2024年4月13日发(作者：叶若华)
８４８ 中国抗生素杂志２０１３年１１月第３８卷第１１期
文章编号：１００１－８６８９（２０１３）１ ｌ一０８４８—０５
替米考￣Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００纳米粒的制备及体外评价
杜昌余 王洪光
林卫瑞 王嘉伟
（青岛科技大学，
青岛２６６０４２１
摘要： 目的 研究Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＬＩＯ０纳米粒的制备工艺和处方，并考察其包封率和体外释放度。方法 ￣Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００为高分
子载体材料，以替米考星为模型药物，采用溶剂非溶剂法制备纳米粒。用透射电镜观察其形态，纳米粒度仪测定其粒径分布，
用透析袋法测定纳米粒的包封率，动态透析法研究其体外释放度。结果 制备的纳米粒为结构致密的球体，且均匀规整，平均
粒径为（４５．６±４．８）ｎｍ￣右。包封率为达９５％以上，载药量（２０．６４－ｔ－０－３６）％。替米考星纳米粒的体外释药具有显著的ｐＨ敏感性，
且具有一定的缓释效果。结论
中图分类号：Ｒ９７８．１ ５
溶剂非溶剂法制备了均匀规整、包封率高、且具有一定缓释效果的替米考星纳米粒。
文献标志码：Ａ
关键词：替米考星；纳米粒；Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００；包封率
Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｉｌｍｉｃｏｓｉｎ－—Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ １ ００－－ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ａｎｄ
ｉｔｓ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ／１１ ｖｉｔｒｏ
Ｄｕ Ｃｈａｎｇ—ｙｕ，Ｗａｎｇ Ｈｏｎｇ—ｇｕａｎｇ，Ｌｉｎ Ｗｅｉ－ｒｕｉ ａｎｄ Ｗａｎｇ Ｊｉａ．ｗｅｉ
（Ｑｉｎｇｄａｏ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｑｉｎｇｄａｏ ２６６０４２１
Ａｂｓｔｒａｃｔ ０ｂｊｅｃｔｉｖｅ ＴＯ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｏｆ ｐｒｅｐａｒｅ Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ Ｉ Ｏ０ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｌｏａｄｅｄ
ｗｉｔｈ ｔｉｌｍｉｃｏｓｉｎ，ａｎｄ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ａｎｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｂｅｈａｖｉｆｏｒ ｉｎ ｖｉｔｒｏ
Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
．
ｗｅｒｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｅｖａｐｏｒａｔｉｎｇ ｅｔｈａｎｏｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ Ｉ Ｏ０，ａｎｄ ｔｈｅ ｔｉｌｍｉｃｏｓｉｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｍｏｄｅｌ ｄｒｕｇ
．
．
ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｕｎｄｅｒ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ
Ｔｈｅ ｄｉａｍｅｔｅｒ ｏｆ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｎａｎｏｍｅｔｅｒ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ａｎａｌｙｚｅｒ．Ｔｈｅ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ａｎｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｔｅｓｔ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｆ
ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｄｉａｌｙｓｉｓ ｂａｇ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｗｅｒｅ ｓｐｈｅｒｉｃａｌ ｗｉｔｈ ａ ｓｏｌｉｄ ｄｅｎｓｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
Ｔｈｅｙ ｈａｖｅ
．
ａｖｅｒａｇｅ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ｏｆ（４５．６￣４．８）ｎｍ ｗｉｔｈ ｕｎｉｆｏｒｍｅｄ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｉｃｉｆｅｎｃｙ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ
９５％，ａｎｄ ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ ｃｏｅｆｉｃｉｆｅｎｔ ｗａｓ（２０．６４￣０－３６１％．Ｔｈｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｔｉｌｍｉｃｏｓｉｎ—ＮＰｓ ｄｉｓｔｉｎｃｔｌｙ ｄｅｐｅｎｄｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｐＨ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｅｆｉｃｉｆｅｎｃｙ ｖａｌｕｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｍｅａｎｓ ｏｆ ｅｖａｐｏｒａｔｉｎｇ ｅｔｈａｎｏｌ
ｓｏｌｕｔｉｏｎ，Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈｅｒ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｉｓ ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ｉｎ ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｆ
ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．ｆ
