2024年5月15日发(作者：律朔)
（策略篇）S5E56 大名鼎鼎的Rescue挽救实验，是个什么鬼？
前两天在看朋友发过来的专家反馈意见的时候看到了一条建议：需设计严谨的“挽救
（rescue）”实验，看来大家对挽救实验的理解还是有些模糊的，今天小张就说一说对挽
救实验的一点理解。1
根据挽救的现象，我们把Rescue实验分为表型挽救和机制挽救。表型挽救是说A技
术回复了B技术所造成的表型，比如X基因的过表达回复了X基因的干扰所造成的表型，
这里说的表型比如细胞增殖表型、周期、自噬等等；机制挽救是说A技术回复了B技术所
造成的下游分子表达、活性或者定位，比如X基因的过表达回复了X基因的干扰所造成Y
基因的上调，P通路的激活，或者Z分子的定位。关于机制研究的三种模式，大家可看文
章（策略篇）三分天下：分子机制研究的三种模式。2
根据要解决的问题，我们把Rescue实验分为分为单因素挽救和多因素挽救。
单因素挽救是指围绕单一因素展开的A技术和B技术的回复，X基因的过表达回复了
X基因的干扰所造成的表型和表达调控，就是围绕X基因所展开的表达层次的回复。广义
来说，这里的单因素除了基因外，还可以是信号通路（比如通过对TGF-β通路进行激活和
抑制挽救细胞纤维化的表型）、表型（比如通过促进和抑制细胞自噬研究自噬对肿瘤的影
响）、菌群（比如通过菌群移植挽救菌群缺失造成的IBD） ，甚至是药物。多因素挽救就
复杂一些了，我们以两因素为例，比如为了证明M分子通过调控N分子的表达影响细胞
增殖，就可以通过干预M分子挽救N分子干预所造成的细胞增殖能力变化来证明。多因
素挽救实验是研究分子间调控关系常做的实验之一。黑箱中的“自挽救”和“旁挽救”
我们粗略总结下就是：利用对某个（些）因素的已知干预手段（加法和减法）来研究
某个（些）因素对下游结果的影响。我们在包括单因素和多因素的黑箱中研究因素之间的
“因果报应”，有点像犯罪后判刑，表现好减刑的意思。上面是理论，下面我们举例看
Rescue实验在课题设计中的应用。案例1Effects of SOX2 on Proliferation, Migration
and Adhesion of Human Dental Pulp Stem 2过表达导致DPSC细胞增殖、
侵袭和粘附能力上调，而SOX2 siRNA挽救了上述表型。单因素表型挽救。案例2miR-92b
regulates glioma cells proliferation, migration, invasion, and apoptosis via
PTEN/Akt signaling -92b抑制物（inhibitor）可以抑制胶质瘤细胞的增殖、
迁移、侵袭，并促进细胞凋亡；而miR-92b和靶基因PTEN的双敲实验（double
knockdown）挽救了miR-92b抑制物造成的上述细胞表型。双因素表型挽救。案例
3MicroRNA-663 suppresses cell invasion and migration by targeting transforming
growth factor beta 1 in papillary thyroid carcinoma.在荧光素酶报告基因实验中，
miR-663类似物（mimics）下调了靶基因 TGFβ1野生型3′-UTR的荧光素酶活性，而
TGFβ1的3′-UTR中miR-663结合位点的突变挽救（上调）了荧光素酶活性。双因素机制
（活性）挽救。案例4MiR-221 Promotes Capan-2 Pancreatic Ductal Adenocarcinoma
Cells Proliferation by Targeting -221通过激活PTEN-Akt信号通路促进
胰腺癌细胞增殖，而PTEN-Akt信号通路抑制剂LY294002挽救了miR-221过表达导致
的细胞增殖。双因素表型挽救。
案例5Targeting the Nuclear Import Receptor Kpnβ1 as an Anticancer
Therapeutic.小分子INI-43是癌基因Kpnβ1的抑制剂，Kpnβ1作为核转运受体通过转运
P65等发挥功能。INI-43抑制Kpnβ1功能导致P65核转运受阻，而Kpnβ1的过表达挽
救了P65的核转运。双因素机制（定位）挽救。
好了，挽救实验在文章中的案例就到这里了，我们看基金。在（基金篇）S5E50：基
金评审意见“人话翻译机”一文中，我们说到在基金申请中在方案设计上常遇到问题是研
究太浅，不够深入：而挽救实验就是一个增加机制研究深度的一个解决方案，比如为了说
明分子A通过激活P通路促进肿瘤增殖的时候就可以分为三部分： A对P通路分子和P
通路状态调控；（最浅）A通过与P通路中的P1分子直接作用调控激活P通路；挽救实验：
A过表达 沉默对P通路分子表达、通路激活和增殖表型的影响；P1分子干预（激活、抑
制、干扰、过表达）对A促进肿瘤增殖的影响；P通路干预（抑制剂、激活剂）对A促进
肿瘤增殖的影响；That’s all. Thank you!
