2024年5月6日发(作者：辛玉泽)
实验 土壤硝态氮的紫外分光光度法
根层土壤中硝态氮的含量与植物生长发育有着密切的关系，其测定结果可为合理施肥，
肥料规划和估产提供依据。
一. 目的要求
了解紫外/可见分光光度计的基本结构，掌握用波长选择消除干扰组分的测定技术，用
校正因数法测定土壤硝态氮的含量。
二. 方法原理
用氯化钠溶液提取土壤硝态氮，于紫外分光光度计上分别测量其210和275纳米的吸
光度，前者是硝酸根和以有机质为主的杂质的吸收值，后者是以有机质为主的杂质的吸收。
因为275纳米处硝酸根已无吸收，而有机质在275纳米处的吸收值是210纳米处的f倍，
故可将A275校正为有机质在210纳米处的干扰吸收，从A210中减去，即得硝酸根在210
纳米处得真实吸收值，再利用标准曲线法求得土壤中硝态氮得含量。
三. 器皿与试剂
1. 紫外、可见分光光度计和石英比色皿。
2. 50毫升容量瓶10个，100和250毫升锥形瓶各4个，漏斗4个，普通试管4支，
50毫升胖肚吸管1支，5、10毫升和2毫升刻度吸管各一只，滴管2支。
3. 氯化钠溶液1mol/L: 称取氯化钠58.44克溶于400毫升水中，转入1升容量瓶中，
稀释至刻度。
4. 硝态氮标准溶液100µg/ml: 称取于105℃烘制2小时得硝酸钾0.3609克溶于水，
转移至500毫升容量瓶中，用水定容。临用时再稀释至20µg/ml。
5. 硫酸溶液，10％（V/V）
四. 测定步骤
1.待测液制备
称取10.00克风干土样于250毫升锥形瓶中，加入50毫升1 mol/L的氯化钠溶液，
加塞振荡30分钟，过滤于干净干燥的100毫升锥形瓶中，初液弃去。同时做试剂空白。
2.标准曲线绘制与测定
吸取20µg/ml硝态氮标准溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00毫升分别置入
50毫升容量瓶中，用水定容至刻度后，再加入2毫升10％硫酸溶液，摇匀。浓度分别为
0.00、0.20、0.40、0.80、1.20和1.60µg/ml。
以零浓度标液作参比，于210米处测定标准系列的吸光度，绘制标准曲线或建立回归
方程。
去土壤浸体液和试剂空白液各10毫升入试管中，加入0.8毫升10％硫酸，摇匀。以
试剂空白作参比，分别于210纳米和275纳米处测定吸光度，不要每测一个样品改变一次
波长，以避免逐次改变波长而引入波长重现性误差。若土壤浸体液吸光度太大，可用氯化
钠溶液稀释，但应按比例加入硫酸溶液。
测定时，向比色皿中加入待测液不要超过3/4容积。
3. 结果计算
根据测得A210和A275，按下式计算硝态氮的吸光度△A
△A=A210-f×A275
由△A从工作曲线上查得相应浓度，乘以液土比和稀释倍数，即为土壤硝态氮含量。式
中f为校正因数，本实验取值为3.6。
五. 问题讨论
1. 为什么标准曲线溶液不加入试剂空白？标准定容后，再加2毫升10％硫酸溶液，
对测定结果有没有影响？
2024年5月6日发(作者：辛玉泽)
实验 土壤硝态氮的紫外分光光度法
根层土壤中硝态氮的含量与植物生长发育有着密切的关系，其测定结果可为合理施肥，
肥料规划和估产提供依据。
一. 目的要求
了解紫外/可见分光光度计的基本结构，掌握用波长选择消除干扰组分的测定技术，用
校正因数法测定土壤硝态氮的含量。
二. 方法原理
用氯化钠溶液提取土壤硝态氮，于紫外分光光度计上分别测量其210和275纳米的吸
光度，前者是硝酸根和以有机质为主的杂质的吸收值，后者是以有机质为主的杂质的吸收。
因为275纳米处硝酸根已无吸收，而有机质在275纳米处的吸收值是210纳米处的f倍，
故可将A275校正为有机质在210纳米处的干扰吸收，从A210中减去，即得硝酸根在210
纳米处得真实吸收值，再利用标准曲线法求得土壤中硝态氮得含量。
三. 器皿与试剂
1. 紫外、可见分光光度计和石英比色皿。
2. 50毫升容量瓶10个，100和250毫升锥形瓶各4个，漏斗4个，普通试管4支，
50毫升胖肚吸管1支，5、10毫升和2毫升刻度吸管各一只，滴管2支。
3. 氯化钠溶液1mol/L: 称取氯化钠58.44克溶于400毫升水中，转入1升容量瓶中，
稀释至刻度。
4. 硝态氮标准溶液100µg/ml: 称取于105℃烘制2小时得硝酸钾0.3609克溶于水，
转移至500毫升容量瓶中，用水定容。临用时再稀释至20µg/ml。
5. 硫酸溶液，10％（V/V）
四. 测定步骤
1.待测液制备
称取10.00克风干土样于250毫升锥形瓶中，加入50毫升1 mol/L的氯化钠溶液，
加塞振荡30分钟，过滤于干净干燥的100毫升锥形瓶中，初液弃去。同时做试剂空白。
2.标准曲线绘制与测定
吸取20µg/ml硝态氮标准溶液0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00毫升分别置入
50毫升容量瓶中，用水定容至刻度后，再加入2毫升10％硫酸溶液，摇匀。浓度分别为
0.00、0.20、0.40、0.80、1.20和1.60µg/ml。
以零浓度标液作参比，于210米处测定标准系列的吸光度，绘制标准曲线或建立回归
方程。
去土壤浸体液和试剂空白液各10毫升入试管中，加入0.8毫升10％硫酸，摇匀。以
试剂空白作参比，分别于210纳米和275纳米处测定吸光度，不要每测一个样品改变一次
波长，以避免逐次改变波长而引入波长重现性误差。若土壤浸体液吸光度太大，可用氯化
钠溶液稀释，但应按比例加入硫酸溶液。
测定时，向比色皿中加入待测液不要超过3/4容积。
3. 结果计算
根据测得A210和A275，按下式计算硝态氮的吸光度△A
△A=A210-f×A275
由△A从工作曲线上查得相应浓度，乘以液土比和稀释倍数，即为土壤硝态氮含量。式
中f为校正因数，本实验取值为3.6。
五. 问题讨论
1. 为什么标准曲线溶液不加入试剂空白？标准定容后，再加2毫升10％硫酸溶液，
对测定结果有没有影响？