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｔｉｌｍｉｃｏｓｉｎ；Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ；Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１ ００；Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ
替米考￣（Ｔｉｌｍｉｃｏｓｉｎ，ＴＭＳ）化学名为４．０．脱（２， 在胃部酸性环境中易被破坏失效，对胃黏膜产生刺
６一二去氧一３一Ｃ一甲基－Ｌ－核糖一吡喃已基）．２０一脱一２０一（３，
５一二甲基－１－哌啶基）泰乐菌素，又名２０．去氧一２０一（３，
５一二甲基一ｌ一哌啶基）脱碳霉糖泰乐菌素，分子式为
激。ＴＭＳ是以泰乐菌素为前体半合成的大环内酯类
畜禽专用抗生素。主要用于牛、奶牛、山羊、猪、
鸡等动物的感染性疾病，特别是畜禽呼吸道疾病如
家畜放线杆菌性胸膜肺炎、巴氏杆菌病和鸡霉形
ｃ Ｈ。０Ｎ：０ｌ３，分子量为８６９．１５，味极苦，且呈碱性，
收稿日期：２０１２—１１－１０
作者简介：杜昌余，男，生于１９８９年，硕士研究生，研究方向：缓控释制剂，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｕｃｈａｎｇｙｕ０４＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。
替米考，￣Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００纳米粒的制备及体外评价杜昌余等
体病，对革兰阳性菌、部份革兰阴性菌、霉形体及
螺旋体等均有抑制作用，抗菌活性明显优于泰乐菌
素。与泰乐菌素相比，其用药量少、作用持久、副
作用小、体内残留低、安全无毒，是一种经济、安
全、有效的畜禽常用抗菌和促进生长的药物，成为
了预防和治疗畜禽呼吸道感染的首选药物【 】。本实验
采用ＴＭＳ作为模型药物来制备纳米粒。
近年来，人们开始研究纳米粒作载体来降低药
物毒性，延长药物的半衰期，提高生物利用度，减少
给药次数【：］。本实验选用ｐＨ敏感性肠溶材料Ｅｕｄｒａｇｉｔ
Ｌ１００为载体，采用溶剂非溶剂法制备了ＴＭＳ纳米
药物，将其制成可生物降解的纳米粒（ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，
ＮＰｓ）。主要目的是考察ＴＥｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００作为载体材料
制备纳米粒的工艺和处方，对它的各种性质和体外
释放进行了初步研究。同时制备的纳米粒还能掩盖
ＴＭＳ药物的苦味，降低药物在胃中的释放，避免胃
刺激。
１ 仪器与材料
仪器：７８ＨＷ一１恒温磁力搅拌器（江苏金坛市金
城国际实验仪器厂）；Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ｚＳ９Ｏ纳米粒度
和Ｚｅｔａ电位及分子量分析仪（英国马尔文仪器有限公
司）；ＹＰ一２０２Ｎ电子天平（上海精密科学仪器有限公
司）；ＪＥＭ一２１００透射电子显微镜（日本电子公司）；
ＵＶ１０００紫外分光光度计（北京莱伯泰科有限公司）；
ＫＨ一２５０ＤＢ型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器
有限公司１；ＢＴ００—１００Ｍ型恒流蠕动泵（保定兰格恒流
泵有限公司１。
材料：替米考星（烟台绿叶动物保健品有限公
司）；Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００（德国罗姆公司）；其他试剂均为分
析纯。
２方法与结果
２．１纳米粒的制备
按照文献［３］报道，采用溶剂非溶剂法制备ＴＭＳ￣Ｎ
米粒。具体方法如下：称取ＴＭＳ适量超声溶解于含
适量磷酸盐的蒸馏水６０ｍＬ中，构成水相。称取适量
Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００溶解于２０ｍＬ无水乙醇中，超声溶解构
成有机相。以４００ｒ／ｍｉｎ的磁力搅拌下，用７号骨髓穿
刺针将水相缓慢注入有机相中。注射完毕后继续搅
拌１０ｍｉｎ，接着转入６０℃水浴中，搅拌４ｈ以挥发有机
溶剂。放冷后过０．４５ｇｍ微孔滤膜，既得。
２．２工艺处方优化
本实验通过考察可能影响纳米粒粒径及包封率
的各因素进行单因素实验，从中选取４个主要因素即
８４９
ＴＭＳ与Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００的比例（Ａ）、搅拌速度（Ｂ）、滴加
速度（Ｃ）、加热时间（Ｄ）进行考察。选用Ｌ９（３ ）正交实
验法优化工艺处方，结果见表１、２。
通过对正交实验进行极差分析可以知道，各因
素对粒径影响的顺序为Ｃ＞Ｄ＞Ｂ＞Ａ，对包封率影响
的顺序为Ａ＞Ｃ＞Ｄ＞Ｂ。对粒径、包封率和载药量３
种指标进行综合考虑后，得出各因素的最优化组合
为Ａ２Ｂ２Ｃ３Ｄ４。
纳米粒的粒径和包封率影响药物的吸收，不同
的工艺处方水平对纳米粒的包封率有非常大的影
响，而得到的粒径都能满足制剂的要求。因此， 在
满足一定的粒径要求下，选取包封率为优化指标，
确定最佳工艺处方为ＴＭＳ ０．１ｇ，Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００ ０．５ｇ，
搅拌速度为４００ｒ／ｍｉｎ，滴加速度为３ｍＬ／ｍｉｎ，加热时
间为４ｈ。
２．３纳米粒形态学研究
取优化后制备的ＴＭＳ纳米粒溶液，滴加在覆盖
碳膜的铜网上，自然干燥后于透射电镜下观察纳米
粒的形态，见图１。从图１中可看出纳米粒为规则的
类球型粒子，均匀分散。出现一些黏连是因为在制
备电镜样本时，纳米粒干燥脱水而造成的。
２．４ 粒径及Ｚｅｔａ￣位测定
取适量优化后制各的纳米粒溶液，稀释后放入纳
米粒度及Ｚｅｔａ电位分析仪中测定其粒径分布、Ｚｅｔａ电位
及多分散系数（ＰＤＩ）。平均粒径为０５．６±４．８）ｎｍ，Ｚｅｔａ电
位为（．３８．１±２．４）ｍＶ。ＰＤＩ为０．１６３。纳米粒度分布图
如下：
图１ ＴＭＳ—Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００纳米粒透射电镜照片（×２０，０００）
Ｆｉｇ．１ ＴＥＭ ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｓ ｏｆＴＭＳ－Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００
ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ（×２０，ｏｏｏ）
表１正交试验因素及水平
Ｔａｂ．１ Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ
８５０． 中国抗生素杂志２０１３年１１月第３８卷第１１期
备ｌｓｌｌ 一
２．５ ＴＭＳ标准曲线及方法学研究
２．５．１ ＴＭＳ紫外吸收波长测定
称取适量ＴＭＳ原料药分别溶解于甲醇和蒸馏水
在蒸馏水中的最大吸收波长为２９ １ｎｍ，而Ｅｕｄｒａｇｉｔ
Ｌ１００在此波长下没有特征吸收。参考文献［４］，ｐＨ值
对ＴＭＳ吸收光谱无影响。因此，选用这两个波长为
ＴＭＳ的测定波长。
溶液中，在２００－６００ｎｍ波长范围分别扫描，同时扫
描Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００在此波长范围内的吸收光谱。结果表
