品的质量
燥１ ｈ，粉碎，过３号筛，粉末备用。
提供依据。
炒炭品：取苦参生品１５０ ｇ．置于热锅中用武火
１仪器与材料
加热，不断翻动．炒至表面焦黑色，内部焦黄色，取
１．１ 仪器：Ａｇｉｌｅｎｔ １１００全自动高效液相色谱仪：ＵＶ
出，放凉，粉碎，过３号筛，粉末备用。
检测器；Ａｇｉｌｅｎｔ化学工作站；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＢＰ２１ １Ｄ电子
２方法与结果
天平；超声波清洗器（ＫＱ一３２００Ｅ）；３号筛（浙江上虞
２．１ 色谱条件：Ｓｉｎｏｃｈｒｏｍ ＯＤＳ—Ｂｐ ５ ｍ色谱柱
县第一筛具厂）：ＣＭ一１型中药粉碎机（广州壹洲医
（４．６ ｍｍ×２５０ ｍｍ），柱温：４Ｏ℃，流动相：Ｏ．０５ ｔｏｏｌ／Ｌ
疗器械五金制品有限公司）。 磷酸二氢钠一乙腈一高氯酸钠（４５０ ｍｌ：５０ ｍｌ：５ ｇ，
１．２材料：苦参饮片来自三明三真药业有限公司．
ｐＨ４．４）．流速：１ ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长：２０５ ｎｍ。
产地：陕西．批号：２００７１００１、２００７１００３、２００７１００５，
２．２样品液制备
并经本所中药室鉴定为豆科植物苦参（Ｓｏｐｈｏｒａ ２．２．１ 对照品溶液的制备：精密称取苦参碱对照品
ｆｌａｖｅｓｃｅｎ Ａｉｔ．）的干燥根：苦参碱、氧化苦参碱对照品
５．７０ ｍｇ、氧化苦参碱对照品７．８８ ｍｇ，分别加流动相
购自中国药品生物制品检定所；乙腈（色谱纯）；水为 溶解．制成每１ ｍｌ含苦参碱０．０５７ ｍｇ、氧化苦参碱
高纯水；中性氧化铝（１００￣２００目，上海五四化学试 ０．１５７６ ｍｇ的溶液，即得。
剂一厂）；其余试剂为分析纯。
２．２＿２供试品溶液的制备：取上述各粉末（过３号
１．３苦参炮制品制备（均过５Ｏ目筛）生品：取净 筛）约Ｏ．３ ｇ，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液
苦参饮片，粉碎，过３号筛，粉末备用。
Ｏ．３ ｍ１．精密加入三氯甲烷２Ｏ ｍ１．密塞，称定重量，超
烘制品：取净苦参饮片１５０ ｇ．置烘箱内，１２０４－
声处理（功率２５０ Ｗ、频率３３ ｋＨｚ）３０ ｍｉｎ；放冷，再称
５ｑＣ烘制１０ ｍｉｎ．成品具有香气。取出放凉．粉碎．过
定重量，用三氯甲烷萃取，补足减失的重量，摇匀，滤
３号筛，粉末备用。 过。精密量取续滤液５ ｍ１．通过中性氧化铝柱（１ｏ０～
炒黄品：取苦参生品１５０ ｇ．置热锅中用文火炒至 ２００目，５ ｇ，内径ｌ ｃｍ），依次以三氯甲烷、三氯甲烷、
比原色加深时，取出放凉，粉碎，过３号筛，粉末备用。
甲醇（７：３）各１Ｏ ｍｌ洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，
麸炒品：取苦参生品１５０ ｇ．麸皮适量．将麸皮撒 残渣加无水乙醇适量使溶解．并转移至１Ｏ ｍｌ量瓶
在热锅中。用中火加热至冒烟时。加入苦参生品。迅 中．加无水乙醇稀释至刻度．摇匀．即得。
速翻动，炒至药材表面色变深时。取出。筛去麸皮。放 ２．２｜３空白对照液的制备：不加苦参药材粉末．以
凉．粉碎。过３号筛．粉末备用（每１００ ｇ苦参用麦麸
苦参样品溶液提取并制备．即得。
ｌＯ ｇ）。
２．３测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶
收稿日期：２００８—０４—２５
液１Ｏ ｌ，注入液相色谱仪，测定，即得。见图１～图４。
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５２ 福建中医药 第３９卷
～一
—蔓 简 茄
