2024年4月22日发(作者：承星儿)
HiScript
®
II Q RT SuperMix
for qPCR (+gDNA wiper)
R223-01
Version 7.1 Vazyme biotech co., ltd.
产品概述
HiScript
®
II Reverse Transcriptase是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基础上通过体外分子进化技术得到的全新逆转录酶，
大幅提高了热稳定性和cDNA合成效率。HiScript
®
II Q RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) 适用于两步法qRT-PCR检测。RNA模板产品
中的4 × gDNA wiper Mix可彻底去除残留的基因组DNA污染，保证后续定量结果更加可靠。5 × HiScript qRT SuperMix II中含有逆转录反应
所需的所有组分，加入模板RNA和水即可迅速进行反应，同时终止gDNA wiper作用，保证cDNA的完整性。
本产品针对qPCR进行特别优化，比例优化的Random primers/Oligo (dT)
23
VN primer mix，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始
并具有相同的逆转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR
Green和探针法qPCR，可以根据实验
目的，选择相应的试剂配合使用，进行高性能的基因表达分析。
产品组分
组 分 R223-01 100 rxn (20 μl/rxn)
RNase free ddH
2
O
4 × gDNA wiper Mix
5 × HiScript II qRT SuperMix II
5 × No RT Control Mix
b
a
2 × 1 ml
400 μl
400 μl
40 μl
a. 包含Buffer、dNTP、HiScript II Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo (dT)
23
VN primer mix。
注意：与HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (Vazyme #R222-01)中所带的5 × HiScript II qRT SuperMix成分不同，不可以混用。
b. 除不含HiScript II Reverse Transcriptase外，其余成分与5 × HiScript II qRT SuperMix II相同，用于配制No RT对照反应。
保存条件
-20℃保存。
质量控制
所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶及RNase残留。
功能检测：以1 pg-1 µg HeLa 细胞总RNA为模板，qRT-PCR检测高中低三种丰度共四个基因表达。以4-6个数量级的模板量的对数值对C
T
值做标准曲线并计算扩增效率，R
2
>0.990，扩增效率在0.9到1.1之间。在1 µg HeLa细胞总RNA中混入100 ng human genomic DNA，经
gDNA wiper Mix处理后，进行两对质控引物的qRT-PCR，No RT Control的C
T
值>40。
实验准备和指南
自备材料
● RNase-free 1.5 ml离心管、0.2 ml PCR管、移液器吸头
● 移液器；PCR仪；冰或移动冰盒
RNA
●
高质量的完整的RNA对于获得高质量的cDNA是至关重要的。实验前请用电泳验证RNA的完整性。
qPCR试剂选择指南
● 第一链cDNA产物可直接用作qPCR反应的模板。建议作为模板的cDNA产物的体积不超过qPCR反应体积的1/10。可选择AceQ
®
qPCR
SYBR
®
Green Master Mix (Vazyme #Q111) 、AceQ
®
qPCR Probe Master Mix (Vazyme #Q112) 或ChamQ
TM
SYBR
®
qPCR Master Mix
(Vazyme #Q311)作为qPCR试剂。
诺唯赞生物 网址/ 咨询热线/400-600-9335 销售/sales@ 技术支持/support@ 技术服务/service@
Vazyme Biotech Co., Ltd Web/ Tel/400-600-9335 Sales/sales@ Support/support@ Service/service@
实验流程
1. 基因组DNA去除
在RNase-free的离心管中配制如下混合液
RNase free ddH
2
O
4 × gDNA wiper Mix
模板RNA
to 16 µl
4 µl
Total RNA: 1 pg-1 µg
用移液器轻轻吹打混匀。42℃ 2 min。
2. 配制逆转录反应体系
在第1步的反应管中直接加入5 × HiScript
II qRT SuperMix II
5 × HiScript
II qRT SuperMix II
第1步的反应液
4 µl
16 µl
用移液器轻轻吹打混匀。
No RT Control反应（可选）
No RT Control是指不加逆转录酶的逆转录阴性对照反应，用于检验RNA模板中是否有基因组DNA残留。
在RNase-free离心管中配制如下混合液
5 × No RT Control Mix
第1步的反应液
4 µl
16 µl
用移液器轻轻吹打混匀。
3. 进行逆转录反应
50℃*
85℃
* 如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，可将反应温度提高至55℃，有助于提高产量。
15 min
5 sec
产物可立即用于qPCR反应，或在-20℃保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后在-80℃保存。cDNA应避免反复冻融。
注意事项
1.
