2024年4月4日发(作者：声含海)
TAE是Tris-乙酸，缓冲容量小，但是溶解度大，易于储存
TBE是Tris-硼酸，缓冲容量大，但是溶解度小，不易长期储存，易产生沉淀
TAE与TBE的区别
首先要知道 TAE 与 TBE 缓冲溶液的成份如下：
50x TAE Buffer (Tris-Acetate-EDTA)
242 gm Tris base
57.1 ml Acetic acid 100ml
0.5M EDTA
Add ddH2O to 1 liter and adjust pH to 8.5.
10x TBE Buffer (Tris-Borate-EDTA)
108 gm Tris base
55 gm Boric acid
9.3 gm Na4EDTA
Add ddH2O to 1 liter.
The pH is 8.3 and requires no adjustment.
它们的分别有下列几点：
1. TBE 不能太浓 (它只可有 10 times)，因为 borate 会很容易沉淀，但一般有少许沉淀
是不会有太大问题。
2. TBE 的 buffering capacity 比 TAE 高，用 TBE 来跑出来的 gel，分辨率 (resolution)
会比较高。
3. 因为 TBE 有 borate 离子 (ion)，它会影向酵素 (enzyme) 的工作。因此，若要为分离
出的 DNA 进行下一步酵素处理，如 cloning 或 restriction cut 的话，就要切记不要让
DNA 碰上 borate ion。
4. TAE的 buffer capacity 比较差，gel 一般比较模糊，但它不会对影向酵素
三种缓冲液的配制方法
Tris-乙酸（TAE）：50×浓贮存液（每升）：
242g Tris 碱
57.1ml 冰乙酸
100ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用时再稀释50倍。
Tris-磷酸（TPE）：10×浓贮存液（每升）：
108g Tris 碱
15.5ml 85％磷酸（1.679g /ml）
40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用时再稀释10倍。
Tris-硼酸（TBE）：5×浓贮存液（每升）：
54g Tris 碱
27.5g 硼酸
20ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
电泳缓冲液TAE起什么作用呢?
默认分类 2007-10-05 20:29:30 阅读11 评论0 字号：大中小 订阅
电泳缓冲液TAE起什么作用呢?
缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反
应，正极发生的是氧化反应（4OH--4e->2H2O+O2)，负极发生的是还原反应（4H++4e->2H2)，
长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，使溶液两
极的pH保持基本不变。
电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，
一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢；
太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。
电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等离子，
防止电泳时激活 DNA酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。
TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量
（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移
率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效
果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小，长时
间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。
TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb的片段
时分离效果更好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作用生成
非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使
用。
TPE的缓冲能力也较强，但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出，所以也不宜在回收
DNA片段的电泳中使用。
[转载]实验室常用技术参数资料
记事本_我看世界 2007-10-18 15:47:27 阅读13 评论0 字号：大中小 订阅
[转载]实验室常用技术参数资料（一）
2007-10-16 15:12
一、核酸及蛋白质常用数据
1．核苷三磷酸的物理常数
分
化合物 子
.0)
量
ATP
5
07
4
83
5
23
4
84
4
94
4
67
5
07
4
82
λmax(pH71摩尔溶液（pH7.0）中λmax
时的最大吸收值 0
OD280/OD26
259 15400 0.15
CTP 271 9000 0.97
GTP 253 13700 0.66
UTP 262 10000 0.38
dATP 259 15200 0.15
dCTP 271 9300 0.98
dGTP 253 13700 0.66
dTTP 267 9600 0.71
2．常用核酸的长度与分子量
核酸
λDNA
pBR322
28SrRNA
23SrRNA
18SrRNA
19SrRNA
核苷酸数
48502（双链环状）
4363（双链）
4800
3700
1900
1700
分子量
3.0×107
2.8×106
1.6×106
1.2×106
6.1×105
5.5×105
5SrRNA
tRNA（大肠杆菌）
120
75
3.6×104
2.5×104
3．常用核酸蛋白换算数据
（1）重量换算
1μg=10-6g 1pg=10-12g
1ng=10-9g 1fg=10-15g
（2）分光光度换算：