上
一
ｎｌ０ ５＝Ｏ Ｉｏｌｏ １３，０
Ｂ
妇
２．４＿２精密度试验：精密吸取对照品溶液１Ｏ ｌ，连
续测定６次，记录峰面积并计算ＲＳＤ值。苦参碱峰
面积ＲＳＤ＝１．２３％．氧化苦参碱峰面积ＲＳＤ＝
１．３４％，表明精密度良好。
２＿４＿３重复性试验：取同一批样品６份．按样品提
取法提取、测定，结果苦参碱、氧化苦参碱总和的平
均含量为２．７０％，ＲＳＤ为０．９２％，表明分析方法重复
性良好。
图１ 苦参碱对照品
图２氧化苦参碱对照品
Ｃ
¨ｊ ＩＯ ”∞ｍ
２．４．４稳定性试验：取新制备的供试品溶液．在上
图３供试品 图４空白对照液
２．４方法学考察
２＿４＿１ 线性关系考察：分别精密吸取对照品溶液１、
５、８、１Ｏ、１２、ｌ５、２Ｏ ｌ，注入液相色谱仪，以峰面积为
纵坐标，以样品进样量为横坐标．绘制标准曲线并计
算回归方程．得到苦参碱的回归方程为Ｙ＝１．０３５＋
４３３１．７６Ｘ，ｒ＝０．９９９７，线性范围０．０５７ １．１４ Ｉｘｇ／ｌｘｌ。
氧化苦参碱的回归方程为Ｙ一９．７５８＋４７０８７３Ｘ，ｒ＝
０．９９９８，线性范围０．１５７６￣３．１５２ ｇ／ ｌ。
述同一色谱条件下，于０、２…４ ６ ８、１０ ｈ分别进样测
定、计算。苦参碱的峰面积ＲＳＤ为１．０３％，氧化苦参
碱的峰面积ＲＳＤ为１．２３％，表明供试品溶液在１０ ｈ
内稳定。
２．４．５加样回收试验：采用加样回收法，取已知含
量的供试品，分别加入对照品适量，按上述色谱条件
测定，计算回收率。结果表明，方法的回收率良好，见
表１。
表１ 苦参碱回收率试验结果（ｎ＝６ Ｊ
２．５样品测定：对苦参的不同炮制品按上述供试品 少于１．２％ｆ２］。从上述试验测定结果可见，所选苦参药
材的不同炮制品中，除了苦参炭品外，其余炮制品的
溶液和色谱条件进行测定和计算，结果见表２。
表２苦参的不同炮制品中苦参碱、氧化苦参碱含量测定结果
样品 苦参碱含量（％）氧化苦参碱含量（％）总含量（％）
苦参碱、氧化苦参碱总含量均符合药典标准。但是苦
参不同炮制品中有效成分含量差异显著，结果表明：
苦参不同炮制品中苦参碱含量大小为：炒炭品＞炒
黄品＞酒制品＞醋制品＞麸炒品＞烘制品＞生品；
氧化苦参碱含量大小为：生品＞烘制品＞酒制品＞
麸炒品＞炒黄品＞醋制品＞炒炭品。
３．４本次试验还对氨水的用量（０．１、０．２、０．３、０．５ ｍ１）、
超声的时间（２０、３０、５０ ｍｉｎ）、洗脱液的用量（１Ｏ、２Ｏ、
３０ ｍ１）做了对比，结果表明：用０．３ ｍｌ的氨水，超声３Ｏ
３讨论
ｍｉｎ．洗脱液１Ｏ ｍｌ可以得到很好的效果。
３．１ 测定波长的选择：通过对苦参碱和氧化苦参碱
对照品最大吸收波长的统计，确定该波长作为测定
波长．空白对照表明没有溶剂等的干扰。
３．２流动相的选择：采用高氯酸钠作为离子对试
３．５上述实验结果还发现．传统的炮制方法使苦参
碱含量都高于生品，而氧化苦参碱含量以生品为高。
这种比例上的反差对药效有何影响，有待进一步研
究。该研究结果不仅为评价苦参不同炮制品的质量
提供了依据，而且为进一步了解苦参不同炮制品中
剂．可以将这对结构相似的弱碱性化合物完全分离
开．经实验摸索．选用０．０５ ｍｏｌ／Ｌ磷酸二氢钠一乙腈
高氯酸钠（４５０ ｍｌ：５０ ｍｌ：５ ｇ）溶液为流动相分离效
一
有效成分含量的差异奠定了一定的实验基础。
参考文献：
［１］ 南京中医药大学．中药大辞典（上册）［Ｍ］．２版．上海：上海科
学技术出版社．２００６：１７５６．
［２］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［Ｍ］．北京：化
学Ｔ业 版社．２００５：１４Ｉ．
果较好。
３．３ 《中国药典）２００５年版一部苦参项下规定按干
燥品计算，原药材含苦参碱、氧化苦参碱的总量不得