2024年6月2日发(作者:郝思迪)
Dilperchlorate
——细胞膜橙红色荧光探针
产品货号
C017
包装规格
25mg
储存条件:
-20
℃,避光保存。
激发/发射波长:549/565nm
产品说明书
GeneCopoeia,Inc.广州易锦生物技术有限公司
广州高新技术产业开发区广州科学城
掬泉路3号广州国际企业孵化器F区8楼
邮编:510663
电话:4006-020-200
邮箱:******************
网址:
©2016GeneCopoeia,Inc.
Dilperchlorate
使用说明书
产品介绍
DiI即DiIC
18
(3),全称为1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine
perchlorate,是最常用的细胞膜荧光探针之一,呈现橙红色荧光。DiI是一种亲脂性膜
染料,进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。
DiI
在进入细胞膜
之前荧光非常弱,仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiI被激发后可以
发出橙红色的荧光,DiI和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考下图。其中,
最大激发波长为
549nm
,最大发射波长为
565nm
。
长链二烷基羰花青化合物,特别是Dil,被广泛应用于细胞及组织的染色,进行顺行或
逆行的神经元示踪分析。
Dil
不会影响细胞的活力,生长以及基本的生理特性。用
Dil
标记的运动神经元,在培养基条件下持续跟踪时间可长达四周,在体内长达一年。在经
过固定处理的样品中,染料在质膜中以0.2~0.6mm/天的速度缓慢横向扩散均匀标记神
经元;在活体组织中扩散速度可达到6mm/天。经过醛类试剂固定的组织,Dil的扩散
可持续两年。一般情况下,除非细胞膜(例如切片部位)被破坏,未标记的染料不会向
非标记的细胞转移。
光谱特性
DiO,Dil,DiD与DiR结合磷脂双分子层后的标准发射光谱图。
实验步骤
制备储备液
将DiI固体染料溶于DMF或DMSO或乙醇配制为1mM的染色储备液。配制好的储备液,
在避光
-20°C
的条件下至少可以保存
6
个月。
悬浮细胞的染色
1.1
将细胞以
1×10
6
个
/ml
的密度悬浮于无血清培养基中;
1.2
每
1mL
细胞悬液加入
5µl
染色储备液,混匀;
2
Dilperchlorate
使用说明书
1.337
℃孵育
1~20
分钟。不同类型的细胞孵育条件不一样,可参考表格
1
。初始孵育时
间可选择20分钟,然后再进行优化;
1.4将孵育后的细胞悬液37℃,1500rpm,离心5分钟;
1.5
弃去上清,用
37
℃的培养基轻轻悬浮细胞;
1.6
重复以上洗涤步骤(
1.4
和
1.5
)两次;
1.7放置10分钟后测定荧光信号。
贴壁细胞的染色
2.1放置干净的载玻片在培养皿内,培养细胞至所需的融合度;
2.2
取出爬片,用吸水纸从边缘轻轻吸去多余的培养基,然后将爬片放置于湿盒内;
2.3
配制染色液:每
1ml
培养基加入
5µl
细胞染色液;
2.4用移液器吸取100µl步骤2.3中配制好的染色液,从边角处加入爬片,轻轻摇动使
染色液均匀覆盖整个爬片;
2.5
将爬片置于
37
℃孵育,不同类型的细胞孵育的时间不尽相同(参考表
1
);对于未
在表中列出的细胞类型,建议孵育时间设为
20
分钟,然后再进行优化以获得均一
的染色效果;
2.6
吸去染色液,加入温育过的新鲜培养基孵育
10
分钟,重复此洗涤步骤三次。
表1.推荐的细胞染色孵育时间
细胞系
Jurkat
HeLa
P3X
3T3
推荐的孵育时间
2分钟
8分钟
15分钟
15分钟
表,Dil,DiD与DiR光谱特性
Tracer
DiO
DiI
DiD
DiR
激发波长(nm)
484
549
644
750
发射波长(nm)
501
565
665
780
推荐滤光器
Omega
XF23
XF32
XF47
XF112
Chroma
31001
31002
31023
41009
3
Dilperchlorate
使用说明书
使用许可与质量保证
使用限制
以下条款适用于
DiIperchlorate
产品。若您不能接受这些条款,请在5个自然日内将产
品完整退还给GeneCopoeia。产品购买者需遵守最终用户限制许可条例。本产品仅限
购买者内部研究使用,不得使用于人体或诊断、治疗。未经
GeneCopoeia
事先书面同
意,本产品不得转售,不得重新包装或修改后转售,不得用于生产商用产品。
质量保证
GeneCopoeia保证产品与产品数据表中描述的规格保持一致。若经GeneCopoeia证实产品未
达到规格要求,GeneCopoeia将为您替换产品。若无法替换,GeneCopoeia将退款给购买者。此
质量保证仅适用于最初产品购买者。GeneCopoeia仅负责替换产品或退还实际的购买金额。对于由
使用或不正确使用产品产生的损害或使用其他相关材料和试剂产生的损耗,GeneCopoeia不承担责
任。GeneCopoeia不提供任何形式的明示的或者默示的保证,包括对适销性、适用于特定用途的默
示保证。
GeneCopoeia致力于为消费者提供高质量的研究产品。如果您对GeneCopoeia的产品有任何
问题或疑虑,请拨打电话4006-020-200联系我们。
©2016,GeneCopoeia,In
GeneCopoeia,Inc.