明，ＴＭＳ在甲醇溶液中的最大吸收波长为２８４ｎｍ，
ＳｔａｔｉｓｔｉＣＳ ＧｒａｐＷｌ ｍｅａｓｍ＇ｅｍｅｎ￣
２．５．２ ＴＭＳ在甲醇溶液中的标准曲线
精密称取ＴＭＳ原料药０．１００７ｇ，加甲醇溶解并定
容到１０ｍＬ，精密量取ｌｍＬ定容到１００ｍＬ，配制成浓
度为１００．７ｇｇ／ｍＬ标准溶液。分别精密量取上述标准
一’
’ ‘
一’。 ‘。。‘ 。 １ Ｉ ’・一…‘ｌ
一・。 一一‘：一Ｉ ｌ 。‘一 ：‘・ｌ
ｌ １０ １００ ｌＯＧＯ
Ｉ ｌ 一～ 。‘‘‘
Ｉ ’一
溶液１、１．５、２、２．５、３、３．５￣Ｗ４ｍＬ，置于１０ｍＬ容
量瓶中，再用甲醇定容得系列浓度的标准溶液。将
上述标准在２８４ｎｍ波长处分别测定紫外吸收度 ），
以ＴＭＳ溶液浓度（Ｃ）为横坐标，吸收度（ ）为纵坐标
进行线性回归，回归方程为Ａ＝０．０２１５Ｃ＋０．０２３６，
ｒ＝０．９９９８。结果表明，ＴＭＳ在０～４０．２８ｐ．ｇ／ｍＬ范围内线
性关系良好。
Ｓｉｚｅ／∞ ｎ）
图２纳米粒度分布图
Ｆｉｇ．２ Ｔｈｅ ｓｉｚｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
Ｚｅｔａ Ｐｔｅｎｔｉａｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｄｏｎ
ｏ×１
２．５．３ ＴＭＳ在蒸馏水中的标准曲线
精密称取ＴＭＳ原料药０．１０００ｇ，按“２．５．２”同法
操作，得ＴＭＳ在蒸馏水中的标准曲线。回归方程为
Ａ＝０．０２２１Ｃ＋Ｏ．０１５９，ｒ＝０．９９９５。结果表明，ＴＭＳ在
Ｏ－４０ｇｇ／ｍＬ范围内线性关系良好。
营５×１
ｔ
兰５ｘｌ
２ｏ０
１００ ０
Ｚｅｔａ Ｐｏｔｅｎｔｉａ／ｍＶ
—
ｌＯ０ ２００
２．５．４ 精密度与回收率考察
取“２．５．２”和“２．５．３”所配制的高、中、低浓
度的标准溶液，分别在１ｄ内测定５次，得日内ＲＳＤ分
—
Ｒｅｃｏｒｄ １９：６ｌ
图３ Ｚｅｔａ电位分布图
Ｆｉｇ．３ Ｚｅｔａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｐａａｅｍ ｏｆｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
替米考星Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００纳米粒的制备及体外评价杜昌余等
别为０．８８％，ｎ１．４５％；连续测定３ｄ，得日间ＲＳＤ分别
为１．３８％和２．２％。精密度符合分析要求。
分别取处方量ＴＭＳ药物的８０％，１００％，１２０％，
分别加入适量空白纳米粒溶液。摇匀后，用甲醇
超声溶解并定容。紫外测定ＴＭＳ的紫外吸收，并
计算得回收率分别为（９９．７±１．８）％、（１０１＿３±２．１）％、
（１００．８±３．９）％ ＝３）。结果表明，制备纳米粒所用的辅
料对样品测定无影响，此方法灵敏度高，重现性好。
２．６包封率及载药量测定
本研究采用透析袋法测定ＴＭＳ纳米粒的包封率［５】。
为考察透析袋的阻滞作用，配置了不同浓度的ＴＭＳ
溶液进行试验。分别取０．２５、０．５和ｌｍｇ／ｍＬ的ＴＭＳ
水溶液ｆ加入适量磷酸盐）２ｍＬ，分别装入长短相同
的透析袋中，两端扎紧，置于盛有１００ｍＬ蒸馏水的
锥形瓶中。然后放入冰箱中，４＂Ｃ冷藏透析。１２ｈ替
换１００ｍＬ新鲜透析介质，透析２４ｈ。过０．２２ｇｍ的微孔
滤膜，测定续滤液的吸光度并计算ＴＭＳ药物的透析
率。该方法透析率为９８．３１％～１０１．６％。分别取０．５、１
和２ｍｇ／ｍＬ的ＴＭＳ水溶液（加入适量磷酸盐）ｌｍＬ，加
入１ｍＬ的空白纳米溶液，震摇后放入透析袋中。同
上透析，测得药物的透析率为９８．０４％～９９．６８％。结
果表明各浓度药物均在２４ｈ内透析完全，可以作为包
封率的一个测定方法。取ＴＭＳ纳米溶液２ｍＬ置透析
袋中，按上述步骤透析，透析液过０．２２ｇｍ的微孔滤
膜，然后测定续滤液的吸光度并计算得到游离药物
的含量（Ｗ ）。另取ＴＭＳ纳米溶液２ｍＬ，加甲醇超声
溶解并定容。过０．２２ｇｍ的微孔滤膜后，测定续滤液
的吸光度，计算得药物总的含量（ｗ ）。计算得药物
包封率为（９８．０４±０．６）％，载药量为（２０．６４±０．３６）％。
２．７纳米粒的体外释放
精密移取纳米混悬液ｌｍＬ（ＴＭＳ：２ｍｇ／ｍＬ），置
于透析袋内，两端扎紧。分别放入装有１００ｍｌ磷酸盐
缓冲液（ｐＨ３．５，５．０，６．８）￣ＩｐＨ１．２的稀盐酸溶液的释
放瓶中，平行３组实验，然后置于（３７±０．５）℃的恒温
振荡器中，在１００ｒ／ｍｉｎ恒温震荡。在０．２５，０．５，１，
２，４，６，８，１２，２４，３６ｈ分别取样ｌｍｌ，同时补加
等量同温释放介质。样品过微孔滤膜后，紫外测定
ＴＭＳ的吸光度，并计算其累积释放百分率。释放曲
线见图
由图４可见，ＴＭＳ纳米粒释放呈现ｐＨ依赖性。由
于Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＬＩＯ０在ｐＨ＞６时溶解，因此在ｐＨ６．８的释放
介质中，Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００被溶蚀而造成一个突释现象，
纳米粒１２ｈ累积释放度已达到８５％以上。而在ｐＨｉ＜５．０
怠
蠢
— 一ｐ｝Ｅ６。８—◆一ｐＩ｛５ ０ ＋ｐＨ３．５—＊一ｐＨｌ＿２
图４ 不同介质的体外释放率曲线， ±Ｓ，ｎ＝３
Ｆｉｇ．４ Ｒｅｌｅａｓｅ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ， ±Ｓ，ｎ＝３
时，纳米粒１２ｈ累积释放度不到５０％。可见ＴＭＳ—
Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００纳米粒具有明显的缓释作用。
释放１Ｏｈ后观察透析袋里的纳米粒形态，发现
ｐＨ６．８释放介质中的纳米粒溶液变的澄清，而其它３
种释放介质中的纳米粒依然为蓝色乳光溶液，和原
来的形态相比基本无差别。进一步说明在ｐＨ６．８的释
放介质中，Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ １ ００材料被被溶解，纳米粒被破
坏而造成突释。
２．８释放方程拟合
将ＴＭＳ纳米粒的累计释放百分率（Ｑ）和时间的平
方根（ｆ ）回归作图，发现在ｐＨ１．２，３．５和５．０的释放
介质两者有显著的线性关系，符合Ｈｉｇｕｃｈｉ［ ］线性方
程。在ｐＨ６．８的磷酸缓冲液中，药物前６ｈ释放符合
Ｈｉｇｕｃｈｉ线性方程，之后出现一个突释效果，Ｈｉｇｕｃｈｉ
方程拟合结果见表３。
３讨论
尤特奇（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）是合成甲基丙烯酸共聚物和甲
基丙烯酸酯共聚物的商品名，通称为丙烯酸树脂。
其由德国ＥＶＯＮＩＫ下属的ＲＯＨＭ公司生产。尤特奇
系列产品均由几种单体聚合而成，根据聚合物的溶
表３ ＴＭＳ纳米粒在４介质中的拟合方程
Ｔａｂ．３ Ｈｉｇｕｃｈｉ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｒｅｌｅａｓｅｄ ｉｎ ｏｆｕｒ ｍｅｄｉｕｍｓ
８５２ 中国抗生素杂志２０１３年１１月第３８卷第１１期
解特性，可分为２类：（１）ｐＨ￣依赖型，包括Ｅｕｄｒａｇｉｔ
ＲＬ、ＲＳ及ＮＥ、ＮＭ系列，在消化液中不溶，但能溶