1A260双链DNA=50μg/ml
1A260单链DNA=30μg/ml
1A260单链RNA=40μg/ml
（3）DNA摩尔换算：
1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端
1μg pBR322 DNA=0.36pmol
1pmol 1000bp DNA=0.66μg
1pmol pBR322=2.8μg
1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿
1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿
1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿
（4）蛋白摩尔换算：
100pmol分子量100，000蛋白质=10μg
100pmol分子量50，000蛋白质=5μg
100pmol分子量10，000蛋白质=1μg
氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿
（5）蛋白质/DNA换算：
1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质
10，000MW蛋白质=270bp DNA
30，000MW蛋白质=810bp DNA
50，000MW蛋白质=1.35kb
100，000MW蛋白质=2.7kb DNA
4．常用蛋白质分子量标准参照物
（1）高分子量标准参照
肌球蛋白
肌球蛋白
β-半乳糖甘酶
B
磷酸化酶B
分子量
212，000
116，000
97，400
（2）中分子量标准参照
磷酸化酶B
牛血清白蛋白
谷氨酶脱氢酶
卵白蛋白
醛缩酶
碳酸酐酶
大豆??蛋白酶
抑制剂
溶菌酶
（3）低分子量标准参照
31，00
21，500
16，900
14，400
97，400 碳酸酐酶
66，200 大豆??蛋白酶
55，000 抑制剂
42，700 马心肌球蛋白
40，000 溶菌酶 牛血清白蛋白 66，200
过氧化氢酶`
醛缩酶
57，000
40，000
31，000 肌球蛋白（F1） 8，100
21，500 肌球蛋白（F2） 6，200
肌球蛋白（F3） 2，500
14，400
5．常用DNA分子量标准参照物
λDNA/Hind
Ⅲ
23130
9416
6557
4361
2322
2027
564
125
续上表
Ⅰ
21226
7421
5804
5643
4843
3530
λDNA/EcoR
λ/HindⅢ+EcoRⅠ
21227
5148
4973
4268
3530
2027
1904
1584
1375
974
831
564
125
pBR322/HaeⅢ
587
405
504
458
434
267
234
213
192
184
124
123
104
89
80
64
57
51
21
18
11
7
pBR322/Hinf
Ⅰ
1631
517
506
396
344
298
221
220
154
75
φχ174/HinfⅠ
726
713
553
500
417
413
311
249
200
151
140
118
100
82
66
48
42
40
24
φχ174/Hae Ⅲ
1353
1078
872
603
310
281
271
234
194
118
72
φχ174/Tap
Ⅰ
2914
1175
404
327
231
141
87
54
33
20
二、常用缓冲液
1．分子克隆常用缓冲液(无)
2．磷酸缓冲液
（1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※
pH
5.8
6.0
6.2
6.4
6.6
6.8
7.0
7.2
1mol/L K2HPO4(ml)
8.5
13.2
19.2
27.8
38.1
49.7
61.5
71.7
1mol/L KH2PO4(ml)
91.5
86.8
80.8
72.2
61.9
50.3
38.5
28.3
7.4
7.6
7.8
8.0
80.2
86.6
90.8
94.0
19.8
13.4
9.2
6.2
（2）25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※
pH
5.8
6.0
6.2
6.4
6.6
6.8
7.0
7.2
7.4
7.6
7.8
8.0
1mol/L Na2HPO4(ml)
7.9
12.0
17.8
25.5
35.2
46.3
57.7
68.4
77.4
84.5
89.6
93.2
1mol/L NaH2PO4(ml)
92.1
88.0
82.2
74.5
64.8
53.7
42.3
31.6
22.6
15.5
10.4
6.8
※:用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据
Henderson-Hasselbalch方程计算其pH值：
pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体])
在此，pK’=6.86(25℃)。
3．电泳缓冲液
测序凝胶加样缓冲液
98%去离子甲酰胺
10mol/L EDTA(pH8.0)
0.025%二甲苯青FF
0.025%溴酚蓝
甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不
过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1
小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存
于-70℃。
常用的电泳缓冲液
缓冲液
Tris-乙酸（TAE）
Tris-磷酸（TPE）
使用液
1×：0.04mol/L Tris-乙酸
0.001mol/L EDTA
1×:0.09mol/L Tris-磷酸
0.002mol/L EDTA
浓贮存液（每升）
50×：242g Tris碱
57.1ml冰乙酸
100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
10×:10g Tris碱
15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）
40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
5×：54g Tris碱
27.5硼酸
