2024年5月21日发(作者：兆成仁)
第
22
卷第
3
期
2005
年
5
月
沈 阳 药 科 大 学 学 报
JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity
Vol
1
22
No
1
3
May2005p
1
164
文章编号
:1006-2858
(
2005
)
03-0164-04
莪术油纳米乳剂的制备及制备工艺影响因素考察
何海冰
,
唐 星
(
沈阳药科大学药学院
,
辽宁沈阳
110016
)
摘要
:
目的制备莪术油纳米乳剂
,
详细评价制备工艺中影响莪术油纳米乳剂质量的因素
,
并考察
纳米乳剂在不同释放介质中的药物释放。方法采用高压乳匀法制备莪术油纳米乳剂
;
采用单因素
和正交设计法考察制备工艺中影响莪术油纳米乳剂质量的因素
;
采用动力光散射法测定其粒径及
粒径分布
;
采用透射电镜法观察其形态
;
采用葡聚糖凝胶柱层析法测定包封率。结果所制备的纳
米乳剂为类球状
,
大小均匀。平均粒径为
(
76
1
5
±
10
1
1
)
nm,
纳米乳剂中吉马酮的质量浓度为
(
1
1
76
±
0
1
09
)
g
・
L
-1
,
吉马酮的包封率为
(
84
1
4
±
1
1
0
)
%
。结论高压乳匀法可用于莪术油纳米乳剂
的制备
,
通过调节处方工艺可获得满意的粒度分布和包封率。
关键词
:
高压乳匀法
;
纳米乳剂
;
莪术油
;
制备工艺
中图分类号
:R944
文献标识码
:A
油状液体类药物尤其是中草药挥发油
,
是医
药领域用于疾病治疗的一类重要活性物质。将此
类药物分散
,
使粒径达到纳米水平
,
有可能提高药
物的生物利用度
,
进而产生许多新的功效。莪术
挥发油是从姜科植物蓬莪术
(
Curcumaphaeo
2
caulis
Val
1
)
、广西莪术
(
Curcumakwangsiensis
S
1
G
1
LeeetC
1
F
1
Liang
)
或温郁金
(
Curcuma
wenyujin
Y
1
H
1
ChenetC
1
Ling
)
的干燥根茎
(
中
Corporation
)
,DF
—
101
集热式恒温磁力搅拌器
(
巩义市英峪予华仪器厂
)
,Uitra
2
cell
超声仪
(
Sonics&Materials,USA
)
,PEL
—
02
高压匀质纳
米机
(
YoshidaKikaiCo
1
Ltd
1
,Japan
)
,HZQ
—
C
空
气恒温振荡器
(
哈尔滨东明医疗仪器厂
)
,Nicomp
380
粒度分析仪
(
SantaBarbara,California,
USA
)
,H
—
600
透射电子显微镜
(
日本
Hitachi
公
药莪术
)
中
,
经水蒸气蒸馏法提取出的有效成分。
它具有抗肿瘤、抗病毒、抗真菌、兴奋胃肠道作用。
研究证明
,
当分散相粒径达到
50
～
100nm
时
,
药
物的转运机制将会发生许多质的转变。当油状液
体药物制备成纳米级脂质分散体后
,
其主要吸收
方式为胞饮作用。这种吸收方式可使抗病毒和抗
肿瘤药物更易进入细胞内
,
发挥作用。作者采用
高压乳匀法制备稳定的莪术油纳米乳剂
,
研究莪
术油纳米乳剂的制备工艺和影响因素
,
并采用动
态透析法研究莪术油中主要成分吉马酮在纳米乳
剂中的释放性能
[1
～
3]
。
司
)
,
生物显微镜
(
上海光学仪器六厂
)
。
蓬莪术挥发油
(
浙江瑞安制药厂
,
批号
:
0104003,
经
HPLC
法测定其中吉马酮质量分数
(
w
)
为
9
1
75%
)
,
吉马酮对照品
(
本校天然药化教
研室提供
,
归一化测定含量
98%
以上
)
,
注射级卵
磷脂
(
LipoidE
2
80,
上海东尚实业有限公司
)
,
普朗
尼克
F
2
68
(
上海协泰化工有限公司
)
,
甘油
(
浙江
昌遂甘油厂
)
,
吐温2
80
(
天津市博迪化工有限公
司
)
,
葡聚糖凝胶2
G50
(
Pharmacia,USA
)
,
甲醇、乙
醇
(
色谱纯
,
山东禹王公司
)
,
其他药品和试剂
(
药
用规格或分析纯
,
市售
)
。
2
方法与结果
2
1
1
纳米乳剂的制备
2
1
1
1
1
纳米乳剂制备工艺单因素考察
1
仪器与材料
Jasco
高效液相色谱仪
(
日本分光公司
)
,
PU
—
1580
泵、
UV
—
1575UV
2
VIS
检测器、
AS
—
1555
自动进样器
(
日本分光公司
)
,HiQsilC
18
V
试验过程中发现
,
卵磷脂与
F
2
68
混合使用比
单独使用效果好。本研究中所选的模型药物为中
药挥发油
,
对温度较为敏感
,
不稳定
,
制备时温度色谱柱
(
4
1
6mm
×
250mm,5
μ
m,KYATECH
收稿日期
:2004-08-27
作者简介
:
何海水
(
1979-
)
,
女
(
汉族
)
,
辽宁沈阳人
,
在读博士
,
主要从事药剂学研究
;
唐星
(
1964-
)
,
男
(
汉族
)
,
陕西
商县人
,
副教授
,
博士
,
博士生导师
,
主要从事药剂学及中药现代化研究
,Tel.,E-mailtangpharm@
。
© 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
第
3
期何海冰等
:
莪术油纳米乳剂的制备及制备工艺影响因素考察
165
不宜过高
,
故选择在室温下进行乳化
,
以减少油的
损耗。高压匀质时
,
在相同循环次数下压力取
30
、
80
、
130MPa
。结果
130MPa
时
,
分散效果和
物理稳定性最佳。在
130MPa
时
,
分别循环
3
、
5
、
8
次。结果表明
,
循环
3
次和
5
次的样品
,
粒径和
包封率没有较大的变化。反而
,
在循环
8
次时
,
粒
径有增大的趋势。因此
,
根据单因素考察结果确
定均质压力为
