2024年10月9日发(作者：褒从菡)
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测定结核分枝杆菌感染者对经典二线药和新型抗菌药敏感
性的BECTEC MGIT 960技术的多通道实验室确证
BECTEC MGIT 960系统被证明是具有测定二线药物敏感性的能力的，是针对对分支杆
菌的鉴定及其药物敏感性的一个全自动、无辐射、无侵害性的测定系统。在这个研究中，它
被运用在三个部分（第一部分主要为敏感性的筛选，第二部分为耐药性的筛选，第三部分为
对于第一、二部分得出的最佳药物浓度的最终测定），相比于BECTEC 460TB系统，我们在
960系统上测定并确认了7中药物的临界浓度。这7种药物及其浓度分别是：amikacin阿米
卡星 1.0 µg/ml,capreomycin卷曲霉素 2.5µg/ml，ethionmide乙硫异烟胺5.0µg/ml，
protionamide丙硫异烟胺2.5µg/ml，ofloxacin氧氟沙星2.0µg/ml，rifabutin利福布丁0.5µg/ml，
linezolid利奈唑胺1.0µg/ml。我们的结果可论证，对于快速测定结核分枝杆菌的二线药物的
敏感性，BECTEC MGIT 960系统是一个精确的系统。
对于一线和二线抗结核药的药敏测定，有辐射的肉汤培养系统BECTEC 460TB（Becton
Dickinson Diagnostic Systems，Sparks，MD ）被很好的建立起来，并被认为是一种“金标
准”（15）。但是，出于对辐射性材料的使用和处理问题，急需可商用的无辐射肉汤培养和药
物敏感性测定方法。BECTEC MGIT 960系统（Becton Dickinson Diagnostic Systems）是一种
功能上可同BECTEC 460TB相媲美且无辐射的新系统。对于临床结核分支杆菌的治愈和测
定其对一线药物的敏感性的价值，BECTEC MGIT 960系统已经被做过全面透彻的研究
（3,4,5,7，10,11,12）。然而没有通过研究的多通道技术已经用在了用于结核杆菌的治疗的确
证二线药物和新的抗菌药物的敏感性上。同时依据WHO的报告，全球性的耐药处于令人与
日俱增的的担忧中（18）。一些国家报道了很高的耐药性，甚至是对二线药物的（1,17）。因
此，提供药物敏感性测定的无辐射肉汤培养系统十分重要，除了已经研究成熟的一线药物。
多通道研究的首要目标是建立一个基础的科学实验计划，先确证七种二线药和新型的抗
菌药（包括一些近来才被推荐的）的临界测试浓度，然后再进行大量的临床菌株的测试。以
BECTEC 460TB为金标准作对比，通过本系统已经确证了大部分药物的临界测试浓度。这
个研究将会为快速的测试敏感性的肉汤培养提供一个前瞻性的指导大纲，不仅包括本实验中
的药物，而且还包括那些现在被用于或者不久的将来会被用于结核治疗的药物。
材料和方法
抗菌剂 amikacin(AK) , capreomycin(CM), ethionamide(ETH), protionamide(PTH),
ofloxacin(OFX), rifabutin(RBT) and linezolid(LIN)，这些所得药都有一定的化学纯度（除了
RBT,LIN和其他的被主要资助者分配到其他点的药物）.LIN，CM和AK用去离子水溶解，
ETH和PTH溶于乙醇然后用去离子水稀释，OFX溶于0.1N NaOH然后用去离子水稀释，
RBT溶于甲醇中然后用去离子水稀释。用于储存的药敏浓度至少要高于测试需要的浓度40
倍以上。除了ETH和RBT，其他的所有药物都需要用聚碳酸酯过滤膜进行过滤，并丢去滤
液的前20%。所有药都将平均分配到冻存管中，在-70℃温度保存，复溶使用后就要丢弃。
测试方法和媒介。配套的MGIT培养管要用在相应的960设备上。应严格遵守MGIT 960
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上被推荐的用做药敏标准步骤。为了避免错误耐药的结果，接种的培养液应进行充分混匀以
消除块状体。混匀后的菌悬液要静置至少15分钟，上清液就可被用来接种于药物培养和质