20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
1×:5ml 10mol/L NaOH
2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
5×:15.1g Tris
94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3）
50ml 10% SDS(电泳级)
Tris-硼酸（TBE）a 0.5×0.045mol/L Tris-硼酸
碱性缓冲液b
Tris-甘氨酸c
说明：
0.001mol/L EDTA
1×:50mmol/L NaOH
1mmol/L EDTA
1×:25mmol/L Tris
250mmol/L 甘氨酸
0.1% SDS
①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保
存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×
的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作
为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小， 故通过缓冲液的电流量通常较大，
需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
2×SDS凝胶加样缓冲液：
100mmol/L Tris?HCl(6.8)
200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）
4%SDS（电泳级）
0.2%溴酚蓝
20%甘油
不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液
现加于上述缓冲液中。
4．凝胶加样缓冲液
缓冲液类型 6×缓冲液
0.25%溴酚蓝
Ⅰ
0.25%二甲苯青FF
40%（W/V）蔗糖水溶液
0.25溴酚蓝
Ⅱ
0.25%二甲苯青FF
15%聚蔗糖(Ficoll400)
0.25%溴酚蓝
Ⅲ
0.25%二甲苯青FF
30%甘油水溶液
Ⅳ
0.25%溴酚蓝
40%(W/V)蔗糖水溶液
碱性加样缓冲液:
300mmol/L NaOH
6mmol/L EDTA
18%聚蔗糖(Ficoll400)
Ⅴ
0.15%溴甲酚绿
0.25%二甲苯青FF
使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品
孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳
动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。
以0.5×TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，
而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的范围
内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为
示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。
5．各种pH值的Tris缓冲液的配制
各种pH值的Tris缓冲液的配制
4℃
4℃
4℃
室温
4℃
贮存温度
所需pH值（25℃）
7．1
7．2
7．3
7．4
7．5
7．6
7．7
7．8
7．9
8．0
8.1
8.2
8.3
8.4
8.5
8.6
8.7
8.8
8.9
0.1mol/L HCl的体积
45．7
44．7
43．4
42．0
40．3
38．5
36．6
34．5
32．0
29．2
26.2
22.9
19.9
17.2
14.7
12.4
10.3
8.5
7.0
某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制：将50ml 0.1mol/L Tris碱溶液
与上表所示相应体积（单位：ml）的0.1ml/L HCl混合，加水将体积调至100ml
（2）温度对50mmol/L Tris?HCl液pH值的影响
4℃ 25℃
3
7℃
7
．2
7
．3
8．1 7．5
8．2 7．6
8．3 7．7
7
．4
7
．5
7
．6
7
．7
7
．8
7
．9
8
．0
8
．1
8
．2
8
．3
8
．4
8
．5
8．4 7．8
8．5 7．9
8．6 8．0
8．7 8．1
8．8 8．2
8．9 8．3
9．0 8．4
9．1 8．5
9．2 8．6
9．3 8．7
9．4
（6）常用缓冲液的pKa值
缓冲液
Trisa
HEPESb
MPOSc
PIPESd
分子量
12.1
283.3
209.3
304.3
8．8
pKa值
8.08
7.47
7.15
6.76
缓冲范围
7.1～7.9
7.2～8.2
6.6～7.8
6.2～7.3
MESe 195.2 6.09 5.4～6.8
a：三羟甲基氨基甲烷；b：N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸；c：3-（N-吗啉代）
丙磺酸；d：N，N’-双（2-乙磺酸）哌嗪；e：2-（N-吗啉代）乙磺酸。
7．温度对常用缓冲液pH的影响
缓冲体系
Mes
Ada
PiPes
Aces
Bes
Mops
Tes
Hepes
Tricine
Tris
Bicine
Glycylglycine
pKa(20℃)
6.15
6.60
6.80
6.90
7.15
7.20
7.50
7.55
8.15
8.30
8.35
8.40
△pKa/10℃
-0.110
-0.110
-0.085
-0.200
-0.160
-0.013
-0.200
-0.014
-0.210
-0.310
-0.180
-0.280
2024年4月4日发(作者：声含海)
TAE是Tris-乙酸，缓冲容量小，但是溶解度大，易于储存
TBE是Tris-硼酸，缓冲容量大，但是溶解度小，不易长期储存，易产生沉淀
TAE与TBE的区别
首先要知道 TAE 与 TBE 缓冲溶液的成份如下：
50x TAE Buffer (Tris-Acetate-EDTA)
242 gm Tris base
57.1 ml Acetic acid 100ml
0.5M EDTA
Add ddH2O to 1 liter and adjust pH to 8.5.