130MPa,
循环
3
次。
2
1
1
1
2
莪术油纳米乳剂的制备
称取处方量的甘油、吐温2
80,
搅拌分散于
20mL
蒸馏水中。另取卵磷脂、普朗尼克
F
2
68
适
普朗克尼
F
2
68
分散完全后
,
将莪术油
1g
逐滴加
入到水相中
,
同时磁力搅拌。超声
6min,
即得莪
术油初乳。在搅拌下向初乳中加入蒸馏水至
50mL,
再超声
6min
。将此胶体分散系用高压匀
质机于
130MPa
循环
3
次
,
即可得到乳光明显的
莪术油纳米乳剂。
2
1
1
1
3
正交试验法处方优化
由单因素考察可知
,
各种乳化剂的用量对纳
米乳剂的粒径
(
X
)
有较大的影响。因此
,
主要考
察卵磷脂、普朗克尼
F
2
68
、吐温2
80
和甘油的用
量。各因素安排见表
1
。
量
,
搅拌下依次加入到水相溶液中。待卵磷脂与
Table1
Factorsandlevelsoftheorthogonaldesign
Factors
Levels
1
2
3
A
w
(
phospholipid
)
/%
B
w
(
F
2
68
)
/%
C
w
(
Tween
2
80
)
/%
D
w
(
glycerol
)
/%
0
1
3
0
1
5
0
1
7
1
1
8
1
1
0
1
1
2
0
1
16
0
1
20
0
1
24
2
1
0
2
1
5
3
1
0
用
L
9
(
3
4
)
正交设计表进行处方筛选。按表
2
所示制备脂质纳米分散体后
,
以粒度测定结果为
No
1
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Ⅰ
X
Ⅱ
X
Ⅲ
X
R
X
AB
指标进行处方筛选
,
以粒径均匀且粒径较小为好。
Table2
InvestigationontheoptimumconditionsforpreparingCurcumazedoariaoil
2
loadednanoemulsionbyorthogonaldesign
CDX
/nm
1
2
3
1
2
3
1
2
3
382
210
1
2
285
171
1
8
1
1
1
2
2
2
3
3
3
277
1
1
184
1
6
415
1
5
230
1
9
3
1
2
2
3
1
1
2
3
347
1
6
243
1
7
285
1
9
103
1
9
2
1
3
1
3
2
3
2
1
275
1
4
215
1
7
386
1
1
170
1
4
94
1
5
77
1
7
104
1
9
69
1
5
63
1
2
51
1
9
218
69
1
3
128
1
2
根据表
2
中极差值
(
R
)
可知
,
各因素对粒径
的影响主次顺序是
B
、
A
、
D
、
C
,
说明普朗尼克
F
2
68
、卵磷脂、甘油和吐温2
80
用量的影响依次减
弱
,
由此得出各因素最优化组合为
A
2
B
2
C
2
D
2
。
通过分析正交设计表及综合因素筛选得最优处方
(
w
)
为卵磷脂
0
1
5%
、普朗尼克
F
2
681
1
0%
、吐温2
800
1
2%
、甘油
2
1
5%
。
2
1
2
纳米乳剂粒径大小分布测定
将按“
2
1
1
1
3
”条处方制备的莪术油纳米乳剂用
蒸馏水稀释
5
倍
,
用粒度分析仪测定其粒径大小分
布。制备的莪术油纳米乳剂为均一稳定而带蓝色
乳光的分散体系
,
其粒径为
(
76
1
5
±
10
1
1
)
nm
。
2
1
3
纳米乳剂形态测定
取莪术油纳米乳剂加蒸馏水稀释
50
倍
,
取适
量滴至铜筛网上
,
用
2%
(
φ
)
锇酸熏蒸染色
,
室温
放置至形成薄膜后用透射电子显微镜观察其形
态
,
并拍摄照片。莪术油纳米乳剂的透射电镜
(
TEM
)
照片见图
1
。纳米乳剂中的粒子成类球
状
,
粒径分布均匀。
2
1
4
纳米乳剂中指标成分含量及包封率考察
2
1
4
1
1
含量测定
以莪术挥发油中所含吉马酮为考察指标
,
采
© 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
166
沈 阳 药 科 大 学 学 报第
22
卷
吉马酮的包封率为
(
84
1
4
±
1
1
0
)
%
。
Fig.1
AppearanceofvolatileoilofCurcumazedoariaoil
2
loadednanoemulsionundertransmissionelectron
microscopy(1
×
20000)
用
HPLC
法测定莪术油纳米乳剂中吉马酮的
含量。
色谱条件为色谱柱
:HiQsilC
18
V
色谱柱
(
4
1
6mm
×
250mm,5
μ
m
)
;
流动相
:
乙睛2水
(
体积
比
80
∶
20
)
;
流速
:1
1
0mL
・
min
-1
;
检测波长
:
204nm;
检测温度
:
室温。
Fig.2
Thegelpermeationchromatographyofgermacrone
inCurcumazedoariaoil
2
loadednanoemulsion
2
1
5
纳米乳剂体外药物释放测定
取莪术油纳米乳剂
0
1
5mL,
置
25mL
量瓶
中
,
加甲醇超声溶解
5min,
用甲醇定容至刻度。
用
0
1
22
μ
m
的微孔滤膜过滤
,
取续滤液
20
μ
L
注
入高效液相色谱仪
,
测定纳米分散体中吉马酮的
质量浓度。经方法专一性考察
,
在此色谱条件下
,
空白纳米乳剂在吉马酮保留时间处无峰。实验表
明在
0
1
0254
～
5
1
08
μ
g
内
,
吉马酮的进样量
(
X
)
和峰面积
(
Y
)
间有良好的线性关系
,
标准曲线方
程为
:
Y
=3
×
10
6
X
+62264
,r
=0
1
9998
(
n
=6
)
。
HPLC
法测定
3
批莪术油纳米乳剂中
吉马酮的质量浓度为
(
1
