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Ki-67抗体试剂(免疫组织化学)说明书

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2024年4月17日发(作者:友凝冬)

P04603CN_03

Ki-67抗体试剂(免疫组织化学)说明书

【产品名称】

通用名称:Ki-67抗体试剂(免疫组织化学)

英文名称:FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Ki-67 Antigen, Clone MIB-1, Ready-

to-Use (Link)

【包装规格】

40-60测试/盒

【预期用途】

体外诊断用途。

在常规染色(如:HE染色)基础上进行免疫组织化学染色,为医师提供诊断的辅助信

息。

Ki-67抗体试剂(免疫组织化学)旨在与Autostainer Link仪器一起用于免疫组织化

学(IHC)。本抗体有助于对正常细胞和肿瘤细胞中的Ki-67抗原进行分型(1)。系列抗体的

结果有助于肿瘤的分类分型。对任何染色或缺少染色的临床解释均应通过使用适当质控品进

行形态学研究对其加以补充,并且应根据患者的临床病史,以及由符合资质的病理学家进行

的其他诊断测试,进行评估。本抗体可在通过常规组织病理学染色对肿瘤进行初步诊断后使

用的免疫组织化学染色法。

【检验原理】

Ki-67抗原是一种核蛋白,可与来自Ki-67克隆的单克隆抗体发生反应(2)。现已鉴定

的有345和395 kDa两种亚型(3)。Ki-67抗原在细胞周期的所有活性阶段(G1、S、G2和

M-期)均优先表达,但在静息细胞(G0期)中不表达(2)。在细胞间期,只能在细胞核内检

测到抗原,而在有丝分裂中,大部分蛋白质被重新定位到染色体表面。细胞进入非增殖状态

时,抗原迅速降解(4),在DNA修复过程中似乎没有Ki-67表达(5)。

程序原则、需要但未提供的材料、储存、标本制备、染色程序、质控、故障排除、染色

判读和一般局限性,请参阅Dako免疫组织化学染色一般说明或IHC程序的检测系统说明。

【主要组成成份】

1. 提供的试剂:

即用型单克隆小鼠抗体以液体形式提供,溶于含有稳定蛋白和0.015 mol/L 叠氮钠的

缓冲溶液中。

克隆:MIB-1(6). 同型:IgG1,kappa。

2. 免疫原

与1002bp Ki-67 cDNA片段对应的人重组肽(6)。

3. 特异性

在多发性骨髓瘤细胞系IM-9裂解物的蛋白免疫印迹中,MIB-1抗体标记345和395 kDa

条带,与最初的Ki-67抗体标记的条带相同。此外,蛋白免疫印迹和竞争性结合实验清

楚证实,MIB-1与最初的Ki-67抗体一样,会与Ki-67基因中66 bp重复成分编码的表

位发生反应。

在免疫组织化学中,MIB-1和Ki-67抗体在系列扁桃体冷冻切片上提供了相同的染色模

式(6)。MIB-1抗体可识别天然Ki-67抗原和Ki-67分子的重组片段(6)。

【储存条件及有效期】

2-8 ℃下储存,产品有效期为24个月。超过试剂瓶上的失效日期后,请勿使用。如果

在除规定条件以外的任何其他条件下储存试剂,这些条件必须经使用者验证。尚无明显迹象

P04603CN_03/IR62661-2CN 1/4

P04603CN_03

表明本产品具有不稳定性。因此检测患者标本时应同时运行阳性质控品和阴性质控品。如果

观察到非预期染色,且该现象无法用实验室检测程序的变化来解释,并且疑似是抗体出现问

题,请联系Dako技术支持部门。

生产日期、失效日期:见标签。

【适用仪器】

Autostainer Link 48

【样本要求】

抗体可用于标记福尔马林固定石蜡包埋组织切片。组织标本应制备成厚度约为4µm的

切片。

【检验方法】

样本制备

本抗体可用于标记福尔马林固定石蜡包埋的组织切片。组织标本应制备成厚度约为4µm

的切片。

需要使用Dako PT Link通过热诱导抗原表位修复(HIER)进行预处理。详情请参见PT

Link用户指南。通过使用EnVision FLEX抗原修复液,低pH(50x)(货号K8005)对组织

进行预处理来获得最佳结果。

石蜡包埋切片:推荐使用Dako PT Link的三合一标本制备程序对福尔马林固定石蜡包

埋的组织切片进行预处理。染色后,切片必须脱水、透明,然后使用永久性封片剂封片。

脱蜡切片:推荐使用Dako PT Link和与石蜡包埋切片相同的程序对脱蜡的福尔马林固

定石蜡包埋切片进行预处理。染色后,应使用水性或永久性封片剂对载玻片进行封片。

预处理过程中以及随后的免疫组织化学染色步骤中,组织切片不可发生干片现象。为使

组织切片更好地粘附到玻璃载玻片上,推荐使用FLEX IHC显微镜用载玻片(货号K8020)。

染色程序

推荐使用的显色系统为EnVisionFLEX,高pH,(Link)(货号K8000),使用EnVision

FLEX抗原修复液,低pH(50x)(货号K8005)替换此试剂盒中的高pH抗原修复液。染色步

骤和孵育时间在Autostainer Link软件中已预先设定。推荐使用的试剂应用体积为每个载

玻片1x200μL或2x150μL。有关加载载玻片和试剂的详细说明,请参见合适的Autostainer

Link用户指南。如果所用Autostainer平台中不能得到相关方案,请联系Dako技术支持部

门。所有孵育步骤均应在室温条件下进行。

最佳条件可能因标本和制备方法而异,应由每个实验室确定。

推荐使用EnVision FLEX苏木精染色液(Link)(货号K8008)进行苏木精复染。

应使用与患者标本相同的方案同时运行阳性和阴性质控组织以及阴性质控试剂。阳性质

控组织应包括扁桃体,同时细胞/结构所显示的反应模式应与“性能特征”中所述的一致。

推荐使用的阴性质控试剂为FLEX阴性质控品,小鼠(Link)(货号IR750)。

【检验结果的解释】

染色判读:本抗体标记的细胞除有丝分裂细胞外,均表现出核细胞染色模式,而在有丝

分裂细胞中标记的部位则为染色体和细胞质。

【产品性能指标】

正常组织:小肠和结肠中的粘膜颈细胞和深隐窝细胞以及派伊尔氏斑的生发中心细胞对

本抗体呈阳性。表面上皮细胞和其他粘膜细胞,如潘氏细胞和粘膜下结缔组织细胞呈阴性。

肌肉细胞也呈阴性,平滑肌中的一些阳性细胞除外。肾脏、肝脏、胰腺和大脑均呈阴性(1)。

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在扁桃体中,暗区的生发中心B细胞显示中度至强度染色反应,而明区的生发中心B细胞显

示弱度至中度染色反应(8)。

异常组织:在一项针对322例浸润性导管乳腺癌的研究中报道有膜/细胞质染色(7)。

有24/24例前列腺癌被本抗体标记(9)。

【注意事项】

1. 供体外诊断使用。

2. 供专业用户使用。

3. 本产品含叠氮化钠(NaN3),纯品为一种剧毒化学品。虽然叠氮化钠在产品中的浓

度不具有危险性,但它可与铅或铜管发生反应,生成高度易爆的金属叠氮化物。处置时,应

使用大量的水冲洗,以防止管道中金属叠氮化物的蓄积。

4. 处置本产品时应使用与其他生物源制品相同的处理程序。

5. 穿戴适当的个人防护设备,避免接触眼睛和皮肤。

6. 应根据当地、州和联邦法规处置未使用的溶液。

【标识的解释】

目录号

体外诊断医疗器械

温度限

足够用于次测试

失效日期

生产商

参阅使用说明书 批号

【参考文献】

1. Cattoretti G, Becker MHG, Key G, Duchrow M, Schlüter C, Galle J, et al.

Monoclonal antibodies against recombinant parts of the Ki-67 antigen (MIB 1

and MIB 3) detect proliferating cells in microwave-processed formalin-fixed

paraffin sections. J Pathol 1992; 168:357-63

2. Gerdes J, Lemke H, Baisch H, Wacker H-H, Schwab U, Stein H. Cell cycle

analysis of a cell proliferation-associated human nuclear antigen defined

by the monoclonal antibody Ki-67. J Immunol 1984;133:1710-5.