10x TBE Buffer (Tris-Borate-EDTA)
108 gm Tris base
55 gm Boric acid
9.3 gm Na4EDTA
Add ddH2O to 1 liter.
The pH is 8.3 and requires no adjustment.
它们的分别有下列几点：
1. TBE 不能太浓 (它只可有 10 times)，因为 borate 会很容易沉淀，但一般有少许沉淀
是不会有太大问题。
2. TBE 的 buffering capacity 比 TAE 高，用 TBE 来跑出来的 gel，分辨率 (resolution)
会比较高。
3. 因为 TBE 有 borate 离子 (ion)，它会影向酵素 (enzyme) 的工作。因此，若要为分离
出的 DNA 进行下一步酵素处理，如 cloning 或 restriction cut 的话，就要切记不要让
DNA 碰上 borate ion。
4. TAE的 buffer capacity 比较差，gel 一般比较模糊，但它不会对影向酵素
三种缓冲液的配制方法
Tris-乙酸（TAE）：50×浓贮存液（每升）：
242g Tris 碱
57.1ml 冰乙酸
100ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用时再稀释50倍。
Tris-磷酸（TPE）：10×浓贮存液（每升）：
108g Tris 碱
15.5ml 85％磷酸（1.679g /ml）
40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
使用时再稀释10倍。
Tris-硼酸（TBE）：5×浓贮存液（每升）：
54g Tris 碱
27.5g 硼酸
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电泳缓冲液TAE起什么作用呢?
默认分类 2007-10-05 20:29:30 阅读11 评论0 字号：大中小 订阅
电泳缓冲液TAE起什么作用呢?
缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反
应，正极发生的是氧化反应（4OH--4e->2H2O+O2)，负极发生的是还原反应（4H++4e->2H2)，
长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，使溶液两
极的pH保持基本不变。
电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，
一般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢；
太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。
电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等离子，
防止电泳时激活 DNA酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。
TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量
（TBE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移
率较其他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效
果，此外，回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小，长时
间电泳（如过夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。
TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于1kb的片段
时分离效果更好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作用生成
非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使
用。
TPE的缓冲能力也较强，但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出，所以也不宜在回收
DNA片段的电泳中使用。
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2007-10-16 15:12
一、核酸及蛋白质常用数据
1．核苷三磷酸的物理常数
分
化合物 子
.0)
量
ATP
5
07
4
83
5
23
4
84
4
94
4
67
5
07
4
82
λmax(pH71摩尔溶液（pH7.0）中λmax
时的最大吸收值 0
OD280/OD26
259 15400 0.15
CTP 271 9000 0.97
GTP 253 13700 0.66
UTP 262 10000 0.38
dATP 259 15200 0.15
dCTP 271 9300 0.98
dGTP 253 13700 0.66
dTTP 267 9600 0.71
2．常用核酸的长度与分子量
核酸
λDNA
pBR322
28SrRNA
23SrRNA
18SrRNA
19SrRNA
核苷酸数
48502（双链环状）
4363（双链）
4800
3700
1900
1700
分子量
3.0×107
2.8×106
1.6×106
1.2×106
6.1×105
5.5×105
5SrRNA
tRNA（大肠杆菌）
120
75
3.6×104
2.5×104
3．常用核酸蛋白换算数据
（1）重量换算
1μg=10-6g 1pg=10-12g
1ng=10-9g 1fg=10-15g
（2）分光光度换算：
