2024年3月31日发(作者：拱丰)
HG miRNA SYBR Green PCR Kit
HG miRNA荧光定量PCR试剂盒
.:APXXXXX Size: 100次×20 μl
描述：HaiGene的HG miRNA SYBR Green PCR Kit使
用Peter改良的miR-Q技术，采用特异性的上下游引物
对反转录所得miRNA的cDNA产物进行定量检测【参考
文献1】。不同于其它公司的单条特异性引物扩增方法，
HaiGene采用双向特异性扩增引物（原理如图1），从而
极大提高了miRNA的检测特异性，其可以区分极高相似
度的miRNA分子、减少非特异性扩增（图2，3所示）。
该试剂盒对可以对任何miRNA分子进行检测。HG
miRNA荧光定量PCR试剂盒共有一万余种，试剂盒编号
为APXXXXX，每一个miRNA分子对应一个检测试剂盒，
可于HG miRNA qPCR 中查询。如果您研究的
mircoRNA分子不在我们的列表中，请来信咨询，我们将
及时给您优化设计。该试剂盒中的每一对引物均经过设计
优化，确保扩增效率和特异性。使用该方法进行miRNA
定量检测已被大量文献所采用【参考文献2～11】。
组分
名称 (100T×20 μl)
5×Golden HS SYBR Green qPCR Mix 400 μl
50×ROX Reference Dye 40 μl
20×miRNA Primer F
100 μl
20×miRNA Primer R
100 μl
储存：避光置于-20°C，可保存2年；避免反复冻融
常用内参HG miRNA荧光定量PCR试剂盒
内参名称 货号 适用物种
RNU6B AP01501
哺乳动物
RNU44 AP01502
人
RNU48 AP01503
人
SnoRNA135 AP01504
鼠
SnoRNA202 AP01505
鼠
注：其它miRNA荧光定量检测试剂盒见
HG miRNA qPCR
。
图1：Peter改良miR-Q检测原理图
图2：高效的扩增miRNAs
图3：有效的区分相似度很高的miRNAs
HG miRNA SYBR Green PCR Kit
HG miRNA荧光定量PCR试剂盒
.:APXXXXX Size: 100次×20 μl
操作方法
1. 按以下组分配制反转录反应液
microRNA（0.01-0.1 μg）or Total RNA 0.1-2 μg
4×One step miRNA RT Solution 5 μl
*10×miRNA RT Primer 2 μl
Rnase Free H
2
O Up to 20 μl
2. 在PCR仪上按以下条件进行反应:
37°C 60min
95°C 5min
3. 获得cDNA产物后使用HG miRNA荧光定量PCR试剂
盒进行miRNA定量检测。
根据机型选择步骤A或B，配制反应体系
A: 需要添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time
PCR仪，包括：ABI PRISM7000/7700/7900HT,
7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied
Biosystems)；Mx3000P (Stratagene)等。按照如下组分配
制20 μl PCR反应体系：
终浓度
5×Golden HS SYBR Green qPCR Mix 4 μl 1×
50×ROX Reference Dye 0.4 μl 1×
PCR Forward Primer(20×) 1 μl 1×
PCR Reverse Primer(20×) 1 μl 1×
cDNA模板 1～2.5 μl
ddH
2
O Up to 20 μl
B:无需添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-
Time PCR仪，包括：LightCycler (Roche Diagnostics)；
MiniOpticon、Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-Time
PCR(Bio-Rad & MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。
按照如下组分配制20μl PCR反应体系：
终浓度
5×Golden HS SYBR Green qPCR Mix 4 μl 1×
PCR Forward Primer(20×) 1 μl 1×
PCR Reverse Primer(20×) 1 μl 1×
cDNA模板 1～2.5 μl
ddH
2
O Up to 20 μl
4 进行Real-Time PCR反应,
通常采用两步法，程序如下：
Stage 1: 95℃ 15min
Stage 2: 95℃ 5s
60℃ 30s 30 ～40cycles
Stage 3: Dissociation analysis
5. 扩增结果分析和数据处理
反应结束后确认Real-Time PCR的cDNA样品和NTC阴性
对照的扩增曲线和融解曲线。
HG miRNA SYBR Green PCR Kit
HG miRNA荧光定量PCR试剂盒
.:APXXXXX Size: 100次×20 μl
参考文献
[1] Specific and sensitive quantitative RT-PCR of miRNAs
with DNA primers. BMC Biotechnol. 2011 Jun 25; 11: 70.