4 × gDNA wiper Mix、5 × HiScript
II qRT SuperMix II及5 × No RT Control Mix含有高浓度的甘油，在使用前请短暂离心收集到反应管
底部，并用移液枪轻轻吸打充分混匀后，准确吸取。
2.
20 µl逆转录反应体系建议加入不超过1 µg的Total RNA。如果目的基因表达量非常低，最多加入5 µg total RNA，否则加入RNA量过高，
可能会超出后续定量PCR的线性范围。
3.
如果加入RNA模板体积较大 (如超过2 µl)，请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE中的EDTA会对逆转录反应产生抑制。
4.
cDNA产物仅适用于qPCR反应，不适用于克隆等下游实验的长片段PCR扩增。如有需要，可使用HiScript
II 1st Strand cDNA
Synthesis Kit (+gDNA wiper)(Vazyme #R212)进行操作。
5.
可以不经过基因组去除步骤，直接用5 × HiScript II qRT SuperMix II进行逆转录，这样所得到的结果会与使用HiScript II Q RT
SuperMix for qPCR (Vazyme #R222-01)相当。但是，请勿将4 × gDNA wiper Mix与R222-01配套使用，因为R222-01中所带的5 × HiScript II
qRTSuperMix不含终止gDNA wiper反应的成分，有可能会影响后续的qPCR结果。
SYSTEMS
企业已通过
ISO 9001:2015
国际质量管理体
系认证
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2024年4月22日发(作者：承星儿)
HiScript
®
II Q RT SuperMix
for qPCR (+gDNA wiper)
R223-01
Version 7.1 Vazyme biotech co., ltd.
产品概述
HiScript
®
II Reverse Transcriptase是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基础上通过体外分子进化技术得到的全新逆转录酶，
大幅提高了热稳定性和cDNA合成效率。HiScript
®
II Q RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) 适用于两步法qRT-PCR检测。RNA模板产品
中的4 × gDNA wiper Mix可彻底去除残留的基因组DNA污染，保证后续定量结果更加可靠。5 × HiScript qRT SuperMix II中含有逆转录反应
所需的所有组分，加入模板RNA和水即可迅速进行反应，同时终止gDNA wiper作用，保证cDNA的完整性。
本产品针对qPCR进行特别优化，比例优化的Random primers/Oligo (dT)
23
VN primer mix，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始
并具有相同的逆转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR
Green和探针法qPCR，可以根据实验
目的，选择相应的试剂配合使用，进行高性能的基因表达分析。
产品组分
组 分 R223-01 100 rxn (20 μl/rxn)
RNase free ddH
2
O
4 × gDNA wiper Mix
5 × HiScript II qRT SuperMix II
5 × No RT Control Mix
b
a
2 × 1 ml
400 μl
400 μl
40 μl
a. 包含Buffer、dNTP、HiScript II Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo (dT)
23
VN primer mix。
注意：与HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (Vazyme #R222-01)中所带的5 × HiScript II qRT SuperMix成分不同，不可以混用。
b. 除不含HiScript II Reverse Transcriptase外，其余成分与5 × HiScript II qRT SuperMix II相同，用于配制No RT对照反应。
保存条件
-20℃保存。
质量控制
所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶及RNase残留。
功能检测：以1 pg-1 µg HeLa 细胞总RNA为模板，qRT-PCR检测高中低三种丰度共四个基因表达。以4-6个数量级的模板量的对数值对C