1A260双链DNA=50μg/ml
1A260单链DNA=30μg/ml
1A260单链RNA=40μg/ml
（3）DNA摩尔换算：
1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端
1μg pBR322 DNA=0.36pmol
1pmol 1000bp DNA=0.66μg
1pmol pBR322=2.8μg
1kb双链DNA（钠盐）=6.6×105道尔顿
1kb单链DNA（钠盐）=3.3×105道尔顿
1kb单链RNA（钠盐）=3.4×105道尔顿
（4）蛋白摩尔换算：
100pmol分子量100，000蛋白质=10μg
100pmol分子量50，000蛋白质=5μg
100pmol分子量10，000蛋白质=1μg
氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿
（5）蛋白质/DNA换算：
1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质
10，000MW蛋白质=270bp DNA
30，000MW蛋白质=810bp DNA
50，000MW蛋白质=1.35kb
100，000MW蛋白质=2.7kb DNA
4．常用蛋白质分子量标准参照物
（1）高分子量标准参照
肌球蛋白
肌球蛋白
β-半乳糖甘酶
B
磷酸化酶B
分子量
212，000
116，000
97，400
（2）中分子量标准参照
磷酸化酶B
牛血清白蛋白
谷氨酶脱氢酶
卵白蛋白
醛缩酶
碳酸酐酶
大豆??蛋白酶
抑制剂
溶菌酶
（3）低分子量标准参照
31，00
21，500
16，900
14，400
97，400 碳酸酐酶
66，200 大豆??蛋白酶
55，000 抑制剂
42，700 马心肌球蛋白
40，000 溶菌酶 牛血清白蛋白 66，200
过氧化氢酶`
醛缩酶
57，000
40，000
31，000 肌球蛋白（F1） 8，100
21，500 肌球蛋白（F2） 6，200
肌球蛋白（F3） 2，500
14，400
5．常用DNA分子量标准参照物
λDNA/Hind
Ⅲ
23130
9416
6557
4361
2322
2027
564
125
续上表
Ⅰ
21226
7421
5804
5643
4843
3530
λDNA/EcoR
λ/HindⅢ+EcoRⅠ
21227
5148
4973
4268
3530
2027
1904
1584
1375
974
831
564
125
pBR322/HaeⅢ
587
405
504
458
434
267
234
213
192
184
124
123
104
89
80
64
57
51
21
18
11
7
pBR322/Hinf
Ⅰ
1631
517
506
396
344
298
221
220
154
75
φχ174/HinfⅠ
726
713
553
500
417
413
311
249
200
151
140
118
100
82
66
48
42
40
24
φχ174/Hae Ⅲ
1353
1078
872
603
310
281
271
234
194
118
72
φχ174/Tap
Ⅰ
2914
1175
404
327
231
141
87
54
33
20
二、常用缓冲液
1．分子克隆常用缓冲液(无)
2．磷酸缓冲液
（1）25℃下0.1mol/L磷酸钾缓冲液的配制※
pH
5.8
6.0
6.2
6.4
6.6
6.8
7.0
7.2
1mol/L K2HPO4(ml)
8.5
13.2
19.2
27.8
38.1
49.7
61.5
71.7
1mol/L KH2PO4(ml)
91.5
86.8
80.8
72.2
61.9
50.3
38.5
28.3
7.4
7.6
7.8
8.0
80.2
86.6
90.8
94.0
19.8
13.4
9.2
6.2
（2）25℃下0.1mol/L磷酸钠缓冲液的配制※
pH
5.8
6.0
6.2
6.4
6.6
6.8
7.0
7.2
7.4
7.6
7.8
8.0
1mol/L Na2HPO4(ml)
7.9
12.0
17.8
25.5
35.2
46.3
57.7
68.4
77.4
84.5
89.6
93.2
1mol/L NaH2PO4(ml)
92.1
88.0
82.2
74.5
64.8
53.7
42.3
31.6
22.6
15.5
10.4
6.8
※:用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据
Henderson-Hasselbalch方程计算其pH值：
pH=pK’+1g([质子受体]/[质子供体])
在此，pK’=6.86(25℃)。
3．电泳缓冲液
测序凝胶加样缓冲液
98%去离子甲酰胺
10mol/L EDTA(pH8.0)
0.025%二甲苯青FF
0.025%溴酚蓝
甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不
过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1
小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存
于-70℃。
常用的电泳缓冲液
缓冲液
Tris-乙酸（TAE）
Tris-磷酸（TPE）
使用液
1×：0.04mol/L Tris-乙酸
0.001mol/L EDTA
1×:0.09mol/L Tris-磷酸
0.002mol/L EDTA
浓贮存液（每升）
50×：242g Tris碱
57.1ml冰乙酸
100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
10×:10g Tris碱
15.5ml85%磷酸（1.679g/ml）
40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
