2024年4月2日发(作者：占柏)
一、制胶
1、 注意一定要将玻璃板洗净，最后用ddH2O冲洗，将与胶接触的一面向下倾斜置
于干净的纸巾晾干
2、玻璃板干净后，对着与胶接触的面对其靠拢，整齐的夹到绿色架子里，再按照说明
书，配制分离胶（分为两块的配制与一块的配制）， 其中PAGE（解冻现拿现用，聚丙酰
胺（4度冰箱冷藏），在加入分离胶之前用水检验是否漏水
3、用枪头，对好玻璃板的边缘打下去，注意快速不要漏出去，液面要平，根据插梳子
的位置，加入到一定高度，最后在加满纯水覆盖其上，封胶
4、静置40min,将分离胶上的水倒出，观察分离胶是否有较好的制作好
5、配制浓缩胶（分为两块的配制与一块的配制），配制好后迅速的加入到玻璃板内，，
并插上梳子，静置30min
6、结束后，将玻璃板取下，放入纯水的盒子里，放入到4度冰箱内备用
二、提取蛋白
1、取出六孔板，吸取原培养液丢弃，靠边加入PBS洗涤（500ml），轻晃，吸取废液
丢弃，洗涤三次
2、加入蛋白裂解液（视细胞数量而定） 加入裂解液之后，调小移液枪量程，反复摧
打至培养皿底部全透明
3、将产物吸入1.5ml的EP管，用震荡机振荡30s，冰浴10min，反复三次，取的两
支EP管标注蛋白名字）
4、振荡离心 13000转，4度，5min
5、用移液枪取离心后的上清液至新取的EP管，1.5ml 2支，注意名称的对称
6、放入—80度冰箱储存
三、蛋白定量测定
1、准备工作：BCA工作液、蛋白标准液、96孔板、冰盒、提取的蛋白
2、按照说明书计算所需BCA工作液的量，A液：B液=50：1
3、在孔板盖子上标记，加标准液（8个）与样品的标记，在本子上写好浓度梯度，对
着位置加入标准液浓度0，1，2，4，8，12，16，20，之后在标准样品的孔内，用pbs
加满到20微升
4、加完标准液，在对应的孔里加样品20微升，最后将配好的BCA液加入到标准液
和样品中各200微升，
5、放在37度振荡培养箱内振荡孵育30分钟
2024年4月2日发(作者：占柏)
一、制胶
1、 注意一定要将玻璃板洗净，最后用ddH2O冲洗，将与胶接触的一面向下倾斜置
于干净的纸巾晾干
2、玻璃板干净后，对着与胶接触的面对其靠拢，整齐的夹到绿色架子里，再按照说明
书，配制分离胶（分为两块的配制与一块的配制）， 其中PAGE（解冻现拿现用，聚丙酰
胺（4度冰箱冷藏），在加入分离胶之前用水检验是否漏水
3、用枪头，对好玻璃板的边缘打下去，注意快速不要漏出去，液面要平，根据插梳子
的位置，加入到一定高度，最后在加满纯水覆盖其上，封胶
4、静置40min,将分离胶上的水倒出，观察分离胶是否有较好的制作好
5、配制浓缩胶（分为两块的配制与一块的配制），配制好后迅速的加入到玻璃板内，，
并插上梳子，静置30min
6、结束后，将玻璃板取下，放入纯水的盒子里，放入到4度冰箱内备用
二、提取蛋白
1、取出六孔板，吸取原培养液丢弃，靠边加入PBS洗涤（500ml），轻晃，吸取废液
丢弃，洗涤三次
2、加入蛋白裂解液（视细胞数量而定） 加入裂解液之后，调小移液枪量程，反复摧
打至培养皿底部全透明
3、将产物吸入1.5ml的EP管，用震荡机振荡30s，冰浴10min，反复三次，取的两
支EP管标注蛋白名字）
4、振荡离心 13000转，4度，5min
5、用移液枪取离心后的上清液至新取的EP管，1.5ml 2支，注意名称的对称
6、放入—80度冰箱储存
三、蛋白定量测定
1、准备工作：BCA工作液、蛋白标准液、96孔板、冰盒、提取的蛋白
2、按照说明书计算所需BCA工作液的量，A液：B液=50：1
3、在孔板盖子上标记，加标准液（8个）与样品的标记，在本子上写好浓度梯度，对
着位置加入标准液浓度0，1，2，4，8，12，16，20，之后在标准样品的孔内，用pbs
加满到20微升
4、加完标准液，在对应的孔里加样品20微升，最后将配好的BCA液加入到标准液
和样品中各200微升，
5、放在37度振荡培养箱内振荡孵育30分钟