1
76
±
0
1
09
)
g
・
L
-1
。
2
1
4
1
2
包封率考察
精密吸取
5mL
纳米乳剂
,
置事先在蒸馏水
浸泡
24h
的透析袋
(
截留相对分子质量
8000
～
10000
)
中
,
将装药的透析袋置于不同的释放介质
50mL
(
40%
(
φ
)
pH7
1
4
磷酸缓冲盐乙醇溶液和
40%
(
φ
)
pH7
1
4
磷酸缓冲盐丙二醇溶液
)
中
[4]
,
于
(
37
±
1
)
℃恒温
,
每分钟振荡
150
次
,
于
2
、
4
、
8
、
12
、
24
、
36
、
48
、
60
、
72
、
96
、
120h
更换释放介质
,
取
出的释放介质用
0
1
45
μ
m
微孔滤膜过滤
,
取续滤
液进高效液相色谱仪测定吉马酮的质量浓度
,
计
算不同时间累计释放吉马酮占总药量的百分数。
吉马酮在不同释放介质中的累积释放百分率测定
结果见图
3
。将吉马酮在不同释放介质中释药曲
线进行拟合
,
结果见表
3
。拟合的结果显示
,
纳米
乳剂在
40%
(
φ
)
pH7
1
4
磷酸缓冲盐乙醇溶液和
40%
(
φ
)
pH7
1
4
磷酸缓冲盐丙二醇溶液中的释放
均符合一级过程。
取莪术油纳米乳剂
0
1
5mL
上样于
Sephadex
2
G50
柱
(
16cm
×
2cm
)
,
以蒸馏水为洗
脱液
,
调节洗脱速度
0
1
8mL
・
min
-1
,
待带有明显
乳光的胶体分散系流出后
,
收集洗脱液
,
收集到的
胶体分散系用甲醇超声溶解并定容至
25mL,
用
0
1
22
μ
m
微孔滤膜过滤
,
取续滤液
20
μ
L
注入高
效液相色谱仪
,
采用“
2
1
4
1
1
”条中的
HPLC
条件
测定包封药物中吉马酮的质量浓度。另取莪术油
纳米乳剂
0
1
5mL,
按“
2
1
4
1
1
”条测定脂质纳米分
散体中吉马酮的质量浓度。包封率
=
(
m
ent
/
m
total
)
×
100%
。
m
ent
为被包封的吉马酮含量
,
m
total
为制剂中的吉马酮总含药量。莪术油纳米
◆
—
40
)
ethanolPBS;
%
(
φ
■
—
40
)
propyleneglycolPBS%
(
φ
Fig.3
ReleaseprofilesofgermacronefromCurcumaze
2
doariaoil
2
loadednanoemulsionatdifferentmedium
solutions
乳剂中吉马酮于
Sephadex
2
G50
凝胶柱上流出液
的峰面积2体积曲线见图
2,3
批纳米乳剂样品对
© 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
第
3
期何海冰等
:
莪术油纳米乳剂的制备及制备工艺影响因素考察
Table3
Themodelfittedequations
MediumEquation
ln
(
1-
Q
)
=-0
1
0827
t
-0
1
0978
ln
(
1-
Q
)
=-0
1
0247
t
+0
1
0501
r
167
40%
(
φ
)
ethanolPBS
40%
(
φ
)
propyleneglycolPBS
0
1
9954
0
1
9943
Q
—
Cumulateamountofgermacronereleased;
t
—
Time
(
h
)
3
讨论
莪术油纳米乳剂的制备受到许多因素如乳化
剂用量、乳化时间、匀质压力、次数等影响。处方
的筛选分为两步
,
第一步
:
用显微镜观察及放置稳
定性来初步筛选处方
,
确定制备粒径较小较为稳
定的胶体分散系的条件
;
第二步
:
以莪术油中吉马
酮的包封率为指标
,
进一步优选处方。
凝胶色谱法分离游离药物与脂质纳米分散体
是依据葡聚糖凝胶的多孔性。当含有不同质量的
分子的混合物流经这一介质时
,
小分子物质能进
入介质内部空隙
,
而大分子物质则被排阻在介质
外
,
从而达到分离的目的。当含有游离吉马酮的
莪术油脂质纳米分散体通过凝胶色谱柱时
,
纳米
分散体由于粒度相对较大
,
先洗脱出来
,
从而达到
与游离吉马酮分离的目的。
由于莪术油为中药莪术中提取出的挥发油成
分
,
其中的指标性成分吉马酮在水中的溶解度极
小
,
当用普通溶出介质时
,
溶出液中吉马酮释放极
为缓慢只有痕量。因此需在释放介质中加入一定
量的增溶剂
(
如乙醇、丙二醇
)
,
以增加吉马酮在水
性释放介质中的溶解度
,
而且各时间点更换全部
释放介质也可避免药物在释放介质中达到饱和而
影响药物的释放。
由释放度测定结果可知
,
在含有乙醇的释放
介质中
,
纳米乳剂中吉马酮的释药速度要快于含
有丙二醇的介质。这可能是因为乙醇对脂质材料
溶蚀的作用较丙二醇强的缘故。并且在实验中发
现
,
乙醇对纳米乳剂有破坏作用
,
故高浓度的乙醇
不宜作为释放介质。其他增溶剂
(
如吐温2
80
、
SDS
)
对纳米溶乳剂中吉马酮释药速度的影响仍
在考察中。
初步释放度测定结果表明
,
莪术油纳米乳剂
具有显著的缓释作用。乳剂中药物的释放受到多
种因素的影响
,
药物性质、介质的
pH
值、乳化剂
的性质及用量、界面膜的性质及粒径大小等因素
均可影响乳剂中药物的释放
[5]
。在含丙二醇的
介质中
,8h
累积释放了约
20%,
而在以后的
112h
内又释放了
60%,8h
释放量与未包封住的
吉马酮的量相当。这初步表明
,
在最初
8h
内的
释放是以未包封的游离药物渗透透过透析膜的过
程为主
,
纳米乳剂中的药物先穿过油水界面进入
水相
,
再由水相渗透透过透析膜进入释放介质。
在释放后期
,
纳米乳剂中的药物先穿过油水界面
进入水相
,
再由水相渗透透过透析膜进入释放介
质中的过程成为主要的释放过程
,
因而释放缓慢。
参考文献
:
[1]LevyMY,leasefromsubmicronized