5×：54g Tris碱
27.5硼酸
20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)
1×:5ml 10mol/L NaOH
2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
5×:15.1g Tris
94g 苷氨酸（电泳级）（pH8.3）
50ml 10% SDS(电泳级)
Tris-硼酸（TBE）a 0.5×0.045mol/L Tris-硼酸
碱性缓冲液b
Tris-甘氨酸c
说明：
0.001mol/L EDTA
1×:50mmol/L NaOH
1mmol/L EDTA
1×:25mmol/L Tris
250mmol/L 甘氨酸
0.1% SDS
①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保
存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×
的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作
为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小， 故通过缓冲液的电流量通常较大，
需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
2×SDS凝胶加样缓冲液：
100mmol/L Tris?HCl(6.8)
200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）
4%SDS（电泳级）
0.2%溴酚蓝
20%甘油
不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液
现加于上述缓冲液中。
4．凝胶加样缓冲液
缓冲液类型 6×缓冲液
0.25%溴酚蓝
Ⅰ
0.25%二甲苯青FF
40%（W/V）蔗糖水溶液
0.25溴酚蓝
Ⅱ
0.25%二甲苯青FF
15%聚蔗糖(Ficoll400)
0.25%溴酚蓝
Ⅲ
0.25%二甲苯青FF
30%甘油水溶液
Ⅳ
0.25%溴酚蓝
40%(W/V)蔗糖水溶液
碱性加样缓冲液:
300mmol/L NaOH
6mmol/L EDTA
18%聚蔗糖(Ficoll400)
Ⅴ
0.15%溴甲酚绿
0.25%二甲苯青FF
使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品
孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳
动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。
以0.5×TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，
而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的范围
内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为
示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。
5．各种pH值的Tris缓冲液的配制
各种pH值的Tris缓冲液的配制
4℃
4℃
4℃
室温
4℃
贮存温度
所需pH值（25℃）
7．1
7．2
7．3
7．4
7．5
7．6
7．7
7．8
7．9
8．0
8.1
8.2
8.3
8.4
8.5
8.6
8.7
8.8
8.9
0.1mol/L HCl的体积
45．7
44．7
43．4
42．0
40．3
38．5
36．6
34．5
32．0
29．2
26.2
22.9
19.9
17.2
14.7
12.4
10.3
8.5
7.0
某一特定pH值的0.05mol/L Tris缓冲液的配制：将50ml 0.1mol/L Tris碱溶液
与上表所示相应体积（单位：ml）的0.1ml/L HCl混合，加水将体积调至100ml
（2）温度对50mmol/L Tris?HCl液pH值的影响
4℃ 25℃
3
7℃
7
．2
7
．3
8．1 7．5
8．2 7．6
8．3 7．7
7
．4
7
．5
7
．6
7
．7
7
．8
7
．9
8
．0
8
．1
8
．2
8
．3
8
．4
8
．5
8．4 7．8
8．5 7．9
8．6 8．0
8．7 8．1
8．8 8．2
8．9 8．3
9．0 8．4
9．1 8．5
9．2 8．6
9．3 8．7
9．4
（6）常用缓冲液的pKa值
缓冲液
Trisa
HEPESb
MPOSc
PIPESd
分子量
12.1
283.3
209.3
304.3
8．8
pKa值
8.08
7.47
7.15
6.76
缓冲范围
7.1～7.9
7.2～8.2
6.6～7.8
6.2～7.3
MESe 195.2 6.09 5.4～6.8
a：三羟甲基氨基甲烷；b：N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸；c：3-（N-吗啉代）
丙磺酸；d：N，N’-双（2-乙磺酸）哌嗪；e：2-（N-吗啉代）乙磺酸。
7．温度对常用缓冲液pH的影响
缓冲体系
Mes
Ada
PiPes
Aces
Bes
Mops
Tes
Hepes
Tricine
Tris
Bicine
Glycylglycine
pKa(20℃)
6.15
6.60
6.80
6.90
7.15
7.20
7.50
7.55
8.15
8.30
8.35
8.40
△pKa/10℃
-0.110
-0.110
-0.085
-0.200
-0.160
-0.013
-0.200
-0.014
-0.210
-0.310
-0.180
-0.280