3. Gerdes J, Li L, Schlueter C, Duchrow M, Wohlenberg C, Gerlach C, et al.

Immunobiochemical and molecular biologic characterization of the cell

proliferation-associated nuclear antigen that is defined by monoclonal

antibody Ki-67. Am J Pathol 1991; 138:867-73.

4. Scholzen T, Gerdes J. The Ki-67 protein: from the known and the unknown

[review]. J Cell Physiol 2000; 182:311-22.

5. Key G, Kubbutat MH, Gerdes J. Assessment of cell proliferation by means of

an enzyme-linked immunosorbent assay based on the detection of the Ki-67

protein. J Immunol Methods 1994; 177:113-7.

6. Key G, Becker MHG, Baron B, Duchrow M, Schlüter C, Flad H-D, et al. New Ki-

67-equivalent murine monoclonal antibodies (MIB 1-3) generated against

bacterially expressed parts of the Ki-67 cDNA containing three 62 base pair

repetitive elements encoding for the Ki-67 epitope. Lab Invest 1993; 68:629-

36.

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P04603CN_03

7. Faratian D, Munro A, Twelves C,Bartlett JMS. Membranous and cytoplasmic

staining of Ki67 is associated with HER2 and ER status in invasive breast

carcinoma. sHistopathology 2009:54:254-257.

8. Dako in-house test. Report D33066

9. Claudio PP, Zamparelli A, Garcia FU, Claudio L, Ammirati G, Farina A, et

al. Expression of cell-cycle-regulated proteins pRb2/p130, p107, p27kip1,

p53, mdm-2, and Ki-67 (MIB-1) in prostatic gland adenocarcinoma. Clin Cancer

Res 2002; 8:1808-15.

【基本信息】

备案人/生产企业名称:丹麦丹科股份有限公司

住所:Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Denmark

生产地址: Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Denmark

联系方式:+45 44 85 95 00

售后服务单位名称:安捷伦科技(中国)有限公司

联系方式:800-820-7008, 400-820-7008

代理人的名称:安捷伦科技(中国)有限公司

住所:北京市朝阳区望京北路3号研发中心(一期)3层3-1至3-3室

联系方式:800-820-3278,400-820-3278

【医疗器械备案凭证编号/产品技术要求编号】

国械备20190494号

【说明书核准日期及修改日期】

2019.4.30

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2024年4月17日发(作者:友凝冬)

P04603CN_03

Ki-67抗体试剂(免疫组织化学)说明书

【产品名称】

通用名称:Ki-67抗体试剂(免疫组织化学)

英文名称:FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Ki-67 Antigen, Clone MIB-1, Ready-

to-Use (Link)

【包装规格】

40-60测试/盒

【预期用途】

体外诊断用途。

在常规染色(如:HE染色)基础上进行免疫组织化学染色,为医师提供诊断的辅助信

息。

Ki-67抗体试剂(免疫组织化学)旨在与Autostainer Link仪器一起用于免疫组织化

学(IHC)。本抗体有助于对正常细胞和肿瘤细胞中的Ki-67抗原进行分型(1)。系列抗体的

结果有助于肿瘤的分类分型。对任何染色或缺少染色的临床解释均应通过使用适当质控品进

行形态学研究对其加以补充,并且应根据患者的临床病史,以及由符合资质的病理学家进行

的其他诊断测试,进行评估。本抗体可在通过常规组织病理学染色对肿瘤进行初步诊断后使

用的免疫组织化学染色法。

【检验原理】

Ki-67抗原是一种核蛋白,可与来自Ki-67克隆的单克隆抗体发生反应(2)。现已鉴定

的有345和395 kDa两种亚型(3)。Ki-67抗原在细胞周期的所有活性阶段(G1、S、G2和

M-期)均优先表达,但在静息细胞(G0期)中不表达(2)。在细胞间期,只能在细胞核内检

测到抗原,而在有丝分裂中,大部分蛋白质被重新定位到染色体表面。细胞进入非增殖状态

时,抗原迅速降解(4),在DNA修复过程中似乎没有Ki-67表达(5)。

程序原则、需要但未提供的材料、储存、标本制备、染色程序、质控、故障排除、染色

判读和一般局限性,请参阅Dako免疫组织化学染色一般说明或IHC程序的检测系统说明。

【主要组成成份】

1. 提供的试剂:

即用型单克隆小鼠抗体以液体形式提供,溶于含有稳定蛋白和0.015 mol/L 叠氮钠的

缓冲溶液中。

克隆:MIB-1(6). 同型:IgG1,kappa。

2. 免疫原

与1002bp Ki-67 cDNA片段对应的人重组肽(6)。

3. 特异性

在多发性骨髓瘤细胞系IM-9裂解物的蛋白免疫印迹中,MIB-1抗体标记345和395 kDa

条带,与最初的Ki-67抗体标记的条带相同。此外,蛋白免疫印迹和竞争性结合实验清

楚证实,MIB-1与最初的Ki-67抗体一样,会与Ki-67基因中66 bp重复成分编码的表

位发生反应。

在免疫组织化学中,MIB-1和Ki-67抗体在系列扁桃体冷冻切片上提供了相同的染色模

式(6)。MIB-1抗体可识别天然Ki-67抗原和Ki-67分子的重组片段(6)。

【储存条件及有效期】

2-8 ℃下储存,产品有效期为24个月。超过试剂瓶上的失效日期后,请勿使用。如果

在除规定条件以外的任何其他条件下储存试剂,这些条件必须经使用者验证。尚无明显迹象

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P04603CN_03

表明本产品具有不稳定性。因此检测患者标本时应同时运行阳性质控品和阴性质控品。如果

观察到非预期染色,且该现象无法用实验室检测程序的变化来解释,并且疑似是抗体出现问

题,请联系Dako技术支持部门。

生产日期、失效日期:见标签。

【适用仪器】

Autostainer Link 48

【样本要求】

抗体可用于标记福尔马林固定石蜡包埋组织切片。组织标本应制备成厚度约为4µm的

切片。

【检验方法】

样本制备

本抗体可用于标记福尔马林固定石蜡包埋的组织切片。组织标本应制备成厚度约为4µm

的切片。

需要使用Dako PT Link通过热诱导抗原表位修复(HIER)进行预处理。详情请参见PT

Link用户指南。通过使用EnVision FLEX抗原修复液,低pH(50x)(货号K8005)对组织

进行预处理来获得最佳结果。

石蜡包埋切片:推荐使用Dako PT Link的三合一标本制备程序对福尔马林固定石蜡包

埋的组织切片进行预处理。染色后,切片必须脱水、透明,然后使用永久性封片剂封片。

脱蜡切片:推荐使用Dako PT Link和与石蜡包埋切片相同的程序对脱蜡的福尔马林固

定石蜡包埋切片进行预处理。染色后,应使用水性或永久性封片剂对载玻片进行封片。

预处理过程中以及随后的免疫组织化学染色步骤中,组织切片不可发生干片现象。为使

组织切片更好地粘附到玻璃载玻片上,推荐使用FLEX IHC显微镜用载玻片(货号K8020)。

染色程序

推荐使用的显色系统为EnVisionFLEX,高pH,(Link)(货号K8000),使用EnVision

FLEX抗原修复液,低pH(50x)(货号K8005)替换此试剂盒中的高pH抗原修复液。染色步

骤和孵育时间在Autostainer Link软件中已预先设定。推荐使用的试剂应用体积为每个载

玻片1x200μL或2x150μL。有关加载载玻片和试剂的详细说明,请参见合适的Autostainer

Link用户指南。如果所用Autostainer平台中不能得到相关方案,请联系Dako技术支持部

门。所有孵育步骤均应在室温条件下进行。

最佳条件可能因标本和制备方法而异,应由每个实验室确定。

推荐使用EnVision FLEX苏木精染色液(Link)(货号K8008)进行苏木精复染。

应使用与患者标本相同的方案同时运行阳性和阴性质控组织以及阴性质控试剂。阳性质

控组织应包括扁桃体,同时细胞/结构所显示的反应模式应与“性能特征”中所述的一致。

推荐使用的阴性质控试剂为FLEX阴性质控品,小鼠(Link)(货号IR750)。

【检验结果的解释】

染色判读:本抗体标记的细胞除有丝分裂细胞外,均表现出核细胞染色模式,而在有丝

分裂细胞中标记的部位则为染色体和细胞质。

【产品性能指标】

正常组织:小肠和结肠中的粘膜颈细胞和深隐窝细胞以及派伊尔氏斑的生发中心细胞对

本抗体呈阳性。表面上皮细胞和其他粘膜细胞,如潘氏细胞和粘膜下结缔组织细胞呈阴性。

肌肉细胞也呈阴性,平滑肌中的一些阳性细胞除外。肾脏、肝脏、胰腺和大脑均呈阴性(1)。

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在扁桃体中,暗区的生发中心B细胞显示中度至强度染色反应,而明区的生发中心B细胞显