O/Wemulsion:anewinvitrokineticevaluationmodel
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[2]SantosMagatlhaesNS,CaveG,SeillerM,
etal
.The
stabilityand
invitro
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,
孙殿甲
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4
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(
下转至第
186
页
)
© 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
186
沈 阳 药 科 大 学 学 报第
22
卷
Chemicalconstituentsoftheseedsof
Acanthopanax
senticosus
(m)Harms
ZHANGJie
1
,LIWen
2
,GAOHui
2
Yuan
1
,WUBin
1
,WULi
2
jun
1
(
1
.SchoolofTraditionalChineseMateriaMadica,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang
110016
,China;
2
.AnalyticalCenterofShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang
110016
,
China
)
Abstract:ObjectiveToelucidatethestructureoftheconstituentsfromthe75%ethanolextractoftheseeds
of
Acanthopanaxsenticosus
(
Rupr.
etMaxim.
)
sThesolventextractiontogetherwithcol
2
umnchromatographywereusedforisolationofchemicalconstituents;Thestructureswereconfirmedbythe
analysisofphysico
2
sFourcompoundswereisolatedandi
2
β
dentifiedas3
2О2
rhamnopyranosyl
2
(
1
2
2
)
2
arabinopyranosyloleanolicacid
(
Ⅰ
)
、
hederagenin
2
3
2
O
22
glu
2
)
、
β
curonopyranoside
(
Ⅱ
oleanolicacid
2
3
2
O
22
glucuronopyranoside
(
Ⅲ
)
andoleanolicacid
(
Ⅳ
)
.Conclusion
compounds
Ⅱ
,
Ⅲ
areisolatedfrom
Acanthopanax
genusforthefirsttime.
Keywords:Araliaceae;
Acanthopanaxsenticosus
(
m.
)
Harms;seeds;constituents
(
上接第
167
页
)
PreparationandqualitystudyofCurcumazedoaria
oil
2
loadednanoemulsion
HEHai
2
bing,TANGXing
(
SchoolofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang
110016
,China
)
Abstract:ObjectiveTopreparecurcumazedoariaoil
2
loadednanoemulsionandinvestigateitsphysicochemi
2
sThehighpressurehomogenizermethodwasemployedtopreparedCurcumazedoaria
oil
2
ticlesizedistributionwas
investigatedbydynamiclightscattering
(
DLS
)
hadexgelchromatographymethodwases
2
tablishedfordeterminationofdrugentrapmentefficiency
(
EE
)
morphologicalinvestigationsofnanoemulsionwereperformedbytransmissionelectronmicroscopy
(
TEM
)
.
ResultsCurcumazedoariaoil
2
loadednanoemulsionpreparedbyhighpressurehomogenizermethodwas
spherelikewiththemeanparticlesizeof
(
76
1
5
±
10
1
1
)
tentofgermacroneinthenanoemulsion
was
(
1
1
76
±
0
1
09
)
g
・
L
-1
,drugentrapmentefficiencywas
(
84
1
4
±
1
1
0
)
%.ConclusionsThehighpressure
homoenizermethodisavailableforthepreparationofCurcumazedoariaoil
2
loadednanoemulsion,asatisfied
effectcanbeachievedbyadjustingtheformulationandprocessparameters.