胀，具有一定的渗透性，可用于缓控释制剂。（２）ｐＨ
依赖型，包括Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ、Ｓ、ＦＳ￣ｆＨＥ系列聚合物，
因带有酸性或碱性基团溶解于不同ｐＨ值消化液中，
可用于保护和隔离包衣或在胃肠道不同部位释放药
药物主要在肠道的环境中释放，并显著延长药物的
释放时间［１０】，达到缓释效果。
本课题采用溶剂非溶剂法制备纳米粒，通过考
察载体材料与药物比例、搅拌速度、滴加速度和加
热时间对纳米粒径，包封率和载药量的影响，初
步优化了工艺处方。制备的纳米粒类球型，形态
规整，分布均匀，包封率达到９５％以上，且稳定性
物；ｐＨ依赖性的尤特奇材料在溶出介质ｐＨ大于它的
溶解限时发生溶解而大量释放药物。Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＬＩＯ０是
好。本方法处方工艺简单，条件温和，不用添加乳
化剂等添加剂，省去乳化步骤，可扩大生产，有望
甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯（１：１）共聚物，为ｐＨ敏感型
阴离子聚合物，能在大于ｐＨ６．０的溶液中溶解，且不
被人体吸收，无刺激性和毒性［，］。它广泛用于药物制
剂的肠溶包衣、缓控释包衣、保护隔离包衣、缓释
高分子材料和经皮给药制剂的骨架胶黏材料ｆ８＿。
替米考星为大环内酯类抗生素，性状为白色至
类白色粉末，在水中不溶，味道极苦，有刺激性气
味，在起效上属于时间依赖性，杀菌效果主要凭借
抗生素的有效剂量下持续作用时间，所以这类抗生
素最好的服用方法是，在有效剂量内减少单次服用
剂量，增加服用次数（或者服用缓控释制剂１。它呈碱
性，在胃部酸性环境中易被破坏失效，且对胃黏膜
产生刺激。本课题选用替米考星为模型药物，肠溶
型Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００为载体材料，采用溶剂非溶剂法制备
ｐＨ敏感型纳米粒。经过研究发现，制备的纳米粒和
纯药相比无刺激性气味，口尝苦味大大降低，在可
忍耐范围以下。因此制备的ＴＭＳ．Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００纳米
粒能很好的掩盖药物的不良气味和苦昧，提高了药
物的适口性，避免了其对采食的影响。体外释放结
果表明，替米考星纳米粒在ｐＨＩ．２的盐酸溶液中几乎
不释放，从而减少药物对胃的刺激，避免药物被胃
酸破坏。并且可以长期缓慢释放药物，使药物持续
时间更长，用量更少，从而减少药物的毒副作用［ ］，
提高药物的稳定性。
替米考星在水中溶解度很低，在盐酸和磷酸缓
冲液中溶解性好，能够满足药物释放的漏槽条件。
且本实验对药物释放做了对照，取低、中、高３种浓
度的替米考星纯药，替米考星￣ＨＥｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００的物
理混合物进行释放，结果均能在３ｈ内释放完全。因
此，载体材料对药物溶解无影响。体外释放实验表
明，纳米粒在ｐＨ１．２的盐酸环境中释放缓慢，２ｈ释放
不到２０％，可减少胃刺激和避免药物被胃酸破坏。
成为一种新型口服纳米制剂。
参考文献
［１］ 朱颖，戈延茹，王成润，等．替米考星脂质体的制备及体外
释放［Ｊ］＿中国兽药杂志，２００９，４３（９）：５—９．
【２］Ｄｅｓａｉｍ Ｌａｂｈａｓｅｔｗａｒ Ａｍｉｄｏｎｇ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ
ｏｆ ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ【Ｊ】．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ，１ ９９６，
１３（１２）：１８３８—１８４５．
『３］ 王文喜，陈海靓，梁文全．聚甲基丙烯酸脂纳米粒作为反
义寡核苷酸传递系统的研究［Ｊ】．药学学报，２００３，３８（４）：
２９８—３０１．
［４］ 宋艳红，白小红，李英．紫外分光光度法测定替米考星的
含量［Ｊ］．山西医科大学学报，２００５，３６（１）：７１—７３．
［５］ 李姜辉，王柏．乳化蒸发法制备固体脂质纳米粒［ＪＪ．药学
进展，２００８，３２（３）：１２７—１３１．
［６］Ｈｉｇｕｃｈｉ Ｔ．Ｒａｔｅ ｏｆ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔｓ ｆｒｏｍ ｏｉｎｔｍｅｎｔ
ｂａｓｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｄｒｕｇｓ ｉｎ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ，１ ９６ １，
５０：８７４．８７５．
［７］ Ｚｏｂｅｌ Ｈ Ｐ＇Ｓｔｉｅｎｅｋｅｒ Ｆ，Ａｔｍａｃａ Ａｂｄｅｌ Ａ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ
ｏｆ ａｍｉｎｏａｌｋｙｌｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ａｓ ｃｏｌｌｏｉｄａｌ
ｄｒｕｇ ｃａｒｒｉｅｒ ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｐａｒｔ ＩＩ：ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ
ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｌｏａｄｅｄ ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ ｎａｎｏｐａｎｉｃｌｅｓ［Ｊ１．Ｅｕｒ Ｊ
Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｐｈａｒｍ，１９９９，４８（１）：１－１２．
［８］ 郭圣荣，方晓玲，黄惠琼，等．新型丙烯酸树脂肠溶包衣材
料的合成与应用［Ｊ］．药学学报，１９９８，３３（１１）：８６０－８６３．
［９］Ａｎｄｒｅａｓ Ｆ，Ｆｅｌｉｃｉｔａｓ Ｈ，Ａｎｄｒｅａ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｍｏｔｅ Ｌｏａｄｉｎｇ ｏｆ
Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｉｎｔｏ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ Ｄｒｉｖｅｎ ｂｙ ａ Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ
Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｇｒａｄｉｅｎｔ［Ｊ］．ＢＢＳ，２００６，１７５８：１６３３—１６４０．
［１０］Ｐｉｇｎａｔｅｌｌｏ Ｒ，Ｂｕｃｏｌｏ Ｃ，Ｆｅｒｒａｒａ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＲＳ１００
ｎａｎｏｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ
ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ［Ｊ］．ＥｕｒＰｈａｒｍ Ｓｃｉ，２００２，１６：５３—６１．
2024年4月13日发(作者：叶若华)
８４８ 中国抗生素杂志２０１３年１１月第３８卷第１１期
文章编号：１００１－８６８９（２０１３）１ ｌ一０８４８—０５
替米考￣Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００纳米粒的制备及体外评价
杜昌余 王洪光
林卫瑞 王嘉伟
（青岛科技大学，
青岛２６６０４２１
摘要： 目的 研究Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＬＩＯ０纳米粒的制备工艺和处方，并考察其包封率和体外释放度。方法 ￣Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００为高分
子载体材料，以替米考星为模型药物，采用溶剂非溶剂法制备纳米粒。用透射电镜观察其形态，纳米粒度仪测定其粒径分布，
用透析袋法测定纳米粒的包封率，动态透析法研究其体外释放度。结果 制备的纳米粒为结构致密的球体，且均匀规整，平均
粒径为（４５．６±４．８）ｎｍ￣右。包封率为达９５％以上，载药量（２０．６４－ｔ－０－３６）％。替米考星纳米粒的体外释药具有显著的ｐＨ敏感性，
且具有一定的缓释效果。结论
中图分类号：Ｒ９７８．１ ５
溶剂非溶剂法制备了均匀规整、包封率高、且具有一定缓释效果的替米考星纳米粒。
文献标志码：Ａ
关键词：替米考星；纳米粒；Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００；包封率
Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｉｌｍｉｃｏｓｉｎ－—Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ １ ００－－ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ａｎｄ
ｉｔｓ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ／１１ ｖｉｔｒｏ
Ｄｕ Ｃｈａｎｇ—ｙｕ，Ｗａｎｇ Ｈｏｎｇ—ｇｕａｎｇ，Ｌｉｎ Ｗｅｉ－ｒｕｉ ａｎｄ Ｗａｎｇ Ｊｉａ．ｗｅｉ
（Ｑｉｎｇｄａｏ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｑｉｎｇｄａｏ ２６６０４２１
Ａｂｓｔｒａｃｔ ０ｂｊｅｃｔｉｖｅ ＴＯ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｏｆ ｐｒｅｐａｒｅ Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ Ｉ Ｏ０ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｌｏａｄｅｄ
ｗｉｔｈ ｔｉｌｍｉｃｏｓｉｎ，ａｎｄ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ａｎｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｂｅｈａｖｉｆｏｒ ｉｎ ｖｉｔｒｏ
Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
．
ｗｅｒｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｅｖａｐｏｒａｔｉｎｇ ｅｔｈａｎｏｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ Ｉ Ｏ０，ａｎｄ ｔｈｅ ｔｉｌｍｉｃｏｓｉｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｍｏｄｅｌ ｄｒｕｇ
．
．
ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｕｎｄｅｒ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ
Ｔｈｅ ｄｉａｍｅｔｅｒ ｏｆ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｎａｎｏｍｅｔｅｒ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ａｎａｌｙｚｅｒ．Ｔｈｅ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ａｎｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｔｅｓｔ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｆ
ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｄｉａｌｙｓｉｓ ｂａｇ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｗｅｒｅ ｓｐｈｅｒｉｃａｌ ｗｉｔｈ ａ ｓｏｌｉｄ ｄｅｎｓｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
Ｔｈｅｙ ｈａｖｅ
．
ａｖｅｒａｇｅ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ｏｆ（４５．６￣４．８）ｎｍ ｗｉｔｈ ｕｎｉｆｏｒｍｅｄ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｉｃｉｆｅｎｃｙ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ
９５％，ａｎｄ ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ ｃｏｅｆｉｃｉｆｅｎｔ ｗａｓ（２０．６４￣０－３６１％．Ｔｈｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｔｉｌｍｉｃｏｓｉｎ—ＮＰｓ ｄｉｓｔｉｎｃｔｌｙ ｄｅｐｅｎｄｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｐＨ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｅｆｉｃｉｆｅｎｃｙ ｖａｌｕｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｍｅａｎｓ ｏｆ ｅｖａｐｏｒａｔｉｎｇ ｅｔｈａｎｏｌ
ｓｏｌｕｔｉｏｎ，Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｉｎｇ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈｅｒ ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｉｓ ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ｉｎ ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｆ
ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．ｆ
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｔｉｌｍｉｃｏｓｉｎ；Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ；Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１ ００；Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ
替米考￣（Ｔｉｌｍｉｃｏｓｉｎ，ＴＭＳ）化学名为４．０．脱（２， 在胃部酸性环境中易被破坏失效，对胃黏膜产生刺
６一二去氧一３一Ｃ一甲基－Ｌ－核糖一吡喃已基）．２０一脱一２０一（３，
５一二甲基－１－哌啶基）泰乐菌素，又名２０．去氧一２０一（３，
５一二甲基一ｌ一哌啶基）脱碳霉糖泰乐菌素，分子式为
激。ＴＭＳ是以泰乐菌素为前体半合成的大环内酯类
畜禽专用抗生素。主要用于牛、奶牛、山羊、猪、
鸡等动物的感染性疾病，特别是畜禽呼吸道疾病如
家畜放线杆菌性胸膜肺炎、巴氏杆菌病和鸡霉形
ｃ Ｈ。０Ｎ：０ｌ３，分子量为８６９．１５，味极苦，且呈碱性，
收稿日期：２０１２—１１－１０
作者简介：杜昌余，男，生于１９８９年，硕士研究生，研究方向：缓控释制剂，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｕｃｈａｎｇｙｕ０４＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。
替米考，￣Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００纳米粒的制备及体外评价杜昌余等
体病，对革兰阳性菌、部份革兰阴性菌、霉形体及
螺旋体等均有抑制作用，抗菌活性明显优于泰乐菌
素。与泰乐菌素相比，其用药量少、作用持久、副
作用小、体内残留低、安全无毒，是一种经济、安
全、有效的畜禽常用抗菌和促进生长的药物，成为
了预防和治疗畜禽呼吸道感染的首选药物【 】。本实验
采用ＴＭＳ作为模型药物来制备纳米粒。
近年来，人们开始研究纳米粒作载体来降低药
物毒性，延长药物的半衰期，提高生物利用度，减少
给药次数【：］。本实验选用ｐＨ敏感性肠溶材料Ｅｕｄｒａｇｉｔ
Ｌ１００为载体，采用溶剂非溶剂法制备了ＴＭＳ纳米
药物，将其制成可生物降解的纳米粒（ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ，
ＮＰｓ）。主要目的是考察ＴＥｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００作为载体材料
制备纳米粒的工艺和处方，对它的各种性质和体外
释放进行了初步研究。同时制备的纳米粒还能掩盖
ＴＭＳ药物的苦味，降低药物在胃中的释放，避免胃
刺激。
１ 仪器与材料
仪器：７８ＨＷ一１恒温磁力搅拌器（江苏金坛市金
城国际实验仪器厂）；Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ｚＳ９Ｏ纳米粒度
和Ｚｅｔａ电位及分子量分析仪（英国马尔文仪器有限公
司）；ＹＰ一２０２Ｎ电子天平（上海精密科学仪器有限公
司）；ＪＥＭ一２１００透射电子显微镜（日本电子公司）；
ＵＶ１０００紫外分光光度计（北京莱伯泰科有限公司）；
ＫＨ一２５０ＤＢ型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器
有限公司１；ＢＴ００—１００Ｍ型恒流蠕动泵（保定兰格恒流
泵有限公司１。
材料：替米考星（烟台绿叶动物保健品有限公
司）；Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００（德国罗姆公司）；其他试剂均为分
析纯。
２方法与结果
２．１纳米粒的制备
按照文献［３］报道，采用溶剂非溶剂法制备ＴＭＳ￣Ｎ
米粒。具体方法如下：称取ＴＭＳ适量超声溶解于含
适量磷酸盐的蒸馏水６０ｍＬ中，构成水相。称取适量
Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００溶解于２０ｍＬ无水乙醇中，超声溶解构
成有机相。以４００ｒ／ｍｉｎ的磁力搅拌下，用７号骨髓穿
刺针将水相缓慢注入有机相中。注射完毕后继续搅
拌１０ｍｉｎ，接着转入６０℃水浴中，搅拌４ｈ以挥发有机
溶剂。放冷后过０．４５ｇｍ微孔滤膜，既得。
２．２工艺处方优化
本实验通过考察可能影响纳米粒粒径及包封率
的各因素进行单因素实验，从中选取４个主要因素即
８４９
ＴＭＳ与Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００的比例（Ａ）、搅拌速度（Ｂ）、滴加
速度（Ｃ）、加热时间（Ｄ）进行考察。选用Ｌ９（３ ）正交实
验法优化工艺处方，结果见表１、２。
通过对正交实验进行极差分析可以知道，各因
素对粒径影响的顺序为Ｃ＞Ｄ＞Ｂ＞Ａ，对包封率影响
的顺序为Ａ＞Ｃ＞Ｄ＞Ｂ。对粒径、包封率和载药量３
种指标进行综合考虑后，得出各因素的最优化组合
为Ａ２Ｂ２Ｃ３Ｄ４。
纳米粒的粒径和包封率影响药物的吸收，不同
的工艺处方水平对纳米粒的包封率有非常大的影
响，而得到的粒径都能满足制剂的要求。因此， 在
满足一定的粒径要求下，选取包封率为优化指标，
确定最佳工艺处方为ＴＭＳ ０．１ｇ，Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００ ０．５ｇ，
搅拌速度为４００ｒ／ｍｉｎ，滴加速度为３ｍＬ／ｍｉｎ，加热时
间为４ｈ。
２．３纳米粒形态学研究
取优化后制备的ＴＭＳ纳米粒溶液，滴加在覆盖
碳膜的铜网上，自然干燥后于透射电镜下观察纳米
粒的形态，见图１。从图１中可看出纳米粒为规则的
类球型粒子，均匀分散。出现一些黏连是因为在制
备电镜样本时，纳米粒干燥脱水而造成的。
２．４ 粒径及Ｚｅｔａ￣位测定
取适量优化后制各的纳米粒溶液，稀释后放入纳
米粒度及Ｚｅｔａ电位分析仪中测定其粒径分布、Ｚｅｔａ电位
及多分散系数（ＰＤＩ）。平均粒径为０５．６±４．８）ｎｍ，Ｚｅｔａ电
位为（．３８．１±２．４）ｍＶ。ＰＤＩ为０．１６３。纳米粒度分布图
如下：
图１ ＴＭＳ—Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００纳米粒透射电镜照片（×２０，０００）
Ｆｉｇ．１ ＴＥＭ ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｓ ｏｆＴＭＳ－Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００
ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ（×２０，ｏｏｏ）
表１正交试验因素及水平
Ｔａｂ．１ Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ
８５０． 中国抗生素杂志２０１３年１１月第３８卷第１１期
备ｌｓｌｌ 一
２．５ ＴＭＳ标准曲线及方法学研究
２．５．１ ＴＭＳ紫外吸收波长测定
称取适量ＴＭＳ原料药分别溶解于甲醇和蒸馏水
在蒸馏水中的最大吸收波长为２９ １ｎｍ，而Ｅｕｄｒａｇｉｔ
Ｌ１００在此波长下没有特征吸收。参考文献［４］，ｐＨ值
