2024年3月10日发(作者：骑痴凝)

亿　与生物互程２０１１，Ｖｏ１．２８　Ｎｏ．１０　

Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　

分析测试固　

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—５４２５．２０１１．１０．０２３　

微生物细胞脂肪酸的组成分析　

柳志杰。章辉。周利，花强　

（华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海２００２３７）　

摘　要：应用气相色谱一质谱联用技术（ＧＣ—ＭＳ）对微生物细胞脂肪酸的组成进行了分析。结果表明，茵体的代谢状　

态分为两个时期：茵体生长期和油脂积累期；茵体细胞主要积累油酸（Ｃ１８：１）、软脂酸（Ｃ１６：ｏ）和棕榈油酸（Ｃ１６：１）；通过　

发酵，最终得到的微生物油脂脂肪酸组成为：油酸（Ｃ１８：１）６４．８ｏ　、软脂酸（Ｃ１６：０）１９．９０　、棕榈油酸（Ｃｌ６：１）１０．９４　、　

硬脂酸（Ｃ１８：Ｏ）３．７２　和亚油酸（Ｃ１８：２）０．５６％。ＧＣ—ＭＳ可以很好地用于脂肪酸甲酯的分析，具有普遍的应用意义。　

关键词：微生物细胞；油脂含量；脂肪酸组成；气相色谱一质谱联用技术　

中图分类号：Ｏ　６５７．７　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２—５４２５（２０１１）１０—００８５—０３　

微生物油脂又称单细胞油脂，是微生物在一定条　

件下产生并储存于菌体内的甘油脂，其脂肪酸组成以　

ｃ　Ｃ　。系脂肪酸（如硬脂酸、油酸和亚油酸）为主。将　

微生物油脂进行酯化反应，可以获得生物燃料＿】　］。　

三氟化硼溶液、癸酸（ＣｌＯ：Ｏ），Ｓｉｇｍａ公司；其它试　

剂均为分析纯。　

１．２培养基　

合成培养基（ｇ・Ｌ　）：葡萄糖１２．０，　

（ＮＨ４）２ＳＯ４０．４，ＫＨ２ＰＯ４　３．０，ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ　０．５，Ｌ一　

脂肪酸含量及组成可以作为微生物分类鉴定的指　

标　］，相对于抗原检测和杂交，具有不需要探针的优　

势；在代谢组学研究中，微生物细胞脂肪酸组成及含量　

的动态变化可以反映细胞的代谢状态ｌ＿６］。因此，微生　

物脂肪酸组成及含量分析具有重要的意义。　

组氨酸０．０３，Ｌ－亮氨酸０．１２５，Ｌ一蛋氨酸０．０２５，尿嘧　

啶０．０４，微量元素溶液１　ｍＬ，维生素溶液１　ｍＬ。　

微量元素溶液（ｇ・Ｌ　）：ＥＤＴＡ　１５．０，ＺｎＳＯ　・　

７Ｈ　２　ｏ　４．５，ＣｏＣ１２・６Ｈ２Ｏ　０．３，ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ　１．０，　

ＣｕＳＯ４・５Ｈ２　Ｏ　０．３，ＣａＣｌ２・２Ｈ２ｏ　４．５，ＦｅＳ０４・　

７Ｈ２Ｏ　３．０，ＮａＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ　０．４，Ｈ３ＢＯ３　１．０，Ｋ１　０．１。　

文献报道细胞内油脂总含量的分析方法有苏丹黑　

Ｂ染色法ｌ＿７］、磷酸香草醛法＿８］以及尼罗红染色法＿９］，但　

这些方法均无法分析细胞油脂脂肪酸的组成。而气相　维生素溶液（ｇ・Ｌ　）：Ｄ－生物素０．０５，泛酸钙　

色谱一质谱联用技术（ＧＣ—ＭＳ）＿】０］可以直接通过图库　

检索得到样品的信息，不需要再通过标样比对进行样　

品的确认，分析方便，具有普遍的应用意义。因此，作　

者在此采用ＧＣ－ＭＳ法，对油脂酵母皮状丝孢酵母的　

油脂分布以及脂肪酸组成进行分析，拟为微生物细胞　

脂肪酸的分析应用提供新途径。　

１．０，烟酸１．０，维生素Ｂ　１．０，维生素Ｂ　１．０，对氨基苯　

甲酸０．２，肌醇２５。　

１．３培养条件　

将对数生长中期的种子液接种到装有０．８　Ｌ培养　

基的１．５　Ｌ发酵罐中，于３Ｏ℃、４８０　ｒ・ｍｉｎ　培养，通　

气量１．５　ｖｖｍ。发酵过程中的溶氧、ｐＨ值、尾气等数　

据全部使用Ｂｉｏｓｔａｒ软件进行在线采集。　

１．４微生物细胞油脂的提取ｎ妇及脂肪酸组成分析　

采用酸热一有机溶剂萃取法提取微生物细胞油　

１　实验　

１．１菌株与试剂　

油脂酵母皮状丝孢酵母（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ　ｃｕｔａｎｅ—　

Ｕｍ），自行保藏。　

脂：离心收集菌体；向菌体中加入适量４　ｔｏｏｌ・Ｌ　

ＨＣ１溶液，浸泡３０　ｒａｉｎ，煮沸１０　ｍｉｎ；置于冰上速冷，　

基金项目：上海市浦江人才计划项目（ｏｇＰＪ１４０３８），国家重点实验室专项经费资助项目（２０６０２０４），教育部留学回国人员科研启动基　

金资助项目，上海市重点学科建设项目（Ｂ５０５）　

收稿日期：２Ｏ１１一Ｏ５—２４　

作者简介：柳志杰（１９８８一），男，湖北黄冈人，硕士研究生，研究方向：代谢工程，Ｅ—ｍａｉｌ：￣１ｉｕ６６＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｒｎ；通讯作者：花强，教授，Ｅ＿　