控上，随后用商家设备进行一线药的药敏判读。所有接种过的MGIT 960药敏管放入培养架
上并用药敏测试输入功能将其作为未知药品放入MGIT 960机器中，当质控管中菌落达到
400个有价值单位时，MGIT 960设备会提示任务完成，此时其他药敏管中菌落超过100的
为耐药，少于100则为敏感。BECTEC 460的12B液基培养基会作为对照，按照BECTEC 460
的操作说明进行操作。所有的培养基和试剂由商家提供。
研究设计
这个方案将进行三部分的研究，第一部分被设计用来确立一个基本的测试程序和抗菌浓
度的范围每种药至少要测试三种浓度，SOP文件也要整理出来。三个实验点要选出10株全
敏感菌种。九株来自临床第十种是和ETH类同，在一部分不用测试。
第二部分是要基于第一部分的结果来调整一些也的浓度。21株不同程度耐药菌株分给
三个点进行药物测试，每种药至少经测试三个浓度。那些菌株进行传代培养后存于arbiter
（仲裁者、权威者）点用于培训运用。
第三部分进行第二部分确定的最佳药物浓度的最终测试，在私人点搜集的临床菌落也在
将与本部分在所有点进行测试。测试的药物浓度同第二部分相同，但会去除最低的浓度，
ETH和PTH将会用更高一些的浓度。
菌株的选择与分配。一、二部分由PI点筛选的菌株由临床所得，耐药菌株和敏感菌株
要尽量一样多，他们选择在BECTEC 460和L-J上进行测试，以得出耐药率。只有那些被选
菌株的耐药情况同研究所的的耐药情况相同，才进行L-J的传代培养。一旦培养出来，就送
往其他点，所有的测试点都要努力的去利用由PI点所提供的原始L-J培养结果，菌株要以
最小菌群传代培养下去。第三部分，每个点都要自己选择自己的临床菌株，每个点都要研究
那些被选希望是高耐药和多重耐药的菌株。
质量控制和差异分析 H37Rv在三个部分都会运用，如果质控结果有问题，那么同批
次的结果都要重做。如两种方法的结果不同，两种方法都要重做。重做的结果用于分析。如
果以上重做的结果仍然存在差异，那么就需要将那些菌株送到arbiter点进行重测（用
BECTEC 460和960重查两次）。
结 果
第一部分。测试的QC结果同敏感结果相符合。在三个实验室，十种菌株对AK,OFX
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和RBT的敏感性高度一致。所有测试菌株都对AK敏感，其最小抑菌浓度为0.5 µg/ml或者
更低。CM的最小抑菌浓度为1.25 µg/ml，而同时甚至在2.5 µg/ml浓度时，ETH的30个测
试在BECTEC 460中仍有2个耐药，在MGIT 960中仍有4个耐药。在浓度2.0 µg/ml时，
LINE在MGIT 960的三十个测试中只有一个耐药，而在浓度为0.5 µg/ml或甚至更低时，ETH
在BECTEC460和MGIT 960中的耐药率分别为77%和67%。
第二部分 本部分结果本总结在了表3中。测试的菌株对一种及以上的二线药有耐
药性，那些结果对不同程度的的耐药很有说明性。除了ETH，BECTEC 460的药物浓度结果
同已经确证了的结果相同。依据在本实验中的到的数据，ETH的临界浓度为2.5 µg/ml。总
的来说，CM,ETH和PTH在MGIT 960中的MIC都要高于BECTEC 460中的。因此，那三
种药的cutoff值就可以确定，它要高BECTEC 460所界定的值。综合三个点的临界药物浓度
值分析所得的cutoff值，在表4中显示，这些临界浓度在两个系统之间基本一致。例如，不
拉不拉不拉。
第三部分 由于每个点测试的都是自己的结核杆菌标本，因此点与点之间的培养及耐
药数量不尽相同，for instance。。。。表格六
表格6 MGIT 960与BECTEC 460相比 所得的最终的药物临界浓度（突破点）
Drug
临界浓度（µg/ml）
MGIT 960 BECTEC 460
Amikacin 1.0 1.0
Capreomycin 2.5 1.25
Ethionamide 5.0 2.5
Protionamide 2.5 1.25
Ofloxacin 2.0 2.0
Rifabutin 0.5 0.5