对ＴＭＳ吸收光谱无影响。因此，选用这两个波长为
ＴＭＳ的测定波长。
溶液中，在２００－６００ｎｍ波长范围分别扫描，同时扫
描Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００在此波长范围内的吸收光谱。结果表
明，ＴＭＳ在甲醇溶液中的最大吸收波长为２８４ｎｍ，
ＳｔａｔｉｓｔｉＣＳ ＧｒａｐＷｌ ｍｅａｓｍ＇ｅｍｅｎ￣
２．５．２ ＴＭＳ在甲醇溶液中的标准曲线
精密称取ＴＭＳ原料药０．１００７ｇ，加甲醇溶解并定
容到１０ｍＬ，精密量取ｌｍＬ定容到１００ｍＬ，配制成浓
度为１００．７ｇｇ／ｍＬ标准溶液。分别精密量取上述标准
一’
’ ‘
一’。 ‘。。‘ 。 １ Ｉ ’・一…‘ｌ
一・。 一一‘：一Ｉ ｌ 。‘一 ：‘・ｌ
ｌ １０ １００ ｌＯＧＯ
Ｉ ｌ 一～ 。‘‘‘
Ｉ ’一
溶液１、１．５、２、２．５、３、３．５￣Ｗ４ｍＬ，置于１０ｍＬ容
量瓶中，再用甲醇定容得系列浓度的标准溶液。将
上述标准在２８４ｎｍ波长处分别测定紫外吸收度 ），
以ＴＭＳ溶液浓度（Ｃ）为横坐标，吸收度（ ）为纵坐标
进行线性回归，回归方程为Ａ＝０．０２１５Ｃ＋０．０２３６，
ｒ＝０．９９９８。结果表明，ＴＭＳ在０～４０．２８ｐ．ｇ／ｍＬ范围内线
性关系良好。
Ｓｉｚｅ／∞ ｎ）
图２纳米粒度分布图
Ｆｉｇ．２ Ｔｈｅ ｓｉｚｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
Ｚｅｔａ Ｐｔｅｎｔｉａｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｄｏｎ
ｏ×１
２．５．３ ＴＭＳ在蒸馏水中的标准曲线
精密称取ＴＭＳ原料药０．１０００ｇ，按“２．５．２”同法
操作，得ＴＭＳ在蒸馏水中的标准曲线。回归方程为
Ａ＝０．０２２１Ｃ＋Ｏ．０１５９，ｒ＝０．９９９５。结果表明，ＴＭＳ在
Ｏ－４０ｇｇ／ｍＬ范围内线性关系良好。
营５×１
ｔ
兰５ｘｌ
２ｏ０
１００ ０
Ｚｅｔａ Ｐｏｔｅｎｔｉａ／ｍＶ
—
ｌＯ０ ２００
２．５．４ 精密度与回收率考察
取“２．５．２”和“２．５．３”所配制的高、中、低浓
度的标准溶液，分别在１ｄ内测定５次，得日内ＲＳＤ分
—
Ｒｅｃｏｒｄ １９：６ｌ
图３ Ｚｅｔａ电位分布图
Ｆｉｇ．３ Ｚｅｔａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｐａａｅｍ ｏｆｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ
替米考星Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００纳米粒的制备及体外评价杜昌余等
别为０．８８％，ｎ１．４５％；连续测定３ｄ，得日间ＲＳＤ分别
为１．３８％和２．２％。精密度符合分析要求。
分别取处方量ＴＭＳ药物的８０％，１００％，１２０％，
分别加入适量空白纳米粒溶液。摇匀后，用甲醇
超声溶解并定容。紫外测定ＴＭＳ的紫外吸收，并
计算得回收率分别为（９９．７±１．８）％、（１０１＿３±２．１）％、
（１００．８±３．９）％ ＝３）。结果表明，制备纳米粒所用的辅
料对样品测定无影响，此方法灵敏度高，重现性好。
２．６包封率及载药量测定
本研究采用透析袋法测定ＴＭＳ纳米粒的包封率［５】。
为考察透析袋的阻滞作用，配置了不同浓度的ＴＭＳ
溶液进行试验。分别取０．２５、０．５和ｌｍｇ／ｍＬ的ＴＭＳ
水溶液ｆ加入适量磷酸盐）２ｍＬ，分别装入长短相同
的透析袋中，两端扎紧，置于盛有１００ｍＬ蒸馏水的
锥形瓶中。然后放入冰箱中，４＂Ｃ冷藏透析。１２ｈ替
换１００ｍＬ新鲜透析介质，透析２４ｈ。过０．２２ｇｍ的微孔
滤膜，测定续滤液的吸光度并计算ＴＭＳ药物的透析
率。该方法透析率为９８．３１％～１０１．６％。分别取０．５、１
和２ｍｇ／ｍＬ的ＴＭＳ水溶液（加入适量磷酸盐）ｌｍＬ，加
入１ｍＬ的空白纳米溶液，震摇后放入透析袋中。同
上透析，测得药物的透析率为９８．０４％～９９．６８％。结
果表明各浓度药物均在２４ｈ内透析完全，可以作为包
封率的一个测定方法。取ＴＭＳ纳米溶液２ｍＬ置透析
袋中，按上述步骤透析，透析液过０．２２ｇｍ的微孔滤
膜，然后测定续滤液的吸光度并计算得到游离药物
的含量（Ｗ ）。另取ＴＭＳ纳米溶液２ｍＬ，加甲醇超声
溶解并定容。过０．２２ｇｍ的微孔滤膜后，测定续滤液
的吸光度，计算得药物总的含量（ｗ ）。计算得药物
包封率为（９８．０４±０．６）％，载药量为（２０．６４±０．３６）％。
２．７纳米粒的体外释放
精密移取纳米混悬液ｌｍＬ（ＴＭＳ：２ｍｇ／ｍＬ），置
于透析袋内，两端扎紧。分别放入装有１００ｍｌ磷酸盐
缓冲液（ｐＨ３．５，５．０，６．８）￣ＩｐＨ１．２的稀盐酸溶液的释
放瓶中，平行３组实验，然后置于（３７±０．５）℃的恒温
振荡器中，在１００ｒ／ｍｉｎ恒温震荡。在０．２５，０．５，１，
２，４，６，８，１２，２４，３６ｈ分别取样ｌｍｌ，同时补加
等量同温释放介质。样品过微孔滤膜后，紫外测定
ＴＭＳ的吸光度，并计算其累积释放百分率。释放曲
线见图
由图４可见，ＴＭＳ纳米粒释放呈现ｐＨ依赖性。由
于Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＬＩＯ０在ｐＨ＞６时溶解，因此在ｐＨ６．８的释放
介质中，Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００被溶蚀而造成一个突释现象，
纳米粒１２ｈ累积释放度已达到８５％以上。而在ｐＨｉ＜５．０
怠
蠢
— 一ｐ｝Ｅ６。８—◆一ｐＩ｛５ ０ ＋ｐＨ３．５—＊一ｐＨｌ＿２
图４ 不同介质的体外释放率曲线， ±Ｓ，ｎ＝３
Ｆｉｇ．４ Ｒｅｌｅａｓｅ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ， ±Ｓ，ｎ＝３
时，纳米粒１２ｈ累积释放度不到５０％。可见ＴＭＳ—
Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００纳米粒具有明显的缓释作用。
释放１Ｏｈ后观察透析袋里的纳米粒形态，发现
ｐＨ６．８释放介质中的纳米粒溶液变的澄清，而其它３
种释放介质中的纳米粒依然为蓝色乳光溶液，和原
来的形态相比基本无差别。进一步说明在ｐＨ６．８的释
放介质中，Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ １ ００材料被被溶解，纳米粒被破
坏而造成突释。
２．８释放方程拟合
将ＴＭＳ纳米粒的累计释放百分率（Ｑ）和时间的平
方根（ｆ ）回归作图，发现在ｐＨ１．２，３．５和５．０的释放
介质两者有显著的线性关系，符合Ｈｉｇｕｃｈｉ［ ］线性方
程。在ｐＨ６．８的磷酸缓冲液中，药物前６ｈ释放符合
Ｈｉｇｕｃｈｉ线性方程，之后出现一个突释效果，Ｈｉｇｕｃｈｉ
方程拟合结果见表３。
３讨论
尤特奇（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）是合成甲基丙烯酸共聚物和甲
基丙烯酸酯共聚物的商品名，通称为丙烯酸树脂。
其由德国ＥＶＯＮＩＫ下属的ＲＯＨＭ公司生产。尤特奇
系列产品均由几种单体聚合而成，根据聚合物的溶
表３ ＴＭＳ纳米粒在４介质中的拟合方程
Ｔａｂ．３ Ｈｉｇｕｃｈｉ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｒｅｌｅａｓｅｄ ｉｎ ｏｆｕｒ ｍｅｄｉｕｍｓ