ｍａｉｌ：ｑｈｕａ＠ｅｃｕｓｔ．ｅｄｕ．ｃｎ。　

孵育；加入４　ＢＶ的甲醇一氯仿（１：２，体积比）溶液，　

混合，封口，置于摇床中于１８０　ｒ・ｍｉｎ　萃取３０　ｍｉｎ；　

１２　０００　ｇ离心５　ｍｉｎ，取下层有机层；重复萃取１次；将　

所收集的有机溶剂过滤，旋转蒸发去除有机溶剂，称　

重。　

将油脂溶解于３　ｍＩ　０．５　ｍｏｌ・Ｉ　氢氧化钾一甲　

醇溶液，７５℃水浴２Ｏ　ｍｉｎ；加入３　ｍＬ　１４％三氟化硼　

溶液，７５℃水浴２Ｏ　ｍｉｎ；加１　ｍＬ饱和氯化钠溶液，再　

加入适量癸酸作为内标，离心取上清，在氮气下吹干，　

用正己烷定容；过滤，用ＧＣ—ＭＳ法分析脂肪酸组成。　

ＧＣ—ＭＳ分析条件：采用Ａｇｉｌｅｎｔ　６８９０—５９７５型气　

质联用仪。气相色谱柱：ＨＰ一５ＭＳ（３０　ＩＴＩ×０．２５　ＩｎＦｌｌ，　

０．２５“ｍ）；升温程序：１８０℃保留２　ｍｉｎ，以５℃・　

ａｒｉｎ　升温至２５０℃；载气（氦气，纯度≥９９．９９６　）流　

速１　ｍＬ・ｍｉｎ　；进样量０．２　Ｌ；不分流进样；进样口　

温度２５０℃，离子源温度２３０℃；一７０　ｅＶ轰击；质谱　

仪扫描范围７Ｏ～５６０　，／ｚ；溶剂延迟１．５　ｍｉｎ。　

１．５分析测试　

（１）细胞干重的测定：取一定量发酵液于４℃、　

１２　０００　ｇ离心１０　ｍｉｎ，用去离子水洗２次后置于８５℃　

烘箱中烘至恒重，称重。　

（２）葡萄糖浓度的测定：采用ＨＰＬＣ法。Ａｇｉｌｅｎｔ　

１２００型高效液相色谱仪，配示差折光分析检测器；色　

谱柱为Ｓｐｈｅｒｉｓｏｒｂ　ＮＨ　２柱（０．４６　ｃｍ×２５　ｃｍ，７　ｍ）；　

流动相为乙腈一水（８０：２０）；流速１　ｒｎＩ　・ｒａｉｎ一　；检测　

器温度４０℃，柱温４０℃。　

（３）氮源浓度的测定：采用苯酚一次氯酸钠法ｌ１　。　

２结果与讨论　

２．１茵体生长及油脂积累情况（图１）　

Ｚ　

堵乔时间／ｈ　

＋ＮＨ：　＋生长量—☆一葡萄糖—ｏ一油脂　

图１　皮状丝孢酵母菌体生长及油脂积累情况　

Ｆｉｇ．１　Ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｌｉｐｉｄ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ．ｃｕｔａｎｅｕｍ　

由图１可以看出，皮状丝孢酵母的生长可以分为　

两个时期：菌体生长期和油脂积累期。Ｏ～２４　ｈ，菌体　

柳志杰等：微生物细胞脂肪酸的组成分析／２０１１年囊１０髓　

快速生长，细胞内油脂含量基本不变，为菌体生长期；　

２４　ｈ后，氮源消耗完，菌体生长变慢，细胞内油脂含量　

不断升高，６０　ｈ时，葡萄糖耗尽，油脂含量达到最大值　

３１　，为油脂积累期。　

２．２菌体细胞油脂脂肪酸的组成分析　

皮状丝孢酵母体内积累的油脂经酸热～有机溶剂　

萃取、甲酯化处理后进行ＧＣ—ＭＳ分析，得到的总离子　

流图见图２。　

加　印　如

加　∞　如

１．Ｄｅｃａｎｏｉｃ　ａｃｉｄ’ｍｅｔｈｙｌ　ｅ￣ｔｅｒ（ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｓｔａｎｄａｒｄ）　２．９　Ｈｅｘａｄｅｃａｎｏｉ

∞　∞　∞

ｃ　

ａｃｉｄ，ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ，（Ｚ）　３．Ｈｅｘａｄｅｃａｎｏｉｃ　ａｃｉｄ，ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　４．９，　

１２－Ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎ０ｉｃ　ａｃｉｄ（Ｚ，Ｚ）一，ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　５．９－０ｃｔａｄｅｅｅｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　

（Ｚ）一，ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　６．Ｏｃｔａｄｅｃａｎｏｌｃ　ａｃｉｄ，ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　