Keywords:highpressurehomogenizermethod;nanoemulsion;Curcumazedoariaoil;preparationprocess
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2024年5月21日发(作者：兆成仁)
第
22
卷第
3
期
2005
年
5
月
沈 阳 药 科 大 学 学 报
JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity
Vol
1
22
No
1
3
May2005p
1
164
文章编号
:1006-2858
(
2005
)
03-0164-04
莪术油纳米乳剂的制备及制备工艺影响因素考察
何海冰
,
唐 星
(
沈阳药科大学药学院
,
辽宁沈阳
110016
)
摘要
:
目的制备莪术油纳米乳剂
,
详细评价制备工艺中影响莪术油纳米乳剂质量的因素
,
并考察
纳米乳剂在不同释放介质中的药物释放。方法采用高压乳匀法制备莪术油纳米乳剂
;
采用单因素
和正交设计法考察制备工艺中影响莪术油纳米乳剂质量的因素
;
采用动力光散射法测定其粒径及
粒径分布
;
采用透射电镜法观察其形态
;
采用葡聚糖凝胶柱层析法测定包封率。结果所制备的纳
米乳剂为类球状
,
大小均匀。平均粒径为
(
76
1
5
±
10
1
1
)
nm,
纳米乳剂中吉马酮的质量浓度为
(
1
1
76
±
0
1
09
)
g
・
L
-1
,
吉马酮的包封率为
(
84
1
4
±
1
1
0
)
%
。结论高压乳匀法可用于莪术油纳米乳剂
的制备
,
通过调节处方工艺可获得满意的粒度分布和包封率。
关键词
:
高压乳匀法
;
纳米乳剂
;
莪术油
;
制备工艺
中图分类号
:R944
文献标识码
:A
油状液体类药物尤其是中草药挥发油
,
是医
药领域用于疾病治疗的一类重要活性物质。将此
类药物分散
,
使粒径达到纳米水平
,
有可能提高药
物的生物利用度
,
进而产生许多新的功效。莪术
挥发油是从姜科植物蓬莪术
(
Curcumaphaeo
2
caulis
Val
1
)
、广西莪术
(
Curcumakwangsiensis
S
1
G
1
LeeetC
1
F
1
Liang
)
或温郁金
(
Curcuma
wenyujin
Y
1
H
1
ChenetC
1
Ling
)
的干燥根茎
(
中
Corporation
)
,DF
—
101
集热式恒温磁力搅拌器
(
巩义市英峪予华仪器厂
)
,Uitra
2
cell
超声仪
(
Sonics&Materials,USA
)
,PEL
—
02
高压匀质纳
米机
(
YoshidaKikaiCo
1
Ltd
1
,Japan
)
,HZQ
—
C
空
气恒温振荡器
(
哈尔滨东明医疗仪器厂
)
,Nicomp
380
粒度分析仪
(
SantaBarbara,California,
USA
)
,H
—
600
透射电子显微镜
(
日本
Hitachi
公
药莪术
)
中
,
经水蒸气蒸馏法提取出的有效成分。
它具有抗肿瘤、抗病毒、抗真菌、兴奋胃肠道作用。
研究证明
,
当分散相粒径达到
50
～
100nm
时
,
药
物的转运机制将会发生许多质的转变。当油状液
体药物制备成纳米级脂质分散体后
,
其主要吸收
方式为胞饮作用。这种吸收方式可使抗病毒和抗
肿瘤药物更易进入细胞内
,
发挥作用。作者采用
高压乳匀法制备稳定的莪术油纳米乳剂
,
研究莪
术油纳米乳剂的制备工艺和影响因素
,
并采用动
态透析法研究莪术油中主要成分吉马酮在纳米乳
剂中的释放性能
[1
～
3]
。
司
)
,
生物显微镜
(
上海光学仪器六厂
)
。
蓬莪术挥发油
(
浙江瑞安制药厂
,
批号
:
0104003,
经
HPLC
法测定其中吉马酮质量分数
(
w
)
为
9
1
75%
)
,
吉马酮对照品
(
本校天然药化教
研室提供
,
归一化测定含量
98%
以上
)
,
注射级卵
磷脂
(
LipoidE
2
80,
上海东尚实业有限公司
)
,
普朗
尼克
F
2
68
(
上海协泰化工有限公司
)
,
甘油
(
浙江
昌遂甘油厂
)
,
吐温2
80
(
天津市博迪化工有限公
司
)
,
葡聚糖凝胶2
G50
(
Pharmacia,USA
)
,
甲醇、乙
醇
(
色谱纯
,
山东禹王公司
)
,
其他药品和试剂
(
药
用规格或分析纯
,
市售
)
。
2
方法与结果
2
1
1
纳米乳剂的制备
2
1
1
1
1
纳米乳剂制备工艺单因素考察
1
仪器与材料
Jasco
高效液相色谱仪
(
日本分光公司
)
,
PU
—
1580
泵、
UV
—
1575UV
2
VIS
检测器、
AS
—
1555
自动进样器
(
日本分光公司
)
,HiQsilC
18
V
试验过程中发现
,
卵磷脂与
F
2
68
混合使用比
单独使用效果好。本研究中所选的模型药物为中
药挥发油
,
对温度较为敏感
,
不稳定
,
制备时温度色谱柱
(
4
1
6mm
×
250mm,5
μ
m,KYATECH
收稿日期
:2004-08-27
作者简介
:
何海水
(
1979-
)
,
女
(
汉族
)
,
辽宁沈阳人
,
在读博士
,
主要从事药剂学研究
;
唐星
(
1964-
)
,
男
(
汉族
)
,
陕西
商县人
,
副教授
,
博士
,
博士生导师
,
主要从事药剂学及中药现代化研究
,Tel.,E-mailtangpharm@
。
© 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
第
3
期何海冰等
:
莪术油纳米乳剂的制备及制备工艺影响因素考察
165
不宜过高
,
故选择在室温下进行乳化
,
以减少油的
损耗。高压匀质时
,
在相同循环次数下压力取
30
、
80
、
130MPa
。结果
130MPa
时
,
分散效果和
物理稳定性最佳。在
130MPa
时