Linezolid 1.0 1.0
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性的BECTEC MGIT 960技术的多通道实验室确证
BECTEC MGIT 960系统被证明是具有测定二线药物敏感性的能力的，是针对对分支杆
菌的鉴定及其药物敏感性的一个全自动、无辐射、无侵害性的测定系统。在这个研究中，它
被运用在三个部分（第一部分主要为敏感性的筛选，第二部分为耐药性的筛选，第三部分为
对于第一、二部分得出的最佳药物浓度的最终测定），相比于BECTEC 460TB系统，我们在
960系统上测定并确认了7中药物的临界浓度。这7种药物及其浓度分别是：amikacin阿米
卡星 1.0 µg/ml,capreomycin卷曲霉素 2.5µg/ml，ethionmide乙硫异烟胺5.0µg/ml，
protionamide丙硫异烟胺2.5µg/ml，ofloxacin氧氟沙星2.0µg/ml，rifabutin利福布丁0.5µg/ml，
linezolid利奈唑胺1.0µg/ml。我们的结果可论证，对于快速测定结核分枝杆菌的二线药物的
敏感性，BECTEC MGIT 960系统是一个精确的系统。
对于一线和二线抗结核药的药敏测定，有辐射的肉汤培养系统BECTEC 460TB（Becton
Dickinson Diagnostic Systems，Sparks，MD ）被很好的建立起来，并被认为是一种“金标
准”（15）。但是，出于对辐射性材料的使用和处理问题，急需可商用的无辐射肉汤培养和药
物敏感性测定方法。BECTEC MGIT 960系统（Becton Dickinson Diagnostic Systems）是一种
功能上可同BECTEC 460TB相媲美且无辐射的新系统。对于临床结核分支杆菌的治愈和测
定其对一线药物的敏感性的价值，BECTEC MGIT 960系统已经被做过全面透彻的研究
（3,4,5,7，10,11,12）。然而没有通过研究的多通道技术已经用在了用于结核杆菌的治疗的确
证二线药物和新的抗菌药物的敏感性上。同时依据WHO的报告，全球性的耐药处于令人与
日俱增的的担忧中（18）。一些国家报道了很高的耐药性，甚至是对二线药物的（1,17）。因
此，提供药物敏感性测定的无辐射肉汤培养系统十分重要，除了已经研究成熟的一线药物。
多通道研究的首要目标是建立一个基础的科学实验计划，先确证七种二线药和新型的抗
菌药（包括一些近来才被推荐的）的临界测试浓度，然后再进行大量的临床菌株的测试。以
BECTEC 460TB为金标准作对比，通过本系统已经确证了大部分药物的临界测试浓度。这
个研究将会为快速的测试敏感性的肉汤培养提供一个前瞻性的指导大纲，不仅包括本实验中
的药物，而且还包括那些现在被用于或者不久的将来会被用于结核治疗的药物。
材料和方法
抗菌剂 amikacin(AK) , capreomycin(CM), ethionamide(ETH), protionamide(PTH),
ofloxacin(OFX), rifabutin(RBT) and linezolid(LIN)，这些所得药都有一定的化学纯度（除了
RBT,LIN和其他的被主要资助者分配到其他点的药物）.LIN，CM和AK用去离子水溶解，
ETH和PTH溶于乙醇然后用去离子水稀释，OFX溶于0.1N NaOH然后用去离子水稀释，
RBT溶于甲醇中然后用去离子水稀释。用于储存的药敏浓度至少要高于测试需要的浓度40
倍以上。除了ETH和RBT，其他的所有药物都需要用聚碳酸酯过滤膜进行过滤，并丢去滤
液的前20%。所有药都将平均分配到冻存管中，在-70℃温度保存，复溶使用后就要丢弃。
测试方法和媒介。配套的MGIT培养管要用在相应的960设备上。应严格遵守MGIT 960
精品文档
精品文档
上被推荐的用做药敏标准步骤。为了避免错误耐药的结果，接种的培养液应进行充分混匀以
消除块状体。混匀后的菌悬液要静置至少15分钟，上清液就可被用来接种于药物培养和质
控上，随后用商家设备进行一线药的药敏判读。所有接种过的MGIT 960药敏管放入培养架