PMC3135530.
[2] Identification of circulating miRNA biomarkers based on
global quantitative real-time PCR profiling. J Anim Sci
Biotechnol. 2012 PMID:22958414.
[3] Reliable reference miRNAs for quantitative gene
expression analysis of stress responses in Caenorhabditis
elegans. BMC Genomics. 2014. PMID:24656064.
[4] Profiling microRNAs in lung tissue from pigs infected
with Actinobacillus pleuropneumoniae. BMC Genomics.
2012. PMID:22953717.
[5] The role of viral and host microRNAs in the Aujeszky's
disease virus during the infection process. PLoS One. 2014.
PMID:24475202.
[6] MicroRNA polymorphisms and environmental smoke
exposure as risk factors for oesophageal squamous cell
carcinoma. PLoS One. :24205249.
[7] Plasma proANP and SDMA and microRNAs are
associated with chronic mitral regurgitation in a pig model.
Endocr Connect. :24029364.
[8] Advances in microRNA experimental approaches to study
physiological regulation of gene products implicated in CNS
disorders. Exp Neurol. 2012. PMID:22245616.
[9] Maternally deposited germline piRNAs silence the tirant
retrotransposon in somatic cells. EMBO Rep. 2013.
PMID:23559065.
[10] miRNA expression profile analysis in kidney of
different porcine breeds. PLoS One. 2013. PMID:23372853
[11] Determination of reference microRNAs for relative
quantification in porcine tissues. PLoS One. 2012.
PMID:22970213.
2024年3月31日发(作者：拱丰)
HG miRNA SYBR Green PCR Kit
HG miRNA荧光定量PCR试剂盒
.:APXXXXX Size: 100次×20 μl
描述：HaiGene的HG miRNA SYBR Green PCR Kit使
用Peter改良的miR-Q技术，采用特异性的上下游引物
对反转录所得miRNA的cDNA产物进行定量检测【参考
文献1】。不同于其它公司的单条特异性引物扩增方法，
HaiGene采用双向特异性扩增引物（原理如图1），从而
极大提高了miRNA的检测特异性，其可以区分极高相似
度的miRNA分子、减少非特异性扩增（图2，3所示）。
该试剂盒对可以对任何miRNA分子进行检测。HG
miRNA荧光定量PCR试剂盒共有一万余种，试剂盒编号
为APXXXXX，每一个miRNA分子对应一个检测试剂盒，
可于HG miRNA qPCR 中查询。如果您研究的
mircoRNA分子不在我们的列表中，请来信咨询，我们将
及时给您优化设计。该试剂盒中的每一对引物均经过设计
优化，确保扩增效率和特异性。使用该方法进行miRNA
定量检测已被大量文献所采用【参考文献2～11】。
组分
名称 (100T×20 μl)
5×Golden HS SYBR Green qPCR Mix 400 μl
50×ROX Reference Dye 40 μl
20×miRNA Primer F
100 μl
20×miRNA Primer R
100 μl
储存：避光置于-20°C，可保存2年；避免反复冻融
常用内参HG miRNA荧光定量PCR试剂盒
内参名称 货号 适用物种
RNU6B AP01501
哺乳动物
RNU44 AP01502
人
RNU48 AP01503
人
SnoRNA135 AP01504
鼠
SnoRNA202 AP01505
鼠
注：其它miRNA荧光定量检测试剂盒见
HG miRNA qPCR
。
图1：Peter改良miR-Q检测原理图
图2：高效的扩增miRNAs
图3：有效的区分相似度很高的miRNAs
HG miRNA SYBR Green PCR Kit
HG miRNA荧光定量PCR试剂盒
.:APXXXXX Size: 100次×20 μl
操作方法
1. 按以下组分配制反转录反应液
microRNA（0.01-0.1 μg）or Total RNA 0.1-2 μg
4×One step miRNA RT Solution 5 μl
*10×miRNA RT Primer 2 μl
Rnase Free H
2
O Up to 20 μl
2. 在PCR仪上按以下条件进行反应:
37°C 60min
95°C 5min
3. 获得cDNA产物后使用HG miRNA荧光定量PCR试剂