图２皮状丝孢酵母油脂脂肪酸甲酯的总离子流图　

Ｆｉｇ．２　Ｔｏｔａｌ　ｉｏｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　

ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　ｆｒｏｍ　ｃｕｔａｎｅｕｍ　ｌｉｐｉｄ　

由图２可以看出，脂肪酸甲酯得到了很好的分离。　

菌体细胞油脂脂肪酸组成主要为油酸（Ｃ１８：１）、软脂　

酸（Ｃ１６：０）、棕榈油酸（Ｃ１６：１）、硬脂酸（Ｃ１８：０）和亚油　

酸（Ｃ】８：２）。　

对皮状丝孢酵母油脂脂肪酸的积累及组成进行分　

析，结果见图３和图４。　

ｇ　

●　

吕　

嘴　｝

一

璺

－咖＿　。囵Ｉ圜＿。一一一．口　硼８啊．　．皿－。　

Ｃｌ６：ｌ　Ｃ１６：０　Ｃｌ　：２　Ｃｌ８：ｌ　Ｃ１８：Ｕ　

油脂脂肪酸　

图３　皮状丝孢酵母油脂脂肪酸的积累情况　

Ｆｉｇ．３　Ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ．ｃｕｔａｎｅｕｍ　ｌｉｐｉｄｓ　

由图３和图４可以看出，菌体细胞在发酵过程中　

主要积累油酸（Ｃ１８：１），其次为软脂酸（Ｃ１６：０）和棕榈　

油酸（Ｃ１６：１），硬脂酸（Ｃ１８：０）积累速率较慢，亚油酸　

一

一

～镀　

柳志杰等：微生物细胞脂肪酸的组成分析／２０１１年第ｌ０期　

７０　

６０　

５０　

［１］　

Ｌｉｕ　Ｔ，Ｖｏｒａ　Ｈ。Ｋｈｏｓｌａ　Ｃ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｏｆ　

ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ［Ｊ］．Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒ—　

ｉｎｇ，２０１０，１２（４）：３７８—３８６．　

ｕ　Ｔ　Ｇ，Ｋｈｏｓｌａ　Ｃ．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｏｆ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ｆｏｒ　

［２］　

Ｌｉ

４０　

３０　

２０　

１０　

ｂｉｏｆｕｅｌ　ｐｒ０ｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｎｎｕａｌ　Ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０１０，４４：５３—　

６９．　

：　删＿

．

Ｏ　

Ｈ￣ＩＨＩ几．　．ｎ圈一姗■　

Ｃ１６：Ｏ　ｃ１８：２　ｃｌ８：ｌ　ｃＩ８：ｏ　

ｐｉｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｔｏ　ｃｈｅｍｏｔａｘ—　

Ｅ３］　

Ｔｏｒｎａｂｅｎｅ　Ｔ　Ｇ．Ｌｉ

ｏｎｏｍｙ［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９８５，１８：２０９—２３４．　

ｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｂｙ　ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｏｆ　ｃｅｌ　

［４］　

Ｓａｓｓｅｒ　Ｍ．Ｉｄｅｎｔ

ｃｌ６：１　

油脂脂肪酸　

ｌｕｌａｒ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄｓ［Ｊ］．ＵＳ　Ｆｅｄ　Ｃｕｌｔ　Ｃｏｏｌｅｃｔｉｏｎ　Ｎｅｗｓｌｅｔｔｅｒ，１９９０，２Ｏ：　

１－６．　

图４皮状丝孢酵母油脂脂肪酸的组成　

Ｆｉｇ．４　Ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｕｔａｎｅｕｍ　ｌｉｐｉｄｓ　

ｌｌｅｒ　Ｌ，Ｂｅｒｇｅｒ　Ｔ．Ｂａｃｔｅｒｉａ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　

［５３　

Ｍｉ

ｏｆ　ｗｈｏｌｅ　ｃｅｌｌ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄｓ［Ｊ］．Ｈｅｗｌｅｔｔ—Ｐａｃｋａｒｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｎｏｔｅ，　

（Ｃ１８：２）基本不积累。脂肪酸组成变化：软脂酸（Ｃ１６：　

０）、棕榈油酸（Ｃ１６：１）、硬脂酸（Ｃ１８：０）所占比率基本　

不变，油酸（Ｃ１８：１）所占比率升高，亚油酸（Ｃ１８：２）所　

１９８５。２２８：３８—４１．　

　Ｍ　Ｃ，Ｍｅｅｃｈａｉ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｇｅｎｏｍｅ—ｓｃａｌｅ　

［６］　

Ｎｏｏｋａｅｗ　Ｉ，Ｊｅｗｅｔｔ

ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｍｏｄｅｌ　ｉＩＮ８００　ｏｆ　Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｖａｉｌ—　

占比率降低。通过发酵，最终得到的皮状丝孢酵母油　

脂脂肪酸组成为：油酸（Ｃ１８：１）６４．８０　、软脂酸（Ｃ１６：　

ｄａｔｉｏｎ：Ａ　ｓｃａｆｆｏｌｄ　ｔｏ　ｑｕｅｒｙ　ｌｉｐｉｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．ＢＭＣ　Ｓｙｓｔｅｍｓ　Ｂｉ—　

ｏｌｏｇｙ，２００８，２（１）：７１．　

０）１９．９０　、棕榈油酸（Ｃ１６：１）１０．９４　、硬脂酸（Ｃ１８：　

０）３．７２　、亚油酸（Ｃ１８：２）０．５６　。　

［７］　

Ｔｈａｋｕｒ　Ｍ　Ｓ，Ｐｒａｐｕｌｌａ　Ｓ　Ｇ，Ｋａｒａｎｔｈ　Ｎ　Ｇ．Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｃｅｌ—　

ｌｕｌａｒ　ｌｉｐｉｄｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｏｆ　ｙｅａｓｔ　ｃｅｌｌｓ　

ｓｔａｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｓｕｄａｎ　Ｂｌａｃｋ　Ｂ［刀．Ｅｎｚｙｍｅ　ａｎｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏ—　