示弱度至中度染色反应(8)。

异常组织:在一项针对322例浸润性导管乳腺癌的研究中报道有膜/细胞质染色(7)。

有24/24例前列腺癌被本抗体标记(9)。

【注意事项】

1. 供体外诊断使用。

2. 供专业用户使用。

3. 本产品含叠氮化钠(NaN3),纯品为一种剧毒化学品。虽然叠氮化钠在产品中的浓

度不具有危险性,但它可与铅或铜管发生反应,生成高度易爆的金属叠氮化物。处置时,应

使用大量的水冲洗,以防止管道中金属叠氮化物的蓄积。

4. 处置本产品时应使用与其他生物源制品相同的处理程序。

5. 穿戴适当的个人防护设备,避免接触眼睛和皮肤。

6. 应根据当地、州和联邦法规处置未使用的溶液。

【标识的解释】

目录号

体外诊断医疗器械

温度限

足够用于次测试

失效日期

生产商

参阅使用说明书 批号

【参考文献】

1. Cattoretti G, Becker MHG, Key G, Duchrow M, Schlüter C, Galle J, et al.

Monoclonal antibodies against recombinant parts of the Ki-67 antigen (MIB 1

and MIB 3) detect proliferating cells in microwave-processed formalin-fixed

paraffin sections. J Pathol 1992; 168:357-63

2. Gerdes J, Lemke H, Baisch H, Wacker H-H, Schwab U, Stein H. Cell cycle

analysis of a cell proliferation-associated human nuclear antigen defined

by the monoclonal antibody Ki-67. J Immunol 1984;133:1710-5.

3. Gerdes J, Li L, Schlueter C, Duchrow M, Wohlenberg C, Gerlach C, et al.

Immunobiochemical and molecular biologic characterization of the cell

proliferation-associated nuclear antigen that is defined by monoclonal

antibody Ki-67. Am J Pathol 1991; 138:867-73.

4. Scholzen T, Gerdes J. The Ki-67 protein: from the known and the unknown

[review]. J Cell Physiol 2000; 182:311-22.

5. Key G, Kubbutat MH, Gerdes J. Assessment of cell proliferation by means of

an enzyme-linked immunosorbent assay based on the detection of the Ki-67

protein. J Immunol Methods 1994; 177:113-7.

6. Key G, Becker MHG, Baron B, Duchrow M, Schlüter C, Flad H-D, et al. New Ki-

67-equivalent murine monoclonal antibodies (MIB 1-3) generated against

bacterially expressed parts of the Ki-67 cDNA containing three 62 base pair

repetitive elements encoding for the Ki-67 epitope. Lab Invest 1993; 68:629-

36.

P04603CN_03/IR62661-2CN 3/4

P04603CN_03

7. Faratian D, Munro A, Twelves C,Bartlett JMS. Membranous and cytoplasmic

staining of Ki67 is associated with HER2 and ER status in invasive breast

carcinoma. sHistopathology 2009:54:254-257.

8. Dako in-house test. Report D33066

9. Claudio PP, Zamparelli A, Garcia FU, Claudio L, Ammirati G, Farina A, et

al. Expression of cell-cycle-regulated proteins pRb2/p130, p107, p27kip1,

p53, mdm-2, and Ki-67 (MIB-1) in prostatic gland adenocarcinoma. Clin Cancer

Res 2002; 8:1808-15.

【基本信息】

备案人/生产企业名称:丹麦丹科股份有限公司

住所:Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Denmark

生产地址: Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Denmark

联系方式:+45 44 85 95 00

售后服务单位名称:安捷伦科技(中国)有限公司

联系方式:800-820-7008, 400-820-7008

代理人的名称:安捷伦科技(中国)有限公司

住所:北京市朝阳区望京北路3号研发中心(一期)3层3-1至3-3室

联系方式:800-820-3278,400-820-3278

【医疗器械备案凭证编号/产品技术要求编号】

国械备20190494号

【说明书核准日期及修改日期】

2019.4.30

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