,
分别循环
3
、
5
、
8
次。结果表明
,
循环
3
次和
5
次的样品
,
粒径和
包封率没有较大的变化。反而
,
在循环
8
次时
,
粒
径有增大的趋势。因此
,
根据单因素考察结果确
定均质压力为
130MPa,
循环
3
次。
2
1
1
1
2
莪术油纳米乳剂的制备
称取处方量的甘油、吐温2
80,
搅拌分散于
20mL
蒸馏水中。另取卵磷脂、普朗尼克
F
2
68
适
普朗克尼
F
2
68
分散完全后
,
将莪术油
1g
逐滴加
入到水相中
,
同时磁力搅拌。超声
6min,
即得莪
术油初乳。在搅拌下向初乳中加入蒸馏水至
50mL,
再超声
6min
。将此胶体分散系用高压匀
质机于
130MPa
循环
3
次
,
即可得到乳光明显的
莪术油纳米乳剂。
2
1
1
1
3
正交试验法处方优化
由单因素考察可知
,
各种乳化剂的用量对纳
米乳剂的粒径
(
X
)
有较大的影响。因此
,
主要考
察卵磷脂、普朗克尼
F
2
68
、吐温2
80
和甘油的用
量。各因素安排见表
1
。
量
,
搅拌下依次加入到水相溶液中。待卵磷脂与
Table1
Factorsandlevelsoftheorthogonaldesign
Factors
Levels
1
2
3
A
w
(
phospholipid
)
/%
B
w
(
F
2
68
)
/%
C
w
(
Tween
2
80
)
/%
D
w
(
glycerol
)
/%
0
1
3
0
1
5
0
1
7
1
1
8
1
1
0
1
1
2
0
1
16
0
1
20
0
1
24
2
1
0
2
1
5
3
1
0
用
L
9
(
3
4
)
正交设计表进行处方筛选。按表
2
所示制备脂质纳米分散体后
,
以粒度测定结果为
No
1
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Ⅰ
X
Ⅱ
X
Ⅲ
X
R
X
AB
指标进行处方筛选
,
以粒径均匀且粒径较小为好。
Table2
InvestigationontheoptimumconditionsforpreparingCurcumazedoariaoil
2
loadednanoemulsionbyorthogonaldesign
CDX
/nm
1
2
3
1
2
3
1
2
3
382
210
1
2
285
171
1
8
1
1
1
2
2
2
3
3
3
277
1
1
184
1
6
415
1
5
230
1
9
3
1
2
2
3
1
1
2
3
347
1
6
243
1
7
285
1
9
103
1
9
2
1
3
1
3
2
3
2
1
275
1
4
215
1
7
386
1
1
170
1
4
94
1
5
77
1
7
104
1
9
69
1
5
63
1
2
51
1
9
218
69
1
3
128
1
2
根据表
2
中极差值
(
R
)
可知
,
各因素对粒径
的影响主次顺序是
B
、
A
、
D
、
C
,
说明普朗尼克
F
2
68
、卵磷脂、甘油和吐温2
80
用量的影响依次减
弱
,
由此得出各因素最优化组合为
A
2
B
2
C
2
D
2
。
通过分析正交设计表及综合因素筛选得最优处方
(
w
)
为卵磷脂
0
1
5%
、普朗尼克
F
2
681
1
0%
、吐温2
800
1
2%
、甘油
2
1
5%
。
2
1
2
纳米乳剂粒径大小分布测定
将按“
2
1
1
1
3
”条处方制备的莪术油纳米乳剂用
蒸馏水稀释
5
倍
,
用粒度分析仪测定其粒径大小分
布。制备的莪术油纳米乳剂为均一稳定而带蓝色
乳光的分散体系
,
其粒径为
(
76
1
5
±
10
1
1
)
nm
。
2
1
3
纳米乳剂形态测定
取莪术油纳米乳剂加蒸馏水稀释
50
倍
,
取适
量滴至铜筛网上
,
用
2%
(
φ
)
锇酸熏蒸染色
,
室温
放置至形成薄膜后用透射电子显微镜观察其形
态
,
并拍摄照片。莪术油纳米乳剂的透射电镜
(
TEM
)
照片见图
1
。纳米乳剂中的粒子成类球
状
,
粒径分布均匀。
2
1
4
纳米乳剂中指标成分含量及包封率考察
2
1
4
1
1
含量测定
以莪术挥发油中所含吉马酮为考察指标
,
采
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166
沈 阳 药 科 大 学 学 报第
22
卷
吉马酮的包封率为
(
84
1
4
±
1
1
0
)
%
。
Fig.1
AppearanceofvolatileoilofCurcumazedoariaoil
2
loadednanoemulsionundertransmissionelectron
microscopy(1
×
20000)
用
HPLC
法测定莪术油纳米乳剂中吉马酮的
含量。
色谱条件为色谱柱
:HiQsilC
18
V
色谱柱
(
4
1
6mm
×
250mm,5
μ
m
)
;
流动相
:
乙睛2水
(
体积
比
80
∶
20
)
;
流速
:1
1
0mL
・
min
-1
;
检测波长
:
204nm;
检测温度
:
室温。
Fig.2
Thegelpermeationchromatographyofgermacrone
inCurcumazedoariaoil
2
loadednanoemulsion
2
1
5
纳米乳剂体外药物释放测定
取莪术油纳米乳剂
0
1
5mL,
置
25mL
量瓶
中
,
加甲醇超声溶解
5min,
用甲醇定容至刻度。
用
0
1
22
μ
m
的微孔滤膜过滤
,
取续滤液
20
μ
L
注
入高效液相色谱仪
,
测定纳米分散体中吉马酮的
质量浓度。经方法专一性考察
,
在此色谱条件下
,
空白纳米乳剂在吉马酮保留时间处无峰。实验表
明在
0
1
0254
～
5
1
08
μ
g
内
,
吉马酮的进样量
(
X
)
和峰面积
(
Y
)
间有良好的线性关系
,
标准曲线方
程为
:
Y
=3
×
10
6
X