ｇＹ，１９８９，１１（４）：２５２—２５４．　

３　结论　

对油脂酵母皮状丝孢酵母细胞油脂进行提取，并　

应用ＧＣ—ＭＳ对其脂肪酸组成进行了分析。结果表　

［８］　

Ｉｚａｒｄ　Ｊ，Ｌｉｍｂｅｒｇｅｒ　Ｒ　Ｊ．Ｒａｐｉｄ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　

ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｃｅｌｌ　ｌｉｐｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｗｈｏｌｅ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　

Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００３，５５（２）：４１１－４１８．　

ｍｕｒａ　Ｋ，Ｙａｍａｏｋａ　Ｍ，Ｋａｍｉｓａｋａ　Ｙ．Ｒａｐｉｄ　ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｐｉｄｓ　ｉｎ　

［９］　

Ｋｉ

明，菌体的代谢状态分为两个时期：菌体生长期和油脂　

积累期；菌体细胞主要积累油酸（Ｃ１８：１）、软脂酸　

（Ｃ１６：０）和棕榈油酸（Ｃ１６：１）；通过发酵，最终得到的　

皮状丝孢酵母油脂脂肪酸组成为：油酸（Ｃ１８：１）　

ｏｌｅａｇｉｎｏｕｓ　ｆｕｎｇｉ　ａｎｄ　ｙｅａｓｔｓ　ｕｓｉｎｇ　Ｎｉｌｅ　ｒｅｄ　ｆｌｕ０ｒｅｓｃｅｎｃｅ口］．１ｏｕｒ—　

ｎａｌ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００４，５６（３）：３３卜３３８．　

ｅｍａｎｎ　Ｈ　Ｂ，Ａｔｒｅｙａ　Ｓ　Ｋ，Ｂａｕｅｒ　Ｓ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ａｂｕｎｄａｎｃｅｓ　ｏｆ　

［１Ｏ］　

Ｎｉ

ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｔｉｔａｎ　ｓ　ａｔｍｏｓｐｈｅｒｅ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ＧＣ—ＭＳ　ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　

６４．８Ｏ　９／５、软脂酸（Ｃ１６：０）１９．９０　、棕榈油酸（Ｃ１６：１）　

１Ｏ．９４　、硬脂酸（Ｃ１８：０）３．７２　９／６和亚油酸（Ｃ１８：２）　

ｏｎ　ｔｈｅ　Ｈｕｙｇｅｎｓ　ｐｒｏｂｅ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２００５，４３８（７０６９）：７７９—７８４．　

［１１］　

Ｗｅａｔｈｅｒｂｕｒｎ　Ｍ　Ｗ．Ｐｈｅｎｏｌ—ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａ—　

ｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｍｍｏｎｉａ［Ｊ１　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９６７，３９（８）：９７１—　

９７４．　

０．５６　。ＧＣ—ＭＳ可以很好地用于脂肪酸甲酯的分析，　

具有普遍的应用意义。　

参考文献：　

ｉｇｈ　Ｅ　Ｇ，Ｄｙｅｒ　Ｗ　Ｊ．Ａ　ｒａｐｉｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｌｉｐｉｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　

［１２］　

Ｂｌ

ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃａｎ　Ｊ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９５９，３７（８）：９１卜９１７．　

Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ　Ｃｅｌｌｕｌａｒ　Ｆａｔｔｙ　Ａｃｉｄ　

ＬＩＵ　Ｚｈｉ－ｊｉｅ，ＺＨＡＮＧ　Ｈｕｉ，ＺＨＯＵ　Ｌｉ，ＨＵＡ　Ｑｉａｎｇ　

（Ｓｔａｔｅ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｅａｓｔ　Ｃｈｉｎａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　

ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２００２３７，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ｍａｓｓ　

ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＧＣ—ＭＳ）．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｒａｉｎ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　

ｓｔａｇｅ　ａｎｄ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｓｔａｇｅ．Ｔ．ｃｕｔａｎｅｕｍ　ｌｉｐｉｄ　ｗａｓ　ｍａｉｎｌｙ　ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ　ｏｆ　ｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ（Ｃ１８：１），ｐａｌｍｉｔｉｃ　

ａｃｉｄ（Ｃ１６：０），ｐａｌｍｉｔｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ（Ｃ１６：１）．Ｔｈｅ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｗａｓ　ａｓ　ｆｏｌｌｏｗｓ：ｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ（Ｃ１８：１）６４．８０　９／６，　

ｐａｌｍｉｔｉｃ　ａｃｉｄ（Ｃ１６：０）１９．９０％，ｐａｌｍｉｔｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ（Ｃ１６：１）１０．９４　，ｓｔｅａｒｉｃ　ａｃｉｄ（Ｃ１８：０）３．７２　ａｎｄ　ｌｉｎｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　

（Ｃ１８：２）０．５６　，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｗｅｌｌ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ＧＣ—ＭＳ，ｗｈｉｃｈ　ｃｏｕｌｄ　ａｌｓｏ　

ｂｅ　ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ　ｔｏ　ｍａｎｙ　ｏｔｈｅｒ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．　

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ　ｃｅｌｌ；ｌｉｐｉｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ；ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ；ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　

（ＧＣ—ＭＳ）　

2024年3月10日发(作者：骑痴凝)