2024年5月15日发(作者：律朔)
（策略篇）S5E56 大名鼎鼎的Rescue挽救实验，是个什么鬼？
前两天在看朋友发过来的专家反馈意见的时候看到了一条建议：需设计严谨的“挽救
（rescue）”实验，看来大家对挽救实验的理解还是有些模糊的，今天小张就说一说对挽
救实验的一点理解。1
根据挽救的现象，我们把Rescue实验分为表型挽救和机制挽救。表型挽救是说A技
术回复了B技术所造成的表型，比如X基因的过表达回复了X基因的干扰所造成的表型，
这里说的表型比如细胞增殖表型、周期、自噬等等；机制挽救是说A技术回复了B技术所
造成的下游分子表达、活性或者定位，比如X基因的过表达回复了X基因的干扰所造成Y
基因的上调，P通路的激活，或者Z分子的定位。关于机制研究的三种模式，大家可看文
章（策略篇）三分天下：分子机制研究的三种模式。2
根据要解决的问题，我们把Rescue实验分为分为单因素挽救和多因素挽救。
单因素挽救是指围绕单一因素展开的A技术和B技术的回复，X基因的过表达回复了
X基因的干扰所造成的表型和表达调控，就是围绕X基因所展开的表达层次的回复。广义
来说，这里的单因素除了基因外，还可以是信号通路（比如通过对TGF-β通路进行激活和
抑制挽救细胞纤维化的表型）、表型（比如通过促进和抑制细胞自噬研究自噬对肿瘤的影
响）、菌群（比如通过菌群移植挽救菌群缺失造成的IBD） ，甚至是药物。多因素挽救就
复杂一些了，我们以两因素为例，比如为了证明M分子通过调控N分子的表达影响细胞
增殖，就可以通过干预M分子挽救N分子干预所造成的细胞增殖能力变化来证明。多因
素挽救实验是研究分子间调控关系常做的实验之一。黑箱中的“自挽救”和“旁挽救”
我们粗略总结下就是：利用对某个（些）因素的已知干预手段（加法和减法）来研究
某个（些）因素对下游结果的影响。我们在包括单因素和多因素的黑箱中研究因素之间的
“因果报应”，有点像犯罪后判刑，表现好减刑的意思。上面是理论，下面我们举例看
Rescue实验在课题设计中的应用。案例1Effects of SOX2 on Proliferation, Migration
and Adhesion of Human Dental Pulp Stem 2过表达导致DPSC细胞增殖、
侵袭和粘附能力上调，而SOX2 siRNA挽救了上述表型。单因素表型挽救。案例2miR-92b
regulates glioma cells proliferation, migration, invasion, and apoptosis via
PTEN/Akt signaling -92b抑制物（inhibitor）可以抑制胶质瘤细胞的增殖、
迁移、侵袭，并促进细胞凋亡；而miR-92b和靶基因PTEN的双敲实验（double
knockdown）挽救了miR-92b抑制物造成的上述细胞表型。双因素表型挽救。案例
3MicroRNA-663 suppresses cell invasion and migration by targeting transforming
growth factor beta 1 in papillary thyroid carcinoma.在荧光素酶报告基因实验中，
miR-663类似物（mimics）下调了靶基因 TGFβ1野生型3′-UTR的荧光素酶活性，而
TGFβ1的3′-UTR中miR-663结合位点的突变挽救（上调）了荧光素酶活性。双因素机制
（活性）挽救。案例4MiR-221 Promotes Capan-2 Pancreatic Ductal Adenocarcinoma
Cells Proliferation by Targeting -221通过激活PTEN-Akt信号通路促进
胰腺癌细胞增殖，而PTEN-Akt信号通路抑制剂LY294002挽救了miR-221过表达导致
的细胞增殖。双因素表型挽救。
案例5Targeting the Nuclear Import Receptor Kpnβ1 as an Anticancer
Therapeutic.小分子INI-43是癌基因Kpnβ1的抑制剂，Kpnβ1作为核转运受体通过转运
P65等发挥功能。INI-43抑制Kpnβ1功能导致P65核转运受阻，而Kpnβ1的过表达挽
救了P65的核转运。双因素机制（定位）挽救。
好了，挽救实验在文章中的案例就到这里了，我们看基金。在（基金篇）S5E50：基
金评审意见“人话翻译机”一文中，我们说到在基金申请中在方案设计上常遇到问题是研
究太浅，不够深入：而挽救实验就是一个增加机制研究深度的一个解决方案，比如为了说
明分子A通过激活P通路促进肿瘤增殖的时候就可以分为三部分： A对P通路分子和P
通路状态调控；（最浅）A通过与P通路中的P1分子直接作用调控激活P通路；挽救实验：
A过表达 沉默对P通路分子表达、通路激活和增殖表型的影响；P1分子干预（激活、抑
制、干扰、过表达）对A促进肿瘤增殖的影响；P通路干预（抑制剂、激活剂）对A促进
肿瘤增殖的影响；That’s all. Thank you!