+62264
,r
=0
1
9998
(
n
=6
)
。
HPLC
法测定
3
批莪术油纳米乳剂中
吉马酮的质量浓度为
(
1
1
76
±
0
1
09
)
g
・
L
-1
。
2
1
4
1
2
包封率考察
精密吸取
5mL
纳米乳剂
,
置事先在蒸馏水
浸泡
24h
的透析袋
(
截留相对分子质量
8000
～
10000
)
中
,
将装药的透析袋置于不同的释放介质
50mL
(
40%
(
φ
)
pH7
1
4
磷酸缓冲盐乙醇溶液和
40%
(
φ
)
pH7
1
4
磷酸缓冲盐丙二醇溶液
)
中
[4]
,
于
(
37
±
1
)
℃恒温
,
每分钟振荡
150
次
,
于
2
、
4
、
8
、
12
、
24
、
36
、
48
、
60
、
72
、
96
、
120h
更换释放介质
,
取
出的释放介质用
0
1
45
μ
m
微孔滤膜过滤
,
取续滤
液进高效液相色谱仪测定吉马酮的质量浓度
,
计
算不同时间累计释放吉马酮占总药量的百分数。
吉马酮在不同释放介质中的累积释放百分率测定
结果见图
3
。将吉马酮在不同释放介质中释药曲
线进行拟合
,
结果见表
3
。拟合的结果显示
,
纳米
乳剂在
40%
(
φ
)
pH7
1
4
磷酸缓冲盐乙醇溶液和
40%
(
φ
)
pH7
1
4
磷酸缓冲盐丙二醇溶液中的释放
均符合一级过程。
取莪术油纳米乳剂
0
1
5mL
上样于
Sephadex
2
G50
柱
(
16cm
×
2cm
)
,
以蒸馏水为洗
脱液
,
调节洗脱速度
0
1
8mL
・
min
-1
,
待带有明显
乳光的胶体分散系流出后
,
收集洗脱液
,
收集到的
胶体分散系用甲醇超声溶解并定容至
25mL,
用
0
1
22
μ
m
微孔滤膜过滤
,
取续滤液
20
μ
L
注入高
效液相色谱仪
,
采用“
2
1
4
1
1
”条中的
HPLC
条件
测定包封药物中吉马酮的质量浓度。另取莪术油
纳米乳剂
0
1
5mL,
按“
2
1
4
1
1
”条测定脂质纳米分
散体中吉马酮的质量浓度。包封率
=
(
m
ent
/
m
total
)
×
100%
。
m
ent
为被包封的吉马酮含量
,
m
total
为制剂中的吉马酮总含药量。莪术油纳米
◆
—
40
)
ethanolPBS;
%
(
φ
■
—
40
)
propyleneglycolPBS%
(
φ
Fig.3
ReleaseprofilesofgermacronefromCurcumaze
2
doariaoil
2
loadednanoemulsionatdifferentmedium
solutions
乳剂中吉马酮于
Sephadex
2
G50
凝胶柱上流出液
的峰面积2体积曲线见图
2,3
批纳米乳剂样品对
© 1995-2006 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
第
3
期何海冰等
:
莪术油纳米乳剂的制备及制备工艺影响因素考察
Table3
Themodelfittedequations
MediumEquation
ln
(
1-
Q
)
=-0
1
0827
t
-0
1
0978
ln
(
1-
Q
)
=-0
1
0247
t
+0
1
0501
r
167
40%
(
φ
)
ethanolPBS
40%
(
φ
)
propyleneglycolPBS
0
1
9954
0
1
9943
Q
—
Cumulateamountofgermacronereleased;
t
—
Time
(
h
)
3
讨论
莪术油纳米乳剂的制备受到许多因素如乳化
剂用量、乳化时间、匀质压力、次数等影响。处方
的筛选分为两步
,
第一步
:
用显微镜观察及放置稳
定性来初步筛选处方
,
确定制备粒径较小较为稳
定的胶体分散系的条件
;
第二步
:
以莪术油中吉马
酮的包封率为指标
,
进一步优选处方。
凝胶色谱法分离游离药物与脂质纳米分散体
是依据葡聚糖凝胶的多孔性。当含有不同质量的
分子的混合物流经这一介质时
,
小分子物质能进
入介质内部空隙
,
而大分子物质则被排阻在介质
外
,
从而达到分离的目的。当含有游离吉马酮的
莪术油脂质纳米分散体通过凝胶色谱柱时
,
纳米
分散体由于粒度相对较大
,
先洗脱出来
,
从而达到
与游离吉马酮分离的目的。
由于莪术油为中药莪术中提取出的挥发油成
分
,
其中的指标性成分吉马酮在水中的溶解度极
小
,
当用普通溶出介质时
,
溶出液中吉马酮释放极
为缓慢只有痕量。因此需在释放介质中加入一定
量的增溶剂
(
如乙醇、丙二醇
)
,
以增加吉马酮在水
性释放介质中的溶解度
,
而且各时间点更换全部
释放介质也可避免药物在释放介质中达到饱和而
影响药物的释放。
由释放度测定结果可知
,
在含有乙醇的释放
介质中
,
纳米乳剂中吉马酮的释药速度要快于含
有丙二醇的介质。这可能是因为乙醇对脂质材料
溶蚀的作用较丙二醇强的缘故。并且在实验中发
现
,
乙醇对纳米乳剂有破坏作用
,
故高浓度的乙醇
不宜作为释放介质。其他增溶剂
(
如吐温2
80
、
SDS
)
对纳米溶乳剂中吉马酮释药速度的影响仍
在考察中。
初步释放度测定结果表明
,
莪术油纳米乳剂
具有显著的缓释作用。乳剂中药物的释放受到多
种因素的影响
,
药物性质、介质的
pH
值、乳化剂
的性质及用量、界面膜的性质及粒径大小等因素
均可影响乳剂中药物的释放
[5]
。在含丙二醇的
介质中
,8h
累积释放了约
20%,
而在以后的
112h
内又释放了
60%,8h
释放量与未包封住的
吉马酮的量相当。这初步表明
,
在最初
8h
内的
释放是以未包封的游离药物渗透透过透析膜的过
程为主
,
纳米乳剂中的药物先穿过油水界面进入
水相
,
再由水相渗透透过透析膜进入释放介质。
在释放后期
,
纳米乳剂中的药物先穿过油水界面
进入水相
,
再由水相渗透透过透析膜进入释放介
质中的过程成为主要的释放过程
,
因而释放缓慢。
参考文献
:
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O/Wemulsion:anewinvitrokineticevaluationmodel
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stabilityand
invitro
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(
下转至第
186
页
)
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186
沈 阳 药 科 大 学 学 报第
22
卷
Chemicalconstituentsoftheseedsof
Acanthopanax
senticosus
(m)Harms
ZHANGJie
1
,LIWen
2
,GAOHui
2
Yuan
1
,WUBin
1
,WULi
2
jun
1
(
1
.SchoolofTraditionalChineseMateriaMadica,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang
110016
,China;
2
.AnalyticalCenterofShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang
110016
,
China
)
Abstract:ObjectiveToelucidatethestructureoftheconstituentsfromthe75%ethanolextractoftheseeds
of
Acanthopanaxsenticosus
(
Rupr.
etMaxim.
)
sThesolventextractiontogetherwithcol
2
umnchromatographywereusedforisolationofchemicalconstituents;Thestructureswereconfirmedbythe
analysisofphysico
2
sFourcompoundswereisolatedandi
2
β
dentifiedas3
2О2
rhamnopyranosyl
2
(
1
2
2
)
2
arabinopyranosyloleanolicacid
(
Ⅰ
)
、
hederagenin
2
3
2
O
22
glu
2
)
、
β
curonopyranoside
(
Ⅱ
oleanolicacid
2
3
2
O
22
glucuronopyranoside
(
Ⅲ
)
andoleanolicacid
(
Ⅳ
)
.Conclusion
compounds
Ⅱ
,
Ⅲ
areisolatedfrom
Acanthopanax
genusforthefirsttime.
Keywords:Araliaceae;
Acanthopanaxsenticosus
(
m.
)
Harms;seeds;constituents
(
上接第
167
页
)
PreparationandqualitystudyofCurcumazedoaria
oil
2
loadednanoemulsion
HEHai
2
bing,TANGXing
(
SchoolofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang
110016
,China
)
Abstract:ObjectiveTopreparecurcumazedoariaoil
2
loadednanoemulsionandinvestigateitsphysicochemi
2
sThehighpressurehomogenizermethodwasemployedtopreparedCurcumazedoaria
oil
2
ticlesizedistributionwas
investigatedbydynamiclightscattering
(
DLS
)
hadexgelchromatographymethodwases
2
tablishedfordeterminationofdrugentrapmentefficiency
(
EE
)
morphologicalinvestigationsofnanoemulsionwereperformedbytransmissionelectronmicroscopy
(
TEM
)
.
ResultsCurcumazedoariaoil
2
loadednanoemulsionpreparedbyhighpressurehomogenizermethodwas
spherelikewiththemeanparticlesizeof
(
76
1
5
±
10
1
1
)
tentofgermacroneinthenanoemulsion
was
(
1
1
76
±
0
1
09
)
g
・
L
-1
,drugentrapmentefficiencywas
(
84
1
4
±
1
1
0
)
%.ConclusionsThehighpressure
homoenizermethodisavailableforthepreparationofCurcumazedoariaoil
2
loadednanoemulsion,asatisfied
effectcanbeachievedbyadjustingtheformulationandprocessparameters.
Keywords:highpressurehomogenizermethod;nanoemulsion;Curcumazedoariaoil;preparationprocess
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