亿　与生物互程２０１１，Ｖｏ１．２８　Ｎｏ．１０　

Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　

分析测试固　

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—５４２５．２０１１．１０．０２３　

微生物细胞脂肪酸的组成分析　

柳志杰。章辉。周利，花强　

（华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海２００２３７）　

摘　要：应用气相色谱一质谱联用技术（ＧＣ—ＭＳ）对微生物细胞脂肪酸的组成进行了分析。结果表明，茵体的代谢状　

态分为两个时期：茵体生长期和油脂积累期；茵体细胞主要积累油酸（Ｃ１８：１）、软脂酸（Ｃ１６：ｏ）和棕榈油酸（Ｃ１６：１）；通过　

发酵，最终得到的微生物油脂脂肪酸组成为：油酸（Ｃ１８：１）６４．８ｏ　、软脂酸（Ｃ１６：０）１９．９０　、棕榈油酸（Ｃｌ６：１）１０．９４　、　

硬脂酸（Ｃ１８：Ｏ）３．７２　和亚油酸（Ｃ１８：２）０．５６％。ＧＣ—ＭＳ可以很好地用于脂肪酸甲酯的分析，具有普遍的应用意义。　

关键词：微生物细胞；油脂含量；脂肪酸组成；气相色谱一质谱联用技术　

中图分类号：Ｏ　６５７．７　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２—５４２５（２０１１）１０—００８５—０３　

微生物油脂又称单细胞油脂，是微生物在一定条　

件下产生并储存于菌体内的甘油脂，其脂肪酸组成以　

ｃ　Ｃ　。系脂肪酸（如硬脂酸、油酸和亚油酸）为主。将　

微生物油脂进行酯化反应，可以获得生物燃料＿】　］。　

三氟化硼溶液、癸酸（ＣｌＯ：Ｏ），Ｓｉｇｍａ公司；其它试　

剂均为分析纯。　

１．２培养基　

合成培养基（ｇ・Ｌ　）：葡萄糖１２．０，　

（ＮＨ４）２ＳＯ４０．４，ＫＨ２ＰＯ４　３．０，ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ　０．５，Ｌ一　

脂肪酸含量及组成可以作为微生物分类鉴定的指　

标　］，相对于抗原检测和杂交，具有不需要探针的优　

势；在代谢组学研究中，微生物细胞脂肪酸组成及含量　

的动态变化可以反映细胞的代谢状态ｌ＿６］。因此，微生　

物脂肪酸组成及含量分析具有重要的意义。　

组氨酸０．０３，Ｌ－亮氨酸０．１２５，Ｌ一蛋氨酸０．０２５，尿嘧　

啶０．０４，微量元素溶液１　ｍＬ，维生素溶液１　ｍＬ。　

微量元素溶液（ｇ・Ｌ　）：ＥＤＴＡ　１５．０，ＺｎＳＯ　・　

７Ｈ　２　ｏ　４．５，ＣｏＣ１２・６Ｈ２Ｏ　０．３，ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ　１．０，　

ＣｕＳＯ４・５Ｈ２　Ｏ　０．３，ＣａＣｌ２・２Ｈ２ｏ　４．５，ＦｅＳ０４・　

７Ｈ２Ｏ　３．０，ＮａＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ　０．４，Ｈ３ＢＯ３　１．０，Ｋ１　０．１。　

文献报道细胞内油脂总含量的分析方法有苏丹黑　

Ｂ染色法ｌ＿７］、磷酸香草醛法＿８］以及尼罗红染色法＿９］，但　

这些方法均无法分析细胞油脂脂肪酸的组成。而气相　维生素溶液（ｇ・Ｌ　）：Ｄ－生物素０．０５，泛酸钙　

色谱一质谱联用技术（ＧＣ—ＭＳ）＿】０］可以直接通过图库　

检索得到样品的信息，不需要再通过标样比对进行样　

品的确认，分析方便，具有普遍的应用意义。因此，作　

者在此采用ＧＣ－ＭＳ法，对油脂酵母皮状丝孢酵母的　

油脂分布以及脂肪酸组成进行分析，拟为微生物细胞　

脂肪酸的分析应用提供新途径。　

１．０，烟酸１．０，维生素Ｂ　１．０，维生素Ｂ　１．０，对氨基苯　

甲酸０．２，肌醇２５。　

１．３培养条件　

将对数生长中期的种子液接种到装有０．８　Ｌ培养　

基的１．５　Ｌ发酵罐中，于３Ｏ℃、４８０　ｒ・ｍｉｎ　培养，通　

气量１．５　ｖｖｍ。发酵过程中的溶氧、ｐＨ值、尾气等数　

据全部使用Ｂｉｏｓｔａｒ软件进行在线采集。　

１．４微生物细胞油脂的提取ｎ妇及脂肪酸组成分析　

采用酸热一有机溶剂萃取法提取微生物细胞油　

１　实验　

１．１菌株与试剂　

油脂酵母皮状丝孢酵母（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ　ｃｕｔａｎｅ—　

Ｕｍ），自行保藏。　

脂：离心收集菌体；向菌体中加入适量４　ｔｏｏｌ・Ｌ　

ＨＣ１溶液，浸泡３０　ｒａｉｎ，煮沸１０　ｍｉｎ；置于冰上速冷，　

基金项目：上海市浦江人才计划项目（ｏｇＰＪ１４０３８），国家重点实验室专项经费资助项目（２０６０２０４），教育部留学回国人员科研启动基　

金资助项目，上海市重点学科建设项目（Ｂ５０５）　

收稿日期：２Ｏ１１一Ｏ５—２４　

作者简介：柳志杰（１９８８一），男，湖北黄冈人，硕士研究生，研究方向：代谢工程，Ｅ—ｍａｉｌ：￣１ｉｕ６６＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｒｎ；通讯作者：花强，教授，Ｅ＿　