８５２ 中国抗生素杂志２０１３年１１月第３８卷第１１期
解特性，可分为２类：（１）ｐＨ￣依赖型，包括Ｅｕｄｒａｇｉｔ
ＲＬ、ＲＳ及ＮＥ、ＮＭ系列，在消化液中不溶，但能溶
胀，具有一定的渗透性，可用于缓控释制剂。（２）ｐＨ
依赖型，包括Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ、Ｓ、ＦＳ￣ｆＨＥ系列聚合物，
因带有酸性或碱性基团溶解于不同ｐＨ值消化液中，
可用于保护和隔离包衣或在胃肠道不同部位释放药
药物主要在肠道的环境中释放，并显著延长药物的
释放时间［１０】，达到缓释效果。
本课题采用溶剂非溶剂法制备纳米粒，通过考
察载体材料与药物比例、搅拌速度、滴加速度和加
热时间对纳米粒径，包封率和载药量的影响，初
步优化了工艺处方。制备的纳米粒类球型，形态
规整，分布均匀，包封率达到９５％以上，且稳定性
物；ｐＨ依赖性的尤特奇材料在溶出介质ｐＨ大于它的
溶解限时发生溶解而大量释放药物。Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＬＩＯ０是
好。本方法处方工艺简单，条件温和，不用添加乳
化剂等添加剂，省去乳化步骤，可扩大生产，有望
甲基丙烯酸和丙烯酸乙酯（１：１）共聚物，为ｐＨ敏感型
阴离子聚合物，能在大于ｐＨ６．０的溶液中溶解，且不
被人体吸收，无刺激性和毒性［，］。它广泛用于药物制
剂的肠溶包衣、缓控释包衣、保护隔离包衣、缓释
高分子材料和经皮给药制剂的骨架胶黏材料ｆ８＿。
替米考星为大环内酯类抗生素，性状为白色至
类白色粉末，在水中不溶，味道极苦，有刺激性气
味，在起效上属于时间依赖性，杀菌效果主要凭借
抗生素的有效剂量下持续作用时间，所以这类抗生
素最好的服用方法是，在有效剂量内减少单次服用
剂量，增加服用次数（或者服用缓控释制剂１。它呈碱
性，在胃部酸性环境中易被破坏失效，且对胃黏膜
产生刺激。本课题选用替米考星为模型药物，肠溶
型Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００为载体材料，采用溶剂非溶剂法制备
ｐＨ敏感型纳米粒。经过研究发现，制备的纳米粒和
纯药相比无刺激性气味，口尝苦味大大降低，在可
忍耐范围以下。因此制备的ＴＭＳ．Ｅｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００纳米
粒能很好的掩盖药物的不良气味和苦昧，提高了药
物的适口性，避免了其对采食的影响。体外释放结
果表明，替米考星纳米粒在ｐＨＩ．２的盐酸溶液中几乎
不释放，从而减少药物对胃的刺激，避免药物被胃
酸破坏。并且可以长期缓慢释放药物，使药物持续
时间更长，用量更少，从而减少药物的毒副作用［ ］，
提高药物的稳定性。
替米考星在水中溶解度很低，在盐酸和磷酸缓
冲液中溶解性好，能够满足药物释放的漏槽条件。
且本实验对药物释放做了对照，取低、中、高３种浓
度的替米考星纯药，替米考星￣ＨＥｕｄｒａｇｉｔ Ｌ１００的物
理混合物进行释放，结果均能在３ｈ内释放完全。因
此，载体材料对药物溶解无影响。体外释放实验表
明，纳米粒在ｐＨ１．２的盐酸环境中释放缓慢，２ｈ释放
不到２０％，可减少胃刺激和避免药物被胃酸破坏。
成为一种新型口服纳米制剂。
参考文献
［１］ 朱颖，戈延茹，王成润，等．替米考星脂质体的制备及体外
释放［Ｊ］＿中国兽药杂志，２００９，４３（９）：５—９．
【２］Ｄｅｓａｉｍ Ｌａｂｈａｓｅｔｗａｒ Ａｍｉｄｏｎｇ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ
ｏｆ ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ【Ｊ】．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ，１ ９９６，
１３（１２）：１８３８—１８４５．
『３］ 王文喜，陈海靓，梁文全．聚甲基丙烯酸脂纳米粒作为反
义寡核苷酸传递系统的研究［Ｊ】．药学学报，２００３，３８（４）：
２９８—３０１．
［４］ 宋艳红，白小红，李英．紫外分光光度法测定替米考星的
含量［Ｊ］．山西医科大学学报，２００５，３６（１）：７１—７３．
［５］ 李姜辉，王柏．乳化蒸发法制备固体脂质纳米粒［ＪＪ．药学
进展，２００８，３２（３）：１２７—１３１．
［６］Ｈｉｇｕｃｈｉ Ｔ．Ｒａｔｅ ｏｆ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔｓ ｆｒｏｍ ｏｉｎｔｍｅｎｔ
ｂａｓｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｄｒｕｇｓ ｉｎ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ，１ ９６ １，
５０：８７４．８７５．
［７］ Ｚｏｂｅｌ Ｈ Ｐ＇Ｓｔｉｅｎｅｋｅｒ Ｆ，Ａｔｍａｃａ Ａｂｄｅｌ Ａ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ
ｏｆ ａｍｉｎｏａｌｋｙｌｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ａｓ ｃｏｌｌｏｉｄａｌ
ｄｒｕｇ ｃａｒｒｉｅｒ ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｐａｒｔ ＩＩ：ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ
ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｌｏａｄｅｄ ｃｏｐｏｌｙｍｅｒ ｎａｎｏｐａｎｉｃｌｅｓ［Ｊ１．Ｅｕｒ Ｊ
Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｐｈａｒｍ，１９９９，４８（１）：１－１２．
［８］ 郭圣荣，方晓玲，黄惠琼，等．新型丙烯酸树脂肠溶包衣材
料的合成与应用［Ｊ］．药学学报，１９９８，３３（１１）：８６０－８６３．
［９］Ａｎｄｒｅａｓ Ｆ，Ｆｅｌｉｃｉｔａｓ Ｈ，Ａｎｄｒｅａ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｍｏｔｅ Ｌｏａｄｉｎｇ ｏｆ
Ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｉｎｔｏ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ Ｄｒｉｖｅｎ ｂｙ ａ Ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ
Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ Ｇｒａｄｉｅｎｔ［Ｊ］．ＢＢＳ，２００６，１７５８：１６３３—１６４０．
［１０］Ｐｉｇｎａｔｅｌｌｏ Ｒ，Ｂｕｃｏｌｏ Ｃ，Ｆｅｒｒａｒａ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｅｕｄｒａｇｉｔ ＲＳ１００
ｎａｎｏｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ
ｉｂｕｐｒｏｆｅｎ［Ｊ］．ＥｕｒＰｈａｒｍ Ｓｃｉ，２００２，１６：５３—６１．