9620MedicalCenterDrive
Rockville,MD20850
Tel:301-762-0888Fax:301-762-3888
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Web:
广州易锦生物技术有限公司
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℃,避光保存。
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18
(3),全称为1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine
perchlorate,是最常用的细胞膜荧光探针之一,呈现橙红色荧光。DiI是一种亲脂性膜
染料,进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。
DiI
在进入细胞膜
之前荧光非常弱,仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiI被激发后可以
发出橙红色的荧光,DiI和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考下图。其中,
最大激发波长为
549nm
,最大发射波长为
565nm
。
长链二烷基羰花青化合物,特别是Dil,被广泛应用于细胞及组织的染色,进行顺行或
逆行的神经元示踪分析。
Dil
不会影响细胞的活力,生长以及基本的生理特性。用
Dil
标记的运动神经元,在培养基条件下持续跟踪时间可长达四周,在体内长达一年。在经
过固定处理的样品中,染料在质膜中以0.2~0.6mm/天的速度缓慢横向扩散均匀标记神
经元;在活体组织中扩散速度可达到6mm/天。经过醛类试剂固定的组织,Dil的扩散
可持续两年。一般情况下,除非细胞膜(例如切片部位)被破坏,未标记的染料不会向
非标记的细胞转移。
光谱特性
DiO,Dil,DiD与DiR结合磷脂双分子层后的标准发射光谱图。
实验步骤
制备储备液
将DiI固体染料溶于DMF或DMSO或乙醇配制为1mM的染色储备液。配制好的储备液,
在避光
-20°C
的条件下至少可以保存
6
个月。
悬浮细胞的染色
1.1
将细胞以
1×10
6
个
/ml
的密度悬浮于无血清培养基中;
1.2
每
1mL
细胞悬液加入
5µl
染色储备液,混匀;
2
Dilperchlorate
使用说明书
1.337
℃孵育
1~20
分钟。不同类型的细胞孵育条件不一样,可参考表格
1
。初始孵育时
间可选择20分钟,然后再进行优化;
1.4将孵育后的细胞悬液37℃,1500rpm,离心5分钟;
1.5
弃去上清,用
37
℃的培养基轻轻悬浮细胞;
1.6
重复以上洗涤步骤(
1.4
和
1.5
)两次;
1.7放置10分钟后测定荧光信号。
贴壁细胞的染色
2.1放置干净的载玻片在培养皿内,培养细胞至所需的融合度;
2.2
取出爬片,用吸水纸从边缘轻轻吸去多余的培养基,然后将爬片放置于湿盒内;
2.3
配制染色液:每
1ml
培养基加入
5µl
细胞染色液;
2.4用移液器吸取100µl步骤2.3中配制好的染色液,从边角处加入爬片,轻轻摇动使
染色液均匀覆盖整个爬片;
2.5
将爬片置于
37
℃孵育,不同类型的细胞孵育的时间不尽相同(参考表
1
);对于未
在表中列出的细胞类型,建议孵育时间设为
20
分钟,然后再进行优化以获得均一
的染色效果;
2.6
吸去染色液,加入温育过的新鲜培养基孵育
10
分钟,重复此洗涤步骤三次。
表1.推荐的细胞染色孵育时间
细胞系
Jurkat
HeLa
P3X
3T3
推荐的孵育时间
2分钟
8分钟
15分钟
15分钟
表,Dil,DiD与DiR光谱特性
Tracer
DiO
DiI
DiD
DiR
激发波长(nm)
484
549
644
750
发射波长(nm)
501
565
665
780
推荐滤光器
Omega
XF23
XF32
XF47
XF112
Chroma
31001
31002
31023
41009
3
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以下条款适用于
DiIperchlorate
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