T
值做标准曲线并计算扩增效率，R
2
>0.990，扩增效率在0.9到1.1之间。在1 µg HeLa细胞总RNA中混入100 ng human genomic DNA，经
gDNA wiper Mix处理后，进行两对质控引物的qRT-PCR，No RT Control的C
T
值>40。
实验准备和指南
自备材料
● RNase-free 1.5 ml离心管、0.2 ml PCR管、移液器吸头
● 移液器；PCR仪；冰或移动冰盒
RNA
●
高质量的完整的RNA对于获得高质量的cDNA是至关重要的。实验前请用电泳验证RNA的完整性。
qPCR试剂选择指南
● 第一链cDNA产物可直接用作qPCR反应的模板。建议作为模板的cDNA产物的体积不超过qPCR反应体积的1/10。可选择AceQ
®
qPCR
SYBR
®
Green Master Mix (Vazyme #Q111) 、AceQ
®
qPCR Probe Master Mix (Vazyme #Q112) 或ChamQ
TM
SYBR
®
qPCR Master Mix
(Vazyme #Q311)作为qPCR试剂。
诺唯赞生物 网址/ 咨询热线/400-600-9335 销售/sales@ 技术支持/support@ 技术服务/service@
Vazyme Biotech Co., Ltd Web/ Tel/400-600-9335 Sales/sales@ Support/support@ Service/service@
实验流程
1. 基因组DNA去除
在RNase-free的离心管中配制如下混合液
RNase free ddH
2
O
4 × gDNA wiper Mix
模板RNA
to 16 µl
4 µl
Total RNA: 1 pg-1 µg
用移液器轻轻吹打混匀。42℃ 2 min。
2. 配制逆转录反应体系
在第1步的反应管中直接加入5 × HiScript
II qRT SuperMix II
5 × HiScript
II qRT SuperMix II
第1步的反应液
4 µl
16 µl
用移液器轻轻吹打混匀。
No RT Control反应（可选）
No RT Control是指不加逆转录酶的逆转录阴性对照反应，用于检验RNA模板中是否有基因组DNA残留。
在RNase-free离心管中配制如下混合液
5 × No RT Control Mix
第1步的反应液
4 µl
16 µl
用移液器轻轻吹打混匀。
3. 进行逆转录反应
50℃*
85℃
* 如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，可将反应温度提高至55℃，有助于提高产量。
15 min
5 sec
产物可立即用于qPCR反应，或在-20℃保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后在-80℃保存。cDNA应避免反复冻融。
注意事项
1.
4 × gDNA wiper Mix、5 × HiScript
II qRT SuperMix II及5 × No RT Control Mix含有高浓度的甘油，在使用前请短暂离心收集到反应管
底部，并用移液枪轻轻吸打充分混匀后，准确吸取。
2.
20 µl逆转录反应体系建议加入不超过1 µg的Total RNA。如果目的基因表达量非常低，最多加入5 µg total RNA，否则加入RNA量过高，
可能会超出后续定量PCR的线性范围。
3.
如果加入RNA模板体积较大 (如超过2 µl)，请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE中的EDTA会对逆转录反应产生抑制。
4.
cDNA产物仅适用于qPCR反应，不适用于克隆等下游实验的长片段PCR扩增。如有需要，可使用HiScript
II 1st Strand cDNA
Synthesis Kit (+gDNA wiper)(Vazyme #R212)进行操作。
5.
可以不经过基因组去除步骤，直接用5 × HiScript II qRT SuperMix II进行逆转录，这样所得到的结果会与使用HiScript II Q RT
SuperMix for qPCR (Vazyme #R222-01)相当。但是，请勿将4 × gDNA wiper Mix与R222-01配套使用，因为R222-01中所带的5 × HiScript II
qRTSuperMix不含终止gDNA wiper反应的成分，有可能会影响后续的qPCR结果。
SYSTEMS
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ISO 9001:2015
国际质量管理体
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