上并用药敏测试输入功能将其作为未知药品放入MGIT 960机器中，当质控管中菌落达到
400个有价值单位时，MGIT 960设备会提示任务完成，此时其他药敏管中菌落超过100的
为耐药，少于100则为敏感。BECTEC 460的12B液基培养基会作为对照，按照BECTEC 460
的操作说明进行操作。所有的培养基和试剂由商家提供。
研究设计
这个方案将进行三部分的研究，第一部分被设计用来确立一个基本的测试程序和抗菌浓
度的范围每种药至少要测试三种浓度，SOP文件也要整理出来。三个实验点要选出10株全
敏感菌种。九株来自临床第十种是和ETH类同，在一部分不用测试。
第二部分是要基于第一部分的结果来调整一些也的浓度。21株不同程度耐药菌株分给
三个点进行药物测试，每种药至少经测试三个浓度。那些菌株进行传代培养后存于arbiter
（仲裁者、权威者）点用于培训运用。
第三部分进行第二部分确定的最佳药物浓度的最终测试，在私人点搜集的临床菌落也在
将与本部分在所有点进行测试。测试的药物浓度同第二部分相同，但会去除最低的浓度，
ETH和PTH将会用更高一些的浓度。
菌株的选择与分配。一、二部分由PI点筛选的菌株由临床所得，耐药菌株和敏感菌株
要尽量一样多，他们选择在BECTEC 460和L-J上进行测试，以得出耐药率。只有那些被选
菌株的耐药情况同研究所的的耐药情况相同，才进行L-J的传代培养。一旦培养出来，就送
往其他点，所有的测试点都要努力的去利用由PI点所提供的原始L-J培养结果，菌株要以
最小菌群传代培养下去。第三部分，每个点都要自己选择自己的临床菌株，每个点都要研究
那些被选希望是高耐药和多重耐药的菌株。
质量控制和差异分析 H37Rv在三个部分都会运用，如果质控结果有问题，那么同批
次的结果都要重做。如两种方法的结果不同，两种方法都要重做。重做的结果用于分析。如
果以上重做的结果仍然存在差异，那么就需要将那些菌株送到arbiter点进行重测（用
BECTEC 460和960重查两次）。
结 果
第一部分。测试的QC结果同敏感结果相符合。在三个实验室，十种菌株对AK,OFX
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和RBT的敏感性高度一致。所有测试菌株都对AK敏感，其最小抑菌浓度为0.5 µg/ml或者
更低。CM的最小抑菌浓度为1.25 µg/ml，而同时甚至在2.5 µg/ml浓度时，ETH的30个测
试在BECTEC 460中仍有2个耐药，在MGIT 960中仍有4个耐药。在浓度2.0 µg/ml时，
LINE在MGIT 960的三十个测试中只有一个耐药，而在浓度为0.5 µg/ml或甚至更低时，ETH
在BECTEC460和MGIT 960中的耐药率分别为77%和67%。
第二部分 本部分结果本总结在了表3中。测试的菌株对一种及以上的二线药有耐
药性，那些结果对不同程度的的耐药很有说明性。除了ETH，BECTEC 460的药物浓度结果
同已经确证了的结果相同。依据在本实验中的到的数据，ETH的临界浓度为2.5 µg/ml。总
的来说，CM,ETH和PTH在MGIT 960中的MIC都要高于BECTEC 460中的。因此，那三
种药的cutoff值就可以确定，它要高BECTEC 460所界定的值。综合三个点的临界药物浓度
值分析所得的cutoff值，在表4中显示，这些临界浓度在两个系统之间基本一致。例如，不
拉不拉不拉。
第三部分 由于每个点测试的都是自己的结核杆菌标本，因此点与点之间的培养及耐
药数量不尽相同，for instance。。。。表格六
表格6 MGIT 960与BECTEC 460相比 所得的最终的药物临界浓度（突破点）
Drug
临界浓度（µg/ml）
MGIT 960 BECTEC 460
Amikacin 1.0 1.0
Capreomycin 2.5 1.25
Ethionamide 5.0 2.5
Protionamide 2.5 1.25
Ofloxacin 2.0 2.0
Rifabutin 0.5 0.5
Linezolid 1.0 1.0
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