ｍａｉｌ：ｑｈｕａ＠ｅｃｕｓｔ．ｅｄｕ．ｃｎ。　

孵育；加入４　ＢＶ的甲醇一氯仿（１：２，体积比）溶液，　

混合，封口，置于摇床中于１８０　ｒ・ｍｉｎ　萃取３０　ｍｉｎ；　

１２　０００　ｇ离心５　ｍｉｎ，取下层有机层；重复萃取１次；将　

所收集的有机溶剂过滤，旋转蒸发去除有机溶剂，称　

重。　

将油脂溶解于３　ｍＩ　０．５　ｍｏｌ・Ｉ　氢氧化钾一甲　

醇溶液，７５℃水浴２Ｏ　ｍｉｎ；加入３　ｍＬ　１４％三氟化硼　

溶液，７５℃水浴２Ｏ　ｍｉｎ；加１　ｍＬ饱和氯化钠溶液，再　

加入适量癸酸作为内标，离心取上清，在氮气下吹干，　

用正己烷定容；过滤，用ＧＣ—ＭＳ法分析脂肪酸组成。　

ＧＣ—ＭＳ分析条件：采用Ａｇｉｌｅｎｔ　６８９０—５９７５型气　

质联用仪。气相色谱柱：ＨＰ一５ＭＳ（３０　ＩＴＩ×０．２５　ＩｎＦｌｌ，　

０．２５“ｍ）；升温程序：１８０℃保留２　ｍｉｎ，以５℃・　

ａｒｉｎ　升温至２５０℃；载气（氦气，纯度≥９９．９９６　）流　

速１　ｍＬ・ｍｉｎ　；进样量０．２　Ｌ；不分流进样；进样口　

温度２５０℃，离子源温度２３０℃；一７０　ｅＶ轰击；质谱　

仪扫描范围７Ｏ～５６０　，／ｚ；溶剂延迟１．５　ｍｉｎ。　

１．５分析测试　

（１）细胞干重的测定：取一定量发酵液于４℃、　

１２　０００　ｇ离心１０　ｍｉｎ，用去离子水洗２次后置于８５℃　

烘箱中烘至恒重，称重。　

（２）葡萄糖浓度的测定：采用ＨＰＬＣ法。Ａｇｉｌｅｎｔ　

１２００型高效液相色谱仪，配示差折光分析检测器；色　

谱柱为Ｓｐｈｅｒｉｓｏｒｂ　ＮＨ　２柱（０．４６　ｃｍ×２５　ｃｍ，７　ｍ）；　

流动相为乙腈一水（８０：２０）；流速１　ｒｎＩ　・ｒａｉｎ一　；检测　

器温度４０℃，柱温４０℃。　

（３）氮源浓度的测定：采用苯酚一次氯酸钠法ｌ１　。　

２结果与讨论　

２．１茵体生长及油脂积累情况（图１）　

Ｚ　

堵乔时间／ｈ　

＋ＮＨ：　＋生长量—☆一葡萄糖—ｏ一油脂　

图１　皮状丝孢酵母菌体生长及油脂积累情况　

Ｆｉｇ．１　Ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｌｉｐｉｄ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ．ｃｕｔａｎｅｕｍ　

由图１可以看出，皮状丝孢酵母的生长可以分为　

两个时期：菌体生长期和油脂积累期。Ｏ～２４　ｈ，菌体　

柳志杰等：微生物细胞脂肪酸的组成分析／２０１１年囊１０髓　

快速生长，细胞内油脂含量基本不变，为菌体生长期；　

２４　ｈ后，氮源消耗完，菌体生长变慢，细胞内油脂含量　

不断升高，６０　ｈ时，葡萄糖耗尽，油脂含量达到最大值　

３１　，为油脂积累期。　

２．２菌体细胞油脂脂肪酸的组成分析　

皮状丝孢酵母体内积累的油脂经酸热～有机溶剂　

萃取、甲酯化处理后进行ＧＣ—ＭＳ分析，得到的总离子　

流图见图２。　

加　印　如

加　∞　如

１．Ｄｅｃａｎｏｉｃ　ａｃｉｄ’ｍｅｔｈｙｌ　ｅ￣ｔｅｒ（ｉｎｔｅｒｎａｌ　ｓｔａｎｄａｒｄ）　２．９　Ｈｅｘａｄｅｃａｎｏｉ

∞　∞　∞

ｃ　

ａｃｉｄ，ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ，（Ｚ）　３．Ｈｅｘａｄｅｃａｎｏｉｃ　ａｃｉｄ，ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　４．９，　

１２－Ｏｃｔａｄｅｃａｄｉｅｎ０ｉｃ　ａｃｉｄ（Ｚ，Ｚ）一，ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　５．９－０ｃｔａｄｅｅｅｎｏｉｃ　ａｃｉｄ　

（Ｚ）一，ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　６．Ｏｃｔａｄｅｃａｎｏｌｃ　ａｃｉｄ，ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　

