2024年4月11日发(作者：光忻)
紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12 注射
液
【实验内容】
1. 对照品溶液和样品溶液的配制
准确称取维生素 B12 对照品适量，加水溶解稀释成25μg/mL 的溶液。
精密吸取维生素 B12 注射液0.5 ml 于10 ml 容量瓶中，用水稀释至刻度摇匀，
得到待测
样品溶液（按标示含量稀释成25μg/ml 的溶液）。
2. 吸收光谱的绘制与注射液的鉴别
取对照品溶液进行光谱扫描（250 ~ 600 nm），得到维生素B12 的吸收曲线，
寻找吸收峰，
扫描后可得到在278nm，361 nm 和550 nm 波长处出现的3 个吸收峰，然后
在以上3 个吸
收峰处测量维生素B12 注射液的吸光度，并计算A361/A278 和A361/A550 的
比值。
3. 维生素B12 的定量测定
根据吸收曲线选择最大吸收波长（在 361 nm 或附近）作为测量波长，测量维
生素B12
【注意事项】
1. 注意石英比色皿的操作使用；
2. 使用5 联池时要注意比色皿在样品池中的位置，不可混淆；
3. 测定时不要打开仪器的样品池盖。
【数据记录】
WL
550.5
550.0
361.0
278.0
277.5
【数据处理】
1、定性分析
E(1%1cm361.0nm)/E(1%1cm277.5nm)=A(361.0nm)/A(277.5nm)=1.81
E(1%1cm361.0nm)/E(1%1cm550.5nm)=A(361.0nm)/A(550.5nm)=3.17
2、定量分析
因为，A(361nm)=E(1%1cm)cl，g/100ml=10
6
μg/100ml=10
4
μg/ml
所以，
c
B12
=A(361nm)/E(1%cm)l=A(361nm)/207*10
4
=0.450/207*10
4
=21.74μg/ml
ABS
0.142
0.141
0.450
0.248
0.249
Vit
B12(%)
=(
c
B12
*n)/(500μg/ml)*100%=(21.74*20)/500*100%=87.0%(n
为稀释倍数)
【思考题】
1． 采用吸光系数法直接测定样品含量有何要求？
2．利用其他组同学的实验结果，比较同一溶液在不同仪器上测得的吸收曲线的
形状、
吸收峰波长以及相同浓度的吸光度有无不同，试作解释。
利用邻组同学的实验结果，比较同一溶液在不同仪器上测得的吸收曲线的形状、吸收峰波长以及相同浓度
的吸光度有无不同，试作解释。
答：不同仪器得到的吸收曲线形状基本一致，能反映出同一物质的基本特征，但吸收曲线的吸光度和吸收
峰位置波长略有差异。这是因为不同的仪器由于其性能的差异，导致吸光度和波长等参数不同，因此必须
对仪器进行定期的校正。
3．比较用吸光系数和校正曲线定量方法，你认为哪种方法好？为什么？
吸光系数法可根据测量得到的吸光度直接计算浓度，简便易行，但仪器性能差异会导致结果误差较大，因
此必须对仪器的吸光度和波长进行校正后方能采用此法，且浓度要在复合Beer定律的线性范围内。
校正曲线法是配制一系列标准溶液作为基础进行测量，即使有偏离Beer定律线性关系，也可以应用于
测定。因为是在相同条件下测量，有标准溶液的校正，可抵消仪器性能、操作等所带来的系统误差，与前
一种方法相比，虽然操作步骤要繁琐些，但准确、可靠，是测定最常用的方法。
2024年4月11日发(作者：光忻)
紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12 注射
液
【实验内容】
1. 对照品溶液和样品溶液的配制
准确称取维生素 B12 对照品适量，加水溶解稀释成25μg/mL 的溶液。
精密吸取维生素 B12 注射液0.5 ml 于10 ml 容量瓶中，用水稀释至刻度摇匀，
得到待测
样品溶液（按标示含量稀释成25μg/ml 的溶液）。
2. 吸收光谱的绘制与注射液的鉴别
取对照品溶液进行光谱扫描（250 ~ 600 nm），得到维生素B12 的吸收曲线，
寻找吸收峰，
扫描后可得到在278nm，361 nm 和550 nm 波长处出现的3 个吸收峰，然后
在以上3 个吸
收峰处测量维生素B12 注射液的吸光度，并计算A361/A278 和A361/A550 的
比值。
3. 维生素B12 的定量测定
根据吸收曲线选择最大吸收波长（在 361 nm 或附近）作为测量波长，测量维
生素B12
【注意事项】
1. 注意石英比色皿的操作使用；
2. 使用5 联池时要注意比色皿在样品池中的位置，不可混淆；
3. 测定时不要打开仪器的样品池盖。
【数据记录】
WL
550.5
550.0
361.0
278.0
277.5
【数据处理】
1、定性分析
E(1%1cm361.0nm)/E(1%1cm277.5nm)=A(361.0nm)/A(277.5nm)=1.81
E(1%1cm361.0nm)/E(1%1cm550.5nm)=A(361.0nm)/A(550.5nm)=3.17
2、定量分析
因为，A(361nm)=E(1%1cm)cl，g/100ml=10
6
μg/100ml=10
4
μg/ml
所以，
c
B12
=A(361nm)/E(1%cm)l=A(361nm)/207*10
4
=0.450/207*10
4
=21.74μg/ml
ABS
0.142
0.141
0.450
0.248
0.249
Vit
B12(%)
=(
c
B12
*n)/(500μg/ml)*100%=(21.74*20)/500*100%=87.0%(n
为稀释倍数)
【思考题】
1． 采用吸光系数法直接测定样品含量有何要求？
2．利用其他组同学的实验结果，比较同一溶液在不同仪器上测得的吸收曲线的
形状、
吸收峰波长以及相同浓度的吸光度有无不同，试作解释。
利用邻组同学的实验结果，比较同一溶液在不同仪器上测得的吸收曲线的形状、吸收峰波长以及相同浓度
的吸光度有无不同，试作解释。
答：不同仪器得到的吸收曲线形状基本一致，能反映出同一物质的基本特征，但吸收曲线的吸光度和吸收
峰位置波长略有差异。这是因为不同的仪器由于其性能的差异，导致吸光度和波长等参数不同，因此必须
对仪器进行定期的校正。
3．比较用吸光系数和校正曲线定量方法，你认为哪种方法好？为什么？
吸光系数法可根据测量得到的吸光度直接计算浓度，简便易行，但仪器性能差异会导致结果误差较大，因
此必须对仪器的吸光度和波长进行校正后方能采用此法，且浓度要在复合Beer定律的线性范围内。
校正曲线法是配制一系列标准溶液作为基础进行测量，即使有偏离Beer定律线性关系，也可以应用于
测定。因为是在相同条件下测量，有标准溶液的校正，可抵消仪器性能、操作等所带来的系统误差，与前
一种方法相比，虽然操作步骤要繁琐些，但准确、可靠，是测定最常用的方法。