盒进行miRNA定量检测。
根据机型选择步骤A或B，配制反应体系
A: 需要添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time
PCR仪，包括：ABI PRISM7000/7700/7900HT,
7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied
Biosystems)；Mx3000P (Stratagene)等。按照如下组分配
制20 μl PCR反应体系：
终浓度
5×Golden HS SYBR Green qPCR Mix 4 μl 1×
50×ROX Reference Dye 0.4 μl 1×
PCR Forward Primer(20×) 1 μl 1×
PCR Reverse Primer(20×) 1 μl 1×
cDNA模板 1～2.5 μl
ddH
2
O Up to 20 μl
B:无需添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-
Time PCR仪，包括：LightCycler (Roche Diagnostics)；
MiniOpticon、Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-Time
PCR(Bio-Rad & MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。
按照如下组分配制20μl PCR反应体系：
终浓度
5×Golden HS SYBR Green qPCR Mix 4 μl 1×
PCR Forward Primer(20×) 1 μl 1×
PCR Reverse Primer(20×) 1 μl 1×
cDNA模板 1～2.5 μl
ddH
2
O Up to 20 μl
4 进行Real-Time PCR反应,
通常采用两步法，程序如下：
Stage 1: 95℃ 15min
Stage 2: 95℃ 5s
60℃ 30s 30 ～40cycles
Stage 3: Dissociation analysis
5. 扩增结果分析和数据处理
反应结束后确认Real-Time PCR的cDNA样品和NTC阴性
对照的扩增曲线和融解曲线。
HG miRNA SYBR Green PCR Kit
HG miRNA荧光定量PCR试剂盒
.:APXXXXX Size: 100次×20 μl
参考文献
[1] Specific and sensitive quantitative RT-PCR of miRNAs
with DNA primers. BMC Biotechnol. 2011 Jun 25; 11: 70.
PMC3135530.
[2] Identification of circulating miRNA biomarkers based on
global quantitative real-time PCR profiling. J Anim Sci
Biotechnol. 2012 PMID:22958414.
[3] Reliable reference miRNAs for quantitative gene
expression analysis of stress responses in Caenorhabditis
elegans. BMC Genomics. 2014. PMID:24656064.
[4] Profiling microRNAs in lung tissue from pigs infected
with Actinobacillus pleuropneumoniae. BMC Genomics.
2012. PMID:22953717.
[5] The role of viral and host microRNAs in the Aujeszky's
disease virus during the infection process. PLoS One. 2014.
PMID:24475202.
[6] MicroRNA polymorphisms and environmental smoke
exposure as risk factors for oesophageal squamous cell
carcinoma. PLoS One. :24205249.
[7] Plasma proANP and SDMA and microRNAs are
associated with chronic mitral regurgitation in a pig model.
Endocr Connect. :24029364.
[8] Advances in microRNA experimental approaches to study
physiological regulation of gene products implicated in CNS
disorders. Exp Neurol. 2012. PMID:22245616.
[9] Maternally deposited germline piRNAs silence the tirant
retrotransposon in somatic cells. EMBO Rep. 2013.
PMID:23559065.
[10] miRNA expression profile analysis in kidney of
different porcine breeds. PLoS One. 2013. PMID:23372853
[11] Determination of reference microRNAs for relative
quantification in porcine tissues. PLoS One. 2012.
PMID:22970213.