图２皮状丝孢酵母油脂脂肪酸甲酯的总离子流图　

Ｆｉｇ．２　Ｔｏｔａｌ　ｉｏｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　

ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ　ｆｒｏｍ　ｃｕｔａｎｅｕｍ　ｌｉｐｉｄ　

由图２可以看出，脂肪酸甲酯得到了很好的分离。　

菌体细胞油脂脂肪酸组成主要为油酸（Ｃ１８：１）、软脂　

酸（Ｃ１６：０）、棕榈油酸（Ｃ１６：１）、硬脂酸（Ｃ１８：０）和亚油　

酸（Ｃ】８：２）。　

对皮状丝孢酵母油脂脂肪酸的积累及组成进行分　

析，结果见图３和图４。　

ｇ　

●　

吕　

嘴　｝

一

璺

－咖＿　。囵Ｉ圜＿。一一一．口　硼８啊．　．皿－。　

Ｃｌ６：ｌ　Ｃ１６：０　Ｃｌ　：２　Ｃｌ８：ｌ　Ｃ１８：Ｕ　

油脂脂肪酸　

图３　皮状丝孢酵母油脂脂肪酸的积累情况　

Ｆｉｇ．３　Ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｔ．ｃｕｔａｎｅｕｍ　ｌｉｐｉｄｓ　

由图３和图４可以看出，菌体细胞在发酵过程中　

主要积累油酸（Ｃ１８：１），其次为软脂酸（Ｃ１６：０）和棕榈　

油酸（Ｃ１６：１），硬脂酸（Ｃ１８：０）积累速率较慢，亚油酸　

一

一

～镀　

柳志杰等：微生物细胞脂肪酸的组成分析／２０１１年第ｌ０期　

７０　

６０　

５０　

［１］　

Ｌｉｕ　Ｔ，Ｖｏｒａ　Ｈ。Ｋｈｏｓｌａ　Ｃ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｏｆ　

ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ［Ｊ］．Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒ—　

ｉｎｇ，２０１０，１２（４）：３７８—３８６．　

ｕ　Ｔ　Ｇ，Ｋｈｏｓｌａ　Ｃ．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｏｆ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ｆｏｒ　

［２］　

Ｌｉ

４０　

３０　

２０　

１０　

ｂｉｏｆｕｅｌ　ｐｒ０ｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｎｎｕａｌ　Ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０１０，４４：５３—　

６９．　

：　删＿

．

Ｏ　

Ｈ￣ＩＨＩ几．　．ｎ圈一姗■　

Ｃ１６：Ｏ　ｃ１８：２　ｃｌ８：ｌ　ｃＩ８：ｏ　

ｐｉｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｔｏ　ｃｈｅｍｏｔａｘ—　

Ｅ３］　

Ｔｏｒｎａｂｅｎｅ　Ｔ　Ｇ．Ｌｉ

ｏｎｏｍｙ［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９８５，１８：２０９—２３４．　

ｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｂｙ　ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｏｆ　ｃｅｌ　

［４］　

Ｓａｓｓｅｒ　Ｍ．Ｉｄｅｎｔ

ｃｌ６：１　

油脂脂肪酸　

ｌｕｌａｒ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄｓ［Ｊ］．ＵＳ　Ｆｅｄ　Ｃｕｌｔ　Ｃｏｏｌｅｃｔｉｏｎ　Ｎｅｗｓｌｅｔｔｅｒ，１９９０，２Ｏ：　

１－６．　

图４皮状丝孢酵母油脂脂肪酸的组成　

Ｆｉｇ．４　Ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｕｔａｎｅｕｍ　ｌｉｐｉｄｓ　

ｌｌｅｒ　Ｌ，Ｂｅｒｇｅｒ　Ｔ．Ｂａｃｔｅｒｉａ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　

［５３　

Ｍｉ

ｏｆ　ｗｈｏｌｅ　ｃｅｌｌ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄｓ［Ｊ］．Ｈｅｗｌｅｔｔ—Ｐａｃｋａｒｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｎｏｔｅ，　

（Ｃ１８：２）基本不积累。脂肪酸组成变化：软脂酸（Ｃ１６：　

０）、棕榈油酸（Ｃ１６：１）、硬脂酸（Ｃ１８：０）所占比率基本　

不变，油酸（Ｃ１８：１）所占比率升高，亚油酸（Ｃ１８：２）所　

１９８５。２２８：３８—４１．　

　Ｍ　Ｃ，Ｍｅｅｃｈａｉ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｇｅｎｏｍｅ—ｓｃａｌｅ　

［６］　

Ｎｏｏｋａｅｗ　Ｉ，Ｊｅｗｅｔｔ

ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｍｏｄｅｌ　ｉＩＮ８００　ｏｆ　Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｖａｉｌ—　

占比率降低。通过发酵，最终得到的皮状丝孢酵母油　

脂脂肪酸组成为：油酸（Ｃ１８：１）６４．８０　、软脂酸（Ｃ１６：　

ｄａｔｉｏｎ：Ａ　ｓｃａｆｆｏｌｄ　ｔｏ　ｑｕｅｒｙ　ｌｉｐｉｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．ＢＭＣ　Ｓｙｓｔｅｍｓ　Ｂｉ—　

ｏｌｏｇｙ，２００８，２（１）：７１．　

０）１９．９０　、棕榈油酸（Ｃ１６：１）１０．９４　、硬脂酸（Ｃ１８：　

０）３．７２　、亚油酸（Ｃ１８：２）０．５６　。　

［７］　

Ｔｈａｋｕｒ　Ｍ　Ｓ，Ｐｒａｐｕｌｌａ　Ｓ　Ｇ，Ｋａｒａｎｔｈ　Ｎ　Ｇ．Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｃｅｌ—　

ｌｕｌａｒ　ｌｉｐｉｄｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ　ｏｆ　ｙｅａｓｔ　ｃｅｌｌｓ　

ｓｔａｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｓｕｄａｎ　Ｂｌａｃｋ　Ｂ［刀．Ｅｎｚｙｍｅ　ａｎｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏ—　

ｇＹ，１９８９，１１（４）：２５２—２５４．　

３　结论　

对油脂酵母皮状丝孢酵母细胞油脂进行提取，并　

应用ＧＣ—ＭＳ对其脂肪酸组成进行了分析。结果表　

［８］　

Ｉｚａｒｄ　Ｊ，Ｌｉｍｂｅｒｇｅｒ　Ｒ　Ｊ．Ｒａｐｉｄ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　

ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｃｅｌｌ　ｌｉｐｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｗｈｏｌｅ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　

Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００３，５５（２）：４１１－４１８．　

ｍｕｒａ　Ｋ，Ｙａｍａｏｋａ　Ｍ，Ｋａｍｉｓａｋａ　Ｙ．Ｒａｐｉｄ　ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｐｉｄｓ　ｉｎ　

［９］　

Ｋｉ

明，菌体的代谢状态分为两个时期：菌体生长期和油脂　

积累期；菌体细胞主要积累油酸（Ｃ１８：１）、软脂酸　

（Ｃ１６：０）和棕榈油酸（Ｃ１６：１）；通过发酵，最终得到的　

皮状丝孢酵母油脂脂肪酸组成为：油酸（Ｃ１８：１）　

ｏｌｅａｇｉｎｏｕｓ　ｆｕｎｇｉ　ａｎｄ　ｙｅａｓｔｓ　ｕｓｉｎｇ　Ｎｉｌｅ　ｒｅｄ　ｆｌｕ０ｒｅｓｃｅｎｃｅ口］．１ｏｕｒ—　

ｎａｌ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００４，５６（３）：３３卜３３８．　

ｅｍａｎｎ　Ｈ　Ｂ，Ａｔｒｅｙａ　Ｓ　Ｋ，Ｂａｕｅｒ　Ｓ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ａｂｕｎｄａｎｃｅｓ　ｏｆ　

［１Ｏ］　

Ｎｉ

ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｔｉｔａｎ　ｓ　ａｔｍｏｓｐｈｅｒｅ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ＧＣ—ＭＳ　ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　

６４．８Ｏ　９／５、软脂酸（Ｃ１６：０）１９．９０　、棕榈油酸（Ｃ１６：１）　

１Ｏ．９４　、硬脂酸（Ｃ１８：０）３．７２　９／６和亚油酸（Ｃ１８：２）　

ｏｎ　ｔｈｅ　Ｈｕｙｇｅｎｓ　ｐｒｏｂｅ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２００５，４３８（７０６９）：７７９—７８４．　

［１１］　

Ｗｅａｔｈｅｒｂｕｒｎ　Ｍ　Ｗ．Ｐｈｅｎｏｌ—ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａ—　

ｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｍｍｏｎｉａ［Ｊ１　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９６７，３９（８）：９７１—　

９７４．　

０．５６　。ＧＣ—ＭＳ可以很好地用于脂肪酸甲酯的分析，　

具有普遍的应用意义。　

参考文献：　

ｉｇｈ　Ｅ　Ｇ，Ｄｙｅｒ　Ｗ　Ｊ．Ａ　ｒａｐｉｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｌｉｐｉｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　

［１２］　

Ｂｌ

ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃａｎ　Ｊ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９５９，３７（８）：９１卜９１７．　

Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ　Ｃｅｌｌｕｌａｒ　Ｆａｔｔｙ　Ａｃｉｄ　

ＬＩＵ　Ｚｈｉ－ｊｉｅ，ＺＨＡＮＧ　Ｈｕｉ，ＺＨＯＵ　Ｌｉ，ＨＵＡ　Ｑｉａｎｇ　

（Ｓｔａｔｅ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｂｉｏｒｅａｃｔｏｒ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｅａｓｔ　Ｃｈｉｎａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　

ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２００２３７，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ　ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ｍａｓｓ　

ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（ＧＣ—ＭＳ）．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｒａｉｎ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｃｅｌｌ　ｇｒｏｗｔｈ　

ｓｔａｇｅ　ａｎｄ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｓｔａｇｅ．Ｔ．ｃｕｔａｎｅｕｍ　ｌｉｐｉｄ　ｗａｓ　ｍａｉｎｌｙ　ｃｏｍｐｒｉｓｅｄ　ｏｆ　ｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ（Ｃ１８：１），ｐａｌｍｉｔｉｃ　

ａｃｉｄ（Ｃ１６：０），ｐａｌｍｉｔｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ（Ｃ１６：１）．Ｔｈｅ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｗａｓ　ａｓ　ｆｏｌｌｏｗｓ：ｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ（Ｃ１８：１）６４．８０　９／６，　

ｐａｌｍｉｔｉｃ　ａｃｉｄ（Ｃ１６：０）１９．９０％，ｐａｌｍｉｔｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ（Ｃ１６：１）１０．９４　，ｓｔｅａｒｉｃ　ａｃｉｄ（Ｃ１８：０）３．７２　ａｎｄ　ｌｉｎｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　

（Ｃ１８：２）０．５６　，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｍｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒｓ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｗｅｌｌ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ＧＣ—ＭＳ，ｗｈｉｃｈ　ｃｏｕｌｄ　ａｌｓｏ　

ｂｅ　ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ　ｔｏ　ｍａｎｙ　ｏｔｈｅｒ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．　

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ　ｃｅｌｌ；ｌｉｐｉｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ；ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ；ｇａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　

（ＧＣ—ＭＳ）